Sociedade Brasileira de Química ( SBQ)
32a Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química
Produção de policetídeo por Alternaria tenuissima é induzida em cultura mista com Nigrospora sphaerica
Fernanda O. das Chagas* (PG)1, Mônica Tallarico Pupo (PQ)1 fechagas@fcfrp.usp.br
1Departamento de Ciências Farmacêuticas. Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto – USP
Palavras Chave: culturas mistas, Alternaria tenuissima, Nigrospora sphaerica, fungos endofíticos, policetideo.
Introdução
A relação simbiótica entre fungos endofíticos e sua planta hospedeira tem sido descrita, demonstrando as diversas vantagens para ambas espécies e a sua importância como fonte de metabólitos secundários bioativos e metabólitos idênticos aos produzidos pelas plantas hospedeiras1,2. No entanto, relatos sobre as interações que ocorrem entre os vários endofíticos de uma mesma planta ainda são escassos. Considerando que os microrganismos interagem entre si no ambiente e que essas interações podem levar à produção de metabólitos secundários, o cultivo simultâneo de diferentes endofíticos pode induzir a produção de compostos não observáveis quando as linhagens são cultivadas independentemente3. O objetivo desse trabalho foi verificar a influência do cultivo misto no perfil químico e atividades biológicas produzidas pelas linhagens Alternaria tenuissima (SS77) e Nigrospora sphaerica (SS67), ambas isoladas de Smallanthus sonchifolius 4.
Resultados e Discussão
Figura 1. Cultivo dos fungos e obtenção dos extratos
Figura 2. Ensaio de antagonismo entre os fungos endofíticos SS67 e SS77. A) cultura simples do fungo SS77, (B) cultura simples do fungo SS67 e (C) antagonismo entre os fungos SS67 e SS77 cultivados juntos (meio BDA).
Figura 3. Cromatogramas dos extratos de SS67 (rosa), SS77 (azul) e da cultura mista SS6777 (preto) (C-18, gradiente ACN:H2O) (x) sinal detectado apenas na cultura mista.
O ensaio de antagonismo (Figura 2) indicou que o endofítico SS77 inibe o desenvolvimento de SS67.
Análise do perfil cromatográfico da cultura mista indicou a presença de um pico em tr=19,9 min, não observado nas culturas simples dos endofíticos. O isolamento da substância 1 (1,7 mg) foi realizado através de coluna em Sephadex (FM: EtOH) e CLAE reciclante (Coluna Shodex, FM: MeOH). A estrutura de 1 foi estabelecida com base em dados de RMN 1D e 2D, que correspondem aos dados previamente publicados para a substância 1 5-6. Os dados obtidos até o momento sugerem que o endofítico SS77 produz a substância 1 em resposta à presença de SS67, e, ainda, que 1 é provavelmente responsável pela atividade antifúngica. A substância 1 será isolada em maior quantidade para ensaios antifúngicos contra SS67. Pode-se dizer que a estratégia de culturas mistas de endofíticos foi produtiva para os fungos analisados, levando a produção da substância 1, não detectada nas culturas simples.
Agradecimentos FAPESP, CNPQ (INCT-INBEQMeDI)
A B C
OH O
O OH
HO
H H
OH
1
Minutes
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0
mAU
0 25 50 75 100 125 150 175 200
1: 225 nm, 8 nm x 18
1: 225 nm, 8 nm x 13
1: 225 nm, 8 nm x 12
1. Extração da HP-20 com EtOH 2. Extração da HP-20 acetona 3. Concentração
20 mL de meio nutritivo, 5 dias,
25ºC, 150 rpm Extrato de malte (0,7%), 7 dias, 25ºC,
150 rpm Meio BDA
7 dias
Adição de resina Dianion HP-20
Extratos das culturas simples
e mistas 7 dias, 25ºC,
150 rpm 1. Extração da HP-20 com EtOH 2. Extração da HP-20 acetona 3. Concentração
20 mL de meio nutritivo, 5 dias,
25ºC, 150 rpm Extrato de malte (0,7%), 7 dias, 25ºC,
150 rpm Meio BDA
7 dias
Adição de resina Dianion HP-20
Extratos das culturas simples
e mistas 7 dias, 25ºC,
150 rpm
X
Sociedade Brasileira de Química ( SBQ)
25a Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química - SBQ 2
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