Modelo de estudo
Lesão excisional
Lesões agudas por excisão total realizadas na pele do dorso de roedores são o modelo de lesão mais comumente utilizado, pois essas lesões podem ser realizadas rapidamente e reproduzidas em qualquer linhagem animal. Além disso, diversos agentes podem ser utilizados para avaliar a cicatrização, na tentativa de desvendar os mecanismos envolvidos nesse processo (21). Lesões excisionais podem ser criadas em diferentes formas e tamanhos, por exemplo, com punções de biópsia, tesouras cirúrgicas ou laser (21).
Lesão térmica (queimadura)
Muitos estudos mostram que as queimaduras iniciam respostas inflamatórias sistémicas através da produção de toxinas e ERO, que levam à peroxidação lipídica (deformação dos fosfolípidos da membrana celular por radicais oxidantes) (24). Quando este equilíbrio é destruído, a produção de ERO é excessiva e todos os tecidos ficam expostos a danos oxidativos (24). Associado a esta resposta está um aumento no tráfego celular para o local da lesão com produção concomitante de quimioatraentes (26), que juntamente com as plaquetas iniciam a liberação de mediadores pró-inflamatórios e, posteriormente, ao final da inflamação, mediadores. da resolução (26, 27).
Prostaglandinas
Após a ativação desse processo, ocorre a liberação sucessiva de uma série de mediadores, resultando em vasodilatação, aumento do fluxo sanguíneo e da permeabilidade vascular, levando à formação de exsudato e à ativação de fibras neurossensoriais de dor.
Ciclooxigenase
No grupo de mulheres tratadas, os níveis de 17β-estradiol foram inferiores aos do grupo controle de mulheres (Figura 5A; p<0,05). Entre os grupos tratados, foi observada maior atividade de mieloperoxidase no grupo feminino tratado em comparação com um número significativo de macrófagos positivos para F4/80 entre os grupos de controle feminino e masculino. O mesmo padrão foi observado entre os grupos controle e masculino tratado, com o número de macrófagos positivos para F4/80 sendo maior no grupo masculino tratado (Figura 8B; p<0,05).
Comparando os grupos controle e feminino tratado, foi observada menor quantidade de FvW no grupo controle em comparação ao grupo tratado (fig. 9A; p<0,001). Não houve diferença na expressão da proteína vWF entre os grupos controle feminino e masculino, no entanto, foi observada maior expressão no grupo feminino tratado do que no grupo masculino tratado (Fig. 9A; p<0,001). Os grupos queimado e queimado+CAPE apresentaram maior atividade mieloperoxidase que o grupo não queimado (fig. 11A; p<0,001 para ambos).
Comparando os grupos queimado e queimado+CAPE, 14 dias após a queimadura, observou-se que o grupo queimado+CAPE apresentou níveis de NO mais baixos que o grupo queimado (fig. 11B; p<0,01). O grupo queimado+CAPE apresentou menor número de macrófagos positivos para CD68 em comparação ao grupo queimado (Fig. 12B; p<0,001). Entre os grupos queimado e queimado+CAPE, observou-se que este último grupo apresentou níveis mais elevados de hidroxiprolina (fig. 12C; p<0,01).
O grupo queimado apresentou maior expressão de CD68 e PECAM-1 do que o grupo não queimado (Fig. 11C e D; p<0,05), enquanto no grupo queimado+CAPE não foi observada diferença em relação ao grupo não queimado-queimado. Os grupos queimados e queimados+CAPE apresentaram maiores níveis de MDA nas lesões em comparação ao grupo não queimado (fig. 13B, p<0,01). O mesmo resultado foi observado na determinação de óxido nítrico, onde o grupo queimado+CAPE apresentou teores de nitrito menores que o grupo queimado.
O grupo queimado + CAPE apresentou menos miofibroblastos, macrófagos positivos para CD68 e níveis mais elevados de hidroxiprolina do que o grupo queimado. Surpreendentemente, o grupo não queimado + CAPE apresentou maior peroxidação lipídica plasmática do que o grupo não queimado.
Leucotrienos e lipoxinas
Lipooxigenase
Além do 5-LO, que forma a via de síntese de leucotrienos, os neutrófilos humanos possuem 15-LO, que na presença de cálcio desencadeia a ativação do 5-LO e a formação de novos metabólitos chamados lipoxinas A4 e B4 (LXA4 e LXB4) (6). Observou-se recentemente que o ácido araquidônico é metabolizado em 15(R)-HpETE (40) quando a aspirina inibe covalentemente a COX-2 através da acetilação. Tanto o 5-LO quanto a COX-2 tratada com aspirina atuam em conjunto sobre o ácido araquidônico para formar lipoxinas com algumas diferenças estruturais, 15-epi-lipoxina A4 ou 15-epi-lipoxina B4, chamadas lipoxinas ativadas por aspirina (ATL). (40 ) ).
Num esforço para reduzir os efeitos das respostas inflamatórias, como dor, febre, inchaço e outros sintomas, o uso de anti-inflamatórios não esteróides (AINEs) tem alcançado proporções crescentes. É considerado um dos medicamentos mais utilizados no mundo. mundo (41). Atualmente temos duas grandes categorias de antiinflamatórios não esteróides: os AINEs clássicos, que são inibidores não seletivos da COX, e os AINEs seletivos. Os AINEs clássicos inibem as vias COX-1 e COX-2, embora com uma tendência geral à inibição seletiva da COX-1 (26) (Figura 4).
Esses antiinflamatórios clássicos estão frequentemente associados à toxicidade gastrointestinal, devido à maior inibição da COX-1, tal como se expressa constitutivamente neste local, o que resultaria na falta de proteção da mucosa gástrica (28). A seletividade da COX-2 e, portanto, o desenvolvimento de uma nova categoria de AINEs foi alcançada através do reconhecimento das diferenças na estrutura tridimensional das enzimas COX-1 e COX-2 (4). O sítio ativo da COX-1 se assemelha a um cilindro, enquanto o sítio ativo da COX-2 possui uma bolsa lateral que forma uma estrutura em forma de T (4).
Os inibidores clássicos possuem um braço longo que se encaixa especificamente no sítio ativo da COX-1 e parcialmente na COX-2 (não cobre a bolsa lateral) (4).
Ácido acetilsalicílico
Anti-inflamatório e dimorfismo sexual
O ácido acetilsalicílico, além de sua ação antiinflamatória ao inibir a via (COX), reduz a síntese de prostaglandinas, que por sua vez inibe a atividade da aromatase nas mulheres, resultando na diminuição dos níveis séricos de estrogênio (48, 49). ). Apesar deste efeito, o ácido acetilsalicílico afecta as principais vias de reparação, inibindo a produção de estrogénio, que são considerados agentes anti-inflamatórios endógenos (51). Nos homens, o ácido acetilsalicílico inibe a síntese do hormônio luteinizante (LH), o que requer uma via LO ativa (53).
Assim, se o ácido acetilsalicílico bloquear as vias COX e LO, a produção de testosterona também será prejudicada. Em estudos com homens idosos que apresentavam úlceras pépticas, os níveis circulantes de diidrotestosterona estavam aumentados em comparação com aqueles sem lesões crônicas (9). Outro exemplo seria em relação a alguns medicamentos, como o ibuprofeno, antiinflamatório não esteroidal não seletivo na artrite, que nas mulheres não tem efeito antiinflamatório em relação à dor, enquanto esse efeito observado nos homens . (11).
Este fato provavelmente se deve à diferença na expressão das isoformas da COX em homens e mulheres. Segundo estudos, os estrogênios podem regular a expressão de ambas as isoformas da COX em alguns níveis, enquanto a testosterona pode aumentar a expressão da COX-2 e inibir a produção de prostaglandinas (11). Estudos realizados no plasma de ratos queimados tratados com CAPE mostraram que os biomarcadores de dano oxidativo e atividade antioxidante permaneceram inalterados em comparação com grupos de controle não queimados e não tratados (24).
No grupo queimado não tratado, os níveis plasmáticos de MDA, xantina oxidase e NO aumentaram, enquanto os níveis de SOD diminuíram em relação ao controle, provavelmente devido ao maior consumo desse antioxidante após a queimadura (24).
Camundongos fêmeas, mas não machos, apresentam
O grupo feminino tratado apresentou maior número de células inflamatórias e menor densidade de fibras colágenas, que eram finas e curtas (fig. 7A). A dose de hidroxiprolina confirmou a análise histológica, mostrando que o grupo feminino tratado apresentou níveis mais baixos de hidroxiprolina em comparação ao grupo feminino controle (fig. 7B; p<0,01). Comparando os grupos controle feminino e masculino, observou-se que o aspecto do tecido de granulação foi semelhante entre eles, com fibras colágenas finas e alongadas (figs. 7A e 8A).
Entre os grupos feminino e masculino tratados, as fêmeas apresentaram maior número de células inflamatórias e menor densidade de fibras colágenas em comparação aos machos (figs. 7A e 8A). A análise das fibras colágenas foi confirmada pelos níveis de hidroxiprolina, que foram reduzidos no grupo feminino tratado em comparação ao grupo masculino tratado (fig. 7B; p<0,01). Ao comparar o grupo controle feminino e o grupo feminino tratado, foi observada menor atividade de mieloperoxidase no grupo controle feminino em comparação ao grupo feminino tratado (Fig. 8B; p<0,01) e também em comparação ao grupo masculino controle (Fig. 8B; p <0,01).
Comparando os grupos feminino e masculino tratados, o número de macrófagos positivos para F4/80 foi maior nas mulheres tratadas do que nos homens (Fig. 8B; p <0,05). Comparando os grupos de controle e de mulheres tratadas, o número de células positivas para MIF foi menor nas mulheres de controle do que nas mulheres tratadas, bem como menor do que no grupo de homens de controle (Fig. 8B; p <0,05, respectivamente). Entre os grupos de tratamento feminino e masculino, não foi observada diferença significativa no número de células positivas para MIF.
Comparando os grupos controle e feminino tratado, foi observada maior quantidade de macrófagos positivos para F4/80 nas fêmeas tratadas (Fig. Os grupos controle feminino e masculino apresentaram tecido de granulação com aspecto semelhante (discreto infiltrado inflamatório e alguns fibroblastos). o mesmo padrão foi observado entre os grupos controle e masculino tratado, em que a expressão do vWF foi menor no grupo controle em comparação ao grupo tratado (fig. 9A; p<0,05).
Ácido cafeico fenetil ester (CAPE) melhora a cicatrização de
Embora não tenha havido diferença significativa aos 70 dias pós-queimadura, o grupo queimadura+CAPE apresentou maior tendência à reepitelização em comparação ao grupo queimado. O grupo não queimado+CAPE apresentou menor atividade mieloperoxidase em comparação ao grupo não queimado (Fig. 11A; p<0,05). O grupo queimado + CAPE apresentou menor densidade de miofibroblastos positivos para actina do músculo liso α do que o grupo queimado (Fig. 12A; p <0,05).
Encarte: imunohistoquímica mostrando macrófagos CD68 positivos nos grupos queimadura e queimadura+CAPE e (C) níveis de hidroxiprolina. Ao comparar os dois grupos queimados, observou-se que o grupo queimado+CAPE apresentou menor expressão proteica de CD68 e PECAM-1 em comparação ao grupo queimado (fig. 11C e D; p<0,05 e p<0,001, respectivamente). Os grupos queimado e queimado+CAPE apresentaram maior expressão de α-actina de músculo liso do que o grupo não queimado (fig. 11E; p<0,01 e p<0,001, respectivamente).
O grupo queimado apresentou níveis plasmáticos mais elevados de MDA em comparação ao grupo não queimado (Fig. 13A; p<0,01). Comparando os dois grupos queimados, novamente, o grupo queimado+CAPE apresentou níveis mais baixos de MDA na lesão (Fig. A quantidade de proteínas carboniladas no plasma do grupo queimado foi maior do que no grupo não queimado (Fig. 13C; p<0,05); entretanto, o grupo queimado+CAPE apresentou menores quantidades de carbonilas plasmáticas em comparação aos grupos não queimado e queimado (Fig. 13C; p<0,01 e p<0,001, respectivamente).
A análise tecidual mostrou que os grupos queimado e queimado + CAPE apresentaram maior quantidade de proteínas carboniladas na lesão em comparação ao grupo não queimado (13D; p < 0,001 e p < 0,05, respectivamente), mas o grupo queimado + CAPE apresentou menor quantidade de carbonilas na lesão do que no grupo queimado (13D; p<0,01). A análise bioquímica realizada 14 dias pós-queimadura também mostrou que o CAPE reduziu a resposta inflamatória, como observado no grupo queimadura + CAPE, que apresentou menor atividade mieloperoxidase em comparação ao grupo queimado. Os grupos queimado e queimado+CAPE apresentaram maior expressão dessa proteína do que o grupo não queimado, e essa expressão foi maior no grupo queimado+CAPE do que no grupo queimado, 14 dias após a queimadura.
