Proteínas totais do liquido cefalorraqueano obtido por punção da cisterna magna: valores normais. Variações ligadas ao sexo.

Volume 34 - N.° 4

Dezembro de 1976

P R O T E Í N A S T O T A I S DO LIQUIDO C E F A L O R R A Q U E A N O

OBTIDO POR PUNÇÃO D A C I S T E R N A M A G N A :

V A L O R E S N O R M A I S

V A R I A Ç Õ E S L I G A D A S A O S E X O

L . M . SINGER VERMES * RUBENS GUIMARÃES FERRI * J. AlSEN ***

J. M . MARLET * * * *

As taxas de proteínas totais do líquido cefalorraqueano (LCR) normal

referidas na literatura, variam segundo os diferentes autores. Estas

varia-ções das taxas consideradas normais podem ser atribuídas, entre outros

fato-res, às diferentes técnicas laboratoriais que são utilizadas, assim como à

dificuldade de obtenção de amostras de LCR de indivíduos sadios.

Em estudo prévio

comparamos quatro metodologias de quantificação

de proteínas totais aplicáveis a fluídos biológicos diluídos — o método

turbi-dimétrico após precipitação das proteínas com ácido tricloracético

-

, o

colorimétrico preconizado por Heer & Margni

, o turbidimétrico após

trata-mento do material com solução de ácido sulfossalicílico e sulfato de sódio

e o colorimétrico desenvolvido por Lowry e col.

— e concluímos que, no

cômputo geral, o método de Lowry é o mais adequado dos procedimentos

estudados, em virtude de sua alta sensibilidade e exatidão, e por consumir

pequeno volume de amostra.

A possível presença de taxas de proteínas totais mais altas no LCR normal

de pessoas do sexo masculino (em relação àquelas encontradas nos de sexo

feminino) tem sido objeto de controvérsia entre os pesquisadores; enquanto

Izikowitz

, Dencker

, Spina-França & A m a r

, Dencker & Zethraeus

e

* Prof. Assistente do D e p a r t a m e n t o de Microbiologia e I m u n o l o g i a do Insti-tuto de Ciências Biomédicas da Univ. de São P a u l o .

** Prof. L i v r e - D o c e n t e do D e p a r t a m e n t o de Microbiologia e I m u n o l o g i a do Instituto de Ciências Biomédicas da Univ. de São P a u l o .

*** Assistente da Clínica N e u r o l ó g i c a da F a c u l d a d e de Medicina da Universi-dade de São P a u l o .

Marron

observaram que, em média, indivíduos do sexo masculino

apresen-tam proteinorraquia mais elevada que aqueles do sexo feminino, outros

pes-quisadores

.

.

>

>

.

>

não verificaram diferenças significantes quanto às

taxas protêicas totais do LCR normal entre os dois sexos.

Em face dos fatos acima mencionados, e levando em consideração que em

nosso meio é mais freqüente o emprego da punção subocicpital para a

co-lheita do LCR, determinamos pelo método de Lowry os níveis de proteínas

totais do LCR normal obtido por punção da cisterna magna (LCR-SO).

Ana-lisamos também se, quanto à proteinorraquia total normal, indivíduos do

sexo masculino e feminino pertencem a uma mesma população.

M A T E R I A L E M É T O D O S

D e t e r m i n a m o s a proteinorraquia total do L C R - S O de 98 pacientes a m b u l a t o r i a i s . Todos os pacientes a p r e s e n t a v a m e x a m e neurológico n o r m a l e as a m o s t r a s de L C R e r a m normais q u a n t o à pressão, cor, citologia, conteúdo em glicose, cloretos e uréia; a l é m disto, em todas as a m o s t r a s de L C R e r a m n e g a t i v a s as reações de Pandy, N o n n e - A p p e l t - S c h u m e T a k a t a - A r a ( p a r a pesquisa de globulinas) e soro-lógicas p a r a lues e cisticercose.

Dos 98 pacientes c u j a s idades v a r i a r a m entre 5 meses e 7 5 anos, 58 eram do sexo m a s c u l i n o e 4 0 do f e m i n i n o . Os dados de identificação destes pacientes en-c o n t r a m - se nas t a b e l a s 1 e 2 .

A p ó s a colheita o m a t e r i a l foi sempre centrifugado para eliminação de possí-veis células e m a n t i d o a 4 ° C (por prazo m á x i m o de 72 h o r a s ) até o m o m e n t o de e f e t u a r m o s as determinações de proteínas t o t a i s .

A quantificação das proteínas totais foi e f e t u a d a e m 0,2 m l de cada amostra, utilizando os reagentes cupro-alcalino e de Folin & Ciocalteu, conforme descrito por L o w r y e col. 1 J

. A colorimetria foi realizada em espectrofotômetro "Spectronik 20", no c o m p r i m e n t o de onda de 6 3 0 n m .

A análise estatística p a r a estudar a diferença n a proteinorraquia entre pacientes do sexo m a s c u l i n o e feminino foi feita usando-se a distribuição de freqüência "t" de S t u d e n t . I g u a l teste foi e m p r e g a d o para testar a hipótese de igualdade das médias de idades nos dois s e x o s . P a r a estas análises estabelecemos u m nível de rejeição de 5 % .

R E S U L T A D O S

Os resultados das determinações de proteínas totais efetuadas e m 58 a m o s t r a s de L C R de pacientes do sexo m a s c u l i n o e 4 0 do feminino a c h a m - s e respectivamente nas tabelas 1 e 2 ; as médias, desvios-padrão e intervalos de confiança ( 9 5 , 5 % ) c a l c u l a d o s p a r a a m b o s os sexos e n c o n t r a m - s e na t a b e l a 3, assim c o m o os dados estatísticos referentes à população m i s t a .

Os valores m á x i m o e m í n i m o de proteínas totais encontrados nas pessoas do sexo m a s c u l i n o f o r a m 47,13 e 16,96 m g / I C O m l , r e s p e c t i v a m e n t e . O m a i o r teor protêico encontrado no L C R de pessoas do sexo feminino foi d e 37,68 m g / 1 0 0 m l e o m e n o r foi de 14,43 m g / 1 0 0 m l .

D I S C U S S Ã O

O teor protêico médio encontrado no LCR-SO de 98 pessoas (de ambos

os sexos) foi de 26,78 mg/100 ml. Este valor é mais alto que aqueles

encon-trados por Hill e col.

, Spina-França & A m a r

, Rieder

e Rieder &

Wü-thrich

, como se pode observar pelo diagrama apresentado na figura 2. Esta

diferença de resultados, em parte pode ser decorrência do uso de diferentes

metodologias (e conseqüente variabilidade de exatidão), pois tanto Hill e

col.

quanto Spina-França & A m a r

estabeleceram os níveis normais da

proteinorraquia cisternal, mediante determinações efetuadas por métodos

tur-bidimétricos. De fato, em estudo prévio

demonstramos que o método

tur-bidimétrico após precipitação das proteínas com ácido tricloracético fornece

valores 12,33% inferiores aos reais, e a colorimetria de soluções protêicas

após tratamento com os reagentes cupro-alcalino e de Folin-Ciocalteu

ofere-cem valores que, em média, são 5,41% mais elevados que os reais.

Os níveis médios de proteínas totais do LCR-SO calculados por Rieder

e Dieder & Wüthrich

(que também utili2aram o método de Lowry) foram

também inferiores aos obtidos na presente investigação, embora a diferença

entre os resultados referidos por estes autores e os nossos seja pouco

acentua-da. Esta diferença poderia ser explicada pela hipótese levantada por alguns

autores

-

-

de que fatores ecológicos possam atuar sobre os níveis de

proteínas totais do LCR normal; além disso devemos ainda considerar que

Jung e c o l .

observaram aumento na proteinorraquia total de 18% por

dé-cada e sugeriram que tal elevação de valores poderia estar relacionada a

mudanças que a humanidade vem sofrendo, nos seus hábitos e fatores

am-bientais .

O teor protêico médio encontrado no LCR-SO dos indivíduos do sexo

masculino foi de 28,76 mg/100 ml e o intervalo de confiança (95,5%) foi

de 14,76 a 42,76 mg/100 ml. Já os indivíduos do sexo feminino

apresenta-ram teores protêicos inferiores: 23,91 mg/100 ml em média, e um intervalo

de confiança de 13,01 a 34,81 mg/100 ml. Apesar de vários autores

.

»

-

da proteinorraquia total de homens e mulheres, a análise estatística de

nos-sos resultados mostrou haver, nos indivíduos do sexo masculino, valores

mé-dios de proteínas totais do LCR significantemente mais elevados que aqueles

do sexo feminino. Esta observação concorda com aquelas feitas por Dencker

,

Dencker & Zethraeus

, Izikowitz

, Marron

e Spina-França & A m a r

.

Dado que alguns autores

.

>

>

.

.

verificaram tendência

progres-siva para elevação dos valores da proteinorraquia com o avançar da idade,

e outros

>

observaram valores elevados de proteínas totais do LCR

nor-mal em indivíduos com mais de 60 anos de idade, tomamos a precaução de

verificar se os diferentes valores encontrados quanto às proteínas totais do

LCR nos dois sexos, não poderiam ser atribuídos a erros de amostragem,

no sentido de haver diferenças quanto ao fator idade (entre indivíduos do

sexo masculino e feminino).

Como verificamos que a média das idades dos indivíduos do sexo

mas-culino (31,7 anos) não diferia significantemente (t = 0,39) daquela encontrada

nas pessoas de sexo feminino (28,7 anos), pudemos concluir que não havia

tal tipo de interferência em nossos resultados.

A diferença relativa entre a concentração protêica média do LCR de

indivíduos do sexo masculino e do feminino foi de aproximadamente 20%.

Esta diferença é menor que aquelas encontradas por Dencker

, Dencker &

Zethraeus

e Izikowitz

(que foram de 25,27 e 27%, respectivamente) e

maior que aquela encontrada por Spina-França & A m a r

C O N C L U S Õ E S

Indivíduos do sexo masculino apresentam, em média, taxas de proteínas

totais do LCR-SO superiores àquelas encontradas em indivíduos do sexo

femi-nino. As taxas normais de proteínas totais do LCR-SO de pessoas do sexo

masculino e feminino encontram-se entre 14,76 e 42,76 mg/100 ml e 13,01 a

34,81 mg/100 ml, respectivamente, quando efetuamos a quantificação de

proteínas totais pelo método de Lowry.

R E S U M O

Aplicando o método de Lowry, determinamos as proteínas totais do LCR

considerado normal de 98 pessoas: 58 do sexo masculino e 40 do feminino.

Todas as amostras de LCR foram obtidas por punção da cisterna magna

(LCR-SO).

Mediante tratamento estatístico dos valores obtidos, estabelecemos as

taxas normais de proteinorraquia cisternal para a população mista: limite

superior de 40,36 mg/100 ml, valor médio de 26,78 mg/100 e limite inferior

de 13,20 mg/100 ml. Estes valores são superiores àqueles referidos na

literatura.

Foi verificado que a proteinorraquia total é, em média, significantemente

maior nos indivíduos do sexo masculino, que nos de feminino.

Consequente-mente estabelecemos em separado os níveis normais de proteínas totais do

LCR-SO para pessoas do sexo masculino e feminino.

As taxas médias de proteínas totais do LCR-SO de pessoas do sexo

mas-culino e feminino são de 28,76 e 23,91 mg/100 ml, respectivamente; os limites

normais vão de 16,96 a 47,13 mg/100 ml para o sexo masculino e de 14,76

a 42,76 mg/100 ml para o sexo feminino.

S U M M A R Y

Total protein content of normal cisternal cerebrospinal fluid:

Variations related to sex

The average value and the normal range of cisternal fluid total protein

was calculated for the mixed population (males and females). The mean

protein value was 26.78 mg/100 ml, the lower and upper limits were

respec-tively 13.20 and 40.36 mg/100 ml. These data are higher than those

stated in some publications, and factors that could interfere in the different

results mentioned in the literature are briefly discussed.

Since the statistical analysis of the results showed that the mean total

protein concentration in males (28.76 mg/100 ml) was higher than in females

(23.91 mg/100 ml), normal limits for each sex were established: 16.96 to

47.13 mg/100 ml for males and 14.76 to 42.76 mg/100 ml for females.

R E F E R E N C I A S

1 . B O S S A K , H . N . ; R O S E N B E R G , A . A . & H A R R I S , A . — A q u a n t i t a t i v e turbidi¬ metric m e t h o d for the determination of spinal fluid protein. J. vener. Dis. Inform. 3 0 : 1 0 0 , 1 9 4 9 .

2 . C A S T A I G N E , P . ; L H E R M I T T E , F . ; S C H U L L E R , E . ; R O U Q U E S , C . & L O R I D A N , M . — É t u d e électrophorétique des proteines du liquide céphalo-rachidien au cours de la sclérose en p l a q u e s . R e v . neurol. ( P a r i s ) 1 2 4 : 9 7 , 1 9 7 1 .

3 . D E N C K E R , S . J . — V a r i a t i o n of total cerebrospinal fluid proteins and cells with sex and a g e . W l d . N e u r o l . 3 : 7 7 8 , 1 9 6 2 .

4 . D E N C K E R , S . J . & Z E T H R A E U S , S. — Sex differences in total protein content of cerebrospinal fluid. A c t a psychiat. scand. 3 6 : 7 6 , 1 9 6 1 .

5 . F L O D E N , C . H . — Cerebrospinal fluid protein in syphilis. A c t a derm.-Venereol. ( S t o c k h o l m ) 3 5 (Suppl. 3 2 ) :5-84, 1 9 5 5 .

6 . G I L L A N D , O . — L u m b a r cerebrospinal fluid t o t a l proteins in h e a l t h y s u b j e c t s . A c t a neurol. scand. 4 3 : 5 2 6 , 1 9 6 7 .

7 . H E E R , E . E . & M A R G N I , R . A . — Electro e I m m u n o e l e c t r o f o r e s i s . M a n u a l de L a b o r a t ó r i o e Interpretaciones F u n d a m e n t a l e s . G u m e r s i n d o F. Fernandez, Bue-nos Aires, 1971, p. 2 6 9 - 2 7 6 .

8 . H I L L , N . C . ; M c K E N Z I E , B . F . ; M c G U C K I N , W . F . ; G O L D S T E I N , N . P . & S V I E N , H . J . — Proteins, glycoproteins and lipoproteins in the serum and cerebrospinal fluid of h e a l t h y s u b j e c t s . Proc. Staff, meet. M a y o Clin. 3 3 : 6 8 6 , 1 9 5 8 .

9 . I Z I K O W I T Z , S. — apud F L O D E N , C . H .5

1 0 . JUNG, P . R . ; R I E D E R , H . P . & J E L T S C H , C . — N o r m a l w e r t e des Totalproteins im L u m b a l liquor: A l t e r s - , Geschlechts- und U m w e l t a b h ä n g i g k e i t . Klin. W s c h r . 5 1 : 8 1 0 , 1 9 7 3 .

1 1 . L O W R Y , O . H . ; R O S E B R O U G H , N . J . ; F A R R , A . L . & R A N D A L L , R . J . — Protein m e a s u r e m e n t with the Folin phenol r e a g e n t . J. biol. Chem. 1 9 3 : 2 6 5 , 1 9 5 1 . 1 2 . M A D O N I C K , M . & W E I S S M A N , F . — T h e total spinal fluid protein concentration

in patients over 6 5 . Geriatrics 1 0 : 5 3 3 , 1 9 5 5 .

1 3 . M A R R O N , T . U . — Errors in spinal fluid protein estimation w i t h sulphosalicylic acid r e a g e n t . A m e r . J. clin. Path. 1 2 : 3 7 , 1 9 4 2 .

1 4 . M E R T T N , J . ; W I S S E R , H . & R O E R R , P . — U n t e r s u c h u n g über den N o r m a l ¬ bereich des Gesamteiweisses u n d der Eiweissfraktionen des L i q u o r cerebrospinalis n a c h elektrophoretischer T r e n n u n g auf C e l l u l o s e a c e t a t f o l i e . Z . klin. Chem. 9 : 337, 1 9 7 1 .

1 5 . M E U L E M A N S , O. — D e t e r m i n a t i o n of total protein in spinal fluid w i t h sulpho-salicylic acid and trichloroacetic a c i d . Clin. chim. A c t a 5 : 7 5 7 , 1 9 6 0 .

1 7 . P R I C E , J . D . ; G A N T , P . W . & S A U L , K . J . — N o r m a l concentration of lactate, glucose and protein in cerebrospinal fluid, and the diagnostic implications of a b n o r m a l concentrations. Clin. Chem. 1 6 : 5 6 2 , 1 9 7 0 .

1 8 . R I E D E R , H . P . — Eine neue Modifikation der C u - F o l i n Methode zur B e s t i m m u n g des Total-proteins im Liquor cerebrospinalis. Klin. W s c h r . 4 4 : 1 0 3 6 , 1 9 6 6 . 1 9 . R I E D E R , H . P . & W Ü T H R I C H , R . — Die Cu-Folin M e t h o d e zur B e s t i m m u n g des

G e s a m t e i w e i s s g e h a l t e s im liquor. K l i n . W s c h r . 4 0 : 1 0 7 0 , 1 9 6 2 .

2 0 . S P I N A - F R A N Ç A , A. & A M A R , I . — V a l o r e s normais da concentração do líquido cefalorraquidiano: variações ligadas ao l o c a l de colheita da a m o s t r a . A r q . Neuro-Psiquiat. (São P a u l o ) 1 9 : 2 2 0 , 1 9 6 1 .

2 1 . S P I N A - F R A N Ç A , A . & A M A R , T. — Proteinorraquia t o t a l . V a r i a ç õ e s relacio-nadas ao sexo e à idade. A r q . Neuro-Psiquiat. (São P a u l o ) 2 1 : 1 3 , 1 9 6 3 . 2 2 . V E R M E S , L . M . S . — Proteínas totais do líquido cefalorraqueano: métodos de

d e t e r m i n a ç ã o e níveis normais (variações ligadas ao sexo, idade e local de p u n ç ã o ) . São Paulo, 1 9 7 5 ( D i s s e r t a ç ã o de mestrado — Inst. Ciências Biom. Univers. São P a u l o ) .

2 3 . W I D E L L , S. — On the cerebrospinal fluid in normal children and in patients w i t h acute abacterial m e n i n g o - e n c e p h a l i t i s . A c t a paediat. ( U p p s a l a ) 4 7 ( S u p p l . 1 1 5 ) : 5 , 1 9 5 8 .