Reação de fixação do complemento para cisticercose no líquido cefalorraquidjano: Emprego de novo antígeno por método quantitativo.

REAÇÃO DE FIXAÇÃO DO COMPLEMENTO PARA CISTICERCOSE NO

LÍQUIDO CEFALORRAQUIDJANO. EMPREGO DE NOVO ANTÍGENO

POR MÉTODO QUANTITATIVO

A L V A R O E . D E A L M E I D A M A G A L H Ã E S *

Desde a introdução da reação de fixação do complemento para

diagnós-tico da cisticercose cerebral, por Moses

\ em 1911, o seu valor vem sendo

salientado por vários autores que têm estudado o assunto '

<

·

.

·

·

·

·

.

Em-bora os antígenos de cisticercose tenham sido preparados por diversos

méto-dos, a ocorrência relativamente freqüente de reações inespecíficas não tem

sido evitada, principalmente em casos de neurossífilis

·

. Ainda

recente-mente Nieto

, usando antígeno de Cysticercus cellulosae, previamente

trata-do pela acetona, verificou positividade da reação para cisticercose em cerca

de 30% dos casos com liqüido cefalorraquidiano com reação de Wassermann

positiva.

N o presente trabalho estudamos a reação de fixação do complemento

para cisticercose no liqüido cefalorraquidiano usando um novo antígeno, por

método quantitativo; os resultados, obtidos em grupos bem definidos de

pa-cientes, mostraram ser o método dotado de sensibilidade e especificidade,

mesmo em casos de neurossífilis.

M A T E R I A L Ε M É T O D O S

Antígeno — O antígeno é um extrato metílico de Cysticercus cellulosae

desengordurado pelo benzeno. O tratamento pelo benzeno, empregado

tam-bém por Freitas e Almeida

no preparo de antígeno de T. cruzi, tem sido

indicado em vários sistemas, na extração de substâncias não responsáveis

pela especificidade antigênica.

Preparo do antígeno — 1) Retirar cuidadosamente as vesiculas de

Cysti-cercus cellulosae da carne de porco infestado; 2) lavar as vesiculas

(ínteT r a b a l h o do D e p a r t a m e n t o de P a r a s i t o l o g i a ( D i r e t o r : P r o f . M a u r o P e r e i r a B a r -r e t o ) da F a c u l d a d e de M e d i c i n a de R i b e i -r ã o P -r ê t o ( S ã o P a u l o ) . A p -r e s e n t a d o a o C e n t r o M é d i c o de R i b e i r ã o P r ê t o e m 16 a b r i l 1957.

gras e rompidas) várias vezes em solução fisiológica; 3) secar em papel de

filtro; 4) adicionar um volume de benzeno igual a 3 vezes o volume de

cisticercos; 5) fazer a extração dos cisticercos com benzeno durante 24

ho-ras em temperatura ambiente, agitando várias vezes e separando-os por

ta-mização (repetir duas vezes este processo de extração com intervalo de 24

horas); 6) lavar várias vezes os cisticercos sobre o tamis com benzeno; 7)

secar em estufa a 37^0 durante 6 horas e completar a secagem no vácuo,

em temperatura ambiente; 8) triturar os cisticercos em gral; 9) extrair o

pó em álcool metílico absoluto, na proporção de 1 g do pó para 20 ml de

álcool. Agitar durante uma hora e deixar que a extração se realize durante

25 dias em temperatura ambiente; 10) centrifugar à temperatura de 3

C-Q"C a cerca de 10.000 gravidades durante 15 minutos; 11) o sobrenadante

é o antígeno que será conservado em geladeira a 4°C-6*C.

Liqüido cefalorraquidiano * — Os líquidos cefalorraquidianos estudados

foram obtidos de pacientes com cisticercose cerebral, parasitològicamente

comprovada (grupo I ) ; de pacientes sem distúrbios neurológicos e com

líquo-res sem alterações (grupo I I ) ; de pacientes com distúrbios neurológicos e

líquores com ou sem alterações (grupo I I I ) ; de pacientes com reação de

Wassermann positiva no liquor (grupo I V ) . Estes líquidos

cefalorraquidia-nos satisfizeram as seguintes exigências: aparência límpida, ausência de

he-moglobina e ausência de pus. Centrifugados eram mantidos em geladeira a

4

C-6

C. Quando necessário eram conservados congelados a —20°C.

A reação — A reação de fixação do complemento foi feita pelo método

de Wadsworth, Maltaner e Maltaner

. As relações quantitativas entre

an-tígeno, anticorpos do liquor e complemento foram determinadas pelo método

da isofixação

.

Curvas iso-hemolíticas

foram levantadas projetando as quantidades de

antígeno (em abscissas) contra as quantidades de liqüido cefalorraquidiano

(em ordenadas) necessárias para formar complexos antígeno-anticorpo que

deixam livre, após a fixação, uma unidade de complemento. As curvas

fo-ram traçadas com 3 e 6 unidades de complemento e pudefo-ram ser

classifica-das como do tipo 1

. Nesse caso, doses de antígeno podem ser usadas desde

que estejam afastadas da zona onde antígeno e anticorpo são suplementares.

Por conveniência foi empregada uma "dose de reatividade paralela"

.

A reação é feita de acordo com o quadro 1.

R E S U L T A D O S Ε D I S C U S S Ã O

reação de fixação do complemento para cisticercos foi positiva nos 10 casos

(quadro 2 ) .

A inespecificidade do antígeno foi testada, inicialmente, em 31 pacientes

sem distúrbios neurológicos e com líquidos cefalorraquidianos sem alterações

(grupo I I ) . A reação de fixação de complemento para cisticercose foi

nega-tiva nos 31 pacientes.

A inespecificidade do antígeno foi ainda estudada em 142 líquidos

cefa-lorraquidianos de pacientes, presumivelmente não parasitados por Cysticercus

cellulosae. Estes pacientes foram divididos em dois grupos: grupo I I I

cons-tituído de pacientes com distúrbios neurológicos e apresentando líquores com

ou sem alterações; grupo I V constituído de pacientes em que a reação de

Wassermann, pela técnica quantitativa de Wadsworth, Maltaner e Maltaner,

foi positiva no liquor.

O grupo I I I é constituído de 113 casos que, numa catalogação genérica,

podem ser assim distribuídos: síndromes convulsivas (66 casos); síndromes

de hipertensão intracraniana ( 4 ) ; distúrbios circulatórios cerebrais ( 8 ) ;

sín-drome de Parkinson ( 1 ) ; sínsín-dromes medulares ( 8 ) ; polineurites ( 5 ) ; neurites

(8); meningites ( 2 ) ; neurossífilis ( 5 ) ; miopatias ( 2 ) ; tumores cerebrais ( 1 ) ;

encefalopatias infantis ( 2 ) ; acidentes cerebrais traumáticos ( 1 ) . Neste grupo

a reação de fixação do complemento para cisticercose foi negativa em 108

casos e positiva em 5 casos que figuram na relação acima com os

diagnós-ticos de síndromes de hipertensão intracraniana (3) e síndromes

convulsi-vas ( 2 ) .

Analisando com mais detalhe as observações clínicas destes 5 pacientes

com reação positiva para cisticercose, podemos sintetizar o seguinte:

C A S O 61 — J. P., s e x o m a s c u l i n o , 41 a n o s d e i d a d e . H i s t ó r i a c l í n i c a de m a i s ou m e n o s 8 anos, c o m q u e i x a s m ú l t i p l a s nas q u a i s p r e d o m i n a m o d e s â n i m o e a f r a q u e z a g e r a l . H á 6 m e s e s t e v e crise c o n v u l s i v a t i p o G M . A o e x a m e f í s i c o : c i s t i c e r c o s e c u t â nea g e n e r a l i z a d a ( c o m p r o v a d a p o r b i o p s i a ) . D i a g n ó s t i c o : c i s t i c e r c o s e c e r e b r a l . O l i -q ü i d o c e f a l o r r a -q u i d i a n o p o r p u n ç ã o S O D , ou s e j a p o r v i a s u b o c c i p i t a l e m d e c ú b i t o l a t e r a l , m o s t r o u : p r e s s ã o i n i c i a l 23 ( m a n ô m e t r o d e C l a u d e ) ; 30,4 c é l u l a s p o r μ \ ( l i n -f ó c i t o s 9 4 % , m o n ó c i t o s 5 % , e o s i n ó -f i l o s 1 % ) ; p r o t e í n a s t o t a i s 84 m g p o r 100 m l ; r. de P a n d y + + + ; r. de N o n n e - A p p e l t + + + . R e a ç ã o de W a s s e r m a n n n e g a t i v a .

C A S O 70 — M . L . Z., s e x o f e m i n i n o , 7 a n o s de i d a d e . H i s t ó r i a c l í n i c a de u m a n o . C e f a l é i a p e r s i s t e n t e p r e d o m i n a n t e m e n t e da r e g i ã o da nuca, p o r v e z e s a c o m p a n h a d a de crises de v ô m i t o de t i p o c e r e b r a l . H á 2 m e s e s c r i s e c o n v u l s i v a única. N o s a n t e -c e d e n t e s , t e n í a s e . A o e x a m e f í s i -c o : e d e m a de p a p i l a f r u s t r o b i l a t e r a l . A u s ê n -c i a de o u t r o s s i n t o m a s e sinais n e u r o l ó g i c o s ou p s í q u i c o s . S u s p e i t a c l í n i c a : c i s t i c e r c o s e c e r e b r a l . O l i q ü i d o c e f a l o r r a q u i d i a n o ( p u n ç ã o S O D ) m o s t r o u : p r e s s ã o i n i c i a l 27 ( m a -n ô m e t r o de C l a u d e ) ; 36 c é l u l a s p o r μ \ ( l i -n f ó c i t o s 8 6 % , m o -n ó c i t o s 1 2 % , e o s i -n ó f i l o s 2 % ) ; p r o t e í n a s t o t a i s 116 m g por 100 m l ; r. P a n d y + + + ; r. N o n n e - A p p e l t + + + ; r. d e W a s s e r m a n n n e g a t i v a .

c é l u l a s p o r μ \ ( l i n f ó c i t o s 9 4 % , m o n ó c i t o s 5 % , e o s i n ó f i l o s 1 % ) ; p r o t e í n a s t o t a i s 84 m g p o r 100 m l ; r. P a n d y + + + ; r. N o n n e - A p p e l t + + + . R e a ç ã o de W a s s e r m a i m n e g a t i v a .

C A S O 98 — D . C , s e x o m a s c u l i n o , 6 a n o s de i d a d e . H i s t ó r i a c l í n i c a de 3 meses. Crises de c e f a l é i a , v ô m i t o s e e n t o r p e c i m e n t o i n t e l e c t u a l c o m d u r a ç ã o de dias. A o e x a m e f í s i c o : t o r p o r l e v e , l i g e i r a r i g i d e z da n u c a . S u b f e b r i l ( 3 7 * , 8 C ) . P a r e s i a d o r e t o e x t e r n o ã d i r e i t a , s e m o u t r o s d i s t ú r b i o s n e u r o l ó g i c o s . D i a g n ó s t i c o : m e n i n g i t e t u b e r c u l o s a ? c i s t i c e r c o s e c e r e b r a l ? O l i q ü i d o c e f a l o r r a q u i d i a n o ( p u n ç ã o S O D ) m o s -t r o u : p r e s s ã o i n i c i a l p r e j u d i c a d a ; 80 c é l u l a s p o r μ ΐ ( l i n f ó c i -t o s 8 9 % , m o n ó c i -t o s 1 1 % , p r e s e n ç a de g r a n u l a ç õ e s e o s i n ó f i l a s ) ; p r o t e í n a s t o t a i s 98 m g p o r 100 m l ; r. P a n d y

+ + + ; r. N o n n e - A p p e l t + + . R e a ç ã o de W a s s e r m a n n n e g a t i v a .

C A S O 119 — P . G . , s e x o m a s c u l i n o , 54 a n o s de i d a d e . H i s t ó r i a p r e c á r i a , sendo a s s i n a l a d o s p e r í o d o s de d i s t ú r b i o s m e n t a i s ( d é f i c i t da m e m ó r i a , a p a t i a , i n é r c i a ) , pert u r b a ç õ e s da f a l a do pert i p o a f á s i c o e crises c o n v u l s i v a s r e c e n pert e s . P a c i e n pert e b r a d i p s í -q u i c o c o m s e n s í v e i s d i s t ú r b i o s da m e m ó r i a p a r a f a t o s r e c e n t e s e c o m c e r t o g r a u de m ó r i a . A o e x a m e f í s i c o : c i s t i c e r c o s e c u t â n e a g e n e r a l i z a d a ( c o m p r o v a d a p o r b i ó p s i a ) . D i a g n ó s t i c o : s í n d r o m e c o n v u l s i v a , s í n d r o m e p s í q u i c a do l o b o f r o n t a l , c i s t i c e r c o s e cer e b cer a l ? O l i q ü i d o c e f a l o cer cer a q u i d i a n o ( p u n ç ã o S O D ) m o s t cer o u : 23 c é l u l a s p o cer μ ΐ ( l i n -f ó c i t o s 74,5%, m o n ó c i t o s 9 % , e o s i n ó -f i l o s 1 6 % , b a s ó -f i l o s 0 , 5 % ) ; p r o t e í n a s t o t a i s 38 mg por 100 m l ; r. P a n d y + + ; r. N o n n e - A p p e l t + . R e a ç ã o d e W a s s e r m a n n n e g a t i v a .

No grupo IV, constituído de pacientes com reação de Wassermann

po-sitiva no liquor, a reação de fixação do complemento para cisticercose foi

positiva em 2 casos, um dos quais pôde ser estudado.

C A S O 145 — M . O., s e x o m a s c u l i n o , 52 a n o s de i d a d e . H i s t ó r i a de 5 a n o s a p r o -x i m a d a m e n t e , a p r e s e n t a n d o p a r e s l e s i a dos m e m b r o s i n f e r i o r e s , a t a -x i a na m a r c h a e d i s t ú r b i o s u r i n á r i o s . A o e x a m e f í s i c o : s í n d r o m e r a d í c u l o c o r d o n a l p o s t e r i o r da m e -d u l a e sinal -de A r g y l l - R o b e r t s o n . D i a g n ó s t i c o : t a b e s . O l i q ü i -d o c e f a l o r r a q u i -d i a n o ( p u n ç ã o l o m b a r ) m o s t r o u : 88 c é l u l a s por μ \ ( l i n f ó c i t o s 84,5%, m o n ó c i t o s 1 4 % , eosi-n ó f i l o s 1 , 5 % ) ; p r o t e í eosi-n a s t o t a i s 50 m g p o r 1C0 m l ; r. P a eosi-n d y + + ; r. N o eosi-n eosi-n e - A p p e l t + + ; r. W e i c h b r o d t - t - + . R e a ç ã o de W a s s e r m a n n p o s i t i v a

Neste caso nossa atenção foi chamada pela positividade da reação para

cisticercose. Embora este paciente apresentasse um quadro clínico de

neu-rossífilis, a cisticercose não pôde ser excluída, pois havia ausência de

plas-mócitos e presença de eosinófilos no liquor. Tal quadro somente em caráter

excepcional poderia ser explicado unicamente pela infecção luética

.

Não acreditamos que neste caso a reação positiva para cisticercose possa

ser considerada como efeito não específico da sifilís, pois verificamos nos 29

casos deste grupo (grupo I V ) com positividade da reação de Wassermann no

liqüido cefalorraquidiano apenas um outro caso com reação positiva para

cisticercose.

C O N C L U S Ã O

R E S U M O

O autor descreve um novo antígeno de Cysticercus cellulosae e apresenta

os resultados obtidos com o seu emprêgo na reação de fixação do

comple-mento com liqüido cefalorraquidiano, para diagnóstico da cisticercose

ce-rebral.

O antígeno é preparado com vesículas de C. cellulosae obtidas de porcos

infestados. As vesículas são lavadas várias vêzes em solução fisiológica e

secadas em papel de filtro. O material sêco é extraído com benzeno,

du-rante 24 horas, à temperatura ambiente; o benzeno é desprezado e a extração

repetida várias vêzes. O material é, então, colocado no vácuo, sôbre cloreto

de cálcio e, finalmente, extraído com 20 volumes de álcool metílico absoluto,

durante 25 dias. O sobrenadante obtido após centrifugação (10.000 G

duran-te 15 minutos a 3ºC-6ºC) é o antígeno que é conservado em geladeira.

A reação de fixação do complemento é estandardizada, segundo o método

da isofixação, pela técnica quantitativa de Wadsworth, Maltaner e Maltaner.

Os resultados obtidos com líquidos cefalorraquidianos de pacientes com

cisticercose cerebral e outras condições mostram que o método usado com

o novo antígeno é recomendável para o diagnóstico da cisticercose cerebral

humana.

S U M M A R Y

Fixation complement test for cysticercosis in spinal fluid.

New antigen for quantitative method.

A new Cysticercus cellulosae antigen is described and the results of

com-plement-fixation reactions are presented. The antigen is prepared with

ve-sicles of C. cellulosae from infected pig, washed several times with saline

and dryed on filter paper. The dryed material is extracted with benzol for

24 hours at room temperature; the benzol is discarded and the extraction is

repeated several times. The material is then dryed over calcium chloride and

extracted with 20 volumes of absolute methyl alcohol during 25 days. The

liquid collected after centrifugation (10,000 G, during 15 minutes at low

tem-perature) is kept in ice box and used as antigen. The complement fixation

test was standardized by the isofixation method for the quantitative technic.

The results obtained with cerebrospinal fluid of patients suffering from

cerebral cysticercosis and other conditions showed that the method used is

a valuable test for the diagnosis of human cerebral cysticercosis.

A G R A D E C I M E N T O S

M a t t o s P i m e n t a q u e f o r n e c e r a m l í q u o r e s de p a c i e n t e s c o m c i s t i c e r c o s e c e r e b r a l ; a o D r . O d a i r de O l i v e i r a q u e f o r n e c e u os l í q u o r e s d e p a c i e n t e s do H o s p i t a l P s i q u i á t r i c o " S a n t a T e r e s a " ; à D r a . A l b a S a n c h e s as r e a ç õ e s de W a s s e r m a n n q u e f ê z nos casos a p r e s e n t a d o s ; a o D r . I s n a r d dos R e i s os e x a m e s g e r a i s a o s l í q u o r e s e s t u d a d o s .

R E F E R Ê N C I A S

1. A L M E I D A , J. O. — a) I s o f i x a t i o n c u r v e s as a m e t h o d for s t a n d a r d i z a t i o n of q u a n t i t a t i v e c o m p l e m e n t f i x a t i o n test. J. I m m u n o l . , 76:259263, 1956; b) C o m u n i -c a ç ã o pessoal, 1956. 2. F R E I T A S , J. L . P . ; A L M E I D A , J. O. — N o v a t é -c n i -c a de f i x a ç ã o do c o m p l e m e n t o p a r a m o l é s t i a de C h a g a s . O H o s p i t a l , 35:787-800, 1949. 3. L A N G E , O. — α ) O l i q ü i d o c e f a l o r r a q u i d i a n o na c i s t i c e r c o s e do s i s t e m a n e r v o s o c e n -t r a l . R e v . N e u r o l , e P s y c h i a -t . de S ã o P a u l o , 2:3-11, 1936; b) S í n d r o m o l i q u ó r i c o da. c i s t i c e r c o s e e n c e f a l o m e n i n g é i a . R e v . N e u r o l , e P s y c h i a t . d e S ã o P a u l o , 6:35-38, 1940. 4. M O N T E I R O S A L L E S , F . J. — C i s t i c e r c o s e C e r e b r a l . T e s e da F a c u l d a d e de M e d i -cina da U n i v e r s i d a d e d e S ã o P a u l o , 1934. 5. M O S E S , A . — D o s m é t o d o s b i o l ó g i c o s de d i a g n ó s t i c o da c i s t i c e r c o s e c e r e b r a l . M e m . I n s t . O s w a l d o Cruz, 3:320-327, 1911. 6. N I E T O , D . — C y s t i c e r c o s i s o f t h e n e r v o u s s y s t e m . D i a g n o s i s by m e a n s o f the spinal fluid c o m p l e m e n t f i x a t i o n test. N e u r o l o g y , 6:725-738, 1956. 7. P E S S O A , S. B . ; F L E U ¬ R Y D A S I L V E I R A , J. — S ô b r e a r e a ç ã o de f i x a ç ã o d e c o m p l e m e n t o e o u t r o s m é t o d o s d e l a b o r a t ó r i o p a r a o d i a g n ó s t i c o da c i s t i c e r c o s e . S ã o P a u l o M e d . , 2:499-517, 1929. 8. P I N T O P U P O , P . ; C A R D O S O , W . ; R E I S , J. B . ; S I L V A , C. P . — S ô b r e a c i s t i c e r c o s e e n c e f á l i c a . E s t u d o c l í n i c o , a n á t o m o - p a t o l ó g i c o , r a d i o l ó g i c o e do l i q ü i d o c e í a l o r r a q u e a ¬ no. A r q . Assist. P s i c o p . Est. S ã o P a u l o , 10-11:3-123, 1945-1946. 9. R E I N L E I N , J. M . Α . ; T R I G U E R O S , Ε . Α . ; A L C A L D E , S. O. — T h e s t u d y o f c e r e b r o s p i n a l fluid in d i a g n o s i s o f c y s t i c e r c o s i s o f the c e n t r a l n e r v o u s s y s t e m . B u l l . I n s t . M . R e s e a r c h ( M a d r i d ) , 4:6576, 1951. 10. R E I S , J. B . — C o n t r i b u i ç ã o d o l a b o r a t ó r i o p a r a o d i a g -n ó s t i c o da c i s t i c e r c o s e e -n c e f á l i c a . R e s u m o i-n R e v . P a u l i s t a de M e d . , 43:164-165, 1953. 11. R E I S , J. Β . ; B E I , Α . ; D I N I Z , Η . Β . — D i f i c u l d a d e s no d i a g n ó s t i c o d i f e r e n c i a l en-t r e c i s en-t i c e r c o s e e n c e f á l i c a e n e u r o l u e s . A r q . N e u r o - P s i q u i a en-t . ( S ã o P a u l o ) , 7:156-164, 1949. 12. S P I N A F R A N Ç A , A . — C i s t i c e r c o s e do s i s t e m a n e r v o s o c e n t r a l . R e v . P a u -lista de M e d . , 48:59-70, 1956. 13, T H O M P S O N , W . R . ; A L M E I D A , J. O. — Use of m o d e l s y s t e m t o i n d i c a t e p r e s e n c e o f a second a g e n t in t u b e r c u l o s i s a n t i g e n p r e p a r a -t i o n . E m p u b l i c a ç ã o . 14. W A D S W O R T H , A . B . — S -t a n d a r d M e -t h o d s o f D i v i s i o n of L a b o r a t o r i e s and R e s e a r c h o f the N e w Y o r k S t a t e D e p a r t m e n t o f H e a l t h . W i l l i a m s & W i l k i n s Co., B a l t i m o r e , 1947, p á g s . 261-454.