Avaliação in vitro e in vivo da citotoxicidade e da genotoxicidade da solda de prata e da soldagem a laser utilizadas em ortodontia

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PONTIFICIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DO RIO GRANDE DO SUL FACULDADE DE ODONTOLOGIA

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ODONTOLOGIA NÍVEL: DOUTORADO

ÁREA DE CONCENTRAÇÃO: ORTODONTIA E ORTOPEDIA FACIAL

AVALIAÇÃO IN VITRO E IN VIVO DA CITOTOXICIDADE E DA GENOTOXICIDADE DA SOLDA DE PRATA E DA SOLDAGEM A LASER

UTILIZADAS EM ORTODONTIA

TATIANA SIQUEIRA GONÇALVES

Porto Alegre

(2)

Tatiana Siqueira Gonçalves

AVALIAÇÃO IN VITRO E IN VIVO DA CITOTOXICIDADE E DA GENOTOXICIDADE DA SOLDA DE PRATA E DA SOLDAGEM A LASER

UTILIZADAS EM ORTODONTIA

Tese apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Odontologia da Faculdade de Odontologia da Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, como parte dos requisitos para obtenção do grau de Doutor em Odontologia, área de concentração: Ortodontia e Ortopedia Facial.

Orientadora: Profa. Dra. Luciane Macedo de Menezes Coorientador: Prof. Dr. João Antonio Pêgas Henriques

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(4)

(5)

Agradecimentos

• À minha mãe, Jussara, a melhor amiga de todas as horas, por tudo. • Ao Adriano, por ter me compreendido e ajudado sempre.

• À Profa. Dra. Luciane Macedo de Menezes, exemplo de pesquisadora em

Ortodontia, orientadora e amiga, pelo estímulo constante.

• Ao Prof. Dr. João Antonio Pêgas Henriques, por ter aceitado ser meu

coorientador e por ter me acolhido em seu grupo. Sou extremamente grata por ter tido a oportunidade de trabalharmos juntos e por todos os seus ensinamentos.

• Ao pesquisador Cristiano Trindade, por todo o auxílio na parte laboratorial

deste trabalho e por ter sido incansável em repartir comigo seus conhecimentos.

• À equipe da Commonwealth Scientific and Industrial Research Organisation

– CSIRO - Animal, Food and Health Sciences – Adelaide (Austrália), em especial aos meus orientadores Philip Thomas e Michael Fenech, por terem me recebido e proporcionado todas as condições para a execução de nossos experimentos.

• A Profa. Dra. Renata Medina, por ter aceitado trabalhar em colaboração

conosco, pela disponibilidade e por todos os ensinamentos compartilhados.

• Ao Prof. Dr. Eduardo Martinelli de Lima, pelos ensinamentos clínicos e

científicos, pela amizade e pela confiança que sempre depositou em mim.

• Aos professores e alunos do Curso de Especialização em Ortodontia da

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• Aos colegas do Mestrado e Doutorado em Ortodontia, em especial aos

responsáveis pelo atendimento dos participantes da amostra deste trabalho, pelo auxílio no controle dos pacientes.

• Aos pacientes da Faculdade de Odontologia da PUCRS, que se

prontificaram a participar desta pesquisa.

• Aos meus pacientes que compreenderam minha ausência durante o

período de estudos na Austrália.

• Aos amigos do Laboratório 210 da Biofísica da UFRGS e do Genotox Royal

do Centro de Biotecnologia da UFRGS, por todo o auxílio durante o desenvolvimento da pesquisa. Meu agradecimento especial à pesquisadora Dra. Miriana da Silva Machado, pelas valiosas contribuições.

• À colega Graziela Westphalen, por ter me oportunizado o contato com o

Prof. Dr. João Antonio Pêgas Henriques e com o Dr. Philip Thomas.

• À Faculdade de Odontologia da Pontifícia Universidade Católica do Rio

Grande do Sul, na pessoa de seu diretor, Prof. Dr. Alexandre Bahlis, pela excelente estrutura e organização.

• À Profa. Dra. Ana Maria Spohr, pela competência à frente da coordenação

do Programa de Pós-Graduação em Odontologia de nossa faculdade.

• Aos funcionários da Faculdade de Odontologia da PUCRS, por estarem

sempre prontos a ajudar. Em especial aos funcionários da Secretaria de Pós-Graduação, Ana, Paulo e Davenir, pela disponibilidade.

• À Clarissa Belarmino, vinculada à Pró-Reitoria de Pesquisa e

(7)

• À CAPES, pelo suporte financeiro, através das bolsas de estudo,

fundamentais para a realização deste trabalho.

• Ao Prof. Dr. José Cícero Dinato, por ter disponibilizado no laboratório de

sua clínica o equipamento de soldagem a laser.

• Ao Prof. Dr. Mário Wagner, pelo auxílio nas análises estatísticas.

• À Profa. Judith Scliar, por sua competência e pela amizade que

desenvolvemos durante as aulas preparatórias para o TOEFL.

• À Profa. Maria do Horto Motta, pela revisão de linguagem e padronização

técnica do texto.

• A todos os que, de alguma forma, contribuíram para a concretização deste

trabalho.

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RESUMO

GONÇALVES, T.S. Avaliação in vitro e in vivo da citotoxicidade e da genotoxicidade da solda de prata e da soldagem a laser utilizadas em Ortodontia. Orientadora: Profa. Dra. Luciane Macedo de Menezes. Coorientador: Prof. Dr. João Antônio Pêgas Henriques. Porto Alegre, PUCRS, Faculdade de Odontologia – Tese (Doutorado em Ortodontia e Ortopedia Facial), 2013.

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danos oxidativos. Apesar do efeito tóxico observado in vitro, em humanos a resposta de toxicidade a aparelhos contendo uniões soldadas com liga de prata apresentou menor intensidade, sendo identificada genotoxicidade também in vivo. A soldagem a laser se mostrou menos citotóxica que a soldagem com liga de prata em condições in vitro, devendo ser melhor investigada por se tratar de uma alternativa promissora para a união de metais em Ortodontia.

(10)

ABSTRACT

GONÇALVES, T.S. In vitro and in vivo evaluation of the cytotoxicity and genotoxicity of silver solder and laser soldering used in Orthodontics.

Advisors: Profa. Dra. Luciane Macedo de Menezes and Prof. Dr. João Antonio Pêgas Henriques. Porto Alegre, PUCRS, Faculdade de Odontologia – Thesis (PhD in Orthodontics and Dentofacial Orthopedics), 2013.

(11)

than silver soldering in in vitro conditions and should be more investigated since it seems to be a promising alternative to connect wires in Orthodontics.

(12)

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO ... 12

2 CAPÍTULO I ... 15

3 CAPÍTULO II ... 18

4 CAPÍTULO III ... 21

5 DISCUSSÃO ... 24

6 CONCLUSÃO ... 29

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ... 30

(13)

12

1 Introdução

1 INTRODUÇÃO

A Ortodontia vem evoluindo constantemente. Nas últimas décadas, os avanços dos estudos sobre os materiais odontológicos viabilizou a introdução de diversos novos elementos para uso na clínica ortodôntica. Apesar de todos os avanços observados, alguns materiais clássicos são utilizados desde o início da especialidade. Este é o caso das ligas de solda de prata, as quais podem ser empregadas tanto para a soldagem de acessórios aos aparelhos fixos quanto para a união de elementos metálicos em aparelhos auxiliares. Estas ligas apresentam vantagens importantes, como sua consagrada efetividade, facilidade de manipulação e custo, o que justifica, ainda nos dias atuais, seu emprego em larga escala.

(14)

13

1 Introdução

em reações de hipersensibilidade e alergias (2), tanto com repercussão local quanto sistêmica.

Raros estudos se dedicaram à investigação da biocompatibilidade do uso da solda de prata em aparelhos auxiliares (6-10). Anéis ortodônticos são geralmente de aço inoxidável, compostos por níquel, ferro e cromo, que podem estar relacionados a eventos de hipersensibilidade. Já a liga de solda de prata é composta principalmente pelos íons prata, cobre e zinco, os quais são facilmente liberados para o ambiente bucal em presença de corrosão (8) e que podem levar a eventos tóxicos (6, 8, 11-15). Além disso, o íon cádmio, que pode estar associado a câncer (16) e ser responsável por danos hepáticos, renais e cardíacos (17), costumava ser adicionado à composição da liga de solda de prata como um elemento redutor da temperatura de fusão (18).

(15)

14

1 Introdução

resultados complementares e podem ser realizados em condições in vitro e in vivo (23-25, 27).

Por outro lado, com o aperfeiçoamento das técnicas de aplicação de laser na Odontologia, obteve-se uma nova alternativa para a união de metais, a qual pode, também, ser empregada para a confecção de aparelhos auxiliares, em substituição à solda de prata (7, 8). Na soldagem a laser, devido à alta energia gerada, ocorre uma fusão verdadeira dos metais unidos, eliminando a presença de um terceiro elemento metálico, como a solda de prata. Com isso, é possível que se obtenham soldagens menos suscetíveis a corrosão e, como consequência, mais biocompatíveis.

Tendo em vista o uso frequente de aparelhos ortodônticos auxiliares construídos com o uso da liga de solda de prata, é importante que se investiguem os efeitos destas uniões soldadas em relação a sua citotoxicidade e genotoxicidade. Sendo assim, os objetivos do presente estudo foram:

- avaliar in vitro, empregando células de mamíferos, a citotoxicidade e a genotoxicidade de anéis contendo ou não uniões com solda de prata e quantificar os íons metálicos liberados em meio de cultura;

- avaliar possíveis efeitos sobre o DNA em células da mucosa bucal de pacientes em tratamento com aparelhos auxiliares do tipo Hyrax, contendo oito uniões com solda de prata;

(16)

15

3 Capítulo II

2 CAPÍTULO I

Artigo 1

Cytotoxicity and genotoxicity of orthodontic bands with or without Silver

soldered joints

(17)

16

3 Capítulo II

Cytotoxicity and genotoxicity of orthodontic bands with or without Silver soldered joints

Tatiana Siqueira Gonçalvesa*, Luciane Macedo de Menezesa, Cristiano Trindadeb, Miriana da Silva Machadob, Philip Thomasc, Michael Fenechc, João Antonio Pêgas Henriques b,d

a_{– Department of Orthodontics, Pontifical Catholic University of Rio Grande do Sul,} Porto Alegre, RS, Brazil

Postal Address: Faculdade de Odontologia - Secretaria de Pós-Graduação - Prédio 6, Av. Ipiranga 6681, Sala 209, Porto Alegre – RS – Brazil, Zip Code: 90619-900 b

– Instituto de Educação para Pesquisa, Desenvolvimento e Inovação Tecnológica – ROYAL Unidade GENOTOX – ROYAL / Centro de Biotecnologia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS), Porto Alegre, RS, Brazil

Postal Address: Centro de Biotecnologia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS). Av. Bento Gonçalves, 9500. Prédio 43421, CEP: 91501-970.Porto Alegre - RS, Brasil.

c

– Commonwealth Scientific and Industrial Research Organisation, Animal, Food and Health Sciences, Adelaide, SA, Australia

Postal Address: Gate 13 Kintore Avenue, Adelaide SA 5000 Postal: PO Box 10041, Adelaide BC, SA 5000

d

– Instituto de Biotecnologia – Universidade de Caxias do Sul; Laboratório de Reparação de DNA em Eucariotos, Departamento de Biofísica/Centro de Biotecnologia, UFRGS, Porto Alegre, RS, Brazil.

Short title: Cytotoxicity and genotoxicity of orthodontic bands

*Corresponding author: Tatiana Siqueira Gonçalves

Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul

Faculdade de Odontologia - Secretaria de Pós-Graduação - Prédio 6

(18)

17

3 Capítulo II

Cytotoxicity and genotoxicity of orthodontic bands with or without Silver soldered joints

ABSTRACT

(19)

18

3 Capítulo II

3 CAPÍTULO II

Artigo 2

In vivo evaluation of the genotoxic effects of auxiliary orthodontic appliances containing silver soldered joints

(20)

19

3 Capítulo II

In vivo evaluation of the genotoxic effects of auxiliary orthodontic appliances containing silver soldered joints

Tatiana Siqueira Gonçalves a*, Luciane Macedo de Menezes b, Cristiano Trindade c, Philip Thomas d, Michael Fenech d, João Antonio Pêgas Henriques e,f

a

– Visiting Professor, Department of Orthodontics, Pontifical Catholic University of Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS, Brazil

b

– Professor, Department of Orthodontics, Pontifical Catholic University of Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS, Brazil

c

– Researcher, Instituto de Educação para Pesquisa, Desenvolvimento e Inovação Tecnológica ROYAL Unidade GENOTOX – ROYAL / Centro de Biotecnologia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS), Porto Alegre, RS, Brazil

d_{– Researcher, Commonwealth Scientific and Industrial Research Organisation,} Animal, Food and Health Sciences, Adelaide, SA, Australia

e _{– Scientific Director, Instituto de Educação para Pesquisa, Desenvolvimento e}

Inovação Tecnológica - ROYAL

Unidade GENOTOX – ROYAL / Centro de Biotecnologia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS), Porto Alegre, RS, Brazil

f

– Professor, Instituto de Biotecnologia – Universidade de Caxias do Sul; Laboratório de Reparação de DNA em Eucariotos, Departamento de Biofísica/Centro de Biotecnologia, UFRGS, Porto Alegre, RS, Brazil.

*Corresponding author: Tatiana Siqueira Gonçalves

Faculdade de Odontologia - Secretaria de Pós-Graduação - Prédio 6

Av. Ipiranga 6681, Sala 209, Porto Alegre – RS – Brazil, Zip Code: 90619-900

ACKNOWLEDGEMENTS

(21)

20

3 Capítulo II

In vivo evaluation of the genotoxic effects of auxiliary orthodontic appliances containing silver soldered joints

ABSTRACT

Objective: Auxiliary appliances consisting of silver soldered joints may inhabit the patient’s oral cavity for an extensive period of time. The aim of this study was to investigate, in vivo, the potential genotoxic effects of Hyrax type expanders containing silver soldered joints.

Materials and Methods: Buccal cells were collected from 20 patients and processed for the Buccal Comet Assay (BCA) and Buccal Micronucleus Cytome Assay (BCMA) to investigate DNA damage, cell proliferation and cell death parameters at different time points up to 12 months.

Results: The BCA showed an increase in DNA damage, as the Damage Frequency and Damage Index were significantly increased after the insertion of the appliance. In the BCMA there was an increase in the micronuclei and nuclear buds frequency in one month, but no statistical differences over the 12 month study period were observed.

(22)

21

4 Capítulo III

4 CAPÍTULO III Artigo 3

Differences of cytotoxicity of silver and laser soldered orthodontic bands assessed by survival tests in Saccharomyces cerevisiae

(23)

22

4 Capítulo III

Tatiana Siqueira Gonçalves a, Luciane Macedo de Menezes b, Luciele Gonzaga Ribeiro c, Catieli Gobetti Lindholz d, Renata Medina-Silva e

a – Visiting Professor, Department of Orthodontics, Pontifical Catholic University of Rio Grande do Sul, Brazil

b – Professor, Department of Orthodontics, Pontifical Catholic University of Rio Grande do Sul, Brazil

c – Biologist, Biosciences Faculty - Pontifical Catholic University of Rio Grande do Sul

d – Biologist, Biosciences Faculty - Pontifical Catholic University of Rio Grande do Sul

e - Biologist, MSc. in Genetics and Molecular Biology, PhD in Microbiology, Microbiology teacher and researcher – Biosciences Faculty - Pontifical Catholic University of Rio Grande do Sul,

Short title: Cytotoxicity of orthodontic bands

Corresponding author: Tatiana Siqueira Gonçalves

Faculdade de Odontologia - Secretaria de Pós-Graduação - Prédio 6 Av. Ipiranga 6681, Sala 209

(24)

23

4 Capítulo III

ABSTRACT

Objectives: The aim of this study was to evaluate the cytotoxicity induced by soldered bands through survival tests on Saccharomyces cerevisisae, a microorganism which presents several characteristics similar to human cells.

(25)

24

5 Discussão

5 DISCUSSÃO

A biocompatibilidade é tema de interesse na Ortodontia e, recentemente, diversas pesquisas vêm sendo realizadas para investigar a liberação e a citotoxicidade de materiais ortodônticos como resinas acrílicas, compostas e metais (3, 6, 11, 28-31), em função dos possíveis efeitos biológicos dos materiais empregados na especialidade. Além dos materiais compostos por aço inoxidável, a liga de solda de prata está também presente em diversos aparelhos ortodônticos, em especial nos aparelhos auxiliares. Existe uma carência de informações em relação à biocompatibilidade da solda de prata, e o objetivo deste trabalho foi avaliar a citotoxicidade e a genotoxicidade de anéis contendo ou não uniões com solda de prata ou com soldagem a laser.

(26)

25

5 Discussão

aquecimento gerado durante o processo de soldagem desestabiliza a estrutura metálica levando a um processo de corrosão mais acentuado(35). Com os dados de quantificação dos eluídos metálicos, foi possível traçar um paralelo em relação à toxicidade celular e genética observada (Artigo 1). Foi detectada a presença de cádmio no meio de cultura, o que também pode ter contribuído de maneira significativa para a toxicidade observada em condições laboratoriais(16, 36-38). Diferentes mecanismos parecem explicar os efeitos genotóxicos e mutagênicos dos metais, entre eles a geração de espécies reativas de oxigênio, inibição de enzimas de reparo do DNA, desregulação da proliferação celular(16, 36-38), problemas na replicação e transcrição do DNA, processos inflamatórios e alterações nos genes responsáveis pelo equilíbrio entre sobrevivência e morte celular(39).

Estudos in vitro apresentam vantagens importantes, principalmente em relação à padronização dos ensaios e à quantidade de dados que podem ser obtidos, e devem fazer parte da avaliação de toxicidade de determinado material (40). Entretanto, carecem de respostas que contemplem um contexto mais amplo como a cavidade bucal, a qual apresenta um ambiente característico com condições químicas, físicas e biológicas que favorecem o processo de corrosão(4). Nisso, os estudos in vivo demonstram o que de fato ocorre quando os materiais estão em contato com a saliva (4, 41). Por outro lado, uma das dificuldades quando se trabalha com pacientes está relacionada a dificuldades de padronização da amostra e limitações de tempo e custo, resultando, muitas vezes, em número amostral reduzido(4).

(27)

26

5 Discussão

quando um material está na cavidade bucal, os subprodutos de corrosão sofrem uma lavagem constante pela saliva o que pode reduzir seus efeitos locais(4). Apesar de observada importante genotoxicidade in vitro, tal intensidade de efeito não se confirmou quando os pacientes foram acompanhados longitudinalmente. Constatou-se certo efeito genotóxico, identificado pelo ensaio cometa, e pequeno incremento nos parâmetros de dano ao DNA no citoma bucal, porém sem diferenças estatísticas ao longo do tempo de observação.

A mucosa bucal é um local de fácil acesso e permite a obtenção de material para análise de maneira minimamente invasiva (24). Tanto o ensaio cometa(19, 20, 25) quanto o citoma de micronúcleos(23) são métodos consagrados para a investigação de dano ao DNA em estudos in vitro e apresentam adaptações para a execução dos testes em células bucais(24, 27). Tais ensaios vêm sendo, pouco a pouco, empregados para a avaliação de materiais ortodônticos. Ao início do desenvolvimento da presente pesquisa, idealizou-se a aplicação do teste cometa em células bucais tanto em sua versão alcalina quanto associado ao uso de enzimas de reparo para a investigação de danos oxidativos(26), assim como realizado no estudo in vitro. Entretanto, uma das dificuldades ao se trabalhar com células bucais no teste

(28)

27

5 Discussão

do contato com agentes genotóxicos e de condições nutricionais (24). O presente estudo é um dos primeiros a empregar o citoma bucal para a avaliação de materiais ortodônticos, tendo ainda a vantagem de tê-lo associado ao ensaio cometa.

(29)

28

5 Discussão

união e também de biocompatibilidade. Além disso, esforços devem ser empreendidos no sentido de simplificar os equipamentos de soldagem a laser, para permitir no futuro uma redução no custo de tal procedimento.

(30)

29

6 Conclusão

6 CONCLUSÃO

De acordo com os dados obtidos no presente estudo, foi possível estabelecer as conclusões a seguir.

• Anéis ortodônticos sofreram corrosão e liberaram íons metálicos em condições

laboratoriais, sendo que os íons cromo, níquel, ferro, cobre, zinco, prata e cádmio foram detectados em meio de cultura quando em contato com anéis contendo solda de prata, apesar de o íon cádmio não estar especificado como componente das ligas metálicas estudadas.

• Anéis contendo solda de prata foram capazes de causar efeitos citotóxicos e

genotóxicos em células de mamíferos em condições in vitro. Os efeitos genotóxicos observados estão relacionados tanto a efeitos diretos quanto a efeitos indiretos, tais como danos oxidativos.

• Apesar do efeito tóxico observado in vitro, em humanos a resposta de toxicidade

a aparelhos contendo uniões soldadas com liga de prata apresentou menor intensidade, embora tenha sido identificada genotoxicidade também in vivo.

• A soldagem a laser se mostrou menos citotóxica que a com liga de prata em

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Referências Bibliográficas

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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(36)

35

Anexos

(37)

36

Anexos

ANEXO A

SUBMISSÃO DO ARTIGO 1

A manuscript number has been assigned: MUTGEN-D-13-00133

Ms. Ref. No.: MUTGEN-D-13-00133 Title: Cytotoxicity and genotoxicity of orthodontic bands with or without Silver soldered joints Mutation Research - Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis

Dear Dr. Gonçalves,

Your submission entitled "Cytotoxicity and genotoxicity of orthodontic bands with or without Silver soldered joints" has been assigned the following manuscript number: MUTGEN-D-13-00133.

You may check on the progress of your paper by logging on to the Elsevier Editorial System as an author.

Thank you for submitting your work to this journal. Kind regards,

(38)

37

Anexos

ANEXO B

041813-299 Receipt of New Paper by The Angle Orthodontist

rjisaacson@aol.com<rjisaacson@aol.com> Para: tatianasiqueiragoncalves@gmail.com

Dear Dr. Goncalves,

On April 20, 2013, we received your manuscript submitted to us for publication in The Angle Orthodontist. As is our usual practice, I will send your manuscript out to two reviewers. It generally takes a minimum of eight weeks for the review process to be completed.

Please note that I have assigned a number to your manuscript #041813-299.

You may check on the status of this manuscript by selecting the "Check Manuscript Status" link under the following URL:

Thank you for the opportunity to review your work and thank you for considering The Angle Orthodontist for your publication needs.

Sincerely,

Robert J. Isaacson, DDS, MSD, PhD

Editor-in-Chief Emeritus, The Angle Orthodontist Professor Emeritus

University of Minnesota

(39)

38

Anexos

ANEXO C

CLOI: Submission Confirmation for Differences of cytotoxicity of silver and laser soldered orthodontic bands assessed by survival tests in Saccharomyces cerevisiae

Dear Dr. Gonçalves,

Your submission entitled "Differences of cytotoxicity of silver and laser soldered orthodontic bands assessed by survival tests in Saccharomyces cerevisiae" has been received by Clinical Oral Investigations

You will be able to check on the progress of your paper by logging on to Editorial Manager as an author.

Your manuscript will be given a reference number once an Editor has been assigned. Thank you for submitting your work to our journal.

Kind regards, Editorial Office

(40)

39

Anexos

ANEXO D

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Pesquisa: Avaliação da citotoxicidade e genotoxicidade da solda de prata e da soldagem a laser utilizadas em ortodontia

I. Objetivos e justificativa da pesquisa: Esta pesquisa pretende avaliar os efeitos dos aparelhos ortodônticos que apresentam solda de prata no organismo humano, mais precisamente no material genético das células da mucosa bucal.

II. Procedimentos a serem utilizados: Coleta de células da mucosa bucal com auxílio de escova citológica (semelhante a uma pequena escova de dentes), que será friccionada na bochecha de seu/sua filho (a).

III. Os desconfortos ou riscos esperados: O único desconforto esperado é uma mínima pressão da escova na bochecha de seu/sua filho(a) durante a coleta das células. As escovas utilizadas serão de uso exclusivo de seu/sua filho (a) e serão descartadas imediatamente após o uso.

IV. Garantia de resposta a qualquer pergunta: Qualquer dúvida ou questionamento sobre a pesquisa poderá ser esclarecido a qualquer momento.

V. Liberdade de abandonar a pesquisa sem prejuízo para si: Caso desejar que seu/sua filho(a) abandone a pesquisa, não haverá qualquer prejuízo e não ocorrerão modificações no tratamento proposto. Ressaltamos que a concordância em participar do estudo não implica em qualquer modificação no tratamento que já está sendo feito. Da mesma forma, a não concordância em participar do estudo não irá alterar de nenhuma maneira o tratamento já estabelecido.

VI. Garantia de privacidade: os dados de seu/sua filho(a) serão mantidos em sigilo.

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Anexos

Eu, ..., responsável por..., fui informado(a) dos objetivos da pesquisa acima de maneira clara e detalhada. Recebi informação a respeito do tratamento a ser realizado e esclareci minhas dúvidas. Sei que a qualquer momento poderei solicitar novas informações e modificar minha decisão se assim o desejar. Fui certificado(a) de que todos os dados referentes aos exames realizados serão confidenciais, bem como o tratamento não será modificado em razão do estudo, e terei liberdade de não mais consentir em participar da pesquisa, face a essas informações.

Fui informado(a) de que não existirão danos à saúde causados diretamente pela pesquisa. Também sei que, caso existam gastos adicionais em relação à pesquisa, estes serão absorvidos pelo orçamento da mesma. Caso surjam novas perguntas sobre o estudo, posso entrar em contato com as pesquisadoras responsáveis, Dra. Luciane Macedo de Menezes e Dra.Tatiana Siqueira Gonçalves, pelos telefones 33203538, 3320 4009 e 33203345 (Comitê de Ética em Pesquisa), para qualquer pergunta sobre os direitos como participante deste estudo.

Declaro que recebi cópia do presente Termo de Consentimento.

_____________________________ _________________________________ Assinatura do Responsável Nome do Responsável

__________________________________ ___/___/___ Nome do Participante da Pesquisa

___________________________________ Assinatura do Pesquisador Associado

___________________________________ Nome do Pesquisador Associado

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Anexos

Este formulário foi lido para _______________________________ (nome do responsável) em ___/____/___ (data) pelo _______________________ (nome do pesquisador associado) enquanto eu estava presente.

________________________ Assinatura da Testemunha

________________________ Nome da Testemunha

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Anexos

ANEXO E

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Anexos

ANEXO F

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Anexos

ANEXO G

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Anexos

ANEXO H

CARTA COM PARECER SOBRE A PESQUISA REALIZADA NA COMMONWEALTH SCIENTIFIC AND INDUSTRIAL ORGANISATION