O USO D A C U L T U R A C E L U L A R (Hela) P A R A T R I A G E M D E N O V A S D R O G A S C O M A Ç Ã O " A N T I T U M O R A L " .
B e a t r i z D. O. M i r a n d a d a C r u z (*) M a r i l d a M e i r e l l e s de O l i v e i r a (*) J o y c e Biondi (*)
Ana E s m e r a l d a R o x o (*)
C l é l i a H e l e n a O. M a r t i n e z (**)
RESUMO
A deicobenta de novcu, diogaò [pnodutoò natunaib
e
òubitãncicu òintêticab) com ati
hiÁtkáv. antÃ
,neopláò tica òzndo dificultada devido ao
t&&t&
de tohohatJôhío "in vivo",
mtou-òe, então
pon.
atan pana tAi.agem diLòiOi dnagat antitumonait, a cultuna do. célula
rnmna. neoplástica cultivada de. modo continuo: a linhagem de. célula Η e.la deniv adapon Gey
mm
cancinoma utenino humano.
Foi
utilizada uma cultuna de célula zAtacionánia, dilui
mcg/ml[conteúdo pnoteico celulan, òegundo técnica de
Otjama
e Eagle)em meio botai
wfâa%le com
10%
de
6
o Ίο de vitelo, acneAcido de penicilina
100
unidades/ml, còtneptomi
H f t
100
mcg/ml e {\ungizon
5
mcg/ml.
A eòòa
cultuna adicionou-òe o matenial a
sei
tet>
Μάο em dotei, compneendidai entre
0,001
mcg/ml a
100
mcg/ml.
ApÕò
72
koncu,,
OA
nzÁulta
mi
{onatn
analiòadot
pcuta
detenminan
-òe
a Dl
50
[d
<>òe.
que inibe
50%
do cnetcimento celu
mu tempanado ao contnole.).
0
nümeno
de.
expenimentoò fonam conòtanteA pana uma meòma
m)Çja. fonam tettadaò lè òubétânciaò òintéticaò e. 16 pnodutoò natuna-iò XonhideAanam-òe
Rtiyoó
aò amoòtnaò com Dl 50í40 mcg/ml pana pnodutoò natunaiò e com VI 50iS mcg/ml pana
hihUmciai> òintéticai, devido a
me no/t
t>e.nòibilidade da nefenida linhagem celalan em ne
ilação a KB
[denivada de cancinoma epidenmóide de naâofianinge humana) cultuna utilizada
Βΰ Hational Caneen Institute ( U . S . A . ) pan.a objetivos
òimilaneò ao pnopoòto no pncòente
tílmbalho.
IHTRODUÇÃO
0 "National C a n c e r I n s t i t u t e " (NCl) v e m d e s d e o s a n o s 60 u t i l i z a n d o testes " i n
nitro" para a s e l e ç ã o de a g e n t e s a n t i tumora i s p r o v e n i e n t e s de p l a n t a s . A linhagem d e célula usada para esse f i m é a KB d e Eagle ( E a g l e , 1 9 5 5 ) .
(*) Instituto B i o l ó g i c o , São P a u l o - S P .
(**) Instituto A d o l f o L u t z , S ã o P a u l o - S P .
D ê todos os a g e n t e s anti tumora is de e x t r a t o s b r u t o s de p l a n t a s a g o r a em 0*e v i m e n t o o u em a v a l i a ç ã o c l í n i c a ( t a x o l , e l i p t i c i n a , m a y t a n s i n a , talicarpina) somen N-óxido ¡ndicina teria sido d e s c o b e r t o u t i l i z a n d o - s e u n i c a m e n t e o screening "in vivo"
(Perdue, 19 8 2) , o s o u t r o s teriam sido d e t e c t a d o s a t r a v é s de " s c r e e n i n g " e m K B . N u m e r o s a s são as v a n t a g e n s de se útil izar um teste "in v i t r o " como um pré-"screen¡ng" d e s t e s a g e n t e s a n t i tumora i s, c o m o o c u s t o i n f e r i o r , a e x i g ê n c i a d e m e n o r quant idade de material e m e n o s d i s p e n d i o de t e m p o .
N o B r a s i l , temos v á r i o s g r u p o s t r a b a l h a n d o na a r e a d e p r o d u t o s n a t u r a i s , que even t u a l m e n t e , t e r i a m ã n e c e s s i d a d e de e m p r e g a r um teste para se v e r i f i c a r as atividades q u i m i o t e r a p é u t i c a s e m a i s e s p e c i f i c a m e n t e a n t i t u m o r a i s , d e s s a s s u b s t â n c i a s .
Este teste "in v i t r o " , usando c u l t u r a de c é l u l a K B , é m a i s sensível ã maioria dos a g e n t e s t u m o r a i s de e x t r a t o s d e p l a n t a s q u e m u i t o s testes "¡n v i v o " . Ε o NCI até 1981 já havia t e s t a d o , dessa forma 114.045 e x t r a t o s v e g e t a i s (Suffness & D o u r o s , 1982).
N ã o h a v e n d o d i s p o n i b i l i d a d e desta linhagem c e l u l a r , d e s e n v o l v e m o s o teste comi linhagem de c é l u l a Hela (Gey et a l . , 1 9 5 2 ) , d e r i v a d a d e c a r c i n o m a u t e r i n o humano. Resu| tados s i m i l a r e s q u a n t o a p o s i t í v i d a d e m a s v a r i a n d o a o r d e m de g r a n d e z a q u a n d o comparados aos da linhagem K B , já f o r a m o b s e r v a d o s por (Bramrilia e t a l. , 1 9 7 0 ) .
M A T E R I A L Ε M É T O D O S
A linhagem de c é l u l a H e l a , foi nos f o r n e c i d a p e l o Instituto A d o l f o Lutz. B a s e a n d o nos t r a b a l h o s de " s c r e e n i n g " d e s e n v o l v i d o s pelo NCI c o m a linhagem celii lar KB (Geran e t a l. , 1972) e nas suas a t u a l i z a ç õ e s ( I n s t r u c t i o n 14, 1980),uti 1 izamos a m e s m a m e t o d o l o g i a introduzindo c o m o m o d i f i c a ç ã o o e m p r e g o da l i n h a g e m celular Hela. 1
A c u l t u r a de c é l u l a s e s t a c i o n a r i a s é c u l t i v a d a e m m e i o basal d e Eag 1 e e ad icionada d e 10¾ de soro de v i t e l o , c o n t e n d o p e n i c i l i n a 100 y / m l , e s t r e p t o m i c i n a 100 mcg/ml con* c e n t r a ç ã o s u g e r i d a por (Bird & F o r r e s t e r , 1981) e a m p h o t e r i c i n Β (fungizon) 5mcg/m1 (con c e n t r a ç ã o d e n t r o do limite aceitável s e g u n d o F o g h , 1 9 7 3 ) .
Na d e t e r m i n a ç ã o do e x p e r i m e n t o levou-se e m c o n t a q u e :
1) Cada material a ser t e s t a d o d e v e r i a a p r e s e n t a r d e 3 a 5 n í v e i s de doses dϊfe r e n t e s ;
2) Cada d o s e d e v e r i a ser u t i l i z a d a e m d u p l i c a t a ;
3) C a d a m a t e r i a l a ser t e s t a d o , d e v e r i a p o s s u i r o seu r e s p e c t i v o c o n t r o l e .
O s m a t e r i a i s p a r a t e s t e , t a n t o o s p r o d u t o s n a t u r a i s c o m o o s s i n t é t i c o s deveriam a p r e s e n t a r uma s o l u ç ã o clara ou uma s u s p e n s ã o h o m o g ê n e a . Estes m a t e r i a i s foram escolhi dos ao a c a s o , b a s e a d o s s o m e n t e na s u s p e i t a d e a t i v i d a d e ant i n e o p l ã s t i c a . Alguns deles foram inclusive e s t u d a d o s e m n o s s o l a b o r a t ó r i o c o m o inibidores de c r e s c i m e n t o de outros tipos de tumores e x p e r i m e n t a i s "in v i v o " , como leucemia L 1210 e c a r c i n o m a de Ehrlich.
Os v e í c u l o s u s a d o s para d i l u i ç ã o do material teste f o r a m o s a p r o v a d o s pelo NCI. A q u a n t i d a d e d o material teste e o v e í c u l o foi u n i f o r m e no e x p e r i m e n t o não excedendo m a t é 5% do v o l u m e t o t a l . 0 v o l u m e total é d e 4 m l . A s d o s e s testadas situaram-se, er
ral, entre 0,001 e 100 mcq/ml de c a d a d r o g a .
Para iniciar o e x p e r i m e n t o , a u m a s u s p e n s γ o d e c ι l u l a s d e 0-20 mcg/ml c o n t e ú d o p r o Jileo celular d e t e r m i n a d o s e q u n d o a técnica de (Oyama & E a g l e , 1 9 5 6 ) , a d i c i o n o u - s e o m a
ι -jerial a ser t e s t a d o na c o n c e n t r a ç ã o d e s e j a d a . Concomí t a n t e m e n t e foram fe i tos o s c o n t r o MS e os p a d r õ e s .
Após 72 h o r a s , foi feita u m a a n á l i s e p r o t e i c a (Oyama & E a g l e , 1956) d o s tubos tes^ BS, controles e de 3 p a d r õ e s . T o d o s c o m p a r a d o s â c u r v a p a d r ã o de a l b ú m i n a b o v i n a .
Os produtos e m a n á l i s e foram testados n o m í n i m o 3 v e z e s .
Os resultados s ã o e x p r e s s o s c o m a dose q u e inibiu o c r e s c i m e n t o e m 50¾ (Dl 5 0) c o m arado ao c o n t r o l e , a t r a v é s d a seguinte f ó r m u l a :
P r o t e í n a final - P r o t e í n a final
% I = c o n t r o l e tratado χ 100
(porcentagem Proteina final - Prote'ina inicia) . de in i bicão) c o n t r o l e c o n t r o l e
A Dl 50 é c a l c u l a d a g r á f i c a m e n t e n u m a c u r v a de p o r c e n t a q e m de inibição || I) na ibeissa versus o loqarítimo da d o s e , na o r d e n a d a e m papel s e m i - l o g .
Foram c o n s i d e r a d o s a t i v o s o s p r o d u t o s n a t u r a i s q u e tiveram u m a Dl 50 S 60 mch/ml líprimeiro teste e uma Dl £ **0 mcg/ml n o s e q u n d o e na con f i r m a ç ã o . Pa ra s u b s t â n c i a s sin_ tèticas, no p r i m e i r o teste c o n s i d e r o u - s e a t i v a s a q u e l a s q u e a p r e s e n t a r a m Dl 50iH2mcg/ml I no segundo e na c o n f i r m a ç ã o u m a Dl 50^8 m c q / m l .
ESTOJADOS
Foram testadas 18 s u b s t â n c i a s s i n t é t i c a s , sendo q u e ^ m o s t r a r a m - s e a t i v a s: 3 - 2 d i «Idroxi3carbox i2 (qama d imet i Ia 1 i 1) 1 i n d a n o n a , c l o r i d r a t o de o l i v a c i n a , 1 ,^nafto -miñona, 2 m e t o x i Ι , Ί naf toqu i n o n a .
Na tabela 1, e s t ã o a p r e s e n t a d o s e s t e s r e s u l t a d o s .
Foram testados 16 e x t r a t o s de p r o d u t o s n a t u r a i s , sendo q u e 2 m o s t r a r a m a t i v i d a d e : "Serjania c a r a c a s a n a e C r o t ó n c a j u c a r a B e n t h . A tabela 2 resume e s t e s r e s u l t a d o s .
jlISCUSSΒO
Numerosas d r o g a s a p r e s e n t a m u m a s e l e t i v a t o x i c i d a d e letal a c ι l u l a s t u m o r a l s q u a n
Ho comparadas a c ι l u l a s n o r m a i s .Mu i tas d e l a s f o r a m d e s c o b e r t a s p e l o m ι t o d o d e " s c r e e n i n g "
neste fato tem c o n t r i b u ν d o p a r a q u e se c o n v e n η a d a u t i l i d a d e d e s t e m ι t o d o na d e s c o b e r
ta de novas d r o g a s ( S c h a b e l , 1 9 7 2 ) .
Observase a i n d a q u e a d e s c o b e r t a de p r o d u t o s c o m o a v i n b l a s t i n a , v i n c r i s t i n a e
Ipodof i lotox i na e todos o s 9 a q e n t e s a n t i t u m o r a i s o r i g i n α r i o s d e p l a n t a s , a g o r a e m d e s e n
v o l v l m e n t o o u e m a v a l i a η γ o c l ν n i c a ι a t r i b u ν d a a t e s t e s " i n v i t r o " u t i l i z a n d o-se extn tos a t i v o s e m K B , pois s e g u n d o P e r d u e ( 1 9 8 2 ) , s o m e n t e o N o x i d o i n d i c i n a teria sido
c o b e r t o por t e s t e " i n v i v o " .
U s a n d o u m a e q u i v a l e n c i a a e s t e t e s t e , c o m o u m p r κ " s c r e e n i n g " de testes animais,
p o r ι m c o m a l i n h a g e m d e c ι l u l a H e l a , c o n s e g u i m o s r e s u l t a d o s b a s t a n t e satisfatσrios.
A m p l i a m o s a Dl 5 0 , o u m e l h o r d u p l i c a m o l a , p o i s ( B r a m r i l l a e t al . , 1970), mostra ram u m a d i f e r n η a de s e n s i b i l i d a d e d a s d u a s l i n h a g e n s , sem n o e n t a n t o d e i x a r e m de corres
p o n d e r e n t r e s i . Esta m e n o r s e n s i b i l i d a d e d a s c ι l u l a s H e l a , t a m b ι m foi observada por
(Tew e t al . , 1983) o n d e o e s t r a d i o l n γ o se m o s t r a t σ x i c o , por e s t a s c ι l u l a s nγo apresen t a r e m r e c e p t o r e s a o s m e s m o s , e n q u a n t o q u e o e s t r a m u s t i n e ( d e r i v a d o e s t e r σ i d e Nmustardj)
ι c i t o t σ x i c o p a r a H e l a .
A l g u n s d o s m a t e r i a i s t e s t a d o s j α h a v i a m s i d o e x p e r i m e n t a d o s "in v i v o " emnossola
b o r a t σ r i o , e m o u t r o s t i p o s d e t u m o r e s i m p l a n t a d o s e m a n i m a i s .
D e n t r e 18 s u b s t β n c i a s s i n t ι t i c a s , t e m o s 9 c a s o s q u e s γ o : 7 v e r d a d e i r o s negativos (inativo " i n v i t r o " e i n a t i v o " i n v i v o " ) , 1 v e r d a d e i r o p o s i t i v o (ativo "in vitro" e 3Ύ
vo "in vivo") e 1 f a l s o p o s i t i v o ( a t i v o "in v i t r o " e inativo " i n v i v o " ) .
0 a l c a l σ i d e o l i v a c i n a , q u e foi a t i v o t a n t o "in v i t r o " c o m o "in v i v o " em leucemia)
l i n f σ i d e L 1210 (25 m g / k g ) (Sampaio & O l i v e i r a , 1 9 7 4 ) , foi u s a d o n a forma de derivadoj
pois p a r e c e h a v e r uma m e l h o r a e m sua a t u a η γ o , p o s s i v e l m e n t e por m o d i f i c a r sua solubili
d a d e .
T a m b ι m foi o b s e r v a d o a t i v i d a d e da o l i v a c i n a (de 5 a 450 m c g / m l ) n o u t r o teste "iν
v i t r o " u t i l i z a n d o o m ι t o d o Di P a o l o m o d i f i c a d o ( S a m p a i o e t a l . , 1 9 8 4 ) .
A 3 ,2d i h idrox i-3 c a r b o x i-2-( g a m a d imet i 1a 1 i 1) -1 i n d a n o n a , foi a t i v a "in vitro'1 e n t r e t a n t o m o s t r o u s e inativa c o n t r a o c a r c i n o s a r c o m a de W a l k e r 256 (150 mg/kg) (em m
s u l t a d o s nγo p u b l i c a d o s de n o s s o l a b o r a t σ r i o ) .
D e n t r e a s t r i a z i n a s , s o m e n t e a 2 ,4d i ami no1 ,2d i h i dro1 (3me ν. i 1 f en i 1) 6,6dime t i l t r i a z i n a c l o r i d r a t o n γ o foi t e s t a d a e m c a r c i n o s a r c o m a d e W a l k e r 2 5 6 e m nosso labora
t σ r i o , o b t e n d o s e c o m a s o u t r a s o s m e s m o s r e s u l t a d o s q u e "in v i t r o " o u seja,todas foras
i n a t i v a s . ( T o u n s e n d e t al ., 1982) m o s t r a q u e a p e r m e a b i l i d a d e d a m e m b r a n a parece ser o p a r β m e t r o d e t e r m i n a n t e no t r a n s p o r t e de t r i a z i n a t o s a p σ s a i n j e η γ o .
Das d r o g a s ; o sal de h e x a m ν n i u m do α c i d o 3 b r o m o m e t ί 1 4 p r o p o x ibenzo ico ,o sal de h e x a m i n i u m d o α c i d o 3 b r o m o m e t i 14am΅ l o x i b e n z o i c o e o α c i d o- 3 -( B r m e t e n o ) ptoluico f o r a m t a m b ι m t e s t a d o s e m n o s s o l a b o r a t σ r i o e m c a r c i n o m a de E h r l i c h , demonstrando Inatl
v o s n a s d o s e s 6 0 m g / k g , 60 m g / k g e 20 m g / k g r e s p e c t i v a m e n t e .
A l g u m a s naf toqu i n o n a s , a p r e s e n t a r a m a t i v i d a d e q u a n d o t e s t a d a s e m leucemia Ρ )il
( O l i v e i r a e t al ., 1 9 7 8 ) . Em n o s s o t r a b a l h o d u a s a m o s t r a s d e s t a c l a s s e de substβncias e n t r e a s trκs t e s t a d a s , t a m b ι m a p r e s e n t a r a m a t i v i d a d e .
D e n t r e o s p r o d u t o s n a t u r a i s e s t u d a d o s , 11 p o d e m ser c o m p a r a d o s c o m testes"invW
s e n d o 10 v e r d a d e i r o s f a l s o s ( i n a t i v o "in v i t r o " , inativo "in v i v o " ) e 1 verdade i ro poj
tivo (ativo "in v i t r o " e a t i v o "in v i v o " ) .
A S e r j a n í a c a r a c a s a n a , o v e r d a d e i r o p o s i t i v o , a p r e s e n t o u a t ividade emcarcinoma de E h r l i c h (30 m g / k g ) e t a m b ι m n o m ι t o d o Di P a o l o m o d i f i c a d o a t ι 50 ug/ml (Sampaio et al.,
1984) e m c o n c o r d β n c i a c o m o s n o s s o s r e s u l t a d o s .
As V e l l o z i a s ρi res iana e c a p u t (Ώ»00 m g / k g ) e a si p u n c u l σ i d e a (100 m g / k g ) f o r a m t σ xicas para c a m u n d o n g o s p o r t a d o r e s d o c a r c i n o m a d e E h r l i c h . A s V e l l o z i a s s u p r a c i t a d a s
(500 m c g / m l ) f o r a m a t i v a s n o m ι t o d o Di P a o l o m o d i f i c a d o ( S a m p a i o e t a l . , 1984),sendo i na tivas e m n o s s o s r e s u l t a d o s . M e r e c e m e n t r e t a n t o , m a i o r e s p e s q u i s a s , u m a v e z q u e s e s a b e
que essas p l a n t a s c o n t ι m l i g n a n a s e e n t r e e l a s a l g u n s a n t i c a n c e r ν g e n o s c o m o p o d o f i l o t o
xina.
0 M a y t e n u s ¡lie i f o l i u m foi i n a t i v o e m n o s s o t r a b a l h o e e m s a r c o m a 180 ( r e s u l t a d o s nγo p u b l i c a d o s ) , q u a n d o i n j e t a d o e m c a m u n d o n g o s p o r t a d o r e s d e s t a n e o p l a s i a , n a d o s e d e
AOO m g / k g .
A L e u c a e n a g l a u c a , C h l o r o p h o r a t i n e t o r i a , c a f ι v e r d e (400 m g / k g ) eS w a r t z i a a c u m i n a ta (100 m g / k g ) f o r a m t e s t a d a s e m c a r c i n o m a d e W a l k e r 2 5 6 , s e n d o i n a t i v a s tal qual e m n o s
sos r e s u l t a d o s .
H α , h o j e g r a n d e p r e o c u p a η γ o e m u s a r s i s t e m a s " i n v i t r o " p a r a a u x i l i a r n o t r a t a m e n
to cβncer h u m a n o (Tweit e t al ., 1 9 8 2 ; P o s t e , 1982; S u t h e r l a n d e t a l . , 1 9 8 3 ) . H α portan_ toa n e c e s s i d a d e d e s e a c e l e r a r o s p r o c e s s o s b α s i c o s p a r a e n c o n t r a r e s t e s q u i m i o t e r γ p i
cos, ou seja u m " p r ι s c r e e n i n g " p a r a s e d e t e r m i n a r q u e s u b s t β n c i a s d e v e r i a m s e r e n c a m i
nhadas para o t e s t e " i n v i v o " e c o n t i n u a r e s t a s p e s q u i s a s e d e s e n v o l v i m e n t o d e n o v o s
agentes a n t ν n e o p l α s i c o s .
S u g e r i m o s aqui o " p r ι s c r e e n i n g " c o m c ι l u l a H e l a q u e n o s p a r e c e u ú t i l , pois seus resultados c o r r e s p o n d e m a o d a c é l u l a K B .
0 " K B - s c r e e n i n g " c o n t i n u a s e n d o u t i l i z a d o n o NCI para a d e t e r m i n a ç ã o d a a t i v i d a d e de extratos d e p l a n t a s , o m e s m o p r e t e n d e m o s fazer e m f u t u r o p r ó x i m o , p a r a trabalhos c o m parativos.
G o s t a r í a m o s d e o b s e r v a r q u e o e f e i t o d e s e usar p r é " s c r e e n i n g " d e p r o d u t o s fer -mentados c o m a t i v i d a d e a n t ¡ n e o p l á s t i c a , n o N C I , p a r a d e s c o b r i r n o v a s d r o g a s a n t i - c â n c e r reduziu o n ú m e r o d e testes " i n v i v o " e m 8 3 ¾ e , a l é m desse a s p e c t o , se o b s e r v o u u m custo inferior d e e l a b o r a ç ã o , p e r m i t i n d o u m a i d e n t i f i c a ç ã o m a i s rápida d e s u b s t â n c i a s ativas (Suffness & D o u r o s , 1 9 8 2 ) , q u e é o o b j e t i v o d e todos q u e t r a b a l h a m neste c a m p o d e p e s -quisas.
A u t i l i z a ç ã o d o p r é - " s c r e e n i n g " d e m o n s t r a - s e p a r t i c u l a r m e n t e ú t i l , se a s s o c i a r m o s os 2 métodos " i n v i t r o " e " i n v i v o " , pois g a n h a s e tempo c o m m a i o r p r o b a b i l i d a d e d e s u -cesso. N u m e x t r a t o d e p r o d u t o natural s u g e r e - s e iniciar c o m u m p r é - " s c r e e n i n g " " i n v_i_ tro", sendo d e p o i s e n c a m i n h a d o p a r a testes " i n v i v o " , q u e iria s u g e r i r o f r a c i o n a m e n t o deste, com a j u d a d e testes " i n v i t r o " q u e p e r i o d i c a m e n t e s e r i a m c o n f i r m a d a s suas a t i v i -dades "in v i v o " .
SUMMARY
Screening hoi
been
and continuei to
be
the moit uiefiul and productive method o{΅
itízcting antitumor agentt,. "In vitro" aiiay i& lea expensive and require _.^leΏ>i> te&t
matzAial and time.. Tke antitumor aiòay faor
òcre
.e.niyin planto extracto òincz 19'60, by Ά
(National CanceA Institute) hoi,
been
òlightly moat^ied. It
haí>
been
uu
>e
.d Hela ti
culture {cell tine derived {΅rom human carcinoma
o¿
uteruÁ) instead
o{¡
the original
[cell tine. derived {΅rom human carcinoma o{ nasopharynx) . Hela cellò
weAe
cultivated
Eagle
1ò ba&al medium pluÁ 10% òerum added o{΅ anttbiotick: penicillin 100 unitii
streptomycin 100 mcg/ml and amphotericin 5 mcg/ml. To a dilute stock cells o{ 10
-mcg/ml (protein valuer according to method o{΅ Oyama and Eagle.) In complete, media
simultaneously added test material (range concentAation 1-100 mcg/ml) Test material
eitheA s ynthetlcs oh. natural products.
Total volume
M A U
approximately 4 ml. Also a blank and control was done. K^Wi '
houAS
was conducted a protein analysis o{ tests, control and
at.
least
three
photm
standard and media blank tubes. Results were expressed as the. dose
that
Inhibiσ
QKQVÚ
to 50% acontrol growth [EV 50). The criteria o{ activity {or synthetics toas an
ES
2
mcg/ml on
the
{irst test, and an EV 50^4 mcg/ml on
the.
second and confirmation
testis; and {or natural products were an EV 50٠60 mcg/ml on
the
{Irst test and an EV m
40 mcg/ml on
the
second and con{ΐAmotion testA .
T a b e l a 1 . A t i v i d a d e de p r o d u t o s s i n t ι t i c o s na l i n h a g e m de c ι l u l a H e l a .
E D
5 0
S U B S T A N C I A S S I N T É T I C A S S O L U B I L I D A D E (mcg/ml) A T I V I D A D E
3,2-d ihi drox i-3-carbox i-2-(gama d imet i 1-al i 1)-1 - i n d a n o n a Sa1 i na 0 0 , 0 5 ATIVA
2,4-di ami no-1 , 2-dihi dro-1 -( 2- m e t i 1-5η i t r o - f e n i 1) - 6 , 6 - d i m e t i 1 - 1 r i a z i na el or i d r a t o Sa1 i na 1 n a t i va
2 ,4d΅ami n o 1 , 2 d i h i dro1 - ( 3 m e t i 1fen i 1) 6 , 6 d i m e t i 1 t r i a z i n a el o r i d r a t o Sa1 i n a 1nat i v a 5 - ( 3 e l o r o f e n i 1)-2 ,4d i ami n o 6 , 6 d imet i 1t r iazi n a m o n o c l o r i d ra to Sa1 i n a 1nat i v a 2,4di a m i n o- 1, 6 d i h i d r o- 1 - ( 2 m e t i 1-5 e l o r o f e n i 1) 6 , 6 d i m e t i 1 triazi na el or i d rato Sa1 i na 1nat΅va 2, 4 d iami n o 1, 2 d i h i d r o x i-1 - ( 3, 4di c1o r o f e n i 1) 6 , 6 d i m e t i 1tr iaz i na (HC1) DMSO + Sa1 i na 1 n a t ΅ v a sal d e h e x a m i n i u m d o α c i d o 3 b r o m o m e t i1 4 p r o p o x ΅ b e n z o i c o DMSO + S a l ΅ n a 1 n a t ΅ v a sal d e h e x a m i n i u m d o α c i d o 3 b r o m o m e t i 1 4 a m i1o x i b e n z σ i c o D M S O + S a1΅ n a 12,10 1 n a t ΅ v a sal d e h e x a m i n i u m do α c i d o 3 c l o r o m e t i 1 4 b u t o x ΅ b e n z σ i c o Sal i na 10,40 1 n a t i va α c i d o- 3 -( B r m e t e n o ) p t o l u i c o D M S O + Sa1 i n a 2 3 , 5 0 1nat i v a c l o r i d r a t o de o l i v a c i n a HC1 + Sal i na 05,40 A T I V A 2 h i d r o x i- 3 - ( 21, 51 d i e l o r o f e n i 1am i n o m e t i 1)-1, 4 n a f t o q u i n o n a DMSO 2 9 , 0 0 1nat i v a
1 , 4 n a f t o q u ΅ n o n a DMSO 03,70 A T I V A
2 m e t o x i- 1, 4 n a f t o q u i n o n a DMSO 0 0 , 2 7 A T I V A 2 h i d r o x i- 3 - ( 2 m e t ΅1 propeni 1 ) - 1, 4 n a f t o q u i n o n a DMSO 1nat iva l a m i n o- 2 h i d r o x i 4 s u l f σ n i c o n a f t a leρo D M S O Inat i v a
V e r m e l h o n e u t r o Sa1 i na 16,80 1nat i v a
O
T a b e l a 2 . A t i v i d a d e d e p r o d u t o s n a t u r a i s n a l i n h a g e m de c ι l u l a H e l a .
E X T R A T O S O L U B I L I D A D E E° 5 0 A T I V I D A D E
(mcg/ml)
S e r j a n i a c a r a c a s a n a ( e x t . butanol d a c a s c a e d o c a u l e ) C r o t ó n c a j u c a r a B e n t h . ( e x t . b r u t o da folha)
C a s c a de c a c a u (ext. a q u o s o )
C r a s s o s t r e a ( e x t . a q u o s o )
M a y t e n u s i l i c i f o l i u m ( e x t . a q u o s o de c a u l e )
G r a z í e l l a n t u s p u r p u r e a (raiz e c a u l e e x t . b r u t o e t a n σ l i c o ) W e d e l i a s c a b e r r i m a (folha e x t . b r u t o e t a n σ l i c o )
V e l l o z i a p i r e s i a n a (ext. b r u t o da f o l h a e m h e x a n o ) L e u c a e n a g l a u c a B e n t h . ( e x t . e t a n σ l i c o d a s f o l h a s ) S w a r t z i a a c u m i n a t a ( s e m e n t e , e x t . e t a n σ l i c o ) C a f ι v e r d e c o m e r c i a l l i o f i l i z a d o (ext. a q u o s o )
V e l l o z i a c a p u t , Ardal (parte c a u l e e r a i z , e x t . b r u t o e t a n σ l i c o ) C h l o r o p h o r a t i n c t o r i a (ext. e t a n σ l i c o m a d e i r a )
Inga e d u l i s ( s e m e n t e , e t x . e t a n σ l i c o
C o p a i p h e r a t r a p e z i p h o l i a ( s e m e n t e , e x t . b r u t o e t a n σ l i c o ) S í p u n c u í o í d e a ( e x t . a a u o s o )
aIcool + sal i n a
D M S O
S a l i n a
S a l i n a + c a r b o x i m e t i
c e l u l o s e 0,5Ύ
Sal i na
DMSO
DMSO
D M S O
D M S O
D M S O
Sal i n a
Etanol a b s o l u t o
D M S O
DMSO
DMSO
D M S O
18
12
A T I V A
A T I V A
I n a t iva
Inat i v a
Inat i v a
Inat i v a
Inat i v a
Inat i v a
Inativa
I n a t iva
Inat i v a
Inat i v a
Inat i v a
Inat i v a
Inat i v a
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