UNIVERSIDADE FEDERAL DE CIÊNCIAS
UNIVERSIDADE FEDERAL DE CIÊNCIAS DA SAÚDE DE PORTO ALEGREDA SAÚDE DE PORTO ALEGRE
RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA
BIOQUÍMICA I BIOQUÍMICA I
Ana Paula Schna!"#$% Na#an$ Ba&&an# $ Su&an Flach Ana Paula Schna!"#$% Na#an$ Ba&&an# $ Su&an Flach
'IDRÓLISE ÁCIDA E EN(IMÁTICA DO AMIDO 'IDRÓLISE ÁCIDA E EN(IMÁTICA DO AMIDO
INTRODU)*O+ INTRODU)*O+
O amido é constitu
O amido é constituído basicído basicamenamente por resíduote por resíduos de s de glicglicose que são unidoose que são unidos pelass pelas ligações alfa-1,4, amilose, e
ligações alfa-1,4, amilose, e por ligações alfa-1,6,amilopectina.por ligações alfa-1,6,amilopectina.
a !idr"lise #cida o amido é con$ertido, completamente, em glicose, isso ocorre a !idr"lise #cida o amido é con$ertido, completamente, em glicose, isso ocorre porque o #cido !idrolisa tanto as ligações alfa-1,4 quanto as alfa-1,6. a !idr"lise porque o #cido !idrolisa tanto as ligações alfa-1,4 quanto as alfa-1,6. a !idr"lise en%im#tica a &-amilase não ataca as ligações alfa-1,6, portanto não transforma todo en%im#tica a &-amilase não ataca as ligações alfa-1,6, portanto não transforma todo amid
amido em o em glicglicose. ose. essessa !idr"lia !idr"lise o se o amidamido é o é transtransformaformado, progrdo, progressi$essi$amenamente, emte, em acro
acrode'tde'trinarinas, s, glicglicose, ose, maltmaltose, ose, isomisomaltosaltose e e e oligoligolosolosídioídios. s. (s (s acroacrode'tde'trinarinas s sãosão resultados da !idr"lise da amilopectina, uma $e% que a &-amilase ataca apenas as resultados da !idr"lise da amilopectina, uma $e% que a &-amilase ataca apenas as liga
ligações alfa-1,4ções alfa-1,4, , t)m-st)m-se e como resultacomo resultado do molémoléculaculas s de de maltomaltose, se, maltomaltotriostriose e e e dede glicose com compostos
glicose com compostos ramificados *de'trinas+.ramificados *de'trinas+. ( !i
( !idr"lidr"lise do se do amidamido tem o tem apliaplicaçãcação fisiol"go fisiol"gica de grande rele$ica de grande rele$ncincia, onde ele éa, onde ele é transformado em moléculas menores de açcares pelas en%imas no processo de transformado em moléculas menores de açcares pelas en%imas no processo de digestão para que ocorra a absorção e utili%ação dos nutrientes pelo metabolismo. digestão para que ocorra a absorção e utili%ação dos nutrientes pelo metabolismo. (lém
(lém disso, disso, a a !idr"lise !idr"lise é é aplicada aplicada na na indstria, indstria, para para a a obtenção obtenção dos dos açcares açcares dede alimentos como, por e'emplo, a
alimentos como, por e'emplo, a mandioca.mandioca. essa aula pr#tica se
essa aula pr#tica serão obser$ados os doirão obser$ados os dois tipos de !idr"lise citados tipos de !idr"lise citados, assim comos, assim como os agentes que interferem na ati$idade da en%ima alfa-amilase.
os agentes que interferem na ati$idade da en%ima alfa-amilase.
MATERIAIS E M,TODOS+ MATERIAIS E M,TODOS+
E-.$!#/$n0 1+ '#"!2l#&$ Ác#"a E-.$!#/$n0 1+ '#"!2l#&$ Ác#"a
rimeiramen
rimeiramente, foram numeradote, foram numerados oito tubos de es oito tubos de ensaio seguinnsaio seguindo a seguinte do a seguinte ordemordem numérica/ 0, , 6, 2, 13, 1, 15 e 31. tili%ou-se também uma placa-de-toque que foi numérica/ 0, , 6, 2, 13, 1, 15 e 31. tili%ou-se também uma placa-de-toque que foi marcada seguindo a mesma numeração. (p"s, foi pipetado 1 m7 do regente de marcada seguindo a mesma numeração. (p"s, foi pipetado 1 m7 do regente de 8enedict em cada tubo. 9m um 8ec:er de 0 m7 foi colocado 40 m7 da solução de 8enedict em cada tubo. 9m um 8ec:er de 0 m7 foi colocado 40 m7 da solução de amido a 1g;d7 e essa aquecida até a ebulição. ara que o $olume não fosse perdido amido a 1g;d7 e essa aquecida até a ebulição. ara que o $olume não fosse perdido durante a ebulição, o 8ec:er foi mantido tampado durante o processo. < solução de durante a ebulição, o 8ec:er foi mantido tampado durante o processo. < solução de amido, foi adicionada e misturada com o
amido, foi adicionada e misturada com o uso de bastão de uso de bastão de $idro, 3 m7 de uma $idro, 3 m7 de uma soluçãosolução de #cido clorídrico 0= *$;$+. >mediatamente, ap"s a ebulição, foi retirado 1 m7 da de #cido clorídrico 0= *$;$+. >mediatamente, ap"s a ebulição, foi retirado 1 m7 da mistura !idrolisada e colocado no tubo de nmero 0, ao
mistura !idrolisada e colocado no tubo de nmero 0, ao mesmo tempo em que gotasmesmo tempo em que gotas da mesma mistura eram colocadas na ca$idade 0 da placa-de-toque. (p"s minutos a da mesma mistura eram colocadas na ca$idade 0 da placa-de-toque. (p"s minutos a contar do tempo 0, a operação foi repetida e assim sucessi$amente até que todos os contar do tempo 0, a operação foi repetida e assim sucessi$amente até que todos os tubos e ca$idades da placa ti$essem sido preenc!idos. or fim, foi adicionada 1 gota tubos e ca$idades da placa ti$essem sido preenc!idos. or fim, foi adicionada 1 gota
de uma solução de 7ugol em cada ca$idade da placa-de-toque e, os tubos foram aquecidos em ban!o-maria fer$ente de 1 a 3 minutos.
E-.$!#/$n0 3+ '#"!2l#&$ En4#/50#ca
ara dar-se o início ao procedimento, !ou$e a coleta de apro'imadamente m7 de sali$a, dissol$ida posteriormente em 10 m7 de #gua destilada. (p"s a coleta, tubos de ensaio foram numerados de 1 a e, a eles, adicionado m7 de sali$a. O contedo do tubo de nmero 3 foi aquecido em ban!o-maria fer$ente até a ebulição. (o tubo de nmero foi adicionado 1 m7 de ?@l a =. ara finali%ar esta etapa, 1 m7 da solução de amido 1g;d7 foi adicionado em todos os tubos e estes le$ados para ban!o-maria a 40 A@ por 30 minutos.
ara a segunda etapa deste e'perimento, foram numerados mais tubos com numeração de 4 a 6. (o tubo de nmero 4 foi adicionado 1 m7 do contedo do tubo 1, ao de nmero , 1 m7 do tubo 3 e ao de nmero 6, 1 m7 do contedo do tubo . >mediatamente, foram adicionadas 3 gotas de 7ugol aos tubos de nmero 1, 3 e e m7 do reati$o de 8enedict aos tubos 4, e 6. Os tubos 4, e 6 foram no$amente aquecidos em ban!o-maria fer$ente por minutos. (tra$és disto, os resultados foram analisados.
RESULTADOS E DISCUSS*O+
E-.$!#/$n0 n6 1+ '#"!2l#&$ Ác#"a " A/#"
(o finali%ar o protocolo e'perimental o seguinte resultado foi percebido/
Bempo *min+ Ceação com lugol Ceação de 8enedict
0 DDDDDDDD - DDDDDDD -6 DDDDDD -2 DDDDD -13 DDDD E 1 DDD E 15 DD E 31 D E
8aseando-se nos resultados supracitados, é possí$el perceber que conforme a reação com o lugol decresce a reação de 8enedict se intensifica *fig1.+, isso se de$e ao fato de que cada um desse reati$os reagem com diferentes produtos. O lugol é uma solução de iodo que apresenta cor a%ul escura na presença de amido e a medida que diminui a quantidade de tal, a cor perde a intensidade, até que na sua aus)ncia total a cor é um marrom claro. O reagente de 8enedict percebe a presença de açcares, neste caso da glicose, a $erificação $isual se d# pela presença de um precipitado marrom, conforme aumenta a presença de glicose o precipitado também é mais e$idente.
( !idr"lise #cida baseia-se no fato de que em temperaturas ele$adas o #cido, no caso apresentado o ?@l, pode con$erter completamente o amido em seu constituinte essencial que é a glicose. @om a passagem do tempo a !idrolise progride e mais moléculas de glicose são e$identes, os #cidos rompem tanto as ligações alfa1-4 como as alfa 1-6 do amido, por isso a total con$ersão é possí$el. @om a progressão da !idr"lise o poder redutor da glicose $ai aumentando, deste modo o !idrolisado dei'a de reagir com o iodo, que antes reagia com o amido por este ser um composto não redutor. 1 2 3 4 5 6 7 8 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5
Reação com Lugol e Benedict
Reação com lugol Reação de Benedict
Tempo de 0 a 21min ( de 3 em 3min) I n t e n s i d a d e
Fig.1. Celação entre as reações com 7ugol e com 8enedict, nos diferentes tempos.
E-.$!#/$n0 n6 3+ '#"!2l#&$ En4#/50#ca
ara $erificar como ocorre a !idr"lise en%im#tica, com a &-amilase, presente na sali$a, foi reali%ado o procedimento G# descrito e os seguintes resultados foram adquiridos/
Tu7 R$a89 c/ lu:l Tu7 R$a89 "$ B$n$"#c0
C! R$a89 C! R$a89
1 Harron egati$a 4 Ierde ositi$a
3 (%ul escuro ositi$a (%ul egati$a
; (%ul escuro ositi$a 6 (%ul egati$a
essa situação o lugol continua com as mesmas características descritas anteriormente, reagindo na presença do amido *não redutor+ e re$elando uma coloração a%ul escura que diminui a intensidade J medida que o amido $ai sendo !idrolisado em açcares. O reati$o de 8enedict continuou a%ul nas reações negati$as, ou seGa, que não apresenta$am açcares e na reação positi$a ficou $erde, isso porque na !idr"lise en%im#tica o amido não é completamente !idrolisado em glicose. O amido não é completamente con$ertido pela alfa-amilase em glicose, porque essa en%ima ataca apenas as ligações alfa-1,4 e é inati$a em relação Js ligações alfa-1,6. 9ssa !idr"lise produ% moléculas de maltose, maltotriose, poucas moléculas de glicose e todas essas citadas com um composto ramificado c!amado de'trinas *ligações alfa-1,6+.
O tubo 1 foi o nico que te$e a reação de 8enedict positi$a, ou seGa, foi o nico que te$e o amido con$ertido para algum dos açcares citados acima, uma $e% que nesse tubo não foi adicionado nen!um agente que interferisse na ação en%im#tica da alfa-amilase. 9ssa confirmação é respaldada pelo resultado negati$o com a solução de iodo.
( solução de sali$a adicionada ao tubo 3 !a$ia sido aquecida antes de adicionar a solução de amido, o que e'plica o fato da ação en%im#tica não ter ocorrido. 9m altas temperaturas, a alfa-amilase, que é uma proteína, pode desnaturar e dei'ar de e'ecutar suas ati$idades, logo não ocorreu a !idr"lise do amido e a reação com iodo foi positi$a afirmando.
o tubo antes de adicionar o amido foi colocado ?@l, o que também ocasionou a desnaturação da &-amilase impossibilitando a !idr"lise do amido e sua con$ersão em açcares. or este moti$o a reação com iodo também foi positi$a.
CONCLUS*O+
O amido é formado essencialmente por moléculas de glicose. os dois tipos de !idr"lise estudados a #cida é a que consegue con$erter completamente o amido em moléculas de glicose, uma $e% que ocorre a quebra tanto das ligações alfa-1,4 quanto das ligações alfa-1,6. a !idr"lise en%im#tica o amido é transformado, progressi$amente, em acrode'trinas, glicose, maltose, isomaltose e oligolosídios, uma $e% que a alfa-amilase atua apenas nas ligações alfa-1,4. (lém de obser$ar a diferença entre as !idr"lises #cidas e en%im#ticas, é possí$el entender como os agentes desnaturantes *#cido forte e temperatura ele$ada+ interferem e impedem a ati$idade en%im#tica, G# que eles desnaturam a proteína e impossibilitam que o amido seGa con$ertido.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS+
KCH97L, CM (7I(C9N, ?.M @9C9(, H..MI>7OD,O.F. ?idr"lise do (mido. Iol., cap.1 P @ultura de tuberosas amil#ceas latino-americanas. Fundação @argill. 300 OH>>@N(Q, H. Hetabolismo - Kérie @arne e Osso >>> Kérie. 97K9I>9C, 300R. @ap. 31. BC(STO 9/ Fles! and 8ones of Hetabolism.
QUEST<ES+
1- a !idr"lise #cida o amido é con$ertido, completamente, em glicose, que é seu constituinte essencial. >sso ocorre porque o #cido !idrolisa tanto as ligações alfa-1,4 quanto as alfa-1,6M ligações estas que unem os resíduos de glicose. a !idr"lise en%im#tica a &-amilase não ataca as ligações alfa-1,6, portanto não transforma todo amido em glicose. essa !idr"lise o amido é transformado, progressi$amente, em acrode'trinas, glicose, maltose, isomaltose e oligolosídios. (s acrode'trinas são resultados da !idr"lise da amilopectina, uma $e% que a &-amilase ataca apenas as ligações alfa-1,4, tem-se como resultado moléculas de maltose, maltotriose e de glicose com composto ramificados *de'trinas+.
3- ( solução fisiol"gica possui p? 6,0, por isso se for adicionado algumas gotas dela J solução de amido não ocorrer# nada, uma $e% que o p? ideal da ação en%im#tica é 6,R, bem pr"'imo do p? da solução fisiol"gica.
- R$a89 c/ Lu:l+ O lugol é uma solução de iodo que reage com o amido, apresentando uma coloração a%ul escura na presença do mesmo.
R$a89 "$ B$n$"#c0+ O Ceagente de 8enedict é um reagente químico de cor a%ulada, usado para detectar a presença de açcares, nos quais incluem a glicose, galactose, maltose e manose. Bornando possí$el a $erificação da !idr"lise do amido, uma $e% que ele é composto essencialmente por glicose.
emonstra diferentes cores de acordo com a quantidade de açcares, conforme a tabela abai'o/
@or Cesultados
@or inalterada *a%ul+ negati$o
Ierde-a%ulado ou $erde traços
Ierde *qualquer tom+ com precipitado amarelo
positi$o E
@astan!o ou marrom positi$o EE
Iermel!o tiGolo positi$o EEE
Fonte/ rof. Caimundo UniorM epartamento de 8iologia da @ de Voi#s
4- (o c!egar no estWmago a amilase sali$ar torna-se inati$a, uma $e% que o p? do estWmago é #cido e o seu p? ideal é 6,R *pr"'imo a neutralidade+, ou seGa, a amilase inati$a em meio #cido.
- @omo G# foi citado na resposta da questão nmero um, a amilase sali$ar não con$erte todo o amido em glicose, porque ela ataca apenas as ligações alfa-1,4 no interior da molécula.
