AISLAMIENTO DE VIRUS RABICO DE MURCIELAGOS INSECTIVOROS EN CORDOBA, ARGENTINA ’
S. Sileoni,2 0. Rossetti,’ A. Márquez,3 A. C. Menoyo,” y R. A. de Torres5
La demostración de infección rábica en murciélagos insectí- voros capturados en Córdoba, Argentina, plantea nuevos in- terrogantes epidemiológicos para esta ciudad que ha conse- guido controlar la rabia urbana desde 1966.
Introducción
Desde 1958 ha existido gran interés por la epidemiología de la rabia en la provincia de Córdoba, con especial referencia al en- tonces gran foco endémico de rabia canina en la ciudad capital.
En el Instituto de Virología de Córdoba, uno de los autores colaboró con el Dr. José M. Vanella para realizar estudios tendientes a descubrir rabia en animales silvestres. Numerosos quirópteros hematófagos (Des- modus rotundus rotundus) y otros mamí- feros silvestres del norte de la provincia y alrededores de la ciudad de Córdoba, fueron estudiados por el método de Sellers y el de intento de aislamiento de virus en ratones adultos, con resultados negativos.
Si bien no se obtuvo evidencia alguna de rabia silvestre, se consiguió al menos reunir interesantes datos acerca del área de distri- bución geográfica de los quirópteros hema- tófagos de la provincia de Córdoba (1, 2 ) . Hasta 1963 la ciudad de Córdoba mos- traba una alta incidencia de rabia en la población canina y ocasionales casos de
1 Trabajo realizado en el Departamento Antirrábico, Subsecretaría de Salud Pública, Ministerio de Bienestar Social, Córdoba, Argentina. Presentado en la Sociedad Argentina de Virología en junio de 1970.
2 Investigadores contratados, Departamento Anti- rrábico, Subsecretaría de Salud Pública, Córdoba, Argentma.
3 Subdirector del Instituto de Virología de Córdoba. Profesor Adjunto, Facultad de Ciencias Médicas, Uni- versidad de Córdoba.
4 Director del Departamento Antirrábico. Subsecre- taría de Salud Pública, Córdoba, Argentina.
y Profesor Adjunto, Instituto de Virología de Cór- doba. Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de Córdoba.
rabia humana. En ese año el Dr. Vanella planeó y condujo una campaña antirrábica por medio de la cual consiguió controlar la rabia en dicha ciudad.
En 1969, a raíz de los brotes de rabia canina aparecidos en 1967-1968 en áreas rurales del noroeste de la provincia (de- partamento de Ischilín), se inició un pro- grama de vigilancia epidemiológica e in- vestigación de la rabia, entre cuyos objetivos se destaca la búsqueda de rabia silvestre.
En este trabajo se exponen y se discuten algunos aspectos epidemiológicos de la rabia en Córdoba y fundamentalmente los resultados obtenidos en la investigación de rabia en quirópteros.
Materiales y métodos
Prueba de inmunofluorescencia directa Se utilizó la técnica descrita por Gold- wasser y Kissling (3, 4). El conjugado antirrábico fluorescente, con un título de 1:80 fue cedido por el Centro Panameri- cano de Zoonosis. La observación se realizó con un microscopio Zeiss RA, utili- zando una lámpara HBO-200 W/4, filtro excitador UG-1 de 3 mm, filtro barrera 41 y condensador de campo oscuro.
Aislamiento de virus
Sileuni et al. - VIRUS RABICO EN MURCIELAGOS 457
preparadas al 20% en agua destilada que contenía 2 mg de estreptomicina y 500 uni- dades de penicilina por mililitro.
Los hisopados orofaríngeos (OF) se obtuvieron con hisopos estériles de fibra de rayón en vástagos de madera. Tras un enérgico desplazamiento por la superficie bucal y faríngea, el hisopo fue sumergido en 1 ml de diluyente (agua destilada con 1% de albúmina bovina, pH 8.4-8.6 ajus- tado con NaOH) .
Los ratones fueron inoculados por vía intracerebral y observados durante un pe- ríodo no menor de 30 días.
Prueba de neutralización para identificar el virus rábico
Como sistema huésped se utilizó el ratón albino suizo de 3 a 5 semanas de edad.
Las preparaciones de los virus por identi- ficar consistieron en suspensiones de cere- bro de ratón al 20 por ciento. Como suero antirrábico específico se utilizó el sobre- nadante de líquido ascítico hiperimnune
(SLAH), preparado en ratones mediante la inoculación por vía intraperitoneal de cuatro inyecciones (una por semana) de 0.5 ml de suspensiones al 20% de cerebros de ratones infectados con virus rábico CVS. Estas suspensiones fueron previamente ex- puestas a la acción de la luz ultravioleta
(lámpara germicida 30 W a una distancia de 20 cm) durante 5, 4, 3 y 1 minuto, respectivamente. Una semana más tarde los ratones recibieron una quinta inyección de virus rábico CVS activo con un titulo mayor de lo5 DL,, mezclado en partes iguales con una suspensión al 10% en solu- ción salina, de células ascíticas provenientes de ratones inoculados con Sarcoma 180
(5,6).
Antes de su uso el SLAH fue inactivado a 56” C durante 30 minutos. El título neu- tralizante, frente a 50 DL,, de virus rábico CVS, fue igual a 1:625. Como control se utilizó el sobrenadante de líquido ascítico * normal (SLAN), producido por inocula-
ción de células de Sarcoma 180 en ratones sin inmunización previa (normales).
Se utilizó como diluyente agua destilada con 2% de suero inactivado de ratones normales.
En la prueba de neutralización se proce- dió de la siguiente manera: se prepararon por duplicado diluciones logarítmicas (logIO) de las suspensiones al 20% de cerebros de ratones inoculados con los agentes por iden- tificar o con virus CVS. A una serie de esas diluciones se agregó un volumen igual de SLAN y a la segunda serie SLAH; se mezcló bien y se incubó durante 90 minutos a 37” C. Cada dilución fue inoculada a grupos de seis ratones que fueron obser- vados durante 30 días. Fue considerado significativo un índice neutralizante igual o mayor de 5 0.
Resultados
A los Gnes de informar sobre la situación epidemiológica de la rabia en Córdoba, se exponen a continuación los resultados ob- tenidos por nuestro laboratorio, único centro diagnóstico para la provincia, en los últimos años. Se aclara que el último caso de rabia humana en Córdoba ocurrió en 1963.
En la figura 1 se consignan los casos de rabia animal pertenecientes a la ciudad de Córdoba. Hasta iniciar la campaña antirrá- bica, los diagnósticos positivos superaron los 100 anuales. A partir de 1964, es decir un año después de la iniciación de la cam- paña antirrábica, se observó un marcado descenso que alcanzó tinahnente niveles no detectables en 1967.
El caso ocurrido en 1966 corresponde a un perro mordido por otro rabioso en la provincia de Buenos Aires y posteriormente trasladado a la ciudad de Córdoba. El caso ocurrido en mayo de 1969 corresponde a un gato, y será analizado más adelante con re- lación al hallazgo de rabia en murciélagos insectívoros.
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FIGURA I-Rabia en animales de la ciudad de Córdoba, Argentina, de 1958 a 1970 (diagnóstico de laboratorio).
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cados por el laboratorio, a partir de 1964, en la provincia de Córdoba. La mayoría de los casos ocurrieron en áreas rurales del cuadrante noroeste, que aparecieron en forma de pequeños brotes epidémicos de rabia canina. Solamente tres de los casos registrados corresponden a bovinos mordi- dos por perros rabiosos. La periódica apari- ción de rabia canina en zonas rurales de la provincia de Córdoba en años de rabia no detectable en la ciudad y la falta de eviden- cias que permitieran determinar las fuentes de virus responsables de los brotes men-
cionados, hacían pensar en la posible exis- tencia de rabia silvestre,
En el cuadro 1 se presentan los resultados de la investigación realizada en quirópteros capturados en el período comprendido entre agosto de 1969 y mayo de 1970.
Sileoni et al. * VIRUS RABICO EN MURCIELAGOS 459
FIGURA P-Rabia en la provincia de Córdoba, Argentina, de 1964 a 1969 (diagnóstico de laboratorio).
0 CASOS AÑO 1964
del Dr. Merle Küns, del Centro Panameri- cano de Zoonosis, y la participación del Sr. Gustavo Bronstein.
A principios de 1970 un grupo de biólo- gos informó que en una colonia de mur- ciélagos insectívoros estudiada por ellos habían observado un elevado número de ejemplares muertos. Dicha colonia consistía en unos 500 a 1,000 animales emplazados en el desván de un viejo edificio donde funciona un hogar escuela.
De esta colonia se estudiaron 80 ejem- plares, de los cuales 72 fueron clasificados
como Tadarida brasiliensis brasiliensis y ocho como Myotis chilensis *. Se demostró infección rábica en dos de los murciélagos pertenecientes a la especie Tadarida brasi- liensis brasiliensis.
En abril de 1970 se demostró infección rábica en otro ejemplar de la misma especie, capturado en la ciudad de Córdoba. Este ejemplar fue encontrado por su capturador en el suelo, junto a la puerta de acceso a su
460 BOLETIN DE LA OFICINA SANITARIA PANAMERICANA * Mayo 1971
CUADRO l-Investigación de rabia en quirópteros de Córdoba, Argentina, de agosto de 1969 a mayo de 1970.
Localidad de
captura Especie Método de captura Número de ejemplares estudiado Material para rabia Positivos
Minas abandonadas del noroeste de Córdoba
Desmodus rotundas
rotundus red 75 hisopado of 0
Myotis sp. red 7 hisopado of 0
i
golpes 7 cerebro 1
Tadarida red 33 cerebro 1
Colonia Hogar Escuela brasiliensis
Villa Allende brasiliensis hisopado of 0
Córdoba gases 32 cerebro 0
Myotis chilensis
golpes red
2 cerebro 0
cerebro 0
4
hisopado of 0
gases 2 cerebro 0
Ciudad de Córdoba Tadarida brasiliensis
brasiliensis manual 1 cerebro 1
domicilio. El animal se dejó atrapar sin dificultad y luego mordió a su capturador, en el dedo pulgar, a quien se le administró tratamiento antirrábico preventivo.
La infección rábica en los tres murciéla- gos fue demostrada por:
1) Presencia de corpúsculos de Negri en improntas de cerebros (técnica de Sellers).
2) Fluorescencia específica de improntas simultáneas estudiadas por la técnica directa de anticuerpos fluorescentes.
3) Muerte de ratones recién nacidos y adultos inoculados con las suspensiones de cerebro de murciélago (período de incuba- ción de 7 a 9 días para recién nacidos y de 8 a 13 días para los adultos).
4) Fluorescencia específica de las im- prontas preparadas con cerebro de ratones muertos por la inoculación de suspensiones de cerebro de los murciélagos.
5) Identificación de los agentes aislados en ratones utilizando la prueba de neutrali- zación.
Discusión
No se han encontrado referencias con- cretas sobre la importancia que tiene la in-
fección de murciélagos insectívoros en la iniciación o mantenimiento de la rabia ur- bana (canina). Es posible que algunos casos de rabia en gatos, como el ocurrido en mayo de 1970 (cuadro 1) , puedan explicarse por la ingestión u otro contacto directo con murciélagos infectados. De cualquier ma- nera, la infección de quirópteros en áreas urbanas representa por lo menos un peligro potencial que hay que tener en consideración.
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.:
Se desconoce si los murciélagos de la colonia estudiada o los que colonizan los alrededores y centro de la ciudad de Córdo- ba son migratorios.
Sileoni et al. . VIRUS RABICO EN MURCIELAGOS 461
El hallazgo de Tadarida infectados en las cercanías y centro de la ciudad obliga a plantear una nueva política. Se ha acon- sejado reforzar la educación sanitaria de la L población, recordando que la mordedura de cualquier animal, incluyendo murcié- lagos, implica riesgo de rabia. Por otra parte, se ha iniciado el estudio de otras colonias de murciélagos, a fm de ampliar la información * actual. No se ha dado amplia difusión al
hallazgo para evitar una probable reacción de pánico en la población que podría inducir a una matanza indiscriminada de quiróp- teros, cuyos resultados ecológicos parecen ser, por ahora, imprevisibles. Si la infec- ción estuviera extendida a la mayoría de las poblaciones de murciélagos que viven en esta ciudad, probablemente sea necesario abandonar la idea de erradicación de la rabia en Córdoba y enfrentar el problema mediante medidas indefinidas de control para evitar posibles brotes en gatos y perros y el siempre potencial riesgo de transmisión a humanos.
Por ahora, y hasta tanto se obtenga más información sobre el papel de los murciéla- gos insectívoros en la epidemiología de la c rabia, pareciera razonable recomendar la iniciación de estudios ecológicos en quiróp- teros, de forma que, eventualmente, sea posible desarrollar una metodología cientí- fica y racional para el control de esta fuente de virus rábico.
Resumen
Córdoba, cuya población asciende a casi 900,000 habitantes, pasó de una cifra entre 100 a 400 casos anuales de rabia canina, a la no detección de casos desde 1967, como consecuencia de una campaña antirrábica a cargo de la Subsecretaría de Salud Pública de la provincia. La vacunación canina y un servicio de vigilancia e investigación en rabia son mantenidos con excelente disposi- ción por parte de las autoridades provin- ciales.
Una nueva razón para intensificar todos los aspectos relacionados con la lucha anti- rrábica ha sido puesta de manifiesto como consecuencia del descubrimiento de infec- ción rábica en murciélagos de la especie Tadarida brasiliensis brasiliensis, captura- dos en el área del gran cinturón verde que rodea la ciudad de Córdoba.
En tres de 81 murciélagos estudiados se demostró infección rábica por el método de Sellers, inmunofluorescencia directa y neu- tralización específica de los agentes aislados. Se sugiere la iniciación de estudios ecológi- cos que permitan conocer particularmente si estos murciélagos del centro del país son migratorios. q
Agradecimiento
Se agradece al Centro Panamericano de Zoo- nosis la provisión de conjugado antirrábico uti- lizado en la prueba de anticuerpos fluor&5ites.-- .___ Asimismo, al Consejo Nacional de Investiga- ciones Científicas y Técnicas la utilización par- cial de recursos (Subsidio No. 3520/68).
REFERENCIAS
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Amer J Trop Med 15: 219-226, 1966. J Immun 95: 676-682, 1966.
Isolation of rabies virus from insectivorous bats in Córdoba, Argentina (Summary)
In 1963, the Córdoba Public Health Service initiated an Antirrabies Program which was di- rected by Dr. José M. Vanella. By that time Córdoba, a City of about 900,000 inhabitants, had 100 to 400 cases of laboratory confirmed dog rabies per year. Since 1967 no cases of urban rabies have been detected.
A permanent program of dog vaccination and rabies surveillance is maintained by the local Health Service. A new reason for in- creasing efforts in control measures has come
about after the finding of bat rabies in Cór- doba.
Three out of 81 Tadarida brasiliensis brasi- Iiensis were found infected with rabies virus. This fact was demonstrated by Seller’s method, immunofluorescence and specific neutralization of the recovered agents. There is no avail- able information on the ecology of these bats in the Province, and we think it will be of great interest to find out whether or not they are migratory bats.
Isolamento do virus rábico de morcegos insetlvoros de Córdoba, Argentina (Resumo)
Em 1963 o Servico de Saúde Pública de Córdoba iniciou um Programa Antirábico, que foi dirigido pelo Dr. José M. Vanella. Naquela época Córdoba era urna cidade de cêrca de 900.000 habitante e registrava de 100 a 400 casos, confirmados em laboratório, de raiva canina ao ano. Desde 1967 náo se detectou caso algum de raiva nas áreas urbanas.
0 ServiGo de Saúde local mantém a vigi- lância bem como um programa permanente de vacinacáo de caés. A razáo para aumentar os
esforcos das medidas de controle foi a localiza- cáo de casos de raiva de morcegos em Córdoba.
Três dos 81 Tadarida brasiliensis brariliensis
foram encontrados infeccionados com virus rá- bico. Este fato foi demonstrado pelo método de Seller, imunofluorescência e neutraliza@0 específica dos agentes recuperados. Náo há in- formacáo disponível sôbre a ecologia dêstes morcegos em a Provincia e consideramos que será de grande interêsse determinar a exis- tencia ou náo de morcegos migratórios.
Isolement de virus rabique chez des chauves-souris insectivores a Córdoba, Argentine
(Résumé)
En 1963, le Service de la santé publique de Córdoba entreprenait un programme de lutte antirabique dont la direction était confiée au Dr. José M. Vanella. Córdoba, qui à cette époque comptait environ 900.000 habitants, relevait chaque année de 100 à 400 cas de rage canine confirmés par des analyses de labora- toire. Depuis 1967, aucun cas de rage n’a été enregistré dans les villes de la province.
Une campagne continue de vaccination ca- nine et de dépistage de la rage est menée par le Service local de la santé publique. La décou- verte à Córdoba de chauves-souris atteintes de
la rage a motivé l’intensification des efforts accomplis dans la lutte centre cette maladie.
