TÍTULO DO TRABALHO:
“DESENVOLVIMENTO DE TECNOLOGIA A BAIXO CUSTO PARA DETERMINAÇÃO DE COLIFORMES EM TEMPO REDUZIDO”
TEMA II:
“ ESGOTAMENTO SANITÁRIO “
NOME DA AUTORA:
Isabela Pelatti
Responsável pela Apresentação / Currículo Profissional Bióloga – Universidade Federal de São Carlos
Mestre em Engenharia Sanitária – Hidráulica e Saneamento – USP Especialista em Planejamento e Gerenciamento Ambiental
1.0 – Introdução
Para avaliação da qualidade sanitária da água, do ponto de vista microbiológico, visando a prevenção de doenças de veiculação hídrica, são usualmente empregadas as bactérias do grupo coliforme – particularmente o sub-grupo dos coliformes fecais – que permitem estimar o grau de contaminação fecal na água.
Os métodos de rotina empregados para quantificação dessas bactérias em água, incluem a técnica de tubos múltiplos-que requer um tempo relativamente longo para obtenção de resultados (até 96 horas para coliformes totais e até 72 horas para coliformes fecais) – ou a técnica de membrana filtrante, através da qual os resultados podem ser obtidos em 24 horas.
No entanto, em situações de emergência, tais como falhas no sistema de tratamento da água, rompimento na rede de distribuição, ligações cruzadas ou outras ocorrências, tais como interrupções no sistema de abastecimento de água à comunidade, causadas por desastres que determinam o risco de contaminação fecal, uma rápida avaliação da qualidade sanitária faz-se necessária e, para essas finalidades, pode ser empregada à técnica de membrana filtrante, utilizando-se o
ColiQuant1, que agiliza a obtenção de resultados necessários para a tomada das
medidas requeridas.
Esse método simplificado permite a recuperação dos coliformes presentes na água em um tempo menor (7-9 horas) graças à associação de dois fatores: a presença de dois substratos fermentáveis por estes microrganismos no meio de cultura empregada, possibilitando a opção entre duas vias metabólicas, o que facilita sua recuperação e permite o seu crescimento mais rápido, e a temperatura de incubação (41,5ºC), que é inferior à usualmente empregada nos testes para quantificação de coliformes fecais (44.5ºC).
Esse método pode ser empregado também para detecção rápida de alterações na qualidade de águas de recreação e no monitoramento da eficiência dos processos tratamento de esgotos.
2.0 – Objetivo
Comparar o meio ColiQuant com o tradicional tubo Múltiplo e Chromocult, avaliando assim sua eficiência quanto aos resultados, uma vez que seu custo é bem menor que os tradicionais encontrados no mercado.
3.0 – Materiais e Métodos 3.1 – Amostras
Será analisado 20 amostras de água em duplicata (total de 40 amostras). As amostras utilizadas deverão ser de águas superficiais que recebam poluição fecal.
A coleta deverá ser realizada de acordo com o “Standard Methods for the examination of Water and Wastewater”.
O volume de amostra a ser coletado deverá ser de no mínimo 1 l.
A amostra deve ser mantida em refrigeração até o momento da análise, que não poderá ultrapassar 24 horas.
As amostras coletadas deverão conter de 60 a 100 UFC de coliformes por 100 ml para serem submetidas as análises de comparação entre os métodos.
Deve-se conhecer o número de UFC de coliformes por 100 ml das amostras coletadas através da técnica de membrana filtrante utilizando-se o meio M-endo Agar LES.
Se necessário as amostras deverão ser diluídas para se obter o número mínimo de coliformes recomendado. As diluições deverão ser realizadas com água natural sem “background” de coliformes e estéril. As amostras deverão ser muito bem homogeneizadas (agitando-se o frasco por mais de 25 vezes) antes de e durante o processo de diluição.
Deverá haver o volume final de 600 ml (em um único frasco) de cada amostra diluída contendo de 60 a 100 UFC de coliformes/100 ml, para então serem realizadas as seguintes inoculações: 100 ml para o Teste de Tubos Múltiplos convencional, 100 ml para o Teste de Membrana Filtrante com Chromocult e 100 ml para o Teste de Membrana Filtrante com ColiQuant, sendo que todos os testes deverão ser realizados em duplicata.
3.2 Descrição dos Métodos
a) Proceder a leitura, considerando, como resultado positivo para coliformes fecais, todos os tubos que apresentarem formação de gás no tubo de Durham.
b) Com os dados obtidos, calcular o NMP/100 ml de coliformes fecais.
II – Teste Membrana Filtrante com ColiQuant
- Incubar as placas, em posição invertida, à temperatura de 41.5ºC durante um período de 6:00 a 9:00 horas
- Após o período de incubação retirar as placas da incubadora.
- Efetuar as contagens, selecionando para leitura as placas que apresentaram crescimento entre 20 e 80 colônias típicas de coliformes. As colônias típicas de coliformes fecais apresentam uma coloração que vai do amarelo claro ao brilhante, e de totais de vermelho claro a vermelho escuro as colônias atípicas podem apresentar-se com coloração rosa ou branca, ou ainda incolores.
- Calcular a densidade de coliformes em 100 ml, utilizando a seguinte fórmula:
(Total ou Fecal) coliformes/100 ml = [N.º de colônias típicas x 100 / ml filtrado da amostra]
- Expressar os resultados como: N.º de coliformes / 100 ml Segundo análises estatísticas:
Se 50, 25 e 10 ml, porções examinadas e contem 15,6. e <1 colônias de coliformes, respectivamente calculamos:
[(15 + 6 + 0 ) x 100] / (50+25+10) = 25 coliformes/100 ml
III – Teste Membrana Filtrante com Chromocult
- Calcular a densidade de coliformes em 100 ml, utilizando a seguinte fórmula:
(Total ou Fecal) coliformes/100 ml = [N.º de colônias típicas x 100 / ml filtrado da amostra]
- Expressar os resultados como: N.º de coliformes / 100 ml
4.0 - Resultados
Os resultados obtidos foram analisados quanto a avaliação do método Membrana Filtrante utilizando ColiQuant para detecção de Coliforme Total e E.
coli, quando comprados com os métodos padrões de Membrana Filtrante
utilizando Chromocult e tubos múltiplos – convencional, em amostras de águas superficiais contendo de 60 a 100 coliformes totais.
As amostras discordantes em que a identificação dos positivos não foram realizadas, não foram consideradas.
Amostras de diferentes locais foram utilizadas para essa avaliação: 1- Córrego do Monjolinho
2- Córrego Tijuco Preto 3- Córrego do Feijão 4- Córrego do Gregório
4.1 – Determinação de coliformes totais
Para esta avaliação foram consideradas um total de 60 amostras em duplicata (120).
Os resultados obtidos estão presentes na tabela 1.
Tabela 1. Resultados obtidos para a determinação de coliformes totais pela técnicas convencionais de MF (membrana filtrante), (TB) tubos múltiplos e pelo teste MFColi (MF ColiQuant). MF TB MFColi Local Nº amostras + - + - + - 1 36 36 0 36 0 36 0 2 20 20 0 20 0 20 0 3 36 36 0 36 0 36 0 4 28 28 0 28 0 28 0 Total 120 120 0 120 0 120 0
Comparando-se os resultados obtidos foi observado que 100% das amostras foram concordantes (+/+), conforme uma vez que trabalhamos com amostras contendo uma faixa de 60 a 100 CT/100 ml.
Como 100% das amostras foram positivas, não foi necessária a aplicação de provas estatísticas.
4.2 Determinação de coliformes fecais (MF e MFColi) e E. coli (TB-MFColi).
Um total de 60 amostras realizadas em duplicata foram consideradas para esta avaliação. Portanto um total de 120 resultados foram considerados e as observações quanto aos resultados discordantes serão apresentadas.
Tabela 2. Resultados obtidos para a determinação de coliformes fecais pelas técnicas convencionais de MF e MFColi e de E. coli pelo MFColi.
Test Tubo Teste MF Test MFColi Coli * Coli * Tub o Tub o MF + MF+ MF- MF- Loc al Nº A + - + - + - CO L+ CO L- CO L+ CO L- CO L+ CO L- COL + COL- 1 40 33 7 32 8 30 10 30 3 0 7 30 2 0 8 2 24 22 2 24 0 20 4 20 2 0 2 20 4 0 0 3 30 16 14 16 14 12 18 12 4 0 14 12 4 0 14 4 26 25 1 24 2 24 2 24 1 0 1 24 0 0 2 To tal 120 96 24 96 24 86 34 86 10 0 24 86 10 0 24
As figuras 1 e 2 apresentam os resultados referentes a presença de amostras concordantes e discordantes.
Figura 1. Apresentação das porcentagens dos resultados concordantes e discordantes obtidos quando comparadas as técnicas de Membrana Filtrante (MF) e MFColi para a determinação de coliformes fecais e E. coli respectivamente.
Figura 2. Apresentação das porcentagens dos resultados concordantes e discordantes obtidos quando comparadas as técnicas de TB e MFColi para a determinação de coliformes fecais e E. coli respectivamente.
N=120
Considerando-se as amostras concordantes e discordantes obtidas entre os testes, o cálculo do índice Kappa foi realizado. Foi observado boa concordância entre os testes de MF e MFColi (K= 0.829 e p=0,000). Entre os Testes Tubo e MFColi também foi observada boa concordância (K=0.828 e p= 0.000).
Portanto houve concordância entre os métodos comparados .
5.0 – Referência Bibliográfica
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concorda discorda MFColi x MF concorda discorda 92% 8% TB x MFColi 92% 8%
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