Manejo prático de animais de experimentação

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Universidade do Estado do Pará Reitor Juarez Antônio Simões Quaresma Vice-Reitor Rubens Cardoso da Silva Pró-Reitora de Pesquisa e

Pós- Gradução Hebe Morganne Campos Ribeiro Pró-Reitora de Graduação Ana da Conceição Oliveira

Pró-Reitora de Extensão Mariane Cordeiro Alves Franco Pró-Reitor de Gestão Carlos José Capela Bispo

Editora da Universidade do Estado do Pará Coordenador e

Editor-Chefe Paulo Murilo Guerreiro do Amaral Conselho Editorial Francisca Regina Oliveira Carneiro

Hebe Morganne Campos Ribeiro Joelma Cristina Parente Monteiro Alencar Josebel Akel Fares

José Alberto Silva de Sá Juarez Antônio Simões Quaresma Lia Braga Vieira

Maria das Graças da Silva

Maria do Perpétuo Socorro Cardoso da Silva Marília Brasil Xavier

Núbia Suely Silva Santos

Paulo Murilo Guerreiro do Amaral (Presidente) Pedro Franco de Sá

Tânia Regina Lobato dos Santos Valéria Marques Ferreira Normando

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Editora filiada

Dados Internacionais de Catalogação na Publicação Diretoria de Biblioteca Central da UEPA

Manejo Prático de Animais de Experimentação, Caio Vinicius Bo-telho Brito, Nara Macedo BoBo-telho, Rosa Helena de Figueiredo Chaves Soares – Belém 2016.

ISBN: 978-85-8458-010-1 116f.

1.Pesquisa e cirurgia experimental. 2. Bioética. 3. Animais de la-boratório. 4. Titulo.

Realização

Universidade do Estado do Pará - UEPA Editora da Universidade do Estado do Pará - EDUEPA

Apoio

Editora da Universidade do Estado do Pará - EDUEPA Travessa D. Pedro I, 519 - CEP: 66050-100

E-mail: [email protected] Normalização e Revisão Marco A. da C. Camelo Nilson Bezerra Neto

Capa Fábio Nobre Diagramação Odivaldo T. Lopes Apoio Técnico Arlene S. D. Caldeira Maria C. da Silva Faro

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Organizador, Autor e Revisor

Caio Vinicius Botelho Brito, Médico pelo Centro Universi-tário do Estado do Pará – CESUPA, Mestrando no programa de Cirurgia e Pesquisa Experimental da Universidade do Esta-do Esta-do Pará – UEPA.

Autores e Revisores

Nara Macedo Botelho, Médica, Ginecologista e Obstetra, Doutora em Cirurgia Experimental pela Escola Paulista de Medicina- UNIFESP, Pós doutora em Ginecologia pela Fa-culdade de Medicina – USP, professora Titular de Ginecologia da Universidade do Estado do Pará- UEPA, professora Titular do Instituto de Ciencias da Saúde da Universidade Federal do Pará – UFPA, professora do Centro Universitário do Estado do Pará – CESUPA.

Rosa Helena de Figueiredo Chaves Soares, Médica Ve-terinária, Clínica Médica de Pequenos Animais, Doutoranda em Saúde e Produção Animal na Amazônia da Universida-de FeUniversida-deral Rural da Amazônia – UFRA, professora colabo-radora no Programa de Pós-Graduação da Universidade do Estado do Pará- UEPA, professora na Universidade da Amazônia- UNAMA, professora no Centro Universitário do Estado do Pará- CESUPA.

Robson José de Souza Domingues, Biólogo, Doutor em Ciências Biológicas Anatomia Botucatu- UNESP, Profes-sor titular em Anatomia na Universidade do Estado do Pará - UEPA no curso de Medicina, Coordenador do Programa de Mestrado Profissional em Educação em Saúde da Uni-versidade do Estado do Pará- UEPA.

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“Esta obra é fruto do Programa de Mestrado Profis-sional de Cirurgia e Pesquisa Experimental – CIPE da Universidade do Estado do Pará- UEPA, vinculado à Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Ní-vel Superior -CAPES.”

Autores

Eduardo Henrique Herbster Gouveia, Graduando do curso de Medicina no Centro Universitário do Es-tado do Pará – CESUPA, Estagiário do Laboratório de Cirurgia Experimental da Universidade do Estado do Pará (LCE – UEPA).

Eduardo dos Santos Martins Neto, Graduando do curso de Medicina na Universidade do Estado do Pará – UEPA, Estagiário do Laboratório de Cirurgia experimental (LCE- UEPA).

Higor Yuri Bezerra Henriques, Graduando do curso de Medicina no Centro Universitário do Estado do Pará – CE-SUPA, Estagiário do Laboratório de Cirurgia Experimental da Universidade do Estado do Pará (LCE – UEPA). Danilo Dantas Figueiredo, Graduando do curso de Medi-cina na Universidade do Estado do Pará – UEPA, Estagiário do Laboratório de Cirurgia experimental (LCE- UEPA). Revisor externo

Irani Martins de Gouveia, Médica Veterinária, Mestra em Se-gurança alimentar pela Universidade de Lisboa, Médica veteri-nária do Laboratório de Cirurgia Experimental (LCE –UEPA)

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Sumário Prefácio 9 História e Legislação 10 Bioterismo 38 Contenção de animais 45 Anestesia 62 Analgesia 82 Eutanásia 102

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Prefácio

O Laboratório de Cirurgia Experimental é um dos setores mais profícuos da Universidade do Estado do Pará, no que se refere à produção científico literária. Apesar do exercício constante do respeito às normas de manipulação dos animais de experimentação no trans-correr do cotidiano do laboratório, há muito necessitá-vamos da compilação em um livro, de forma estruturada e organizada, de tais cuidados.

O Manual Prático de Manejo de Animais de Expe-rimentação preenche essa lacuna e vai atender às necessi-dades daqueles que procuram o LCE em busca de explica-ções, no campo experimental, para fenômenos relevantes observados em humanos, beneficiando desde os estudantes até os pós-graduandos.

O mestrando Caio Brito e seus colaboradores desenvolvem esta obra de forma criteriosa e didática distribuindo, em capítulos apropriados e consistentes, o tema do manejo dos animais de experimentação, presen-teando o leitor com um roteiro de normas e cuidados necessários para o desenvolvimento seguro de suas pes-quisas, com ênfase no tratamento zeloso e minoração do sofrimento do animal.

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Capítulo 1

História e Legislação

Caio Vinicius Botelho Brito

Eduardo dos Santos Martins Neto

História geral

O

s primeiros relatos conhecidos do uso de ani-mais em experimentações remontam há ani-mais de dois mil anos com a vivissecção de animais, realizada por Hipócrates (450 A.C) e outros pensadores da época, a fim de estudar e comparar os órgãos de animais com os órgãos humanos. A partir desse ponto, a experimentação animal foi influenciada por várias correntes, como a influência filosófi-ca de Renée Desfilosófi-cartes, que ditava a infilosófi-capacidade de sentir ou sofrer dos animais, a qual perdurou por muito tempo.

As primeiras tentativas de normatizar o uso de ani-mais em pesquisa ocorreram em meados do século XVIII. A partir desta época, os animais começaram a ser

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benefi-ciados por leis específicas, fato que se consolidou após a segunda Guerra Mundial, por meio da instituição do Códi-go de Nuremberg e, loCódi-go depois, da Declaração de Helsin-que, que impactaram as pesquisas em seres humanos e em animais, sendo obrigação dos pesquisadores respeitarem a integridade destes.

As legislações no mundo procederam com sucessi-vas evoluções acerca da experimentação animal. Apesar de essa prática ser realizada desde a Idade Antiga, os primei-ros métodos de regulamentação iniciaram no Reino Unido, por meio da promulgação do British Cruel to Animal Act, criada em 1976 e vigente até os dias atuais, mesmo após sucessivas atualizações em prol do melhor uso de animais em pesquisa. Enquanto isso, na América do Norte, mais especificamente nos Estados Unidos, a lei Laboratory Ani-mal Welfare Act, de 1966, e atualmente chamada apenas de Animal Welfare Act, foi a primeira que dispôs sobre a utiliza-ção de animais em pesquisas. Ano após ano, essa lei sofreu sucessivas emendas que a tornaram mais consolidada e de espectro de ação mais abrangente no campo cientificista, como o caráter intrínseco e obrigatório das comissões ins-titucionais de ética no uso de animais.

Apesar de cada país possuir legislações específicas como a inclusão de animais invertebrados – observada na Suécia, Canadá e Reino Unido, há um regimento comum global publicado pela Organização das Nações Unidas para a Educação, a Ciência e a Cultura (UNESCO), a Declaração Universal dos Direitos dos Animais, de 1978, que é o documento

internacional mais importante, visto que aborda a garantia dos animais à liberdade; o direito de não sofrerem maus-tra-tos e a interdição de experimenmaus-tra-tos que impliquem dor física,

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além de orientar para a utilização de procedimentos em que os animais sejam substituídos por outros métodos de teste. Este documento vislumbra os animais utilizados em pesqui-sa, pois inclui uma visão não antropocêntrica, caracterizando o prisma da igualdade entre todos os seres vivos, bem como a garantia à vida, à liberdade e à proteção contra maus-tratos.

História no Brasil

No Brasil, os primeiros relatos acerca da preocupa-ção do uso de animais em experimentações iniciaram-se em 1934, fundamentando-se no Decreto Federal que reconhecia timidamente as práticas efetuadas com interesse científico. Contudo, foi a partir de 1991 que o Colégio Brasileiro de Experimentação Animal (COBEA) procurou orientar a con-duta dos profissionais, bem como de regulamentar o uso de animais em experimentos ao divulgar 12 artigos nomeados de Princípios Éticos na Experimentação Animal. Esse do-cumento, portanto, surgiu em função de suprir a falta de leis que protegessem os envolvidos nesta prática.

Na falta de leis específicas, ficou clara a necessidade da criação de Comitês de Ética que regulamentassem e respaldas-sem as pesquisas com animais, de forma a destacar o primeiro passo dado por diversas entidades nacionais no concernente à experimentação animal. Dessa forma, apenas em 2008 foi san-cionada a lei 11.794, que estabeleceu os procedimentos para o uso científico de animais, atendendo aos anseios da comuni-dade científica por regulamentação e pondo fim à lacuna legal existente. Assim, houve a criação do Conselho Nacional de Controle de Experimentação Animal (CONCEA), bem como as Comissões de Ética no Uso de Animais (CEUA) em insti-tuições que almejam a pesquisa envolvendo animais.

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É valido ressaltar que as CEUAs possuem funções im-portantes que credenciam as instituições possuidoras de práticas de experimentação animal. No art. 14º da lei 11.794, há alguns requisitos e procedimentos a serem adotados quando da utili-zação de animais em pesquisa, dentre eles: prática de eutanásia para interromper intenso sofrimento causado pelo experimen-to; redução de espécimes e utilização de meios alternativos, quando possíveis; utilização de sedação ou analgésicos para mi-nimizar a dor resultante do processo de pesquisa; autorização específica da CEUA com objetivo de estudar a dor e angústia e, em casos de programas de ensino com o emprego de proce-dimentos traumáticos, vários processos poderão ser realizados em um mesmo animal desde que este não retorne à consciência, devendo ser submetido à eutanásia ao final do procedimento.

Tais critérios objetivam, essencialmente, a redu-ção do número de animais utilizados, bem como a di-minuição do sofrimento ocasionado a eles durante o ex-perimento. A certificação por essa comissão é de suma importância na monitoração dos protocolos aplicados aos pesquisadores locais.

Princípios éticos gerais

Sumariamente, dentre esses princípios, ressalta-se que é primordial manter posturas de respeito ao animal, como ser vivo e pela contribuição científica que ele propor-ciona. Além disso, o animal é dotado de sensibilidade, de memória, e sofre de forma similar à humana, mas sem po-der escapar da dor resultante de manobras experimentais. Dessa forma, o experimentador possui responsabilidade moral perante a escolha de seus métodos e ações frente à experimentação animal.

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É válido ressaltar que se deve considerar a impor-tância dos estudos realizados através da experimentação animal quanto a sua contribuição para saúde humana e animal, além do desenvolvimento do conhecimento e o bem da sociedade em geral. Assim, é de responsabilidade do pesquisador comprovar a relevância do estudo para o avanço do conhecimento, sendo o uso de animais a única maneira de alcançar determinados objetivos desejados.

A utilização do número mínimo necessário de animais em bom estado de saúde, a fim de se obter resultados váli-dos, deve ser aliada ao emprego de métodos alternativos, tais como modelos matemáticos, simulações por computadores e sistemas biológicos in vitro, quando possível, torna-se uma alternativa plausível de proteção aos animais em experimento.

Todos os procedimentos que possam causar dor ou angústia precisam ser desenvolvidos com sedação, analge-sia ou anesteanalge-sia adequada. Atos cirúrgicos ou atos doloro-sos não devem ser aplicados quando há o uso de agentes químicos ou biológicos que causem paralisia, ou não sejam anestésicos. Além disso, quando existe o processo de dor intensa ou angústia crônica, é de extrema necessidade, an-tes mesmo do final do experimento, a submissão desses animais à eutanásia, de forma indolor e que não cause es-tresse. Dessa forma, podem ser citados certos experimen-tos condenáveis, devido ao intenso sofrimento físico ou psíquico, como a privação prolongada de água e alimento; exposição ao calor ou frio excessivo; privação de sono ou descanso; provocação deliberada de pânico; choque elétri-co; lesão traumática violenta; provocação de queimaduras; bloqueio da respiração ou circulação; privação prolongada de movimentos e, por fim, mutilação grave.

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Quanto aos pesquisadores, estes devem possuir qualificação necessária exigida para realização do procedi-mento em animais vivos, sendo que deverá haver a dispo-sição de alojamento que propicie condições adequadas de saúde e conforto, conforme cada necessidade do animal. É imprescindível, também, que o pesquisador utilize testes estatísticos, de forma a viabilizar e justificar a utilização do número apropriado de animais no experimento.

Por fim, os animais devem possuir assistências ade-quadas em relação à alimentação e ao transporte, além de acompanhamento veterinário e atendimento sempre que ne-cessário. Aliada a esses processos, há a importância de manter a biossegurança (conjunto de medidas biológicas necessárias para manipulação dos diversos agentes) dos demais pesqui-sadores e envolvidos nos manejos de modelos animais.

São considerados atos condenáveis pela comunidade científica internacional, para quem o conhecimento gerado deverá estar muito bem embasado para avaliação e autori-zação do CEUA, principalmente se não houver o uso de analgesia e\ou anestesia, e que dificilmente serão aprovados pelos comitês:

• Privação prolongada de água e alimento • Calor e frio excessivo

• Privação de sono ou descanso • Provocação deliberada de pânico • Choques elétricos

• Lesão traumática violenta • Queimaduras

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• Privação prolongada dos movimentos

• Não utilização de analgesia em procedimentos cirúrgicos

• Mutilação grave

Grau de invasividade (GI)

São as formas presentes no formulário de submissão de projeto ao CEUA, que atribuem a valoração ao desconfor-to, estresse, dor, trauma e sofrimentos causados aos seres vivos em experimento, de forma a orientar e fiscalizar a utilização animal na prática científica, bem como a conduta dos pesqui-sadores. Tais graus variam desde o nível GI1, experimentos de pouco ou nenhum desconforto/estresse, até o GI4, que são experimentos dolorosos de alta intensidade. Abaixo, segue-se na íntegra o grau de invasividade e seus níveis.

GRAU DE INVASIVIDADE (GI) -

definições segundo o CONCEA (2010)

GI1 = Experimentos que causam pouco ou nenhum desconforto ou estresse (ex.: observação e exame físico; adminis-tração oral, intravenosa, intraperitoneal, subcutânea, ou intramuscular de substâncias que não causem reações adversas perceptíveis; eutanásia por métodos aprovados após anestesia ou sedação; deprivação alimentar ou hídrica por períodos equivalentes à deprivação na natureza). GI2 = Experimentos que causam estresse, desconforto ou dor, de leve intensidade (ex.: procedimentos cirúrgicos menores, como biópsias, sob anestesia; períodos breves de contenção e imobilidade em animais conscientes; exposição a níveis não letais de compostos químicos que não causem reações adversas graves).

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GI3 = Experimentos que causam estresse, des-conforto ou dor, de intensidade intermediária (ex.: procedimentos cirúrgicos invasivos conduzidos em animais anes-tesiados; imobilidade física por várias horas; indução de estresse por separação materna ou exposição a agressor; exposição a estímulos aversivos inescapáveis; exposição a choques localizados de intensidade leve; exposição a níveis de radiação e compostos químicos que provoquem prejuízo duradouro da função sensorial e motora; administração de agentes químicos por vias como a intracardíaca e intracerebral).

GI4 = Experimentos que causam dor de alta intensi-dade (ex.: Indução de trauma a animais não sedados).

FORMULÁRIO UNIFICADO PARA

SOLICITAÇÃO DE AUTORIZAÇÃO

PARA USO DE ANIMAIS EM ENSINO

E/OU PESQUISA

(Formulário CONCEA 2010)

PROTOCOLO PARA USO DE ANIMAIS

USO EXCLUSIVO DA COMISSÃO PROTOCOLO No

RECEBIDO EM: ___/___/____ No campo “fármaco”, deve-se informar o(s) nome(s) do(s) princípio(s) ativo(s) com sua respectiva Denominação Comum Brasileira (DCB) ou Denominação Comum Internacional (DCI).

Lista das DCBs disponível em:

http://www.anvisa.gov.br/medicamentos/dcb/lista_ dcb_2007.pdf

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FINALIDADE

Finalidade do procedimento realizado. Ensino Pesquisa Treinamento Início: ____/____/_____ Término: ____/____/_____

TÍTULO DO PROJETO/AULA

PRÁTICA/TREINAMENTO

Título na íntegra Área do conhecimento: ___________________________ Lista das áreas do conhecimento disponível em:

http://www.cnpq.br/areasconhecimento/index.htm .

RESPONSÁVEL

Profissional de ensino superior, o qual responderá legal e eticamente pelo manejo dos animais.

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Nome completo Instituição Unidade

Departamento / Disciplina

Experiência Prévia:

Datar a experiência prévia, anterior a presente pes-quisa, com o tipo de animal utilizado na pesquisa.

Não Sim Quanto tempo? __________

Treinamento:

Datar o tempo de treinamento necessário com os animais ou técnicas para a presente pesquisa, den-tro do cronograma das atividades.

Não Sim Quanto tempo? __________

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Vínculo com a Instituição:

Docente/Pesquisador Téc. Nível Sup.

Jovem pesquisador/Pesquisador visitante Telefone

E-mail

4. COLABORADORES

Colocar todos os envolvidos que entraram em contato direto e indiretamente com os animais, sendo estes alunos ou pós-graduandos.

Nome completo Instituição Nível acadêmico

Experiência prévia (anos) Treinamento (especificar) Telefone

E-mail

Utilize esta tabela para o preenchimento de um colaborador. Copie, cole e preencha a tabela, quantas vezes forem necessárias, até que todos os colaboradores sejam contemplados.

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Todos os dados abaixo devem ser incluídos na íntegra.

5. RESUMO DO PROJETO/AULA

6. OBJETIVOS

7. JUSTIFICATIVA

8. RELEVÂNCIA

9. MODELO ANIMAL

Espécie (nome vulgar, se existir): ___________________ _____________________________________________ Justificar o uso dos procedimentos e da espécie animal

Utilizar texto de referências bibliográficas relacio-nadas, respaldando o provável resultado.

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9.1. PROCEDÊNCIA

Neste campo, deve ser colocada a procedência do fornecedor do animal, e não o biotério de estadia do animal.

Biotério, fazenda, aviário, etc. Animal silvestre

Número de protocolo SISBIO: __________ Outra procedência?

Qual? __________

O animal é geneticamente modificado? Número de protocolo CTNBio: __________

9.2. TIPO E CARACTERÍSTICA Espécie _Linha gem Idade Peso apr ox. Quantidade M F M+F Anfíbio Ave

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Bovino Bubalino Cão Camundongo hetero-gênico Camundongo isogê-nico Camundongo Kno-ckout Camundongo trans-gênico Caprino Chinchila Cobaia Coelhos Equídeo Espécie silvestre brasileira Espécie silvestre não-brasileira Gato Gerbil Hamster

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Ovino Peixe Primata não-humano Rato heterogênico Rato isogênico Rato Knockout Rato transgênico Réptil Suíno Outra TOTAL:

9.3. MÉTODOS DE CAPTURA (somente em caso de uso de animais silvestres)

9.4. PLANEJAMENTO ESTATÍSTICO/ DELINEAMENTO EXPERIMENTAL

Colocar o cálculo amostral e o método que será uti-lizado para tratar as variáveis.

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9.5. GRAU DE INVASIVIDADE*: __ (1, 2, 3 ou 4)

Os materiais biológicos destes exemplares serão usados em outros projetos? Quais? Se já aprovado pela CEUA, mencionar o número do protocolo.

Utilizar o máximo de material do mesmo animal utilizado, evitando repetir o mesmo experimento para diferentes finalidades.

9.6. CONDIÇÕES DE ALOJAMENTO E ALIMENTAÇÃO DOS ANIMAIS

• Alimentação • Fonte de água

• Lotação - Número de animais/área • Exaustão do ar: sim ou não

Comentar obrigatoriamente sobre os itens acima e as demais condições que forem particulares à espécie.

Local onde será mantido o animal: __________________ __________________ (biotério, fazenda, aviário, etc.).

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Ambiente de alojamento:

Gaiola Jaula Baia Outros

Número de animais por gaiola/galpão: ______________ Tipo de cama (maravalha, estrado ou outro): _________ _____________________________________________

10. PROCEDIMENTOS

EXPERIMENTAIS DO PROJETO/AULA

10.1. ESTRESSE/DOR INTENCIONAL NOS ANIMAIS

Curto = até 24h de estresse e/ou dor Longo > 24h de estresse e/ou dor

Curto Longo

Não Sim

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(Se “sim”, JUSTIFIQUE.) ESTRESSE:

DOR:

RESTRIÇÃO HÍDRICA/ALIMENTAR: OUTROS:

10.2. USO DE FÁRMACOS ANESTÉSICOS

Sim Não Fármaco

Dose (UI ou mg/kg) Via de administração

Utilize esta tabela para o preenchimento de um fármaco. Copie, cole e preencha a tabela, quantas vezes forem necessárias, até que todos os fármacos sejam contemplados.

No campo “fármaco”, deve-se informar o(s) nome(s) do(s) princí-pio(s) ativo(s) com suas respectivas Denominação Comum Brasileira (DCB) ou Denominação Comum Internacional (DCI).

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10.3. USO DE RELAXANTE MUSCULAR Sim Não Fármaco Dose (UI ou mg/kg) Via de administração

10.4. USO DE FÁRMACOS ANALGÉSICOS Deve ser realizada analgesia sempre que possível, sendo imprescindível para procedimentos com GI2 ou GI3.

Sim Não Justifique em caso negativo:

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Fármaco

Dose (UI ou mg/kg) Via de administração Frequência

No campo “fármaco”, deve-se informar o(s) nome(s) do(s) princípio(s) ativo(s) com sua respectiva Denominação Comum Brasileira (DCB) ou Denominação Comum Internacional (DCI).

10.5. IMOBILIZAÇÃO DO ANIMAL Estrutura utilizada para imobilizar o animal ou membro (tala, gesso, imobilização externa). Diferenciar este item da contenção realizada nos animais durante a manipulação.

Sim Não Indique o tipo em caso positivo:

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10.6. CONDIÇÕES ALIMENTARES 10.6.1. JEJUM: Sim Não Duração em horas: __________ 10.6.2. RESTRIÇÃO HÍDRICA: Sim Não Duração em horas: __________ 10.7. CIRURGIA Sim Não Única Múltipla Qual(is)?

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10.8. PÓS-OPERATÓRIO

10.8.1. OBSERVAÇÃO DA RECUPERAÇÃO

Sim Não

Período de observação (em horas): _________________

10.8.2. USO DE ANALGESIA

Sim Não

Justificar o NÃO-uso de analgesia pós-operatório, quando for o caso:

Fármaco

Dose (UI ou mg/kg) Via de administração Frequência

Duração

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e preencha a tabela, quantas vezes forem necessárias, até que todos os fármacos sejam contemplados.

No campo “fármaco”, deve-se informar o(s) nome(s) do(s) princípio(s) ativo(s) com sua respectiva Denominação Comum Brasileira (DCB) ou Denominação Comum Internacional (DCI).

10.8.3. OUTROS CUIDADOS PÓS-OPERATÓRIOS Sim Não Descrição: 10.9. EXPOSIÇÃO / INOCULAÇÃO / ADMINISTRAÇÃO

Identificar se ocorrerá a introdução de alguma substância no corpo do animal.

Sim Não Fármaco/Outros

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Dose

Via de administração Frequência

11. EXTRAÇÃO DE MATERIAIS

BIOLÓGICOS

Sim Não Material biológico Quantidade da amostra Frequência Método de coleta

Utilize esta tabela para o preenchimento de um material biológico. Copie, cole e preencha a tabela, quantas vezes forem necessárias, até que todos os materiais sejam contemplados.

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12. FINALIZAÇÃO

12.1. MÉTODO DE INDUÇÃO DE MORTE

Descrição

Substância, dose, via

Caso método restrito, justifique:

12.2. DESTINO DOS ANIMAIS APÓS O EXPERIMENTO

12.3. FORMA DE DESCARTE DA CARCAÇA

13. RESUMO DO PROCEDIMENTO (relatar

todos os procedimentos com os animais)

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14. TERMO DE RESPONSABILIDADE

(LEIA CUIDADOSAMENTE ANTES DE

ASSINAR)

Eu, _______________________________________ (nome do responsável), certifico que:

a) li o disposto na Lei nº 11.794, de 8 de outubro de 2008, e nas demais normas aplicáveis à utilização de ani-mais em ensino e/ou pesquisa, especialmente as Resolu-ções Normativas do Conselho Nacional de Controle de Experimentação Animal – CONCEA;

b) este estudo não é desnecessariamente duplicativo, possuindo mérito científico e a equipe participante deste projeto/aula foi treinada e é competente para executar os procedimentos descritos neste protocolo;

c) não existe método substitutivo que possa ser utilizado como uma alternativa ao projeto.

Assinatura: ________________________________ Data: _____ /_____ /_____

Encaminhar em 2 vias.

A critério da CEUA, poderá ser solicitado o projeto, respei-tando confidencialidade e conflito de interesses.

Quando cabível, anexar o termo de consentimento livre e esclarecido do proprietário ou responsável pelo animal.

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15. RESOLUÇÃO DA COMISSÃO

A Comissão de Ética no Uso de Animais - CEUA, na sua reunião de _____ /_____ /_____ , APROVOU os procedimentos éticos apresentados neste Protocolo. Assinatura: __________________________________ Coordenador da Comissão

A Comissão de Ética no Uso de Animais - CEUA, na sua reunião de _____/____/____, emitiu o parecer em anexo e retorna o Protocolo para sua revisão.

Assinatura: __________________________________ Coordenador da Comissão

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REFERÊNCIAS

BRITO, M. V. H. Ética em experimentação animal. In: BRITO, M. V. H. (Org.). Manual do curso teórico-práti-co de cirurgia experimental: módulo básiteórico-práti-co. Belém: La-boratório de Cirurgia Experimental, 2015. p. 1-11.

COLÉGIO BRASILEIRO DE EXPERIMENTAÇÃO ANIMAL. Princípios éticos na experimentação animal. 1991. Disponível em:< http://www.univap.br/institutos/ ipd/docs/principios_éticos_na_experimentacaoanimal. doc.> Acesso em: 25 out. 2015.

RAYMUNDO, M. M., GOLDIM, J. R. Diretrizes para utilização de animais em experimentos científicos. Disponível em: <http://www.bioetica.ufrgs.br/animdir. htm> Acesso em: 20 out. 2005.

RÉGIS, A. H. P, CORNELLI, G. Experimentação animal: panorama histórico e perspectivas. Rev. Bioét (Imp.) v.20, n.2, Fev., 2012, p. 232-243.

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Capitulo 2

Bioterismo

Eduardo Henrique Herbster Gouveia Eduardo dos Santos Martins Neto

O

uso de animais com objetivos científicos é uma prática comum, mas para que seja moral-mente aceitável e apresente resultados confiáveis, é funda-mental ter-se a consciência de que o animal, como ser vivo, possui hábitos de vida próprios da sua espécie, apresenta memória, preserva o instinto de sobrevivência e é sensível a angústia e à dor, razões que preconizam posturas éticas em todos os momentos do desenvolvimento dos estudos com animais de experimentação.

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Cuidados pessoais

É muito importante que todas as pessoas envolvidas mantenham um alto padrão de higiene pessoal. Isso inclui o uso de vestuário adequado, sendo necessário uso de mascaras, luvas, óculos, proteção de calçado e gorro, que são os EPIs (equipamentos de proteção individual) necessários tanto para manipulação dos animais quanto para os cuidados com o mi-croambiente, sempre visando a descontaminação rotineira do vestuário exposto e cuidado com riscos potenciais.

Não é recomendado:

• Utilização de roupas de uso rotineiro ou não apropriadas dentro do biotério, como vestimen-tas curvestimen-tas e sapatos abertos.

• Comer, beber, fumar ou usar cosméticos como perfumes, desodorantes e hidratantes dentro do biotério.

Ambiente

O biotério deve aproximar-se o máximo possível do ambiente do habitat natural do animal. Alem disso, de-vem-se tomar cuidados assíduos para evitar estresse e des-conforto dos animais. É importante o entendimento dos conceitos de microambiente e macroambiente:

Microambiente

É o recinto primário do animal. O ambiente mais próximo, em que o animal tem maior contato. Nos casos de animais de pequeno porte são as gaiolas.

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Microambiente ideal permite:

• A realização das necessidades fisiológicas e comportamentais normais dos animais, incluin-do micção e defecação, manutenção da tempe-ratura corporal, movimentos normais e ajustes de postura e, quando indicado, reprodução. • Que os animais permaneçam limpos e secos (de

acordo com as exigências de cada espécie). • Ventilação adequada.

• Que os animais tenham acesso à comida à água e facilidade na colocação, recolocação, troca, ma-nutenção e limpeza de bebedouros e comedouros. • Um ambiente seguro que impeça a fuga ou pri-são acidental do animal, ou de algum de seus membros, entre superfícies opostas ou por aberturas na estrutura.

• Que os animais possam ser observados com um mínimo de perturbação para eles.

• Utilização de serragem, maravalha e derivados para forrar o chão da gaiola.

Cuidados com o microambiente:

• O microambiente não deve ser pequeno de-mais, ao ponto de impedir a movimentação fisiológica do animal.

• Cuidado com a limpeza periódica é sempre im-portante. O ideal são higienizações diárias ou em dias alternados.

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• Sempre evitar a superpopulação de animais, o que pode causar desconfortos e estresse aos mesmos. • Observar a ventilação que chega ao microambiente,

se este é capaz de suprir a necessidade dos animais.

Macroambiente

O macroambiente é o ambiente físico secundário, onde o microambiente está inserido. Como, por exemplo, a sala do Biotério que comporta as gaiolas no caso dos ani-mais de pequeno porte.

Macroambiente ideal:

• Deve ter a temperatura rigidamente controlada, sen-do que a temperatura ideal para o armazenamento de ratos é aproximadamente entre 22 – 24°C. • A ventilação deve ser capaz de eliminar a maior

parte do odor ofensivo produzido pela amônia. Tal substancia advém do metabolismo de bacté-rias a partir de substratos como as excretas dos roedores e oferece sérios riscos ao sistema res-piratório dos animais.

• O ciclo de claro-escuro deve ser sempre respei-tado, tendo como períodos de 12 horas interva-lados de luz e escuro.

• Para evitar estresses, devem-se controlar ruídos sonoros dentro do biotério.

• Deve sempre contar com ração e água em quan-tidade acessível a todos os animais, para evitar conflitos e desconfortos.

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Tabela 1: Número de animais por gaiola para diferentes espécies

Tipo de caixa Dimens

ões

Número de animais

Camundongo Hamster Rato J

ov em R ato adulto Pequena 30x20x13 5 - - -Grande Retangular 49x34x16 20 10 8 4 Grande Cúbica 41x34x16 20 10 8 4

Recepção de animais de outros biotérios

Os animais recém-chegados devem passar por um período de quarentena, onde serão observados, a fim de se impedir a contaminação de outros animais. A área de quarentena deve obedecer aos mesmos critérios do resto do biotério, como o conforto dos animais, o uso de EPIs, dentre outros. É aceitável um período de quarentena de duas a quatro semanas, período que pode ser estendido, dependendo do caso.

Também é valida a aplicação de exames diagnós-ticos de modo padronizado para todos os novos animais provenientes de outros biotérios.

Troca de Gaiola

A troca de gaiola é essencial para a manutenção da higiene do ambiente, assim como prevenção de possíveis

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infecções aos animais de experimentação. A troca de gaiola, tanto para ratos quanto para camundongos pode ser feita duas vezes por semana ou até mesmo em dias alternados, de acordo com a quantidade de animais por gaiola.

Cuidado especial deve ser tomado com a higiene de animais de médio porte, como porcos. O ambiente des-ses animais deve ser limpo pelo menos 2 ou 3 vezes por semana, visando a retirada de excretas que possam ter se acumulado, as quais podem acarretar afecções diversas, re-cebendo destaque as doenças respiratórias. Além disso, a água e a ração devem ser monitoradas quanto a qualidade e quantidade durante toda a estadia do animal no biotério.

Alimentação dos animais de experimentação

A alimentação caracteriza-se como outro ponto im-portante, tanto qualitativamente, quanto quantitativamente. A tabela abaixo mostra a quantidade média de consumo diário de ração e água por animal de experimentação.

Espécie ração/100g de Consumo de peso (gr) Consumo de água/100g de peso (ml) Coelho 5 10 Cobaia 6 10 Hamster 10-12 8-10 Camundongo 15 15 Rato 10 10-12

Exemplo: então em uma gaiola contendo 5 ratos de 200 gramas, o consumo diário de ração seria de 100 gramas, e em uma semana, 700 gramas.

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REFERÊNCIAS

MANIPULAÇÃO DE ANIMAIS DE LABORATÓRIO. Salvador: FIOCRUZ; 2005.

MANUAL DE CUIDADOS E PROCEDIMENTOS COM ANIMAIS DE LABORATÓRIO DO BIOTÉRIO DE PRODUÇÃO E EXPERIMENTAÇÃO DA FCF -IQ/USP. São Paulo: FCF-IQ/USP, 2013.

MANUAL DE NORMAS TÉCNICAS. São Paulo: ICB – USP, 2004.

POLITI, F.A.S., MAJEROWICZ, J., CARDOSO, T. A.O et al. Caracterização de biotérios, legislação e padrões de biossegurança. Rev. Ciênc. Farm. Básica Apl., São Paulo, v.29, n.1, Jul., 2008, p. 17-28.

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Capítulo 3

Contenção de Animais

Rosa Helena de Figueiredo Chaves Soares

Eduardo Henrique Herbster Gouveia

P

ara manipulação dos animais deve haver segurança

e paciência, nunca manipular o animal em estado de estresse, ou seja, agitação, condicionar o animal em local escuro e silencioso, até momento para manuseio adequado. Quanto mais acostumado o animal, melhor a sua segurança.

As definições de manipular e conter são bem dis-tintas, sendo a primeira o transporte do animal diretamen-te pelo pesquisador, enquanto que a condiretamen-tenção é deixar o animal se mexer o menos possível para realização de pro-cedimento.

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Manipulação e contenção de pequenos animais

Ratos

Nome da técnica: Abraço dorsal Para quais animais posso usar: ratos Número de manipuladores necessários: 1 Material necessário: Pano comum ou flanela

Como faze-la: O animal deverá ser fixado com a mão espalmada em seu dorso, enquanto o dedo indicador e polegar abraçam o mesmo na região escapular, com au-xílio de uma flanela ou pano cirúrgico, a outra mão fixa a cauda do animal.

O animal estará bem contido quando o mesmo dei-xar de debater-se e de mostrar estresse ou agressividade. A contenção não deve ser estressante ou machucar o rato, mas deve ser firme e precisa.

Figura 1: Contenção universal para ratos adultos na mesa. (Foto: acervo do autor Eduardo Gouveia, UEPA CCBS - 2015)

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Figura 2: Contenção universal para ratos adultos para aplica-ção de injetáveis. (Foto: acervo do autor Eduardo Gouveia, UEPA CCBS - 2015)

Figura 3: Contenção de rato adulto para aplicação intraperitoneal. (Foto: acervo do autor Eduardo Gouveia, UEPA CCBS - 2015)

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Nome da técnica: Abraço dorsal com aplicação intraperitoneal Para quais animais posso usar: ratos

Número de manipuladores necessários: 1 ou 2 Material necessário: Pano comum ou flanela

Como fazê-la: Neste tipo de contenção, a forma de pegada deve ser feita da mesma forma mostrada ante-riormente com a mão dominante, enquanto a mão não dominante imobiliza a pata traseira ipsilateral ao lado da aplicação.

Nesta contenção, é recomendado que a aplicação seja feita por um segundo manipulador.

Figura 4: Contenção de rato adulto para administração via gavagem. (Foto: acervo do autor Eduardo Gouveia, UEPA CCBS - 2015)

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Nome da técnica: Contenção para administração via gavagem. Para quais animais posso usar: ratos

Número de manipuladores necessários: 1 ou 2 Material necessário: Pano comum ou flanela

Como fazê-la: Para a contenção para aplicação via ga-vagem, a mão dominante contem o animal da mesma forma que descrito anteriormente, ou pela pele do dorso do animal, enquanto que a mão não dominante posiciona a agulha de gavagem de modo sutil na boca do mesmo.

A colocação do dispositivo de gavagem deve ser fei-ta primariamente pela lateral da boca, para evifei-tar os dentes incisivos, que podem atrapalhar a administração.

A Contenção e administração também podem ser feitas com dois manipuladores.

Camundongos

Figura 5: contenção universal para camundongos adultos.

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Nome da técnica: Contenção dorsal de camundongos Para quais animais posso usar: camundongos e hamsters Número de manipuladores necessários: 1

Como fazê-la: Ao contrário da manipulação do rato, a manipulação do camundongo deve ser feita da seguinte forma: com a mão dominante, pinça-se com o dedo in-dicador e polegar a pele do dorso do animal, enquanto que a cauda é posicionada entre o quarto e quinto dedo, contendo-a na face palmar da mão.

É de grande valia iniciar a contenção do camundon-go posicionando-o sobre uma gaiola com aros de metal, pois o apoio das patas nessa superfície torna o animal mais calmo, e a manipulação mais tranquila.

Figura 6: Contenção de camundongos adultos para aplicação

intraperitoneal.

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Nome da técnica: Contenção para aplicação via in-traperitoneal

Para quais animais posso usar: camundongos e hamsters Número de manipuladores necessários: 1 ou 2 Como fazê-la: Realizando-se a contenção de forma se-melhante ao que foi descrito anteriormente com a mão dominante, a mão não-dominante realiza a aplicação intraperitoneal no quadrante ínfero-lateral esquerdo do animal, para evitar o ceco.

Figura 7: Forma alternativa para contenção de camundongos

para aplicação intraperitoneal.

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Hamsters

Figura 8: Contenção universal de hamsters.

(Foto: acervo do autor Eduardo Gouveia, UEPA CCBS - 2015)

Nome da técnica: Contenção dorsal para hamsters Para quais animais posso usar: hamsters e camundongo Número de manipuladores necessários: 1

Como fazê-la: A manipulação de hamsters deve ser feita da mesma maneira como foi descrito na manipulação de camundongos, porém normalmente a cauda é curta, im-pedindo sua imobilização entre os dedos.

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Contenção de animais de médio porte

Porcos

Figura 9: Contenção universal de porco adulto.

(Foto: acervo do autor Eduardo Gouveia, CESUPA - 2015)

Nome da técnica: Contenção de suíno por fixação das patas Para quais animais posso usar: porco

Número de manipuladores necessários: 2

Como fazê-la: A contenção do suíno deve ser feita com dois manipuladores, enquanto um imobiliza as patas dianteiras ao nível das articulações, o segundo imobiliza as patas traseiras.

É importante posicionar o animal de modo que o pesquisador que contêm as patas dianteiras esteja agachado, enquanto que o segundo esteja em pé, inclinando o corpo do animal em um ângulo de aproximadamente 45 graus.

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O animal normalmente oferece bastante resistência à contenção inicial, por isso o primeiro contato deve ser fir-me e conciso. Cofir-meçar pelas patas traseiras normalfir-mente facilita a adesão do animal. Paradoxalmente, após a conten-ção, e se bem executada, o porco não oferece resistência.

Figura 10: Contenção de porco adulto para aplicação intramuscular.

Nome da técnica: Contenção de suíno por fixação das patas e aplicação intramuscular

Para quais animais posso usar: porco Número de manipuladores necessários: 3

Como fazê-la: A aplicação intramuscular deve ser feita por um terceiro pesquisador, que realiza a administração na face lateral da coxa ou nádega.

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Figura 11: Contenção universal alternativa para porco adulto no chão.

Nome da técnica: Contenção de suíno no chão Para quais animais posso usar: porco Número de manipuladores necessários: 2

Como fazê-la: Neste outro tipo de contenção, um dos pes-quisadores segura as patas dianteiras com uma das mãos, enquanto que a outra imobiliza a cabeça do animal contra o chão. O segundo pesquisador imobiliza as patas traseiras.

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Coelho

Figura 12: Coelho contido em charuto.

Nome da técnica: Contenção de coelho por técnica de charuto

Para quais animais posso usar: coelho e porco Material utilizado: Campo cirúrgico ou pano limpo Número de manipuladores necessários: 1

Como fazê-la: Com o coelho calmo e sem agitação, o posicionamos em cima de um campo cirúrgico. Após isso, confeccionam-se duas dobras no campo que abra-çarão o corpo do animal, de forma a conter todo o cor-po, exceto a cabeça, que deverá ficar para fora.

O animal deve estar firme dentro do campo. Caso o mesmo ofereça resistência, a mão do manipulador pode ser útil na imobilização.

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Figura 13: aplicação intramuscular no coelho.

Nome da técnica: Aplicação intramuscular no coelho no charuto

Para quais animais posso usar: coelho

Material utilizado: Campo cirúrgico ou pano limpo Número de manipuladores necessários: 1

Como fazê-la: Com o coelho contido pela técnica do charuto, deve-se usar uma mão para isolar e expor o músculo da pata traseira do animal, enquanto que a outra mão realiza a aplicação.

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Figura 14: aplicação subcutânea no coelho.

Nome da técnica: Contenção de coelho por isolamento da cabeça

Material utilizado: Campo cirúrgico ou pano limpo Número de manipuladores necessários: 1 ou 2 Como fazê-la: Primeiro a cabeça do coelho deve ser co-berta totalmente com duas dobras do campo cirúrgico, juntamente com as patas dianteiras. Em seguida, confec-ciona-se uma prega de tecido subcutâneo com a mão não dominante no dorso, e realiza-se a aplicação com a mão dominante.

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Figura 15: contenção para transporte.

Nome da técnica: Contenção de coelho para transporte Para quais animais posso usar: coelho

Como fazê-la: Com a mão dominante, fixa-se o coelho pelo dorso, enquanto que a mão não dominante apoia a região posterior do animal. Em animais pequenos, a mão não dominante é opcional.

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Figura 16: contenção universal de coelho.

Nome da técnica: Contenção universal de coelho com os braços

Material utilizado: Campo cirúrgico ou pano limpo Número de manipuladores necessários: 1

Como fazê-la: A mão dominante deve fixar o coelho pelo dorso, enquanto que o braço oposto deve apoiar todo o corpo do animal pela região ventral e segurar a raiz das patas traseiras. A cabeça do animal deve posicio-nar-se debaixo do braço do manipulador.

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Figura 17: Aplicação intramuscular.

Nome da técnica: Aplicação intramuscular na conten-ção universal

Para quais animais posso usar: coelho Material utilizado: Seringa

Como fazê-la: Após a realização correta da técnica de manipulação universal pelo primeiro manipulador, um segundo pesquisador realiza a aplicação intramuscular

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Capítulo 4

Anestesia

Rosa Helena de Figueiredo Chaves Soares

Danilo Dantas Figueiredo

A

nestesia é o estado temporário e reversível de redução ou eliminação de resposta sensorial e motora frente a um estímulo doloroso. A anestesia deve ser realizada sempre que o procedimento promova dor ou des-conforto. De acordo com a Diretriz Brasileira Para o Cuida-do e a Utilização De Animais Para Fins Científicos e Didáti-cos, os pesquisadores, professores, alunos e técnicos devem prever e tomar todas as medidas possíveis para evitar ou mi-nimizar a dor e o estresse, incluindo, por exemplo, agentes tranquilizantes, analgésicos e anestésicos adequados para a espécie animal e para os objetivos científicos ou didáticos.

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Medicação pré-anestésica

Qualquer medicamento que possa ser aplicado an-tes do procedimento anestésico e tenha como finalidade aumentar a segurança e a qualidade do ato anestésico. O uso de Medicação pré-anestésica (MPA) proporciona:

• Analgesia e sedação.

• Reduz o medo e apreensão e consequentemen-te, o estresse antes da anestesia.

• Propicia uma melhor indução anestésica. • Minimiza eventuais efeitos indesejáveis durante

o procedimento, como aumento de salivação e secreções brônquicas, além de bloquear o re-flexo vagal, onde ocorre bradicardia devido ao manejo das vísceras.

• Potencializa o efeito do agente, diminuindo a dose anestésica.

• Permite uma recuperação melhor e mais rápida do animal.

• Reduz a dor no pós-operatório.

Os fármacos utilizados na pré-anestesia são os anti-colinérgicos, os tranquilizantes, os sedativos e os alfa-2-ago-nistas. Os anticolinérgicos bloqueiam o estímulo parassim-pático e diminuem a salivação e as secreções brônquicas; também protegem o coração da inibição vagal que ocorre quando as vísceras são manuseadas, porém podem promo-ver um pequeno aumento dos batimentos cardíacos. Os tranquilizantes e sedativos produzem efeito calmante sem causar sedação e não possuem ação analgésica. Há grande

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variação entre as espécies quanto ao efeito desses agentes. A xilazina é um alfa-2-agonista, utilizada em animais de la-boratório, principalmente em associação ao agente anesté-sico cetamina, de ação sedativa, promovendo relaxamento muscular e discreta analgesia visceral. Tem como efeitos adversos a depressão respiratória e cardiovascular.

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TRANQUILIZANTES Grupo

Far-macológico Fenotiazínicos Benzodiazeí-nicos Benzodiazepí-nicos Anticolinérgicos Alfa-2-agonistas

Fármaco Acepromazina Cloroproma-_zina Midazolan Diazepan Sulfato de atropina Xilazina

Espécie/dose mg/kg Via mg/kg Via mg/_kg mg/kg Via Via mg/kg Via mg/kg via

Rato 1 IM - - 2₄ _IM/IPIV 2₄ _IM/IPIV 0,05 SC/IP 1 - 3 IM

Camundongo - - 25 - 40 IM - - 5 IP 0,04 SC -

-Coelho 1 IM _{25 - 100}7,5 _IMIV - - 5 IP 1 – 3 SC/IM -

-Porco 0,2 IM/IV - - - - 1 – 2 IM/IV 0,05-0,1 SC/IM/IV -

-Hamsters 0,5 – 5 IM/SC - - - - 5 IP 0,04 SC/IM/IV -

-Cobaia 2,5 IP/SC 5 IP - - 2,5 _{- 5} IP 0,05 SC -

-Observações Podem causar hipotensão e hipotermia Depressão respiratória e cardiovascular; Sedação leve na cobaia. Excelente sedação, bom relaxamento muscular e po-tente anticon-vulsionante Excelente sedação, bom relaxamento muscular e potente anticon-vulsionante Taquicardia e reduzem a secreção traqueal e dos

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Com relação ao uso dos bloqueadores neuro-muscula-res é importante neuro-muscula-ressaltar que de acordo com a Lei nº 11.794 de 08 de outubro de 2008, capítulo IV, § 7o_{- “É vedado o uso de}

bloqueadores neuromusculares ou de relaxantes musculares em substituição a substâncias sedativas, analgésicas ou anestésicas”. Por isso os fármacos relaxantes musculares citados na tabela abaixo não devem ser usados sem a supervisão de um médico veterinário: o uso de relaxantes musculares não despolarizantes deve ser feito por veterinários familiarizados, pois sua ação resul-ta na paralisia dos músculos respiratórios, e a intubação endotra-queal e a ventilação devem ser realizadas obrigatoriamente. No geral, os bloqueadores neuromusculares alteram os parâmetros que são usados para avaliação da profundidade anestésica, por exemplo, eles provocam perda dos reflexos palpebral e podal.

Bloqueadores neuro-musculares não-despolarizantes Bloqueadores neuro-musculares despolarizantes Atracúrio Pancurônio Vecurônio Cisatracúrio Rocurônio Rapacurônio Succinilcolina Edrofônio Decametônio

Dose para ratos de fármacos bloqueadores neuro-musculares

Pancurônio 2 µg/mL

Atracúrio 0,5 mg/kg

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Anestesia local

É o procedimento anestésico restrito a uma região do corpo, pode ser feita por meio de infiltração ao re-dor da área da cirurgia proposta ou por meio de bloqueio dos nervos específicos do campo cirúrgico. Qualquer que seja o método de anestesia escolhido, é essencial manter um alto padrão de cuidado com os animais, com o intuito de obter dados de pesquisa significativos. (ANDRADE, 2002; NEVES 2013)

Para ratos, camundongos e coelhos

- Lidocaína (sem vasoconstritor)

Dose: 4-7 mg/kg

Diluir a 0,5% em soro fisiológico Não ultrapassar o total de 7mg/kg

Anestesia local de rápida ação e com duração média de 1 hora.

- Bupivacaína

Dose: 1-7 mg/kg

Diluir a 0,25% em soro fisiológico Não ultrapassar o total de 8mg/kg

Anestesia local de ação lenta com duração longa, entre 2-4 horas.

Os anestésicos locais podem ser administrados por várias vias, incluindo sprays tópicos, líquidos ou cremes, ou ainda infiltração local. A solubilidade lipídica afeta a duração da anestesia, como a bupivacaína é mais lipídica tem uma ação mais longa que a lidocaína. A overdose dos anestésicos locais resulta em toxicidade sistêmica que causa

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hipotensão, arritmia ventricular, depressão do miocárdio e convulsões, por isso a dose máxima que se pode dar com segurança na maior parte das espécies é de 4 - 7 mg/kg de lidocaína, e 1-8 mg/kg de bupivacaína.

Anestesia Geral

Anestesia geral: é o estado anestésico reversível obtido com agentes inalatórios e/ou injetáveis, que satis-faz as seguintes condições: perda da consciência (narcose), abolição da dor (analgesia) e relaxamento muscular.

Para verificar a profundidade da anestesia, o pes-quisador deve avaliar a presença ou a ausência de deter-minados sinais, como reflexo da cauda, reflexo palpebral e corneal e as alterações das frequências cardíaca e respira-tória, que sofrem modificações de acordo com os planos anestésicos atingidos. Se houver reflexo presente, ou seja, se o animal responder a estímulos, a anestesia não está no plano anestésico adequado para a intervenção cirúrgica.

O tempo que o procedimento cirúrgico requer e a ajuda profissional disponível durante esse período determi-na a anestesia mais adequada. Além disso, outros aspectos influenciam na escolha da anestesia como a espécie do ani-mal, a idade, o peso, o estado físico do aniani-mal, a habilidade do cirurgião, a severidade do procedimento (procedimen-tos complexos são associados com aumento da morbida-de e mortalidamorbida-de; com maior risco se envolvem os órgãos: do SNC, procedimentos cardíacos e pulmonares, seguido do trato gastrointestinal, fígado, rim, órgãos reprodutores, músculos, ossos e pele). A familiaridade com o anestésico proposto, equipamento e pessoal disponível são fatores a serem incluídos na escolha do anestésico.

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Grupos mais utilizados de anestesia injetável

Classe Exemplos

Barbitúricos Pentobarbital, Tiopental, Me-_{thohexitono, Thiamylal e Inactin} Não barbitúrico Propofol

Dissociativos Quetamina, Tiletamina

Tabela de Anestésicos injetáveis Espécie

Barbitúricos Não barbitúrico Dissociativos

Pentobarbital Tiopental Propofol Cetamina

mg/kg Via mg/kg Via mg/kg Via mg/kg Via

Rato 20-40_40-60 IV_IP 30 IP 7,5-10 IV 50-100 IM Camundongo 60 IP 25-50₅₀ IV_IP 12-26 IV 80-100100 50 IM IP IV Coelho 20-40 IV 50 IV 7,5-15 IV 20-60 IM Porco 20-40_5-15 IV infusão IV continua 5-11 3-6 IV IV infusão continua 0,83 – 1,66 12 – 20 IV IV Infusão continua - -Hamsters* 50-90 IP - - -

-Cobaia 30-40 IP/IV 55 IP/IV 10 IV 40-200

IV

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Anestesia inalatória

Entre as vantagens da anestesia inalatória estão: maior controle do plano anestésico, o qual leva a menor mortalidade durante os procedimentos, mínimo metabolis-mo hepático e renal, menor biotransformação e excreção, quando comparada com anestésicos injetáveis. Por estas características, este tipo de anestesia é recomendado princi-palmente em experimentos toxicológicos. O despertar rápi-do e tranquilo reduz o tempo necessário de monitorização após o procedimento.

A utilização da anestesia inalatória depende de equipamentos específicos e treinamento técnico, e algu-mas vezes de intubação endotraqueal (o que pode, por algumas vezes, inviabilizar sua utilização), porém é o método mais adequado para realizar procedimentos ci-rúrgicos, principalmente os de longa duração em ratos, camundongos, coelhos e porcos.

Esse tipo de anestesia proporciona: maior con-trole do plano anestésico, retorno rápido da anestesia quando comparada a endovenosa e intramuscular, me-tabolização e eliminação do agente anestésico inala-tório de modo rápido. Como desvantagens, podemos citar: alto custo por ser um gás, há a necessidade de utilização dentro de uma capela, para a segurança do operador; aumento de secreções nas vias aéreas e ne-cessidade de monitorização mais delicada; pois o plano anestésico pode se alterar rapidamente.

O agente anestésico inalatório comumente utilizado é o isoflurano. No final de uma anestesia prolongada, reco-menda-se administrar ao animal oxigênio puro por

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aproxi-madamente 5 a 10 minutos, para evitar hipóxia. Durante o uso da anestesia inalatória, deve-se observar o status de saúde do animal, principalmente se este não aparenta ter alguma doença no trato respiratório, o que pode interferir na administração do agente.

Com a inalação do anestésico, sua pressão parcial alveolar que resulta na anestesia mais leve possível é de-nominada concentração alveolar mínima (CAM). Especi-ficamente, a CAM é a pressão parcial alveolar que extin-gue o movimento em resposta a uma incisão em 50% dos pacientes. A potência de um anestésico está inversamente relacionada à sua CAM. Se a CAM é pequena, a potência é alta, e uma quantidade relativamente baixa do anestésico será suficiente para causar anestesia.

Camundongos

Enflurano _{para indução}3,5 % CAM 1 – 3 % para _manutenção Metoxiflurano 3% para _indução 0,4 – 1% para _manutenção Isoflurano 4% para _indução 1,5 – 3 % para _manutenção Halotano 4% para _indução 1 – 2 % para _manutenção

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Ratos

Enflurano 3,5 % para _indução 1 – 3 % para _manutenção Metoxiflurano 3% para indução 0,4 – 1% para _manutenção Isoflurano 5% para indução 1 – 3 % para _manutenção Halotano 1-3% para _indução 0,5 – 1,5 % para _manutenção

Coelhos

Halotano 3 – 4% para _indução 0,5 a 1% para _manutenção Isoflurano Até 5% para _indução _manutenção1 – 3% para

Óxido Nitroso

Associado a anestésico halogenado Em procedimentos cirúrgicos não usar isoladamente.

Indução e manutenção com até 60% com O₂

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Porcos

Isoflurano 1- 5% para _indução 2 – 3% para _manutenção Halotano 3% para indução 1,5 – 2,5% para _manutenção Metoxiflurano 2 – 4% para _indução 0,5 - 1,5% para _manutenção

Hamster

Halotano 1 – 3% para _indução 0,5 – 1% para _manutenção Isoflurano Até 5% para _indução _manutenção2 – 3% para

Cobaia

Isoflurano 3- 4% para _indução 1,5 – 3 % para _manutenção Halotano 3 - 4% para _indução 1 – 2 % para _manutenção OBS: Fluxo de O2 1-3 L/min <1 L/min

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Protocolos anestésicos

Cada espécie de animal apresenta particularidades para a anestesia, sendo que as doses anestésicas são muito próximas às doses letais, e um plano anestésico adequado é difícil de ser obtido sem que se observe importante depressão cardio-vascular e respiratória. Na literatura, são relatados diferentes protocolos de anestesia que devem ser aplicados e ajustados de acordo com o modelo experimental adotado. Associações anestésicas mais utilizadas em animais de laboratório:

Camundongos

Pr otocolo (mg/kg)Doses Via de admi -nistração Duração Observação Cetamina+ Xilazina 80 – 100

10 IPIP 20 – 30 min _{ser usadas}Devem na mesma seringa 100 – 150 10 – 15 IPIP 60 – 100 Tiletamina- Zolaz epan 80 – 100 (conten-ção) IP -Não é indicado para procedimen-tos cirúrgicos se usada isoladamente 20 – 30 IM 20 – 40 _min

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-Ratos

Protocolo Dose (mg/kg) Via de administração Duração Observação

Cetamina+

Xilazina 50 – 755 – 10 IP 30 min

Misturadas na mesma seringa, bom relaxa-mento muscular. Fentanil-droperidol 2 mL/kg IM 30 min -Tiletamina-zolazepan 20 – 30 IM 20 – 40 min -Cetamina + Propofol 4060 IPIP 30 min -Diazepan+

Cetamina 755 IP 20 – 30 min Anestesia leve

Tipental+

Cetamina 3040 IPIP 10 – 15 min Anestesia cirúrgica

Isoflurano +

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Coelho

Protocolo Dose (mg/kg) Via de administração Duração Observação

Xilazina+

Cetamina 35 – 505 – 10 IM 90 min Misturadas na mesma seringa

Acepromazina+ Cetamina 501 IMIV 30 – 40 min -Diazepam+ Cetamina 5 50 IMIP 30 – 40 min -5 25 IMIM 30 – 40 min

Administrados em seringas diferentes produzem sedação e grau de analgesia moderados Fentanil-droperidol 0,2 IM - -Tiletamina-zolazepam 5 – 10 IM 30 min -Tiletamina-zolazepam + Fentanil-droperidol 0,3 0,4 mL/kg IM IM 40 – 60 min -Acepromazina+ Xilazina+ Cetamina 0,75 5 35 IM IM IM

Mais longa que a associação de quetamina e xi-lazina somente

Mais hipotensão, mais hipotermia

Butorfanol+ Xilazina+ Cetamina 0,1 5 35 IM IM IM

Mais longa que a associação de quetamina e xi-lazina somente

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Porco

Protocolo Dose (mg/kg) Via de adminis-_tração Duração Observação

Cetamina+

Acepromazina 331 IM, SC 30 min Provoca leve depressão cardí-aca

Cetamina+

Diazepam 152 IM, SC Similar a Cetamina + Acepromazina Diazepam deve ser dado 15 – 20 min antes da cetamina Cetamina+

Azaperone 152 IM, SC Similar a Cetamina + Acepromazina Azaperone deve ser dada 15 – 20 min antes da cetamina Cetamina+

Midazolam 500 μg/kg33 IM, SC - Causa hipotermia e necessita de recuperação de 1 – 4 hrs Cetamina+

Dexmedetomidina 0.0510 IMIM

-Dexedetomidine pode ser revertido com atipamezole (0.25-0.35 mg/kg IV). Pres-são sanguínea fica normal Cetamina+ XIlazina 202 IM, SC

-

- Tiletamina-zolaze-pam (Telazol®)+ Xilazina 4 – 6

2,2 IM, SCIM 30 min de sedação

-Propofol + Midazolam + Fentanil 2 – 4,4 mg/kg/hr 0,4 – 0,7 mg/kg/hr 0,003 – 0,005 mg/kg/hr IV infusão continua -

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-Hamster

Cetamina+

Xilazina 20010 IPIP 80 min Misturadas na mesma seringa

Fentanil-droperidol 12 ml/kg IM 60 min

-Tiletamina-Zolapepan 15 – 20 IM 20 – 40 min

-Cobaia

Cetamina+

Diazepam 60 – 1005 – 8 IMIM Variável entre os animais

-Cetamina+

Mede-tomidina 0,540 IM ou IPSC Variável entre os animais;Até 3 hrs segundo alguns manuais -Tiletamina+

Zolazepam 10 – 80 IM ou IP Variável entre os animais

-Cetamina+ Xilazina 30 – 440,1 - 5 IMIM 77 min -Tiletamina+ Xilazina+ Butorfanol 60 mg/kg 5 mg/kg Diluido 1:10 em solução salina 0.1mg/kg) IP IP IM

Anestesia cirúrgica de longa dura-ção – 60 min

Diminui as fun-ções respiratórias; Monitorar os ní-veis de oxigênio.

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REFERENCIAS:

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