APRESENTAÇÃOJOSUE 09 04 2010

(1)

Laboratório de Tecnologia Farmacêutica

Profº Delby Fernandes Medeiros

Avaliação

Avaliação toxicólogica

toxicólogica de

de plantas

plantas medicinais

medicinais

Orientando: Josué do Amaral Ramalho

Orientadora: Profª Drª Margareth F. F. Melo Diniz

(Farmácia/bolsista/PIBIC/CNPq/UFPB)

Estudo

Estudo toxicológico

toxicológico pré

pré--clínico

clínico da

da planta

planta medicinal

medicinal

Foeniculum

Foeniculum vulgare

vulgare M

M.. comercializada

comercializada em

em sachês

sachês nos

nos

supermercados

supermercados de

de João

João Pessoa

Pessoa--PB

PB

João Pessoa

(2)

Família:

Família: Apiaceae;

Apiaceae;

erva

erva--doce,

doce, fiolho

fiolho de

de florema,

florema,

fiolho

doce,

erva

erva--doce

doce--de

de--cabeça,

cabeça, finochio

finochio e

e funcho

funcho--

Nome científico:

Nome científico: Foeniculum vulgare

Foeniculum vulgare M.;

M.;

INTRODUÇÃO

Nome popular:

cabeça,

cabeça, finochio

finochio e

e funcho

funcho--doce

doce

(MATOS,

(MATOS, 1998

1998))

;;

Uso popular:

Modo de uso: chá(decocto).

Parte utilizada: semente;

Ação

Ação cicatrizante

cicatrizante (externamente),

(externamente),

carminativo,

digestivo,

galactagogo,

expectorante,

emenagogo,

emenagogo, diurético

diurético e

e antiespasmódico

antiespasmódico

(MATOS,

1998

(3)

Obtenção do Extrato Liofilizado (EL)

-- Filtrado a cada 3 dias

Filtrado a cada 3 dias

INTRODUÇÃO

Foeniculum vulgare M.

3 kg

-- Maceração em solução

Maceração em solução

hidroalcoólica 50%

Extrato Liofilizado (EL)

-- Filtrado a cada 3 dias

Filtrado a cada 3 dias

-- Durante 21 dias

Durante 21 dias

Filtrado

hidroalcoólico

Rendimento

18%

-- Edwards do Brasil

Edwards do Brasil

( Modelo E2M8)

(4)

Bioensaio com

Bioensaio com Artemia salina

Artemia salina Leach

Leach

Indicador

da

atividade

biológica

de

extratos,

extratos, frações

frações e

e compostos

compostos isolados

isolados de

de

plantas

(LOPES

(LOPES et

et al

al..,, 2002

2002))

;;

INTRODUÇÃO

Substituição do uso de

animais

devido ao

alto custo e sofrimento causado

Vantagens

Vantagens::

Rápido,

simples,

barato,

disponibilidade

comercial

dos

ovos

,,

utilização

de

pequena

quantidade

de

amostra

(McLAUGHLIN

(McLAUGHLIN et

et al

al..,, 1998

1998))

;;

Estudos

Estudos demonstram

demonstram uma

uma

boa

boa relação

relação

entre

entre o

o bioensaio

bioensaio

com

com Artemia

Artemia salina

salina e

e DL

DL

₅₀

_50..

(PARRA

(PARRA et

et al

al..,, 2001

2001))

..

alto custo e sofrimento causado

(5)

INTRODUÇÃO

A

A avaliação

avaliação toxicológica

toxicológica compreende

compreende na

na análise

análise de

de dados

dados

toxicológicos

toxicológicos de

de

substâncias

,, com

com o

o objetivo

objetivo de

de classificá

classificá--las

las

toxicologicamente

toxicologicamente e

e fornecer

fornecer informações

informações a

a respeito

respeito da

da

forma

forma correta

correta de

de seu

seu emprego

emprego

,, bem

bem como

como as

as medidas

medidas

preventivas

e

curativas

quando

quando do

do uso

uso

inadequado

;;

Toxicidade

Toda

substância

pode

pode ser

ser considerada

considerada um

um

agente

agente tóxico

tóxico

dependendo

dependendo das

das condições

condições de

de exposição,

exposição, como

como a

a

dose

administrada

,,

tempo

e

frequência

de

de exposiçao

exposiçao e

e

via

pela

qual

qual é

é administrada

administrada;;

preventivas

e

curativas

quando

quando do

do uso

uso

inadequado

;;

(LARINI, 1999)

(6)

Objetivo Geral

Avaliar

Avaliar a

a

segurança

da

da planta

planta medicinal

medicinal Foeniculum

Foeniculum vulgare

vulgare M

M..

comercializada

comercializada em

em sachês

sachês nos

nos supermercados

supermercados de

de João

João Pessoa

Pessoa--PB

PB..

Objetivos Específicos

Realizar

Realizar uma

uma triagem

triagem toxicológica

toxicológica pré

pré--clínica

clínica do

do EL

EL de

de Foeniculum

Foeniculum

vulgare

vulgare M

M.. comercializado

comercializado em

em

sachês

e

in

in natura

natura

,, através

através do

do bioensaio

bioensaio

com

com Artemia

Artemia salina

salina L

L.;

.;

Realizar

Realizar a

a

padronização

dos

dos parâmetros

parâmetros bioquímicos

bioquímicos e

e hematológicos,

hematológicos,

em

em ratos

ratos Wistar

Wistar

e

e camudongos

camudongos Swiss,

Swiss, provenientes

provenientes do

do biotério

biotério Prof

Prof..

Thomas

Thomas George

George do

do LTF/UFPB

LTF/UFPB..

Avaliar

Avaliar a

a toxicidade

toxicidade pré

pré--clínica

clínica

crônica

do

do EL

EL de

de Foeniculum

Foeniculum vulgare

vulgare M

M..

comercializado

comercializado em

em sachês,

sachês, segundo

segundo a

a RE

RE 90

90//2004

2004 da

da Agência

Agência Nacional

Nacional

de

(7)

Material e Metódos

Extrato

Liofilizado

Bioensaio com

Bioensaio com Artemia salina

Artemia salina Leach

Leach

Liofilizado

Eclosão dos cistos (24 h)

em água salina

(10

(8)

Resultados

Bioensaio com

Bioensaio com Artemia salina

Artemia salina Leach

Leach

CL

CL50

50 Tabela comparativa entre a CL50 de

Tabela comparativa entre a CL50 de Foeniculum vulgare M. em

Foeniculum vulgare M. em

sachê

e

in natura

400

423

423 Foeniculum vulgare M.

Foeniculum vulgare M.

in natura

Foeniculum vulgare M.

sachê

CL

CL50

50 (

µ

g/mL)

(

µ

g/mL)

CL50 < 1000

µµµµµµµµ

g/mL

→

Atividade biológica

(McLAUGHLIN et al., 1998)

(9)

Material e Metódos

ciclo claro e escuro (12 horas) ciclo claro e escuro (12 horas) 200 200--250g, n=20250g, n=20 ambos sexos ambos sexos temperatura 25 º C( temperatura 25 º C(±± 2)2)

Ratos Wistar

Ensaio crônico

Controle

RE 90/2004 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) RE 90/2004 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA)

Consumo de água e alimentos,

Consumo de água e alimentos, evolução ponderal,

evolução ponderal, temperatura,

temperatura, glicemia

glicemia

Rota rod,

Comportamental:

Campo aberto

Campo aberto(ambulação, levantar, defecação, limpeza)

(ambulação, levantar, defecação, limpeza)

Parâmetros hematológicos e bioquímicos

8,5 mg/kg

(DU)

25,5 mg/Kg

(3DU)

76,5 mg/Kg

(9DU)

(10)

Resultados

Temperatura

38.5 *

*

te

m

p

e

ra

tu

ra

c

o

rp

o

ra

l

(°

C

)

Temperatura corporal de ratos tratados cronicamente com diferentes doses de EL

de

de F. vulgare

F. vulgare M.

M. (doses 8,5; 25,5 e 76,5 mg/Kg/dia), durante 12 semanas.

(doses 8,5; 25,5 e 76,5 mg/Kg/dia), durante 12 semanas.

0

2

4

6

8

10

12

35.5

36.5

37.5 controle

8,5 mg/kg

25,5 mg/kg

76,5 mg/kg

*

semanas

te

m

p

e

ra

tu

ra

c

o

rp

o

ra

l

(°

C

)

n = 10 animais. Teste de Tukey

(11)

Resultados

Temperatura

38.5 *

*

te

m

p

e

ra

tu

ra

c

o

rp

o

ra

l

(°

C

)

Temperatura corporal de ratas tratadas cronicamente com diferentes doses de

EL de

EL de F. vulgare

F. vulgare M.

M. (doses 8,5; 25,5 e 76,5 mg/Kg/dia), durante 12 semanas.

(doses 8,5; 25,5 e 76,5 mg/Kg/dia), durante 12 semanas.

0

2

4

6

8

10

12

36.5

37.5 _controle

8,5 mg/kg

25,5 mg/kg

76,5 mg/kg

* *

*

semanas

te

m

p

e

ra

tu

ra

c

o

rp

o

ra

l

(°

C

)

n = 10 animais. Teste de Tukey

(12)

180 *

c

o

n

s

u

m

o

(

m

l)

Consumo voluntário de água por ratos tratados com doses de EL de

Consumo voluntário de água por ratos tratados com doses de EL de F. vulgare

F. vulgare

M. (8,5; 25,5 e 76,5 mg/Kg/dia), durante 12 semanas.

Consumo de água

Resultados

0

2

4

6

8

10

12

120

140

160 controle

8,5 mg/kg

25,5 mg/kg

76,5 mg/kg

*

semanas

c

o

n

s

u

m

o

(

m

l)

n = 10 animais. Teste de Tukey

(13)

140

150 *

*

c

o

n

s

u

m

o

(

m

l)

Consumo voluntário de água por ratas tratadas com doses de EL de

Consumo voluntário de água por ratas tratadas com doses de EL de F.

F. vulgare

vulgare M. (8,5; 25,5 e 76,5 mg/Kg/dia), durante 12 semanas.

M. (8,5; 25,5 e 76,5 mg/Kg/dia), durante 12 semanas.

Consumo de água

Resultados

0

2

4

6

8

10

12

100

110

120

130 controle

8,5 mg/kg

25,5 mg/kg

76,5 mg/kg

*

semanas

c

o

n

s

u

m

o

(

m

l)

n = 10 animais. Teste de Tukey

(14)

100

110 Consumo

Consumo voluntário

voluntário semanal

semanal de

de alimentos

alimentos por

por ratos

ratos tratados

tratados com

com diferentes

diferentes

doses

doses de

de EL

EL de

de F

F.. vulgare

vulgare M

M.. ((8

8,,5

5;; 25

25,,5

5 e

e 76

76,,5

5 mg/Kg),

mg/Kg), durante

durante 12

12 semanas

semanas..

Consumo de alimento

Resultados

0

2

4

6

8

10

12

70

80

90

100 controle

8,5 mg/kg

25,5 mg/kg

76,5 mg/kg

*

semana

c

o

n

s

u

m

o

(

g

)

n = 10 animais. Teste de Tukey

(15)

130

140 **

**

_**

Consumo

Consumo voluntário

voluntário semanal

semanal de

de alimentos

alimentos por

por ratas

ratas tratadas

tratadas com

com

diferentes

diferentes doses

doses de

de EL

EL de

de F

F.. vulgare

vulgare M

M.. ((8

8,,5

5;; 25

25,,5

5 e

e 76

76,,5

5 mg/Kg),

mg/Kg), durante

durante

12 12 semanas

semanas..

Resultados

Consumo de alimento

0

2

4

6

8

10

12

100

110

120

130 controle

8,5 mg/kg

25,5 mg/kg

76,5 mg/kg

*

**

_**

semana

p

e

s

o

(

g

)

n = 10 animais. Teste de Tukey

∗∗

p

<<

0,05

C

o

n

s

u

m

o

(g

)

(16)

Análise bioquímica

Análise bioquímica -- creatina quinase

creatina quinase

Resultados

3000

4000

c

re

a

ti

n

in

a

q

u

in

a

s

e

Dosagem de creatina quinase para ratas tratadas com EL de

Dosagem de creatina quinase para ratas tratadas com EL de F. vulgare

F. vulgare M.

M. (doses 8,5 mg/Kg; 25,5 mg/Kg e 76,5 mg/Kg), durante 3 meses.

(doses 8,5 mg/Kg; 25,5 mg/Kg e 76,5 mg/Kg), durante 3 meses.

c

re

a

ti

n

a

q

u

in

a

s

e

c

re

a

ti

n

a

q

u

in

a

s

e

0 1000

2000

3000

controle

8,5 mg/Kg

25,5 mg/Kg

76,5 mg/Kg

*

doses

c

re

a

ti

n

in

a

q

u

in

a

s

e

(m

g

/d

l)

n=3 animais. Teste Turkey * p<0,05; p<0,01; *p<0,001.

c

re

a

ti

n

a

q

u

in

a

s

e

c

re

a

ti

n

a

q

u

in

a

s

e

(U

/l

)

(U

/l

)

(17)

7.5 10.0

*

p ro te ín a s t o ta is (g /d l)

Dosagem

Dosagem de

de proteínas

proteínas totais

totais para

para ratos

ratos tratados

tratados

com

com EL

EL de

de F

F.. vulgare

vulgare M

M.. (doses

(doses 8

8,,5

5 mg/Kg

mg/Kg;; 25

25,,5

5 mg/Kg

mg/Kg e

e 76

76,,5

5 mg/Kg),

mg/Kg), durante

durante 3

3 meses

meses..

Dosagem

Dosagem de

de proteínas

proteínas totais

totais para

para ratas

ratas tratadas

tratadas

com

com EL

EL de

de F

F.. vulgare

vulgare M

M.. (doses

(doses 8

8,,5

5 mg/Kg

mg/Kg;; 25

25,,5

5 mg/Kg

mg/Kg e

e 76

76,,5

5 mg/Kg),

mg/Kg), durante

durante 3

3 meses

meses..

Análise bioquímica

Análise bioquímica -- proteínas totais

proteínas totais

Resultados

0.0 2.5 5.0 7.5 controle 8,5 mg/Kg 25,5 mg/Kg 76,5 mg/Kg doses p ro te ín a s t o ta is (g /d l) 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 controle 8,5 mg/Kg 25,5 mg/Kg 76,5 mg/Kg doses P ro te ín a s t o ta is ( g /d l)

_*

_{* *}

_*

mg/Kg

mg/Kg e

e 76

76,,5

5 mg/Kg),

mg/Kg), durante

durante 3

3 meses

meses..

N=3 animais. Teste Turkey * p<0,05; ** p<0,01; ***p<0,001. N=3 animais. Teste Turkey * p<0,05; ** p<0,01; ***p<0,001.

(18)

4 5

_*

*

g lo b u li n a ( g /d l)

Dosagem de globulina para ratos tratados com EL

de F. vulgare M. (doses 8,5 mg/Kg; 25,5 mg/Kg e

76,5 mg/Kg), durante 3 meses.

Dosagem de globulina para ratas tratadas com EL

de F. vulgare M. (doses 8,5 mg/Kg; 25,5 mg/Kg e

76,5 mg/Kg), durante 3 meses.

Análise bioquímica

Análise bioquímica -- globulina

globulina

Resultados

0 1 2 3 controle 8,5 mg/Kg 25,5 mg/Kg 76,5 mg/Kg doses g lo b u li n a ( g /d l) 0.0 2.5 5.0

controle

8,5 mg/Kg

25,5 mg/Kg

76,5 mg/Kg

*

doses

g

lo

b

u

li

n

a

(

g

/d

l)

*

76,5 mg/Kg), durante 3 meses.

N=3 animais. Teste Turkey * p<0,05; ** p<0,01; ***p<0,001. N=3 animais. Teste Turkey * p<0,05; ** p<0,01; ***p<0,001.

(19)

750 1000

*

A

m

il

a

s

e

(

U

/L

)

Dosagem

Dosagem de

de amilase

amilase para

para ratos

ratos tratados

tratados com

com EL

EL de

de F

F.. vulgare

vulgare M

M.. (doses

(doses

8 8,,5

5 mg/Kg

mg/Kg;; 25

25,,5

5 mg/Kg

mg/Kg e

e 76

76,,5

5 mg/Kg),

mg/Kg), durante

durante 3

3 meses

meses..

Análise bioquímica

Análise bioquímica -- amilase

amilase

Resultados

0

250

500

750 controle

8,5 mg/Kg

25,5 mg/Kg

76,5 mg/Kg

*

Doses

A

m

il

a

s

e

(

U

/L

)

n=3 animais. Teste Turkey * p<0,05; p<0,01; *p<0,001.

(20)

40

50 **

N

e

u

tr

ó

fi

lo

(

%

)

Percentagem

Percentagem de

de neutrófilo

neutrófilo para

para ratos

ratos tratadas

tratadas com

com EL

EL de

de F

F.. vulgare

vulgare M

M..

(doses

(doses 8

8,,5

5 mg/Kg

mg/Kg;; 25

25,,5

5 mg/Kg

mg/Kg e

e 76

76,,5

5 mg/Kg),

mg/Kg), durante

durante 3

3 meses

meses..

Análise hematológica

Análise hematológica -- neutrófilo

neutrófilo

Resultados

0

10

20

30 controle

8,5 mg/Kg

25,5 mg/Kg

76,5 mg/Kg

Doses

N

e

u

tr

ó

fi

lo

(

%

)

n=3 animais. Teste Turkey * p<0,05; p<0,01; *p<0,001.

(21)

Material e Metódos

Padronização

Camudongos

Swiss

Ratos Wistar

n=20

Sangria do plexo braquial

Tubos com gel separador

Tubos com EDTA

Parâmetros bioquímicos

e hematólogicos

20 dias

Machos e Fêmeas

(22)

Grupos Glicose (mg/dl) Uréia (mg/dl) Creatinina (mg/dl) Colesterol (mg/dl) Triglicerídeos (mg/dl) Ácido Úrico (mg/dl) AST (U/I) ALT (U/I) Fosfatase Alcalina (U/I) Machos Padrão 117,4±2,8 45,2±2,3 0,29±0,10 62,25±2,35 95,7±5,51 0,79±0,07 152,4±6,53 60,90±2,43 184,2±8,06

Parâmetros bioquímicos de ratos wistar

Padronização

Resultados

Fêmeas Padrão 103,5±2,05 40,4±1,80 0,45±0,02 59,4±2,23 98,8±8,82 0,86±0,07 137,1±5,49 53,82±2,78 76,59±4,26 Grupos LDH (U/l) Amilase (U/l) Cálcio (mg/dl) Magnesio (mg/dl) Proteína Albumina (g/dl) Globulina (g/dl) Machos Padrão Fêmeas Padrão Sódio (mEq/l) Creatina quinase (U/l) (g/dl) total 3417±276,4 5484±472,3 2098±103,0 1869±278,1 875,4±14,2 539,8±27,9 9,73±0,08 9,28±0,08 2,02±0,06 2,28±0,05 6,10±0,07 6,51±0,06 3,04±0,04 2,98±0,05 3,06±0,05 3,53±0,04 141,5±1,68 137,0±3,00

(23)

Grupos Hemácias (106_/mm3₎ Hemoglobina (g/dl) Hematócrito (%) Plaquetas (103_/mm3₎ VCM (µ3₎ HCM (µµg) Machos Padrão 7,3±0,1 14,77 ±0,189 34±0,50 730,6 ±33,12 47,80 ±0,35 20,3 ±0,20

Parâmetros hematólogicos de ratos wistar

Padronização

Resultados

Fêmeas Padrão 7,3±0,1 14,77 ±0,189 34 ±0,82 616,1 ±37,98 45,26 ±0,35 19,5 ±0,14 Grupos CHCM (%) Linfócitos (%) Monócitos (%) Neutrófilos (%) Eosinófilos (%) Leucócitos (103_/mm3₎ Machos Padrão Fêmeas Padrão 42,4±0,17 66,7 ±1,58 5,10 ±0,30 26,7 ±1,48 1,00 ±0,10 6,30 ±0,5 43,0 ±0,20 68,9 ±1,78 3,65 ±0,35 26,4 ±1,90 1,04 ±0,15 4,80 ±0,30

(24)

Grupos Glicose (mg/dl) Uréia (mg/dl) Creatinina (mg/dl) Colesterol (mg/dl) Triglicerídeos (mg/dl) Ácido Úrico (mg/dl) AST (U/I) ALT (U/I) Fosfatase Alcalina (U/I) Machos Padrão 97,18±6,0 46,73 ±4,0 0,38 ±0,019 96,36 ±2,84 201,5 ±19,24 2,78 ±0,41 277,4 ±17,9 61,91 ±4,23 89,09 ±5,25

Parâmetros bioquímicos de camudongos Swiss

Resultados

Padronização

Fêmeas Padrão 135,5 ±5,2 35,00 ±1,3 0,40 ±0,017 89,70 ±2,28 103,5 ±6,48 0,99 ±0,01 233,8 ±7,61 70,55 ±4,46 116,2 ±7,15 Grupos LDH (U/l) Amilase (U/l) Cálcio (mg/dl) Magnesio (mg/dl) Proteína total Albumina (g/dl) Globulina (g/dl) Machos Padrão Fêmeas Padrão Sódio (mEq/l) Creatinina quinase (U/l) (g/dl) 3285±636 1047±117 8007±735,2 5273±241,4 3115±403,4 3302±208,3 9,3±0,08 9,1±0,15 2,08±0,06 2,36±0,067 5,79±0,094 5,94±0,083 2,19±0,045 2,35±0,051 3,6±0,075 3,6±0,063 154,3±1,2 142±9,0 Potassio (mEq/l) 5,68±0,47 4,70±0,80

(25)

Grupos Hemácias (106_/mm3₎ Hemoglobina (g/dl) Hematócrito (%) Plaquetas (103_/mm3₎ VCM (µ3₎ HCM (µµg) Machos Padrão 9,41±0,14 13,65 ±0,25 41,25 ±0,83 810,1 ±55,11 43,8 ±0,56 14,48 ±0,16

Parâmetros Hematológicos de camudongos Swiss

Resultados

Padronização

Fêmeas Padrão 9,23 ±0,24 13,50 ±0,33 39,98 ±1,03 1030 ±54,68 43,32 ±0,44 14,64 ±0,14 Grupos CHCM (%) Linfócitos (%) Monócitos (%) Neutrófilos (%) Eosinófilos (%) Leucócitos (103_/mm3₎ Machos Padrão Fêmeas Padrão 33,09 ±0,27 73,10 ±1,62 3,7 ±0,34 21,80 ±1,57 0,8 ±0,18 6,87 ±0,65 33,81 ±0,24 74,55 ±2,13 5,3 ±0,61 19,59 ±1,93 0,6 ±0,16 5,58 ±0,54