AVALIAÇÃO CLÍNICA E LABORATORIAL DE CÃES COM GASTRENTERITE HEMORRÁGICA SUBMETIDOS AO TRANSPLANTE DE MICROBIOTA FECAL Lucas Alécio GOMES1; Giorgio Queiroz PEREIRA2; Iago Smaili SANTOS3 e Márcio
Carvalho da COSTA4
1 Professor Adjunto, Departamento de Clínicas Veterinárias, Universidade Estadual de Londrina – UEL, lucasalecio@gmail.com
2 Mestrando em Ciência Animal, UEL
3 Estudante de graduação e bolsista de Iniciação Científica em Medicina Veterinária, Universidade Estadual de Londrina, UEL, iagosmaili@gmail.com
4 Bolsista Atração de Jovens Talentos – CNPq/CAPES
Resumo
O Transplante de Microbiota Fecal (TMF) tem sido utilizado com altas taxas de sucesso em humanos. A gastrenterite hemorrágica está entre os problemas mais comuns que acometem os cães. Assim sendo, o objetivo desse trabalho foi testar a segurança de um protocolo de TMF e sua eficácia na recuperação clínica de cães com gastrenterite hemorrágica. Foram avaliados 18 cães com gastrenterite hemorrágica, atendidos em um Hospital Veterinário Escola, nos quais foram realizados exame clínico periódico e exames laboratoriais. Estes foram submetidos ao TMF como tratamento adjuvante com a hipótese de que esse procedimento poderia contribuir para recuperação mais rápida dos animais quando comparado a animais que receberam o tratamento convencional a base de fluidoterapia, antibióticos, antieméticos e protetores de mucosa. Dos 18 cães que receberam o TMF, a média do Período de internamento foi de 4,5 dias o que não diferiu estatisticamente do grupo controle (P>0.005) que apresentou média de 4,7 dias. A resolução da diarreia foi alcançada em média após 3,5 de internamento. Não houve diferença na mortalidade do grupo tratado quando comparado ao controle (P>0.005). Os resultados deste trabalho, demonstram que o TMF é um procedimento seguro em cães e pode ser utilizado como um adjuvante no tratamento de animais com diarreia. Estudos futuros são necessários para se comprovar a eficiência do procedimento.
Palavras-chave: cães, microbiota intestinal, diarreia, tratamento. Keywords: dogs, intestinal microbiota, diarrhea, treatment. Introdução
A diarreia está entre os problemas mais comuns que acometem os cães. No Brasil ela usualmente é causada por infecções virais (parvovírus e cinomose), entretanto, outras causas potenciais incluem bactérias, fungos, protozoários, alterações alimentares, parasitas helmintos e doença imunomediada (GARCIA, 2000; WILLARD, 2010). Em cães e em outras espécies, a microbiota intestinal beneficia o hospedeiro, agindo como barreira de defesa contra enteropatógenos, ajudando na digestão de fibras complexas, além de ser fundamental para o desenvolvimento e regulação do sistema imune do hospedeiro (SUNVOLD et al., 1995; HAND et al., 2013). No entanto, frente aos quadros de diarreia, acontece um desequilíbrio da microbiota normal e que tem consquências negativas para o paciente (HONNEFFER et al., 2014). Logo, várias estratégias tem sido utilizadas para se restaurar a microbiota em casos de diarreia, como por exemplo, o uso de probióticos, prebióticos e o transplante do ecossistema microbiano inteiro a partir de fezes de um indivíduo sadio, processo este denominado de “transplante de microbiota fecal” (TMF) ou “bacterioterapia” (GOUGH et al., 2011). O TMF visa transferir a microbiota saudável de um “doador” para o paciente, aumentando a diversidade e normalizando a estrutura global da comunidade bacteriana. O TMF se mostrou promissor para o tratamento de diarreia crônica em cães, sendo a resposta clínica consistente com uma mudança acentuada na microbiota dos animais tratados (WESSE et al., 2013). Assim sendo, o objetivo desse trabalho foi testar a segurança e eficácia do TMF em cães com gastrenterite hemorrágica.
Material e Métodos
No presente trabalho foram avaliados 18 cães com gastrenterite hemorrágica, provenientes do atendimento de rotina do Hospital Veterinário Escola da Universidade Estadual de Londrina (HV-UEL) não havendo restrição quanto ao sexo, raça e idade. O trabalho foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais (CEUA). Os animais incluídos apresentavam gastrenterite hemorrágica ou pelo menos diarreia com sangue. As fezes para o TMF foram obtidas por \defecação espontânea de um cão macho, com seis anos de idade, da raça pit bull, alimentado exclusivamente com ração comercial premium para cães adultos e que não recebeu antibióticos nos seis meses antecedentes ao projeto. O animal selecionado foi avaliado clinicamente e por meio de exames laboratoriais incluindo hemograma, bioquímicos e coproparasitológico completo. Após a colheita, as fezes do doador
foram mantidas a -20ºC e descongeladas a temperatura ambiente no momento do uso. Foram diluídos 10 gramas de fezes em 10 mL de solução de cloreto de sódio 0,9% e a mistura aspirada em seringa de 20 mL conectada a sonda uretral nº 08, que foi introduzida via anal e o conteúdo depositado na porção proximal do reto. O animal receptor foi mantido em decúbito lateral por dois minutos com a pelve discretamente elevada, para auxiliar por gravidade na difusão do conteúdo transplantado. O transplante foi realizado entre 12 a 18 horas pós-internamento e repetido a cada 48 horas até a resolução da diarreia ou por um total de no máximo três aplicações. Exames físicos dos pacientes foram realizados diariamente. Amostras sanguíneas para a realização de hemograma completo foram coletadas durante o exame inicial e no dia da alta hospitalar. Uma amostra de fezes foi coletada para exames coproparasitológicos. Um grupo controle de cães atendidos no hospital durante o mesmo período e que não recebeu o TMF foi selecionado retrospectivamente para se investigar a eficiência terapêutica do procedimento. O período de internamento e a taxa de mortalidade foram comparados entre os grupos pelo test t e Chi quadrado, respectivamente.
Resultados e Discussão
Dos 18 cães avaliados, a média da idade foi 119,11 dias, (± 54 dias); média de peso de 6,79kg (± 4,92kg). Exames coproparasitológicos foram realizados em 12 pacientes e todos apresentaram resultado negativo. Todos os cães apresentaram leucopenia com linfocitose relativa no hemograma inicial, sugerindo infecção viral, sendo a parvovirose a principal suspeita baseado na rotina do hospital e na época do ano. Os pacientes receberam uma terapia padrão com fluidoterapia, protetores gástricos, anti-eméticos, antibióticos de amplo espectro e, além disso, foi realizado o TMF nas primeiras 12 a 18 horas pós-internação o qual foi repetido a cada 48 horas até a alta ou óbito do animal.
A média de hospitalização do grupo tratado com TMF foi de 4,5 dias (±1,86) e de 4,7 dias (±1,83) dias no grupo controle (P>0.05). O tempo de hospitalização dos animais no geral não foi menor quando comparado a animais de rotina que são hospitalizados devido a gastrenterite hemorrágica, entretanto, houve casos em que o período de hospitalização após o TMF foi de apenas 24, 48 ou 72 horas.
Exames físicos foram realizados diariamente para acompanhar a evolução clínica de cada animal e, no momento da alta, o hemograma foi repetido em 8 dos 18 animais
estudados, todos eles evidenciando melhora da leucopenia. Nenhum paciente precisou receber mais do que três TMFs. O TMF tem sido cada vez mais adotado em humanos com diarreia alcançando sucesso terapêutico de até 95% em casos de colite refratária a antibióticos (GOUGH et al., 2011). Em cães, apenas dois relatos podem ser encontrados na literatura, um utilizando apenas um animal (WEESE et al., 2013) e outro utilizando oito cães com diarreia (MURPHY et al., 2014). Assim, além deste estudo ter utilizado um número maior de animais, alguns parâmetros foram comparados a um grupo controle.
Não houve diferença estatística (P>0.05) na mortalidade entre os animais que receberam o TMF (17%) comparados ao grupo controle (17%). No entanto, estudos clínicos dessa natureza requerem um número amostral muito grande para que os efeitos benéficos da terapia possam de fato ser atribuídos a ela. Isso se dá devido ao grande número de variáveis e falta de uniformidade da população estudada com relação por exemplo a severidade da diarreia e desidratação na hora do internamento. Assim, a ausência de diferenças significativas entre os grupos pode ser devido ao número reduzido de animais usados nesse estudo. Apesar disso, estes resultados demonstram que a técnica de TMF é segura para ser utilizada em cães com diarreia aguda e pode vir a auxiliar na recuperação de desses animais. O TMF é uma técnica de baixo custo e fácil aplicação e que merece mais investigações como adjuvante na terapia a diarreia em cães.
A próxima etapa dessa pesquisa consiste em aumentar o número amostral, além de realizar estudos microbiológicos das consequências do TMF nesta espécie.
Conclusão
O TMF por meio de enema é um procedimento de fácil manejo e de baixo custo. Baseando-se na evolução clínica e o prognóstico reservado em casos de diarreia aguda em cães filhotes, conclui-se que a realização do TMF em associação com a terapia de suporte padrão pode auxiliar no controle da diarreia.
Referências
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HAND, D.; WALLIS, C.; COLYER, A.; PENN, C.W. Pyrosequencing the canine faecal microbiota: breadth and depth of biodiversity. PLoS ONE, v. 8, n. 1, e53115, jan. 2013. HONNEFFER, J.B.; MINAMOTO, Y.; SUCHODOLSKI, J.S. Microbiota alterations in acute and chronic gastrointestinal inflammation of cats and dogs. World Journal Gastroenterology, v. 20, n. 44, p. 16489-16497, nov. 2014.
MURPHY, T., CHAITMAN, J., HAN E.. Use of Fecal Transplant in Eight Dogs with Refractory Clostridium perfringens Associated Diarrhea. In: American College Veterinary Internal Medicine, 2014, Tennessee, Anais do ACVIM Forum, 2014, p. 1047.
SUNVOLD, G.D.; FAHEY, G.C.; MERCHEN, N.R.; TITGEMEYER, E.C.; BOURQUIN, L.D.; BAUER, L.L.; REINHART, G.A. Dietary fiber for dogs: IV. In vitro fermentation of selected fiber sources by dog fecal inoculum and in vivo digestion and metabolism of fibersupplemented diets. Journal of Animal Science, n. 73, p. 1099-1109, 1995.
WEESE, J.S.; COSTA, M.C.; WEBB, J. Preliminary Clinical and Microbiome Assessment of Stool Transplantation in the Dog and Cat. In: ACVIM Forum, 2013, Seattle. Journal of Veterinary Internal Medicine, v. 27. p. 705, 2013.
WILLARD, M.D. Manifestações Clínicas dos Distúrbios Gastrointestinais. In: Nelson, R.W.; Couto, G.C. Medicina Interna de Pequenos Animais, Rio de Janeiro, v. 4, p. 360-365, 2010.
