Obesidade materna aumenta a regulação das vias de sinalização da inflamação e expressão de citocinas na placenta de ovelhas na metade da gestação

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Faculdade de Veterinária

Departamento de Clínicas Veterinária

Núcleo de Pesquisa, Ensino e Extensão em Pecuária www.ufpel.edu.br/nupeec

Ismael Mateus Cavazini Samanta Regine Fensterseifer

Obesidade materna aumenta a regulação das vias de

sinalização da inflamação e expressão de citocinas

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Tecido Adiposo

 Funções

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INTRODUÇÃO

 Células: macrófagos, fibroblastos, pré-adipocitos e adipocitos

Tecido Adiposo

 Adipocinas:

 Função imunológica  Cardiovascular  Metabólica  Endócrina  TFNα  IL-6  SC – B, C3 e D (adipsina)

(Costa & Duarte, 2006)

Obesidade estimula tanto o sistema imune quanto o próprio tecido adiposo a produzir mediadores pró-inflamatórios.

(André & Tofalini, 2008)

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INTRODUÇÃO

NF-κB: Núclear fator kappa B JNK: c-Jun N-terminal Vias de sinalização da resposta inflamatória expressão de citocinas pró-inflamatórias TLR4 Impulsiona o processo Ácidos Graxos Obesidade Materna

AGL circulação mãe

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INTRODUÇÃO

A obesidade materna aumenta a concentração de

lipídios na circulação fetal e a expressão de moléculas

sinalizadoras da inflamação no tecido placentário de

ovelhas na metade da gestação

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MATERIAIS E MÉTODOS

- 60d

Concepção

75d

20 Ovelhas

Multíparas

3-4 Anos

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- 60d

Concepção

75d

Avaliação do peso semanalmente

ECC 1-9 (mensalmente)

ajuste de

dieta

Necropsia

 Anestesia:

 Infusão de cetamina IV (22,2 mg/kg PV)

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Necropsia

 Coleta de sangue das ovelhas:

 n=5 de cada grupo

 tubos refrigerados com EDTA

 plasma foi congelado a -80ºC

 Laparotomia médioventral:

 localização útero grávido

 abertura útero

 Coleta de sangue dos fetos:

 Punção venosa cordão umbilical

AGL

Colesterol

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 Coleta de tecido placentário cotiledonar:

 6 fêmeas

 4 machos

 Placentomas do tipo A com tamanho similar

associados com as membranas da placenta de cada feto

Congelados em nitrogênio líquido e

armazenados a -80ºC

RT-PCR

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 TR-PCR

 RNAm expressão:

CD11b, CD14, CD68, IL-6, IL-8, IL-18, TLR2, TRL4, TNF-α

 Western blotting

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Peso Corporal e ECC

OB C P Peso Corporal 98,5 ± 3,1 73,9 ± 4,2 P < 0,01 ECC 7,9 ± 0,2 5 ± 0,5 P < 0,01 OB C P Peso Corporal 234,4 ± 6,61 185,7 ± 6,89 P < 0,05  Fetos  Ovelhas RESULTADOS E DISCUSSÃO

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OB C P

Ácidos Graxos Livres (mM) 0,61 ± 0,03 0,49 ± 0,03 0,008

Triglicerídeos (mg/dL) 48,0 ± 1,8 38,8 ± 1,8 0,006

Colesterol (mg/dL) 42 ± 2,4 34 ± 2,4 0,050

Análises Sanguíneas dos Fetos

RESULTADOS E DISCUSSÃO

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□ OB

■ C

*: P < 0.05;

†: P = 0.06

Receptores do tipo Toll2 e Toll4

Expressão mRNA – Tecido Placentário Cotiledonar

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□ OB

■ C

*: P < 0.05;

†: P = 0.06

CD11b, CD14 e CD68

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CD11b

CD14

CD68

Marcador de ativação de monócitos

Marcadores de diferenciação e

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□ OB

■ C

**: P < 0,01

*: P < 0.05;

†: P = 0.06

TNFα, IL-6, IL-8, IL-18

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TNF-α

IL-6

IL-8

IL-18

Secretado por macrófagos, linfócitos e monócitos; age em células endoteliais; hipotálamo

Liberada por linfócitos T, linfócitos B ativados, fibroblastos, monócitos, macrófagos e células endoteliais; Considerada marcadora de ativação sistêmica das citocinas pró-inflamatórias.

Atrai neutrófilos, basófilos, linfócitos T e promovem a angiogênese até o foco infeccioso.

Secretada pelos macrófagos, promove a secreção do INF-γ; estimula a resposta inflamatória de células NK.

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Modulam a sinalização intracelular da tirosina dos IRS (substratos de

receptor de insulina)

IL-6 e TNF-α

Fosforilação da porção serina

IRS fracos interações protéicas translocação GLUTs expressão dos GLUTs na Internalização glicose Resistência à insulina Ativação NF-κB citocinas pró-inflamatórias

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Qual é a relação com os

experimentos em andamento???

?

_?

?

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EXPERIMENTOS NUPEEC

Resistência à Insulina em ruminantes e sua

relação com hipomagnesemia e hipocalcemia

O objetivo geral deste estudo é avaliar a relação da resistência à insulina, com a

A hipótese é que em ruminantes, o aumento da resistência à insulina devido ao alto grau de adiposidade ao parto, predispõe à hipomagnesemia

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...voltando para

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□ OB

■ C

**: P < 0,01

*: P < 0.05;

Phos-IkB kinase α/β (Ser 176/180)

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□ OB

■ C

**: P < 0,01

*: P < 0.05;

Phos-IkB kinase α/β (Ser 176/180)

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□ OB

■ C

**: P < 0,01

*: P < 0.05;

Phos-JNK (Thr183/Tyr185)

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□ OB

■ C

**: P < 0,01

*: P < 0.05;

Phos-JNK (Thr183/Tyr185)

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CONCLUSÃO

 A obesidade materna causa up-regulation das vias de sinalização da inflamação NF-kB e JNK e reforça a expressão de citocinas;

 Aumenta os níveis de TLR4 no tecido placentário cotiledonar das ovelhas OB;

 Como um receptor ativado por ácidos graxos, a up-regulation do TLR4 pode favorecer uma ligação potencial entre a obesidade materna e a inflamação da placenta.

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