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Níveis de ingestão de matéria seca sobre metabólitos e hormônios circulantes e
hormônios foliculares em novilhas de corte
Levels of dry matter intake on metabolites and hormones plasmatic and follicular hormones in beef heifers
RIGOLON, Luis Paulo
1; PRADO, Ivanor Nunes do
1; CAVALIERI, Fabio Luiz Bim
2; NEGRÃO, João Antônio
3; SILVA, Robério Rodrigues
*4, MARQUES, Jair de Araújo
41 Universidade Estadual de Maringá, Centro de Ciências Agrárias, Depto. de Zootecnia, Maringá, Paraná, Brasil
2 Centro de Ensino Superior de Maringá, Faculdade de Medicina Veterinária, Maringá, Paraná, Brasil
3 Universidade de São Paulo, Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos, Pirassununga, São Paulo, Brasil
4 Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia, Departamento de Zootecnia, Itapetinga, Bahia, Brasil
*Endereço para correspondência: rrsilva@uesb.br
RESUMO
Objetivou-se verificar o efeito do nível da ingestão de matéria seca (IMS) em percentagem do peso vivo sobre as concentrações de glicose, insulina, uréia, estrógeno e progesterona no plasma sangüíneo da veia jugular, progesterona no plasma sangüíneo da veia cava caudal e IGF-1, estrógeno e progesterona no líquido folicular. O experimento foi conduzido na Fazenda Experimental de Iguatemi (FEI), da Universidade Estadual de Maringá (UEM), de maio a junho de 2000. Foram utilizadas 27 novilhas cruzadas (½ Nelore vs. ½ Angus), distribuídas em três tratamentos e nove repetições: 1,2%; 1,6% e 2,6% de IMS/dia em relação ao peso vivo, respectivamente. As dietas continham 12,30% de PB e 1,11Mcal de ELg/kg de MS. Após 142 dias de experimento, os animais tiveram seus ciclos estrais sincronizados.
Cinco novilhas de cada tratamento foram cateterizadas na veia cava caudal. O sangue foi coletado da veia jugular e cava caudal a cada dois dias até o 12o dia do ciclo estral e, a partir da oitava aplicação de FSH (D12), foram coletadas 11 amostras de sangue da veia jugular a cada 4 horas para se determinar as concentrações de glicose, insulina, uréia, estrógeno e progesterona no plasma sangüíneo. As outras quatro novilhas de cada tratamento foram ovariectomizadas na sétima aplicação de FSH (D12) para a dosagem dos níveis de IGF-I no líquido dos folículos médios (5- 9mm) e grandes (>10mm). As concentrações de glicose (83,02mg/100mL) e estrógeno (1.796,93pg/mL) no plasma da veia jugular foram maiores (p<0,05) nos animais com 1,6% de IMS. Por outro lado, os níveis de insulina foram maiores (p<0,05) nos animais com 2,6% de IMS (13,96µU/L).
Com o aumento dos níveis IMS, aumentaram, também, os níveis sangüíneos de uréia (p<0,05). Não
houve efeito (p>0,05) da IMS sobre os níveis de progesterona no plasma sangüíneo coletado da jugular.
No entanto, no plasma sangüíneo coletado da veia cava caudal, os níveis de progesterona foram maiores (p<0,05) nos animais com 2,6% de IMS (11,77ng/ml).
Da mesma forma, não houve efeito (p>0,05) da IMS sobre os níveis foliculares de IGF-I, estrógeno e progesterona. Pode-se concluir que nem sempre uma variação hormonal sistêmica é refletida em nível folicular.
Palavras-chave: estrógeno, glicose, insulina, progesterona e uréia
SUMMARY
This study was carried out to evaluate the effect of dry matter intake (DMI) on metabolites and plasmatic and follicular hormones. Twenty seven crossbreed ½ Nelore x ½ Angus heifers were allocated in the 3 groups, with 9 replications each:
1.2%, 1.6% and 2.6% of DMI/day on the relation of body weight. One hundred forty two days after the beginning of experiment the oestrous cycle was synchronized. Five heifers from each group were catheterizated in the caudal vena cava. Blood was collected via jugular vein and caudal vena cava every two days up to 12th day of the oestrous cycle from 8th FSH application, 11 blood samples were collected from jugular vein every 4 hours to determine glucose, insulin, urea, estradiol-17β and progesterone in plasma. Four heifers from each group were ovarioctemized in the 7th FSH doses and IGF-I, estradiol-17β and progesterone levels were determined in fluid of the mean and large follicle. Glucose levels (83.02 mg/100 mL) and estradiol-17β (1796.93 pg/mL) were superior
368 (P<0.05) in the jugular vein from heifers with 1.6%
of DMI. However, levels of insulin (13.96 µU/L) were higher (P<0.05) for heifers receiving 2.6% of DMI. Levels of urea were higher (P<0.05) as DMI increased. Levels of progesterone, in plasma of jugular vein, were not affected by DMI. However, levels of progesterone were higher (P<0.05) for
heifers receiving 2.6% of DM (11.77 ng/ml) than for heifers receiving 1.2% of DM (6.39% ng/ml). It can be concluded that not always the plasmatic hormonal variation is reflected in to follicular level.
Keywords: estrogen, glucose, insulin, progesterone and urea
INTRODUÇÃO
O índice reprodutivo é um dos principais fatores que determinam a rentabilidade de uma propriedade de bovinos de corte. Nos últimos anos, a implementação da seleção animal, associada a um melhor manejo, tem possibilitado um aumento significativo na produtividade dos rebanhos nacionais.
Entretanto, o mesmo não tem sido observado com as variáveis reprodutivas.
As mesmas estagnaram ou decresceram nos últimos anos, apresentando-se de forma inversa à produção animal (BUTLER, 2000).
O status nutricional de um animal é um dos principais fatores responsáveis pela fertilidade dos bovinos (ROBINSON et al., 1999). Dentre os fatores nutricionais responsáveis pelas variáveis reprodutivas, podem ser destacados o efeito da proteína bruta (GARCIA-BAJALIL et al., 1994), nível de vitamina A (SHAW et al ., 1995), concentração de gordura (THOMAS et al., 1996), condição corporal e densidade energética da dieta (NOLAN et al., 1998;
O’CALLAGHAN & BOLAND, 1999;
YAAKUB et al ., 1999). Todavia, alguns dos mecanismos envolvidos na interface nutrição e reprodução animal ainda não estão completamente elucidados (ARMSTRONG et al ., 2000).
A densidade energética da dieta parece ser um dos principais fatores envolvidos no crescimento folicular, ovulação e desenvolvimento embrionário. Trabalhos com ovelhas têm mostrado que um aumento no nível de energia da dieta em curto prazo aumenta o número de folículos e, por sua vez, a taxa de
ovulação (HARESIGN, 1981; TELENI et al ., 1989; LEURY et al., 1990; MOLLE et al., 1995). Embora os bovinos sejam espécies monovulatórias, parece haver efeito semelhante do aumento do nível de energia da dieta sobre o crescimento folicular (MAURASSE et al., 1985;
GUTIERREZ et al., 1997).
Por outro lado, o número de folículos responsivos às gonadotrofinas, no início dos tratamentos hormonais, parece ser um dos fatores que alteram a resposta superovulatória na produção e transferência de embriões (GONG et al., 1997). Na realidade, a produção in vitro e a transferência de embriões têm sido consideradas umas das principais biotécnicas da reprodução animal ao lado da inseminação artificial, pois valoriza também o potencial reprodutivo das fêmeas.
Vários dos mecanismos, pelos quais o aumento do nível de energia na dieta eleva o número de folículos, parecem ser mediados por alterações, nas concentrações sangüíneas, de glicose (TELENI et al ., 1989; DOWNING et al ., 1995ª; O’CALLAGHAN & BOLAND, 1999), insulina (HARRISON & RANDEL, 1986; GUTIÉRREZ et al. , 1997; SIMPSON et al., 1994; LANDAU et al . , 2000), IGF-I de suas proteínas ligantes (RHIND et al., 1991;
WEBB, 1998; HOUSEKNECHT et al., 1988;
ARMSTRONG et al., 2000) e de progesterona (NOLAN et al., 1998; DUNNE et al ., 1998;
O’CALLAGHAN et al ., 2000).
Dessa forma, objetivou-se com este trabalho
verificar a influência do nível de ingestão de
matéria seca, em percentagem do peso vivo,
sobre as concentrações sangüíneas de
progesterona, estrógeno, glicose, insulina, uréia
e IGF-I no fluído folicular, durante tratamento
superovulatório em novilhas de corte.
369
MATERIAL E MÉTODOS
O experimento foi realizado no setor de Bovinocultura de Corte da Fazenda Experimental de Iguatemi (FEI) da Universidade Estadual de Maringá (UEM) localizada em Iguatemi, no período de março a junho de 2000.
Foram utilizadas 27 novilhas cruzadas (½ Nelore vs. ½ Angus) com idade média de 16 meses e 290kg. Na chegada, as novilhas foram pesadas, identificadas com brincos plásticos na orelha esquerda, vacinadas contra febre aftosa (Afto 6, Pfizer
®) e vermifugadas com Ivermectina a 1% (Ivomec, Merial
®). Em seguida, foram alojadas em baias individuais de 10m
2, piso de concreto, cercadas com barra de ferro, com área coberta com
telhas de zinco e solário. A alimentação foi fornecida em comedouros de alvenarias com 2m lineares por animal. A água foi disponibilizada ad libitum, em bebedouros localizados na área descoberta das instalações.
As 27 novilhas, após avaliação positiva de funcionalidade ovariana, por palpação retal, foram distribuídas em três tratamentos (ingestão de matéria seca – IMS em % do peso vivo ), com nove repetições, como segue: tratamento 1 = 1,2% de IMS; tratamento 2 = 1,6% de IMS; tratamento 3 = 2,6% de IMS.
As dietas foram formuladas de acordo com as recomendações do NRC (1996) (Tabela 1), objetivando-se atender as exigências de novilhas de corte com peso médio de 290kg e ganho médio diário proposto para cada tratamento.
Tabela 1. Ingestão de matéria seca kg/dia em função do peso vivo
Rações 1,2% 1,6% 2,6%
Silagem de Milho 1,80 2,50 3,25
Milho Grão 1,43 1,98 2,58
Farelo de Soja 0,33 0,46 0,60
Sal Mineral 0,04 0,06 0,07
Total 3,60 5,00 6,50
Consumo de MS/PV (%) 1,20 1,60 2,60
O fornecimento de ração foi dividido em duas vezes ao dia, ou seja, às 8:00 e 16:00 horas. Diariamente, no período da manhã, antes da distribuição da ração, foi realizada a limpeza dos comedouros. O controle quantitativo das sobras foi efetuado três vezes por semana durante todo o experimento, estimando-se, assim, a ingestão de matéria seca, sobretudo dos animais do tratamento três. Da mesma forma, as dietas foram ajustadas mensalmente de acordo com o peso médio de cada animal e suas respectivas necessidades.
Após 142 dias de experimento (período de adaptação), os animais tiveram seus ciclos estrais sincronizados (D0 = estro) com a aplicação de PGF2a (Preloban®, Hoechst Vet S.A.) e, nove dias depois (D9), os mesmos foram superovulados com 250UI de FSH (Pluset - Calier®), em duas doses diárias decrescentes, durante quatro dias, utilizando-se na sexta aplicação de FSH (D11), também foi o PGF2a (Preloban®, Hoechst Vet S.A.).
Cinco animais de cada tratamento foram
cateterizados na veia cava caudal, de
370 P4 - Progesterona
E2 -. Estrógeno
acordo com a técnica descrita por Benot et al. (1991) e modificada por Rhodes et al.
(1995). Os animais foram tranquilizados com xilazina e, logo após, anestesiados localmente (acima da junta tarsal, na pata posterior direita) com uma solução de lidocaína a 5%. Nesse local foi feita uma anti-sepcia com álcool- iodado e introduzida uma agulha de 10cm e calibre 12 na veia safena lateral, seguida por uma incisão na pele. Um catéter de 200cm de comprimento foi introduzido através da agulha, até a marca de 100cm. A localização da ponta do cateter na veia cava caudal, na altura do sangue drenado do útero e ovário, foi confirmada por meio da palpação transretal e de um aparelho de ultra-som Scaner 480 (Pie Medical
®, com sonda de 5,0 e 7,5Mhz).
Amostras de sangue foram colhidas por punção da veia jugular e do catéter inserido
na veia cava caudal a cada dois dias, do momento do estro (D0) até o último dia do tratamento superovulatório (D12), objetivando-se analisar as concentrações de progesterona (Fluorimetria – Rhesus®). A partir da oitava aplicação de FSH (D12), foram coletadas 11 amostras de sangue da veia jugular, a cada 4 horas, para determinação das concentrações de uréia, glicose, estrógeno (Fluorimetria) e insulina (Figura 1). As amostras de sangue foram coletadas em tubos heparinizados e, então, submetidas à centrifugação a 3200rpm, por 20 minutos. O plasma foi separado, acondicionado em microtubos de 1,5ml (Eppendorf®) e armazenado a -20oC para as posteriores dosagens dos parâmetros avaliados.
CIO
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
P4 - sangue - catéter P4 - sangue - jugular
CIO
Superovulaçao sangue - jugular -
4 horas -E2, Ins.
uréia, glicose.
DIAS D0
Figura 1. Esquema experimental de coleta de sangue
Em quatro animais de cada tratamento, na sétima aplicação de FSH (D12), foi realizada uma incisão no flanco para a localização dos ovários e posterior ovariectomia. Os ovários foram mantidos a 37
oC e conduzidos ao laboratório de reprodução animal da Fazenda Experimental de Iguatemi, onde o líquido dos folículos, médios (5-9mm) e grandes
(>10mm), foi aspirado e armazenado em microtubos de 1,5ml (eppendorf
®) a -20C
o, para as dosagens de IGF-I (método segundo SPICER et al., 1992)
O delineamento experimental foi inteiramente
casualizado com três tratamentos e cinco
repetições para as dosagens dos parâmetros
sangüíneos avaliados e quatro repetições para
as análises hormonais no fluído folicular, de
371
acordo com o modelo estatístico apresentado
abaixo:
Y
ij= µ + T
i+ C
j+ TC
ij+ e
ijkEm que:
Y
ij =Observação referente ao animal j,
submetido ao tratamento i (i = 1,...., 3);
µ
=Constante geral associado a cada observação;
T
i =Efeito do tratamento i (i = 1,..., 3);
C
j=Efeito da coleta j (j = 1,...,11);
e
ijk =Erro aleatório associado a cada observação.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Os animais com 1,6% de ingestão de matéria seca mostraram aumento (p<0,05) nas concentrações sangüíneas de glicose (Figura 1), quando comparados aos animais com 1,2 e 2,6% de IMS. Esses resultados estão de acordo com as observações de Cavalieri et al.
(1998), que observaram um aumento na concentração sangüínea de glicose para níveis intermediários de energia na dieta. A glicose é considerada um importante metabólito envolvido na regulação do crescimento folicular (TELENI et al., 1989; DOWNING et al., 1991; DOWNING et al., 1995a;
DOWNING et al., 1995b; MOLLE et al., 1995). Short & Adams (1989) afirmaram que a glicose é a principal fonte de energia utilizada pelo sistema nervoso, sendo o mediador específico dos efeitos da nutrição na reprodução animal.
O fornecimento de dietas ricas em grãos aos ruminantes altera a população de microrganismos do rúmen, bem como a produção e a proporção de ácidos graxos voláteis produzidos (TELENI et al., 1989).
Na realidade, o uso de cereais proporciona maior produção de ácido propiônico (SILVA
& LEÃO, 1979). Após sua absorção pela parede ruminal, o ácido propiônico é carreado até o fígado onde é metabolizado até se tornar glicose por meio da gluconeogênese
(O’CALLAGHAN & BOLAND, 1999).
Durante esse processo, ocorre um aumento dos níveis de glicose circulante na corrente sangüínea (LEURY et al., 1990). Matsunaga et al. (1999) infundiram uma mistura de ácidos graxos voláteis (acetato, propionato e n-butirato, na proporção molar de 73:19:8, respectivamente) a uma taxa de 107 µmol/kg/min., durante 4 horas, e verificaram um aumento nos níveis circulantes da glicose sangüínea. Da mesma forma, Dicostanzo et al. (1999) observaram um aumento na concentração sangüínea de glicose ao infundir ácido propiônico no rúmen. No entanto, vale observar que, neste experimento, os animais do tratamento com maior nível de ingestão (2,6% de IMS) apresentaram menores concentrações de glicose do que aqueles alimentados com 1,6% e 1,2% de IMS, respectivamente. Esses resultados poderiam ser explicados, em parte, pela maior concentração de insulina circulante observada nos animais alimentados com 2,6% de IMS.
Os animais do tratamento com 2,6% de IMS apresentaram maior concentração sangüínea de insulina (p<0,001), em comparação aos animais do tratamento 1,2 e 1,6% de IMS. A insulina está intimamente relacionada ao nível de glicose circulante (DOWNING et al., 1995b) e apresenta várias funções relacionadas principalmente com a dinâmica folicular, tais como: proliferação e diferenciação das células da granulosa (SPICER & ECHTERNKAMP, 1995), esteróidogênese e número de folículos pequenos, médios e grandes (HARRISON &
RANDEL, 1986; SIMPSON et al., 1994;
DOWNING et al., 1995b). Gutiérrez et al.
(1997) concluíram que os efeitos do aumento de energia na dieta no crescimento foliculares ocorreram em função do aumento da concentração de insulina circulante. Cox et al . (1987) administraram insulina em leitoas alimentadas com alta ou moderada energia e verificaram um aumento na taxa de ovulação.
Da mesma forma, Matamoros et al. (1990)
verificaram uma diminuição na atresia
folicular ao injetar em insulina em leitoas
alimentadas com dietas restritas em energia.
372
Por outro lado, parece não ser somente o
aumento do nível de energia na dieta, ou seja, aumento da produção de ácidos graxos voláteis, que estimula o aumento nos níveis de glicose sangüínea e, consequentemente, do nível de insulina circulante. Dessa forma, Downing et al. (1995c) verificaram que a infusão de ácidos graxos de cadeia ramificada ou a inclusão de alimentos na dieta ricos em leucina também aumentam a concentração de insulina plasmática (LANDAU et al., 1996).
Sendo assim, o aumento na quantidade de alimentos consumidos pelos animais com a dieta ad libitum (2,6% de IMS) pode ter aumentado a quantidade de carboidratos utilizados (ácido propiônico no rúmen ou glicose no intestino) e de aminoácidos disponíveis para a absorção intestinal, tendo, com isso, contribuído para o aumento nas concentrações sangüíneas de insulina circulante. Bassett et al. (1971) também demonstraram que a concentração de insulina plasmática estava positivamente correlacionada com a quantidade de matéria orgânica ou proteína digestível ingerida pelo animal.
No entanto, McCann & Hansel (1986) observaram que, ao injetarem uma quantidade constante de glicose em novilhas obesas ou magras, os animais do primeiro grupo apresentaram uma maior concentração sangüínea de insulina e mesma taxa de remoção fracional da glicose, demonstrando uma menor sensibilidade celular à atuação da insulina em animais obesos. Os animais do tratamento ad libitum, nesse experimento, estavam mais obesos quando comparados aos animais alimentados com 1,6 e 1,2% de IMS.
Contudo, nem sempre uma maior concentração de insulina sangüínea significa maior produção pancreática da mesma (HARMON, 1992). Os hormônios pancreáticos são primeiramente liberados na circulação-porta e a concentração sangüínea desses hormônios representa a diferença líquida entre a taxa de secreção e o clearance hepático.
Por outro lado, como mostrado na Figura 4, os níveis sangüíneos de uréia aumentaram
(p<0,0001) em função do aumento da IMS.
Vários trabalhos de pesquisas têm mostrado que o aumento de uréia na circulação sangüínea altera negativamente a reprodução animal (HOWARD et al ., 1987; CARROL et al ., 1988; BRUCKENTAL et al., 1989;
SANTOS & AMSTALDEN, 1998;
GARCIA-BAJALIL et al ., 1998). O efeito negativo da uréia pode estar relacionado, principalmente, a uma diminuição do pH uterino (ELROD & BUTLER, 1993a, 1993b). Essa redução poderia prejudicar a resposta dos espermatozóides e óvulos (SINCLAIR et al ., 2000), o desenvolvimento inicial do embrião e/ou alteração na concentração sangüínea de progesterona e insulina (SANTOS & AMSTALDEN, 1998).
Da mesma forma, Fergunson et al . (1993) reportaram que a taxa de concepção no rebanho diminui quando os níveis circulantes de uréia no sangue estão acima de 20mg/dl.
Todavia, nesse experimento, o tratamento com 2,6% de IMS apresentou uma média de 19,9mg/100mL, nível inferior àqueles destacados pelos autores como sendo responsáveis pelos efeitos negativos na reprodução. Dessa maneira, os níveis circulantes de uréia não poderiam ser os responsáveis pelos efeitos negativos no ambiente uterino e, conseqüentemente, sobre mortes embrionárias.
Na realidade, com o aumento da IMS, em função do tratamento, ocorreu também um aumento na ingestão de proteína bruta, uma vez que as rações eram iso-protéicas. Assim sendo, o aumento na ingestão de proteína bruta intensificaria sua degradação no rúmen e, por conseqüência, maior quantidade de amônia seria produzida. Essa maior produção de amônia poderia ser absorvida pela parede ruminal ou poderia aumentar a produção e o fluxo de proteína microbiana para o intestino delgado. Dessa forma, tanto a absorção de amônia pela parede ruminal quanto a absorção de aminoácidos pelo intestino delgado poderiam elevar os níveis circulantes de uréia na corrente sangüínea (Figura 4).
O tratamento com 1,6% de IMS apresentou
maior (p<0,005) concentração sangüínea de
373
estradiol (Figura 5), quando comparado ao
tratamento com 1,2 e 2,6% de IMS. O estradiol é produzido nas células da granulosa pelo folículo em desenvolvimento a partir de andrógenos sintetizados nas células da teca.
Esse hormônio está diretamente relacionado às características do estro, bem como à liberação de LH pela hipófise anterior (FORTUNE et al., 1993; GINTHER et al., 1996). A explicação para os resultados encontrados neste experimento ainda permanece desconhecida, mas o número de folículos em crescimento, que não foi medido na presente pesquisa, poderia estar influenciando a concentração de estrógeno na circulação.
Não houve efeito (p>0,10) do nível de IMS sobre a concentração de progesterona no plasma sangüíneo, coletado na jugular externa (Figura 6). No entanto, houve efeito positivo (p<0,03) do nível de IMS sobre a concentração de progesterona do sangue coletado na veia cava caudal (Figura 7). Essas concentrações de progesterona, diferentes no sangue periférico e interno, possivelmente, ocorreram em função dos horários de coleta ou da meia vida do hormônio. A progesterona é o hormônio essencial para a manutenção da gestação nos animais domésticos. Aswhort (1995) afirmou que a concentração circulante de progesterona modifica a quantidade e a composição dos polipeptídicos secretados pelo endométrio, muitos dos quais responsáveis pelo desenvolvimento do embrião e também diretamente relacionado à qualidade do ovócito (MCEVOY et al., 1995). Ainda, O’Callaghan et al. (2000) afirmaram que pequenas mudanças na concentração de progesterona no período inicial do desenvolvimento embrionário podem ser um fator crítico para a sobrevivência do embrião.
Vários experimentos com ovelhas têm mostrado que o aumento no nível de energia da dieta diminui a concentração de progesterona circulante (CUMMING et al.,
1971; WILLIANS & CUMMING, 1982;
PARR et al ., 1987; MCEVOY et al., 1995;
O’CALLAGHAN et al., 2000). O fígado é o local principal de metabolismo dos hormônios esteróides. Segundo Ashworth (1995), alterações na ingestão de nutrientes podem alterar o metabolismo de progesterona de três diferentes maneiras: mudança na massa hepática, mudança na taxa de fluxo sangüíneo hepático e mudança na atividade de enzimas oxidades ou P-450 que atuam no metabolismo de catálise dos hormônios esteróides.
Parr (1992) propôs que o aumento na ingestão de alimentos no início da gestação em ovelhas causaria uma elevação no fluxo sangüíneo no trato gastrintestinal e no fígado.
Ainda, segundo Ashworth (1995), 95% da progesterona circulante é metabolizada durante uma única passagem através do intestino e fígado. Dessa forma, existiria uma redução na concentração periférica de progesterona. No entanto, em relação aos bovinos, os resultados são contraditórios.
Murphy et al. (1991) trabalharam com 19 novilhas Hereford x Frisien e alimentaram os animais com uma dieta representando 0,7; 1,1 e 1,8% do peso vivo em relação à IMS/dia, durante 5 semanas de tratamento. Os autores também não observaram variações nas concentrações sangüíneas de progesterona, o que estaria de acordo com os resultados desse experimento, onde os níveis de IMS não alteraram as concentrações sangüíneas de progesterona. Resultados semelhantes foram encontrados por Beal et al. (1978), Spitzer et al. (1978) e Dunne et al. (1999).
McAnn & Hansel (1986) e Nolan et al.
(1998) verificaram um aumento na
concentração de progesterona ao diminuir o
nível de energia da dieta, o que também
poderia estar relacionado à mobilização de
gordura nos animais subalimentados e, dessa
forma, aumentar as concentrações de
progesterona sangüínea.
374
Figura 2. Efeito dos níveis de IMS (kg/100kg de PV) sobre a concentração
sangüínea de glicose (mg/100mL), em função do tempo
Figura 3. Efeito do nível de ingestão de matéria seca (kg/100kg de PV) sobre a concentração sangüínea de insulina (µU/L), em função do tempo 0
10 20 30 40
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 Coleta de sangue (horas)
Insulina (µU/L)
1,20%
1,60%
2,60%
*
* * * * * *
*
* * *
60 70 80 90 100
1
a2
a3
a4
a5
a6
a7
a8
a9
a10
a11
aColeta de 4 em 4 horas
Glicose (mg / 100ml)
1.2%
1.6%
2.6%
* *
*
*
*
*
*
* * *
*
375
0 1000 2000 3000 4000
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 Coleta de sangue (horas)
Estradiol (pg / mL)
1,20%
1,60%
2,60%
* * * * * * *
*
Figura 4. Efeito do nível de ingestão de matéria seca (kg/100kg de PV) sobre a concentração sangüínea de uréia (mg/100mL), em função do tempo
Figura 5. Efeito do nível de ingestão de matéria seca (kg/100kg de PV) sobre a concentração sangüínea de Estradiol (pg/mL), em função do tempo
-5 5 15 25 35
1 2 3 4 5 6
Dias de coleta
P4 (ng / mL)
1,20%
1,60%
2,60%
376
Figura 6. Efeito do nível de ingestão de matéria seca (kg/100kg de PV)
sobre a concentração sangüínea de progesterona (ng/mL), coletada da veia jugular, em função do dia de coleta
Figura 7. Efeito do nível de ingestão de matéria seca (kg/100kg de PV) sobre a concentração sangüínea de progesterona (ng/mL), coletada do catéter inserido na veia cava
5 10 15 20 25 30
1
a2
a3
a4
a5
a5
10 15 20 25 30
1
a2
a3
a4
a5
a6
a7
a8
a9
a10
a11
aColeta de 4 em 4 horas
Uréia (mg / 100ml)
1.2%
1.6%
2.6%
-10 0 10 20 30 40
1 2 3 4 5 6
Dia de coleta
p4 (ng / ml)
1,20%
1,60%
2,60%
377
A Figura 7 mostra que o nível de 2,6% de
IMS elevou a concentração de progesterona na veia cava caudal (p<0,05) quando comparado com níve l de 1,2%, não diferindo do nível de 1,6% de IMS. Vários métodos têm sido descritos na literatura com o objetivo de mensurar mais adequadamente a produção hormonal ovariana, entre eles: a cateterização cirúrgica da veia útero-ovárica (IRELAND et al ., 1984), da veia coccígea média (WALTERS et al., 1984) e, mais recentemente, da veia cava caudal, via veia safena lateral (BENOIT & DAILEY, 1991;
RHODES et al., 1995).
Com base nos resultados deste experimento, podemos verificar que a síntese de um determinado hormônio nem sempre é o reflexo do seu nível circulante após a metabolização, o que também está de acordo com as considerações de Harmon et al . (1992). Por exemplo, a progesterona é produzida pelas células da granulosa e células da teca (células maiores e me nores, respectivamente) (MURPHY, 2000) a partir do colesterol (LEHNINGER, 1995; SANTOS &
AMSTALDEN, 1998; MURPHY, 2000), que pode ser derivado de duas fontes principais – nova síntese a partir do acetato ou de lipoproteínas do colesterol no plasma (GRUMER & CARROL, 1988).
Schick et al. (1992) verificaram que o anestro nutricional pode ser precedido pela formação de um corpo lúteo subfuncional e ou com baixa capacidade esteroidogênica.
No entanto, quando o tecido luteal, coletado dessas vacas, foi incubado in vitro com disponibilidade de nutrientes, o mesmo não se apresentou subfuncional. Os autores afirmaram que a disponibilidade de metabólitos é um dos principais fatores que determina a síntese de progesterona em vacas, estando associada ao nível circulante de insulina. Dessa forma, o aumento no nível de IMS poderia ter elevado a produção de ácidos graxos ruminais, aumentando, conseqüentemente, o nível de acetato disponível para a síntese
de colesterol e, posteriormente, de progesterona. Todavia, os animais alimentados com 2,6% de MS apresentavam também uma maior concentração de insulina na circulação (Figura 3), a qual é considerada um dos principais hormônios reguladores da esteroidogênese ovarina (SIMPSON et al., 1994; SPICER & ECHTERNKAMP, 1995), que poderia ter facilitado uma maior disponibilidade de nutrientes para o tecido luteal desses animais.
No entanto, não podemos descartar a hipótese observada em ovinos de que os animais alimentados com alta energia na dieta apresentaram um maior catabolismo de progesterona, pois, apesar de um aumento na produção de progesterona pelo corpo lúteo dos animais que consumiam maior quantidade de alimento, os níveis de progesterona coletados da veia jugular foram semelhantes (Figura 6).
Mesmo existindo efeito de tratamento nas concentrações sangüíneas de vários hormônios, não houve efeito do nível de IMS (p>0,05) sobre a concentração de IGF-I (Tabela 3). Spicer et al. (1992) não encontraram diferença na concentração de IGF-I no fluido folicular de novilhas após 24 a 48 horas de jejum, apesar de terem encontrado diferença nas concentrações sangüíneas desse hormônio. Assim, parece que as concentrações de IGF-I intrafolicular são mais resistentes a manipulações dietéticas do que as concentrações sistêmicas (O’CALLAGHAN et al ., 2000).
É possível afirmar que, os resultados deste
experimento estão de acordo com aqueles
encontrados por Spicer et al . (1991), que
realizaram um trabalho com objetivo de
estudar o efeito da ingestão de energia na
dieta e as concentrações sangüíneas e
folículares de IGF-I. Para tanto, realizaram
um experimento com 23 novilhas divididas
em três tratamentos: T1 = 1,8% PV de
IMS/dia (ganho de peso); T2 = 1,1% do
PV (mantença) e T3 = 0,7% do PV (perda
de peso). Após 10 semanas de tratamento,
os animais foram ovariectomizados, e os
378
autores verificaram que não houve
diferença nas concentrações sangüíneas e folículares de IGF-I. Entretanto, esses resultados diferem daqueles encontrados por O’Callaghan et al. (1998, 2000) com ovelhas. Esses autores observaram que os
animais alimentados com 0,5 ou 2,0 vezes as exigências de mantença apresentaram menores concentrações de IGF-I no fluído folicular quando comparados aos animais alimentados com 1,0 vez as exigências de mantença.
Tabela 3. Efeito do nível de ingestão de matéria seca (kg/100kg de PV) sobre as concentrações de IGF-I (ng/mL), no líquido folicular em novilhas de corte
Tratamentos – IMS (% PV) Variáveis
1,2 % 1,6 % 2,6 % CV* (%)
IGF-1 (ng/mL) 327,76
a282,82
a258,32
a29,01
a Médias com letras diferentes na mesma linha, diferem (p<0,05) pelo teste de Tukey.
*Coeficiente de Variação
O IGF-I é um potente regulador da folículogênese em bovinos (ADASHI, 1992; WEBB, 1998; ARMSTRONG et al., 2000; O’CALLAGHAN et al., 2000). No entanto, o sistema IGF-I é regulado por meio de sua associação com uma família de seis proteínas ligantes específicas (IGFPB 1 - 6) (WEBB & ARMSTRONG, 1998), a qual determina a biodisponibilidade do IGF-I e seus efeitos no crescimento folicular (DE LA SOTA et al., 1996). Dessa forma, a diminuição folicular de IGFPB resultaria em um aumento na atividade biológica do IGF-I produzido localmente e, assim, aumentaria a resposta dos folículos às gonadotrofinas (WEBB, 1999). Todavia, neste experimento não foi possível mensurar as concentrações de IGFPB no líquido folicular.
O aumento do nível de ingestão de matéria seca altera as concentrações sangüíneas de estrógeno, insulina, uréia, glicose e progesterona, sem influenciar as concentrações foliculares de IGF-I em novilhas cruzadas (½ Nelore vs ½ Simental) superovuladas. Assim, nem sempre uma variação hormonal sistêmica é refletida em nível folicular.
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