Antígenos Plaquetários

Antígenos Plaquetários

LEANDRA C N SILVA B i o m é d i c a - P e s q u i s a d o r a L a b o r a t ó r i o d e G r a n u l ó c i t o s D i s c i p l i n a d e H e m a t o l o g i a e H e m o t e r a p i a U n i v e r s i d a d e F e d e r a l d e S ã o P a u l o

DECLARO QUE NÃO POSSUO CONFLITOS DE INTERESSE

Declaração de Conflito de

Antígenos Plaquetários

LEANDRA C N SILVA

D i s c i p l i n a d e H e m a t o l o g i a e H e m o t e r a p i a U n i v e r s i d a d e F e d e r a l d e S ã o P a u l o

Estrutura da apresentação

Anticorpos plaquetários Implicações Clínicas Antígenos Plaquetários

Plaquetas

 Pequenos fragmentos celulares anucleados

 Discoídes :1,5-3,0 µm diamêtro (1/3-1/4 hemácia)

 Vida média na circulação: 7-11 dias

Plaquetas

 Reparação endotelial ( 7-10000/

µ

l/dia)

 Aderência à células dos vasos danificados

 Secreção de grânulos.

 Formação do coágulo (agregado).

Vaso sanguíneo _{Fluxo sangue}

=

Interação plaquetária com colágeno

Ativação Plaquetária

Collagen GPIbα/Ibβ-IX-V GPIV [CD36] Lysosome α-granule GPVI CD63 CD62P GPIa-IIa [CD49b/29] ACTIVATED PLATELET FIBRINOGEN Thrombospondin T CD62P GPIIb-IIIa GPIIb-IIIa CD63 GPIV GPIV vWf ACTIVATED PLATELET Thrombospondin T LESION GPIbα GPIaIIaGPVI GPIIb-IIIa CD62P CD63 CD63 GPIV GPIc-IIa GPIbβ-IX-V  C M Hurd 3/2000 v1.0 Subendothelium Blood Vessel Endothelial cells

HLA class I Grupo ABO

Antígenos Plaquetários

GPIbα/Ibβ-IX-V Lysosome α-granule GPIV CD63 CD62P GPIa-IIa [CD49b/29] HLA class I GPIIb-IIIa [CD41/61] CD109 ABO

 Antígenos Plaquetários Específicos

 GP IIb/IIIa (HPA1,3)  GP Ia/IIa (HPA-5)  GP Ib/IX (HPA-2)  Antígenos Compartilhados  ABO, I, Lewis  HLA Classe I  GPIV

Glicoproteínas Plaquetárias - GP IIb/IIIa

 80.000 moléculas por plaquetas  Receptor para fibrinogênio, Fator

von Willebrand, Fibronectina  Plaquetas, megacarócitos e

células endoteliais  Alta imunogenicidade

 21 antígenos plaquetários

HPA-1,-3,-4,-6,-7,-8,-9,-10,-11...

Glicoproteínas plaquetárias - GP Ia/IIa

 3000-5000 moléculas por plaqueta.

 Receptor para colágeno.

 Também presente em células endoteliais e linf. T

 HPA-5, -13

Glicoproteínas Plaquetárias – GP Ib/IX

 25.000 moléculas por plaqueta.  Receptor para von Willebrand.  HPA-2

CD109

 CD109 é um membro da família das proteínas α2-macroglobulinas

 1000 moléculas por plaqueta

 Plaquetas, linfócitos ativados, cels endotelias

 Carrega o sistema HPA-15 (Gov).

 35 Antígenos em 06 GPs

www.ebi.ac.uk/ipd/hpa

)

Antígenos Plaquetários

 35 antígenos

 06 sistemas bi-alélicos (HPA-1, -2,-3,-4,-5 e -15)  23 antígenos de baixa frequência

 Base Molecular: troca de um nucleotídeo resultando na troca de uma aminoácido na glicoproteína resultando no antígeno correspondente.

Sistema Gene Antígeno Sinônimo Subst. Subst aa. HPA-1 GPIIIa HPA-1a PlA1, Zwa T 196 Leu 33

HPA-1b PLA2, Zwb C 196 Pro 33

Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis(2014)

Nomenclatura HPA

1959 - van Loghem descreveu o primeiro antígeno plaquetário Zwa_{, Pl}A1

1990 Nomeclatura HPA - ISBT HPA – Human Platelet Antigen

2003 - PNC (Platelet Nomenclature Committee)

P. Metcalfe, Vox Sanguinis( 2004)

Nomenclatura HPA

 HPA - Aloantígenos protéicos expressos na membrana plaquetária  Base molecular definida

 Os antígenos e sistemas numerados cronologicamente: Zwa _{= HPA-1a}

 Alelos HPA designados alfabeticamente – frequência populacional  ‘a’ – alta frequência

 ‘b’- baixa frequência

 Sistemas HPA: descrição de anticorpos para os antígenos de alta e baixa frequência.  Sistema HPA-1 (Antígenos HPA-1a e HPA1b)

 Descrição de anticorpos apenas contra o antígeno de baixa frequência - ‘w’

 HPA-8bw _{P. Metcalfe, Vox Sanguinis( 2004)}

Antígenos Plaquetários

Tabela 1 Antígenos plaquetários Humanos

SISTEMA ANTÍGENO NOME ORIGINAL GLICOPROTEINA

HPA-1 HPA-1a Zwa_{, Pl}A1

GPIIIa HPA-1b Zwb_{, Pl}A2

HPA-2 HPA-2b Kob

HPA-2a Koa_,Siba _GpIBα

HPA-3 HPA-3a Baka_{, Lek}a

GPIIb HPA-3b Bakb

HPA-4 HPA-4a Yuka,_Pena

GPIIIa HPA-4b Yukb,_Penb

HPA-5 HPA-5a Brb_{, Zav}b

GPIa HPA-5b Bra_{, Zav}a HPA-6bw Caa_{, Tu}a _GPIIIa HPA-7bw Moa GPIIIa HPA-7cw Hita HPA-8bw Sra _GPIIIa

HPA-9bw Maxa _GPIIb

HPA-10bw Laa _GPIIIa

HPA-11bw Groa _GPIIIa

HPA-12bw lya _GPIbβ

HPA-13bw Sita _GPIa

HPA-14bw Oea _GPIIIa

HPA-15 HPA-15a Govb

CD109 HPA-15b Gova

HPA-16bw Duva _GPIIIa

HPA-17bw Vaa _GPIIIa

HPA-18bw Caba _GPIa

HPA-19bw Sta GPIIIa HPA-20bw Kno GPIIb HPA-21bw Nos GPIIIa HPA-22bw Sey GPIIb HPA-23bw Hug GPIIIa HPA-24bw Cab2 GPIIb HPA-25bw Swi GPIa HPA-26bw Sec GPIIIa HPA-27bw Cab3 GPIIb HPA-28bw Var GPIIb HPA-29bw _{Khab GPIIIa}

Antígenos Plaquetários

Castro Pereira Chiba Cardone HPA-1a 98 97.9 99 100 99.5 >99.9 - 99 96.1 100 -HPA-1b 20 28.8 26.5 0.3 2 <0.15 - 14 28.8 16 -HPA-2a 97 100 99 99.2 99 - - 97 97.8 96 -HPA-2b 15 13.5 16.5 19.7 14 - - 27 20.5 24 -HPA-3a 88 81 83.5 85.1 82.5 78.5 - 83 86.9 86 -HPA-3b 54 69.8 66.5 66.2 71.5 71.9 - 47.7 52.8 58 -HPA-4a 100 100 - 100 100 >99.9 - 100 100 100 -HPA-4b 0 0 - 2 2 <0.2 - 0 0 0 -HPA-5a 98 100 99.5 99 100 99.3 - 99 99.6 100 -HPA-5b 21 19.7 10 7 4.5 17.7 - 15 16.6 35 -HPA-6a - - 100 99.7 100 - - - -HPA-6b - - 2.4 4.8 4 - - - -HPA-15a - - - 78 - - - 80 HPA-15b - - - 75 - - - 73 FINLANDESES JAPONESES

Frequências (%) de antígenos Plaquetários em diferentes populações 18,19,20,21,22

COREANOS BRASILEIROS

HOLANDESES CHINESES

AMERICANOS ALEMÃES

Antígeno

Frequência de Antígenos Plaquetários

P Metcalfe Transfusion, 2000 Castro et al European Journal ,1999 Chiba et al Transfusion Medicine, 2000 Cardone et al Transfusion Medicine, 2004 Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis,2014

 HLA Classe I

 Genes HLA-A, HLA-B, HLA-C

 Todas as células nucleadas

 Plaquetas: 50-180.000 moléculas

 Hemácias

Alto Polimorfismo (IGMT/HLA/database – 11/2016)

HLA*A: 3657 alelos HLA*B: 4459 alelos HLA*C: 3290 alelos

Freqüência Heterogenia

Antígenos Plaquetários não específicos

ABO

•Determinantes A e B presentes ancoradas nas GPs

•Expressão ABO Heterogenia em um mesmo indivíduo

HPA-1a

Ctr-Anti-A

Antígenos Plaquetários não específicos

 Naka _{– antígeno presente na Glicoproteína IV}

 Plaquetas,macrófagos, adipócitos e outros tecidos

 3-5% africanos e asiáticos são GPIV deficiente.

 Caucasianos 0,06%

 Anti-Naka

 Formado por exposição em gravidez e transfusão

.

Anticorpos plaquetários



Aloimunização

 gravidez, transfusão e transplantes



Implicação Clínica:



Trombocitopenia Neonatal Aloimune



Púrpura Pós Tranfusional

Púrpura Pós Transfusional

 Trombocitopenia grave após evento transfusional (CH, PL, PLQ)  Anticorpos dirigidos contra complexo GPIIbIIIa

 Anti-HPA-1a (80%)

 Destruição de plaquetas transfundidas e autólogas

 10-15% dos casos evolui a óbito por sangramento em SNC  Mulheres ( gravidez ou TX prévia)

 Autolimitada – 3 semanas

Trombocitopenia Neonatal Aloimune (TNAI)

 Descrita em 1953 por Moulliner

 Causada pela incompatibilidade de

antígenos plaquetários

feto-materna..

 Anticorpos antiplaquetários IgG

levam a destruição imune mediada das plaquetas fetais/neonato.

 Equivalente a DHRN

R Ahya et al. Transfusion and Apheresis Science, 2010 Kaplan, C. ISBT Science Series, 2009 Kaplan C. Immunohematology, 2007

Trombocitopenia Neonatal Aloimune (TNAI)

Quadro Clínico:  RN termo e saudável  ↓ plaquetas ao nascimento  Pétequias  Hemorragias Incidência:  1/1000 nascimentos

 50% casos na primeira gestação

R Ahya et al. Transfusion and Apheresis Science, 2010 Kaplan, C. ISBT Science Series, 2009 Kaplan C. Immunohematology, 2007

Trombocitopenia Neonatal Aloimune (TNAI)

HLA e ABO: controverso na literatura R Ahya et al. Transfusion and Apheresis Science, 2010Kaplan, C. ISBT Science Series, 2009 Kaplan C. Immunohematology, 2007

Resposta ineficaz a transfusão de Plaquetas



Causas de Refratariedade



Causas Clínicas



Causas Imunes

Refratariedade Plaquetária

ASCO (J Clin Oncology, 2001; 5:1519-1538) British Guidelines, (Br J Haematol, 2003; 122:10-23). Vassallo(Imunohematology,2009;25:119-124)

Resposta ineficaz a transfusão de Plaquetas



Causas de Refratariedade



Causas Clínicas

(60%)



Causas Imunes

(40

%)

Refratariedade Plaquetária

ASCO (J Clin Oncology, 2001; 5:1519-1538) British Guidelines, (Br J Haematol, 2003; 122:10-23). Vassallo(Imunohematology,2009;25:119-124)

Refratariedade Plaquetária



Fatores Imunes:



Ac HLA Classe I : 80 - 90%.



Ac HPAs: 10-20%.



Anti-HPA-1b : 55%



Anti-HPA-5b: 30%



Associados a HLA



Ac ABO

Diagnóstico das Trombocitopenia Aloimune



Confirmação da incompatibilidade HPA



Identificação de anticorpo anti - HPA

Genotipagem HPA



Métodos

Genotipagem em larga escala: genotipagem de um grande número de amostras e em de antígenos em um único ensaio ( bead based assay e microarray)

 banco de doadores/suporte Transfusional

Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis(2014)

Identificação de Anticorpos Plaquetários



Três diferentes linhas:



Ensaios com plaquetas intactas



Ensaios glicoproteína específicos



Ensaios de fase sólida utilizando antígenos

purificados ou recombinantes

Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis(2014)

Identificação de Anticorpos Plaquetários

Hemaglutinação Fase sólida Ag recombinante Ensaios GP Específico ↑Sensibilidade ↓Especificidade HLA/HPA/ABO Especificidade Sensibilidade ↑Especificidade ↑Sensibilidade MPHA SPRCA MAIPA ELISA –ACE BBA - LUMINEX MACE Imunofluorescência PIFT Plaquetas Intactas

Identificação de Anticorpos Plaquetários

MAIPA

Identificação de Anticorpos Plaquetários



Recomendado utilização de técnicas

 MAIPA: falsos negativos – competitividade de Acs Moab

 Anti-HPA-3: anticorpos de difícil detecção

 Falhas com técnicas de fase sólida e com utilização de soluções detergentes.  Melhores resultados em técnicas com plaquetas intactas



PIFT e MAIPA

 Lab de referência em Imunologia plaquetária

 Workshops Internacionais de plaquetas.

Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis(2014)

Síntese

 Plaquetas: Ag ABO, HLA Classe I e Ags específicos (HPA)

 Antígenos HPA: 35 antígenos em em 06 GP.

 Implicações clinicas: TNAI, PPT e RP

 TNAI e PPT: anti-HPA-1a

 RP: anti-HLA-I

 Métodos:

 Antígenos plaquetários: genotipagem

Obrigada !