COMPARAÇÃO DA CINÉTICA DE ESPERMATOZOIDES DA CAUDA DO EPIDÍDIMO COM OS OBTIDOS DO EJACULADO DE
GARANHÕES
AUTORES: Gabriel Augusto Monteiro1, Yamê Fabres Robaina Sancler
da Silva2, Carlos Ramires Neto2, Frederico Ozanam Papa3, Elisa Cristina Dobrowolski4.
1. Docente de Medicina Veterinária da Universidade Estadual do Centro-Oeste - UNICENTRO
2. Pós-graduando (a) na área de reprodução na Universidade Estadual de São Paulo - UNESP
3. Docente de Medicina Veterinária na Universidade Estadual de São Paulo - UNESP
4. Discente de Medicina Veterinária da Universidade Estadual do Centro-Oste - UNICENTRO
RESUMO: A recuperação de espermatozoides da cauda do epidídimo e sua criopreservação é um grande avanço biotecnológico, pois essa pode ser a última chance para recuperação do material genético quando ocorre morte súbita ou lesão grave em garanhões de alto valor genético. Sendo assim, o objetivo do estudo foi comparar a viabilidade e fertilidade dos espermatozoides colhidos com vagina artificial, recuperados da cauda do epidídimo. Com base nos resultados, conclui-se que o que os espermatozoides da cauda do epidídimo tem cinética espermática e integridade de membrana plasmática semelhante ao do ejaculado.
PALAVRAS-CHAVE: criopreservação espermática, epidídimo, espermatozoides.
COMPARISON OF THE KINETICS OF SPERM FROM THE TAIL OF EPIDIDYMIDIS WITH THOSE OBTAINED FROM THE EJACULATE OF
STALLIONS
ABSTRACT: The recovery of spermatozoa from the tail of epididymidis and their cryopreservation is a great advance biotechnology, because this may be the last chance for recovery of genetic material occurs when sudden death or serious injury in stallions of high genetic value. Thus, the objective of the study was to compare the viability and fertility of spermatozoa collected using an artificial vagina, recovered the tail of epididymidis. Based on the results, it is concluded that the that the sperm tail epididymidis has sperm kinetic and integrity of plasma membrane similar to the ejaculate.
KEY-WORDS: sperm cryopreservation, epididymidis spermatozoa. INTRODUÇÃO
A morte inesperada ou processos obstrutivos podem terminar prematuramente com a vida reprodutiva de garanhões de alto valor genético. Nesses casos, muitos proprietários têm buscado outras formas de colheita de sêmen na tentativa de preservar a genética valiosa destes garanhões.
A recuperação de espermatozoides do epidídimo pode ser utilizada para preservação de germoplasma de animais com processos que impossibilitam a colheita de sêmen da forma convencional. Além disso, um estudo recente mostra que os espermatozoides criopreservados colhidos da cauda do epidídimo apresentaram taxa de concepções similares aos espermatozoides do ejaculado. O presente estudo teve como objetivo comparar os parâmetros espermáticos colhidos com vagina artificial e recuperados da cauda do epidídimo imediatamente após orquiectomia.
MATERIAL E MÉTODO
Foram colhidos três ejaculados de 12 garanhões com vagina artificial. Após a coleta o ejaculado foi diluído na proporção 1:1 com o diluente Botu-Sêmen®, centrifugadas a 600xg por 10 minutos.
Posteriormente, o “pellet” ressuspendido com o diluente Botu-Crio® na concentração de 200 milhões de espermatozoides por mL.
Após o envase em palhetas de 0,5 mL, as mesmas permaneceram a temperatura de 5°C por 20 minutos. Posteriormente, foram dispostas horizontalmente a 6,0 cm do nível do nitrogênio líquido por 20 minutos e após este período, foram imersas no mesmo (PAPA et al., 2008).
Uma semana após a última colheita de sêmen, os garanhões foram submetidos à orquiectomia bilateral. Imediatamente após orquiectomia foi realizada a colheita dos espermatozoides da cauda do epidídimo pela técnica de fluxo retrógrado descrita GARDE et al. (1994).
Após a recuperação dos espermatozoides do epidídimo, a amostra recuperada da cauda do epidídimo foi congelada utilizando o mesmo protocolo descrito nos espermatozoides do ejaculado.
Os espermatozoides colhidos com vagina artificial e da cauda do epidídimo foram avaliados pelo método computadorizado – CASA imediatamente após a colheita e após descongelação a 46°C por 20 segundos (DELL’AQUA Jr. et al., 2001). Uma alíquota foi destinada à análise de integridade de membrana plasmática por microscopia de epi-fluorescência.
RESULTADO
Tabela 1. Valores médios e desvio padrão de motilidade total (MT), motilidade progressiva (MP), velocidade angular progressiva (VAP), velocidade linear progressiva (VSL), velocidade curvilínea (VCL) e espermatozoides rápidos (RAP) dos espermatozoides do ejaculado (EJ)
e dos espermatozoides recuperados da cauda do epidídimo (EP) de garanhões férteis após centrifugação e ressuspensão com diluente de congelação (M1).
Grupos MT (%) MP (%) VAP (µm/s) VSL (µm/s) VCL (%) RAP (%) EJ 70,5±11,20 35,2±8,84 97,6±7,50 77,2±5,20 175,6±11,21 58,1±13,24 EP 71,5±6,68 35,4±8,60 98,2±6,34 72,5±6,76 176,9±13,70 58,0±10,73
P 0,8314 0,9775 0,8598 0,9351 0,8447 0,9837
Os valores com letras diferentes na mesma coluna diferem entre si (p<0,05).
Tabela 2. Valores médios e desvio padrão de motilidade total (MT), motilidade progressiva (MP), velocidade angular progressiva (VAP), velocidade linear progressiva (VSL), velocidade curvilínea (VCL) e espermatozoides rápidos (RAP) dos espermatozoides do ejaculado (EJ) e dos espermatozoides recuperados da cauda do epidídimo (EP) de garanhões férteis após descongelação (M2).
Grupos MT (%) MP (%) VAP (µm/s) VSL (µm/s) RAP (%) IMP (%) EJ 54,6±14,21 27,8±10,32 91,7±6,56 74,7±5,66 165,2±6,78a 41,3±14,61 EP 59,0±6,86 26,5±5,97 93,5±4,27 74,4±5,14 175,8±14,08b 44,7±7,86
P 0,3603 0,7271 0,7502 0,8763 0,0353 0,4977
Os valores com letras diferentes na mesma coluna diferem entre si (p<0,05).
DISCUSSÃO
As tabelas 1 e 2 mostram que não houve diferença estatística entre as características seminais analisadas (MT, MP, VAP, VSL e IMP), entretanto, na tabela 3 foi observada característica de superioridade no parâmetro RAP nos espermatozoides da cauda do epidídimo quando comparado com espermatozoides do ejaculado. Esses resultados corroboram com MONTEIRO et al. (2011) que afirmou que após a centrifugação e congelação do sêmen, a motilidade espermática dos espermatozoides da cauda do epidídimo foram semelhantes as
amostras do ejaculado, sendo que no presente estudo, o RAP obteve um valor mais alto.
CONCLUSÃO
Pode-se concluir que os espermatozoides recuperados da cauda do epidídimo apresentam parâmetros de cinética espermática e integridade de membrana plasmática semelhante aos espermatozoides do ejaculado.
REFERÊNCIAS
DELL’AQUA JR., J.A.; PAPA, F.O.; ALVARENGA, M.A.; et al. Effect of packing systems and thawing temperature on spermatic parameters and fertility rate of frozen equine semen. Revista Brasileira de Reprodução
Animal, v.25 n.1, p.458-460, 2001.
GARDE, J.; AGUADO, M.; PEREZ, S.; et al. Physiological characteristics of epididymal spermatozoa from postmortem rams. Theriogenology, v.41, n.1, p. 2003, 1994.
JONES, R. Plasma membrane structure and remodeling during sperm maturation in the epididymis. J. Reprod. Fertil., v. 53, p. 73–84, 1998. MONTEIRO, G. A.; PAPA, F. O.; ZAHN, F. S.; et al. Cryopreservation and fertility of ejaculated and epididymal stallion sperm. Animal
Reproduction Science, v.127, p. 197– 201 2011.
PAPA, F.O.; MELO, C.M.; FIORATTI E.G.; et al. Freezing of stallion epididymal sperm. Animal Reproduction Science, v.107, p.293-301, 2008.
