FRANCIELE ROBERTA MALDANER
EXPRESSÃO DE ANTÍGENO RECOMBINANTE MULTIEPITOPO DO DENGUE VIRUSEM PLANTA UTILIZANDO O VETOR DE PVX
Dissertação apresentada ao programa de pós-graduação strictu senso em Ciências Genômicas e Biotecnologia da Universidade Católica de Brasília, como requisito parcial para a obtenção de título de mestre em Ciências genômicas e Biotecnologia.
Orientador: Ph.D. Tatsuya Nagata
RESUMO
MALDANER, Franciele Roberta. "Express•o de ant‡geno multiep‡topo do Dengue virus em planta utilizando vetor de PVX". 2009. 62 p‚ginas. Disserta…•o de mestrado em ciˆncias gen‰micas e biotecnologia. Universidade Cat„lica de Bras‡lia, Bras‡lia, 2009.
Nos Šltimos anos as infec…‹es pelo Dengue virus(DENV) tˆm emergido como um grande problema de saŠde pŠblica, com expans•o da distribui…•o geogr‚fica e aumento da atividade epidˆmica em regi‹es tropicais e subtropicais da Œsia, Œfrica, Amƒricas Central e do Sul. O diagn„stico da dengue tem sido realizado principalmente por tƒcnicas sorol„gicas, que permitem detec…•o de anticorpos IgM e IgG, entretanto essas tƒcnicas exigem o ant‡geno do DENV. A express•o de ant‡genos em plantas permite produ…•o em larga escala, livre de pat„genos animais e de baixo custo. Esse estudo objetivou a constru…•o de dois genes recombinantes multiepitopo que
abrangeram os quatro sorotipos do DENV e express•o em plantas com o uso de vetor de PVX. Os genes multiepitopo foram constru‡dos segundo dados de regi‹es antigˆnicas da prote‡na E descritos na literatura, englobam os quatro sorotipos do DENV que est•o fusionados em tandem por linkersde glicina na ordem 4, 3, 2 e 1. Os genes multiepitopo foram clonados no vetor de PVX pGR-2AH. Este foi modificado de forma a conter cauda de hexahistidina na regi•o 5’do gene multiepitopo seguido por seqŽˆncia codificante do polipeptideo auto catal‡tico 2A fusionados a capa protƒica do PVX. O polipeptideo 2A exerce a autoclivagem C-terminal liberando os pept‡deos multiepitopo livres da capa protƒica e associados a cauda de hexahistidina. Foram constru‡dos dois plasm‡deos, um contƒm gene multiepitopo do dom‡nio III, o outro pertence aos dom‡nios I e II. Os clones foram agroinfiltrados em plantas de N. bentamiana e
D.stramonium.Constatou-se que houve recupera…•o e replica…•o viral, entretanto com exce…•o de um clone o que abange os dom‡nios I e II, os outros dois clones sofreram dele…•o dos genes multiepitopo do genoma viral, provavelmente pelo mecanismo de Criptic intron. A express•o do dom‡nio I/II em D.stramoniumfoi confirmado com Western blotting em forma clivada da capa protƒica do PVX.
