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TIGO ORIGINAL
RESUMO
Introdução: A água é o recurso natural mais importante do pla-neta, indispensável para a manutenção da vida de todos os seres vivos. Porém, ela pode veicular muitos microrganismos nocivos à saúde humana.
Objetivo: Avaliar e identificar a presença de coliformes totais e termotolerantes na água e nas torneiras de bebedouros escolares.
Métodos: Trata-se de uma pesquisa quali-quantitativa, na qual foram coletadas cinco amostras de água em tubos de ensaio e cinco amostras de esfregaço em superfície de torneiras por meio de swabs. As análises de água foram avaliadas segundo a Instrução Normativa N° 62 do Ministério da Agricultura, obedecendo a uma série de diluições de proporções 10-1, 10-2 e 10-3. Essas amostras foram submetidas à prova presuntiva de coliformes totais, sendo inoculadas em Caldo Lauril Sulfato de Sódio em concentrações simples e dupla, e em se-guida, foram incubadas a 36 ± 1º C por 24/48 horas. Os esfregaços das torneiras foram semeados em placas de Petri em ágar sangue e ágar MacConkey, e posteriormente incubados a 36 ± 1º C, por 24/48 horas. Essas placas foram submetidas aos testes de catalase, coloração de Gram e coagulase.
Resultados: Das amostras analisadas nenhuma apresentou contaminação por coliformes totais ou termotolerantes, embora as amostras de superfície de torneiras apresentaram contaminação por Staphylococcus aureus em 25% das amostras, Staphylococcus sp em 37,5% das amostras e Bacilos-Gram-Positivos em 37,5% das amostras.
Conclusão: Todas as amostras de água estavam em conformidade com a Portaria nº 2914/2011 do Ministério da Saúde. Contudo, é importante ressaltar que as torneiras não apresentaram resultados satisfatórios quanto à presença de microrganismos, tendo em vista que estes microrganismos podem ser patógenos à saúde humana.
Palavras‑chave: Coliformes totais; Termotolerantes; Água.
Água e Bebedouros de Uma Escola Pública no Gama ‑ Distrito Federal
Microbiological Evaluation of Total and Thermotolerant Coliforms in the Water
and Drinking Fountains of a Public School in Gama ‑ Distrito Federal
Juliana Arruda dos Santos1; Joaquim Xavier da Silva1,2; Antônio José de Rezende2
1 Curso de Ciências Biológicas, Universidade Paulista – UNIP, Campus Brasília – DF. 2 Curso de Nutrição, Universidade Paulista – UNIP, Campus Brasília – DF.
Correspondência:
Prof. MSc. Joaquim Xavier da Silva. SEPS 712/912. Lote C. Bloco C. Apartamento 121. Asa Sul. E-mail: joaquimbio@gmail.com Recebido em: 03/04/2014.
ABSTRACT
Introduction: Water is the most important natural resource of the planet and is essential for sustaining the life of all living beings. However, it can also serve many microorganisms harmful to the hu-man health.
Objective: To evaluate and identify the presence of total and ther-motolerant coliforms in the water and faucets of drinking fountains of a school.
Methods: This is a qualitative and quantitative research, which collected five water samples in test tubes and five samples of smear in the surface of faucets by means of swabs. The water samples were evaluated according to Normative Instruction 62 of Brazil’s Ministry of Agriculture, following a series of 10-1, 10-2 e 10-3 dilutions. These samples were subjected to the test of presumptive coliforms, which were inoculated in Sodium Lauryl Sulfate concentrations in single and double concentrations, and were then incubated at 36 ± 1 º C for 24/48 hours. The smears of the taps were sown in Petri dishes on blood agar and MacConkey agar, then incubated at 36 ± 1 º C for 24/48 hours. These dishes were tested for catalase, Gram staining
and coagulase.
Results: None of the analyzed samples presented contamination by total or thermotolerant coliforms, although the faucet surfaces were contaminated by Staphylococcus aureus in 25% of the samples, Staphylococcus sp in 37.5% of the samples and Gram-Positive Bacillus in 37.5% of the samples.
Conclusion: All water samples were in conformity with Ordinance 2914/2011 of the Ministry of Health. However, it is important to note that the faucets did not present satisfactory results as to the presence of microorganisms, considering that these microorganisms can be pathogenic to human health.
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TIGO ORIGINAL
INTRODUÇÃO
A água é o recurso natural mais importante do planeta, indispensável para manutenção da vida de todos os seres vivos. O constante con-tato com a água facilita com que parasitas ma-croscópicos e mima-croscópicos atinjam o homem e que nele se desenvolvam1,2. Embora a água
seja um recurso indispensável à vida, ela pode veicular muitos microrganismos nocivos à saúde humana3.
No final do século XIX e início do século XX, a água se tornou uma questão de interesse para a saúde pública. Anteriormente a qualidade da água era associada apenas a aspectos estéticos e sensoriais como cor, gosto e odor4.
A qualidade de vida humana está relaciona-da à qualirelaciona-dade relaciona-da água em que bebem, por ser importante na preparação de alimentos, manu-tenção de higiene pessoal e utensílios de limpeza. O acesso à água potável é fundamental para se obter boas condições de saúde, portanto, a água potável não pode ter quaisquer patógenos que possam lesar os organismos humanos. Patógenos como bactérias, vírus e protozoários são capazes de causar doenças em seres humanos, através da ingestão de alimentos ou água contaminada5.
É necessário reconhecer o papel decisivo da água no desencadeamento direito e indireto de uma grande quantidade de patologias, e no con-dicionamento da mortalidade geral e em especial a infantil, na maioria dos países em desenvolvi-mento6. Estima-se que as doenças transmitidas
pela água sejam responsáveis por mais de dois milhões de mortes ao ano, principalmente entre crianças menores de cinco anos7.
A contaminação do sistema público de abas-tecimento de água é detectada pela presença de coliformes na água. Em um sentido geral, o termo “coliforme” inclui Escherichia coli, Ente‑
robacter e Klebsiella8. Embora o habitat dessas
bactérias seja o trato intestinal do homem e de outros animais, exemplos como Enterobacter e Klebsiella podem persistir longos períodos e se multiplicar em ambientes não fecais9.
Colifor-mes totais são também encontrados no solo e nos vegetais, possuindo relativa capacidade de se multiplicarem na água10.
Os coliformes termotolerantes são bactérias de um subgrupo dos coliformes totais que
fer-mentam lactose a 44,5º C ± 0,2º C em 24 horas e têm a Escherichia coli como principal repre-sentante de origem exclusivamente fecal11. Os
coliformes termotolerantes não se multiplicam com facilidade no ambiente externo, embora se-jam capazes de sobrevier de modo semelhante às bactérias patogênicas, evidenciando, portanto, indicadores de contaminação fecal10.
A Portaria nº 2914/2011 do Ministério da Saúde estabelece, entre outros parâmetros, a análise de coliformes totais, termotolerantes ou Escherichia coli e de bactérias heterotróficas para análise de água para consumo humano em toda e qualquer situação12. De acordo com essa
Por-taria, a água potável deve apresentar ausência de coliformes termotolerantes ou Escherichia colie ausência de coliformes totais em 100 mL de amostra12.
Portanto, entende-se por água potável, aque-la de consumo humano, cujos aspectos micro-biológicos atendam ao padrão de potabilidade que não ofereça riscos à saúde13,14.
O objetivo dessa pesquisa foi avaliar os as-pectos microbiológicos da água e das superfícies de torneiras de bebedouros quanto à presença de coliformes totais, termotolerantes, bem como outros microrganismos associados, de uma esco-la pública no Gama - Distrito Federal.
MATERIAL E MÉTODOS
Trata-se de uma pesquisa quali-quantitativa, onde foram avaliados os aspectos microbioló-gicos de dois bebedouros do Centro Educacio-nal 06 do Gama- Distrito Federal. As amostras, tanto de água quanto de superfície de torneiras foram coletadas dia 16 de outubro de 2013, às 15h30min horário de intervalo das aulas, onde há uma maior manipulação dos bebedouros. A escola possui dois bebedouros, um deles goza de três torneiras e o outro de duas. As tornei-ras foram denominadas de T1, T2, T3, T4 e T5. Assim como as amostras de água, que foram de-nominadas de Am1, Am2, Am3, Am4 e Am5. As amostras de água e superfície de torneira são correspondentes, ou seja, a amostra de superfície de T1 é correspondente à amostra de água Am1 e assim sucessivamente.
Foram coletados cerca de 100 mL de água de cada torneira supracitada em tubos de ensaio
com tampa autoclavados e com toda a assepsia correta, uso de luvas e jaleco. As coletas da su-perfície das torneiras foram realizadas por meio de swabs com meio Stuart. Ambas as amostras foram acondicionadas em caixa de isopor com gelo e levadas imediatamente ao Laboratório de Microbiologia da Universidade Paulista - UNIP. Os parâmetros para qualidade de água uti-lizados neste trabalho estão de acordo com a Portaria nº. 2914 do Ministério da Saúde, esta por sua vez, estabelece que a água para consumo humano esteja livre de coliformes totais, termo-tolerantes e Escherichia coli12.
As análises microbiológicas da água foram realizadas de acordo com a Instrução Normativa (IN) nº 62 do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento15. As amostras de água foram submetidas à série de diluições nas seguintes proporções: 10-1, 10-2 e 10-3, na prova pre-suntiva para coliformes totais. Onde na primeira série de três tubos, foram inoculados 10 mL da amostra em 10 mL de Caldo Lauril Sulfato de Sódio em concentração dupla, dentro de tubos de ensaio com tubos de Durhan invertidos. Na segunda série de três tubos, foram inoculadas 1 mL da amostra em 10 mL de Caldo Lauril Sulfa-to de Sódio em concentração simples, em tubos de ensaio com tubos de Durhan invertidos. Na terceira série de três tubos, foram inoculados 1 mL da diluição 10-1 em 10 mL de Caldo Lauril Sulfato de Sódio em concentração simples, em tubos de ensaio com tubos de Durhan invertidos.
Esse procedimento foi realizado em todas as amostras e posteriormente foram incubadas em estufa bacteriológica a 36 ± 1º C por 24/48 horas. A presença de coliformes totais é eviden-ciada pela formação de gás dentro dos tubos de Durhan, a leitura dos tubos pode ser feita após 24 horas, mas somente os tubos positivos são considerados, os demais devem ser incubados por mais 24 horas.
As amostras de superfície das torneiras foram semeadas em placas de Petri contendo ágar san-gue e ágar MacConkey e incubadas em estufa bacteriológica a 36 ± 1º C por 24/48 horas. As placas de Petri que apresentaram crescimento bacteriano foram repicadas em novas placas con-tendo o mesmo meio de cultura, pois algumas placas apresentavam mais de uma colônia de bactéria, foram levadas a estufa bacteriológica por mais 24/48 horas. Aquelas que
apresenta-vam crescimento bacteriano foram submetidas ao teste da Catalase, que consiste em um teste para avaliar a presença de Staphylococcus, pois esse gênero de bactéria na presença do peróxi-do de hidrogênio (H2O2) consegue quebrar esta reação, formando uma molécula de água (H20)
e uma molécula de oxigênio (02), evidenciado pela presença de bolhas imediatamente quando a bactéria é exposta ao peróxido de hidrogênio. Após a evidência de Staphylococcus na prova da catalase, as amostras foram submetidas ao teste da coagulase (Staphy test), para identificar a pre-sença de Staphylococcus aureus, pois essa enzima interage com o reagente citado e coagula o meio.
O último teste realizado foi a coloração de Gram, para identificar as bactérias quanto suas paredes celulares, aquelas coradas em púrpu-ra são as bactérias gpúrpu-ram positivas, já as copúrpu-radas em vermelho são as gram negativas. O software Microsoft® Excel 2010 foi usado para a análise dos dados e ilustração dos resultados.
RESULTADOS
Todas as amostras analisadas neste estudo, tanto de água quanto de torneira não apresen-taram nenhuma contaminação por coliformes totais ou termotolerantes (Tabela I).
Tabela I ‑ Resultados das análises de água e torneiras do Centro Educacional 06 do Gama ‑ Distrito Federal. Outubro/2013.
Amostras Coliformes Totais TermotolerantesColiformes
Torneiras T 1 Ausente Ausente T 2 Ausente Ausente T 3 Ausente Ausente T 4 Ausente Ausente T 5 Ausente Ausente Água Am 1 Ausente Ausente Am 2 Ausente Ausente Am 3 Ausente Ausente Am 4 Ausente Ausente Am 5 Ausente Ausente Total 0 0
Fonte: Os próprios autores.
Não houve formação de gás nos tubos de Durhan em nenhuma das etapas de diluições, portanto não foi necessário realizar a prova
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confirmativa para coliformes totais e termoto-lerantes. Entretanto, as placas com ágar sangue que foram repicadas, perfazendo um total de oito placas, evidenciaram crescimento bacte-riano.
De acordo com as análises realizadas no La-boratório de Microbiologia da UNIP, desse total de oito placas com ágar sangue, 25% são Sta‑ phylococcus aureus, 37,5% são Staphylococcus sp e 37,5% são bacilos gram positivos (Figura 1). Embora estes bacilos obtiveram resultado po-sitivo para o teste da catalase foi possível obser-var na coloração de Gram que não se tratavam de Staphylococcus. As demais bactérias foram também avaliadas através dos testes de catalase, coagulase e coloração de Gram (Tabela II).
Figura 1 ‑ Percentual das bactérias encontradas em placas com ágar sangue em bebedouros do Centro Educacional 06 do Gama ‑ Distrito Federal. Outubro/2013.
Fonte: Os próprios autores.
Tabela II ‑ Resultados das bactérias encontradas em ágar sangue em bebedouros do Centro Educacional 06 do Gama ‑ Distrito Federal. Outubro/2013.
Amostras
(n=8) SangueÁgar Catalase Coagulase Coloração de Gram
T1 As. 1 + ‑ CGP T1 As. 2 + ‑ CGP T2 As. 1 + ‑ CGP T2 As. 2 + ‑ BGP T2 As. 3 + ‑ BGP T4 As. 1 + + CGP T4 As. 2 + ‑ BGP T5 As. 1 + + CGP
Nota: As.= Ágar sangue; BGP= Bacilos Gram Positivos; CGP= Cocos Gram Positivos. Fonte: Os próprios autores.
DISCUSSÃO
Por limitação de pesquisa não se conseguiu chegar ao gênero dos bacilos gram positivos encontrados, porém, há uma hipótese de que possam ser bactérias do gênero Corynebacterium, pois através da coloração de Gram observou-se que a morfologia dos bacilos encontrados é se-melhante à morfologia desse gênero de bactéria (Figura 2).
(A) Suspeita de Corynebacterium
(B) Corynebacterium.
Figura 2 ‑ Morfologia vista em coloração de Gram do achado bacteriano no presente estudo (A) e Corynebacterium (B).
Fonte: (A) Autores e (B) Microbiologia Médica e Imunologia (Warren8).
Embora as amostras não tenham apresentado contaminação por coliformes totais ou termoto-lerantes, o número das demais bactérias encon-tradas é relevante, visto que, segundo Warren8, as bactérias do gênero Staphylococcus podem causar diversas doenças. São três principais es-pécies, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis e Staphylococcus saprophyticus.
Sendo Staphylococcus aureus a mais impor-tante como patógeno humano, pois esta pode desencadear doenças como abscessos, infecções piogênicas, intoxicação alimentar, síndrome da pele escaldada, síndrome do choque tóxico,
sep-ticemias, infeções em feridas cirúrgicas e infec-ções cutâneas. As demais espécies de Staphy‑ lococcus podem causar endocardites, infecções em articulações prostéticas e infecções do trato urinário.
Por limitações de pesquisa, os demais gêne-ros de Staphylococcus encontrados nesta pesqui-sa não puderam ter sua espécie confirmada.
Burgos et al13 mostraram resultados
seme-lhantes aos obtidos nesta pesquisa. Ao avalia-rem bacteriologicamente a qualidade das águas de bebedouros da Faculdade Estadual de Lon-drina-PR, obtiveram resultados negativos para coliformes totais e termotolerantes em todas as amostras.
Cruz et al3 ao realizarem análise
microbioló-gica da água em estabelecimentos da educação infantil da rede pública no Gama-DF obtiveram ausência de coliformes totais e termotolerantes em todas as amostras analisadas.
Zulpo et al10 ao analisarem a qualidade
mi-crobiológica da água consumida nos bebedou-ros da Universidade Estadual de Guarapuava-PR, concluíram que, de 47 amostras avaliadas, 8,5% apresentavam resultado positivo para coliformes totais e 2% para coliformes termotolerantes.
Fortuna et al9 ao analisarem
microbiologica-mente a água dos bebedouros da Universidade Federal de Juiz de Fora- MG, demonstraram que em 2,78% de suas amostras apresentavam coli-formes totais e termotolerantes.
Dentre os dados apresentados de avaliação microbiológica da água, foi possível observar uma divergência entre os resultados, apontando que a contaminação pode ser devido aos méto-dos de conservação da água, sua má distribuição e falta de manutenção dos filtros podem ser tam-bém um indicativo de contaminação.
CONCLUSÃO
A partir dos resultados obtidos nesta pesqui-sa, pode-se concluir que todas as amostras de água e torneira encontram-se de acordo com a Portaria nº 2914 do Ministério da Saúde, sen-do assim, apropriadas para o consumo humano. Embora não haja contaminação por coliformes totais e termotolerantes, o número de bactérias encontradas, em maior quantidade o gênero Staphylococcus, é relevante, visto que, essas bactérias podem ser patogênicas aos seres hu-manos. Portanto, tem-se a necessidade de um monitoramento quanto à qualidade microbio-lógica dos bebedouros e alertar a comunidade escolar quanto à profilaxia correta das torneiras dos bebedouros avaliados.
CONFLITOS DE INTERESSE
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REFERÊNCIAS
1. Cabral JPS. Water microbiology: bacterial patho-gens and water. Int J Environ Res Public Health 2010; 7(10): 3657–3703.
2. Carvalho HF, Recco-Pimentel SM. Moléculas im-portantes para a compreensão da célula e do seu funcionamento. In: A célula. 2. ed. São Paulo: Ma-nole, 2007, p.7-28.
3. Cruz JBF, Cruz AMS, Resende A. Análise microbio-lógica da água consumida em estabelecimentos da educação infantil da rede pública do Gama, DF. Sa-Bios -Revista de Saúde e Biologia 2009; 4(1):21-23. 4. Freitas MB, Freitas CM. A vigilância da qualidade da água para consumo humano: desafios e perspec-tivas para o Sistema Único de Saúde. Ciênc. saúde coletiva 2005; 10(4):993-1004.
5. Alves NC, Odorizzi AC, Goulart FC. Análise micro-biológica de Águas Minerais e de Abastecimento de Água potável, Marília, SP. Rev Saúde Pública 2002; 36(6):749-751.
6. Augusto LGS, Gurgel IGD, Câmara Neto HF, Melo CH, Costa AM. O contexto global e nacional fren-te aos desafios do acesso adequado à água para consumo humano. Ciênc. saúde coletiva 2012; 17(6):1511-1522.
7. Tortora GJ, Funke BR, Case CL. Microbiologia. 8ª ed. Porto Alegre: Artmed, 2005.
8. Warren L. Microbiologia Médica e Imunologia. 10ª ed. Porto Alegre: Artmed, 2010.
9. Fortuna JL, Rodrigues MT, Souza SL, Souza L. Análise microbiológica da água dos bebedouros do campus da Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF): coliformes totais e termotolerantes.Revista Higiene Alimentar 2007; 21(153):102-105.
10. Zulpo DL, Peretti J, Ono LM, Garcia JL. Avaliação microbiológica da água consumida nos bebedou-ros da Universidade Estadual do Centro-Oeste, Guarapuava, Paraná, Brasil. C Agrárias 2006; 27(1):107-110.
11. Michelina AF, Bronharoa TM, Daréb F, Ponsanoc EHG. Qualidade microbiológica de águas de sistemas de abastecimento público da região de Araçatuba, SP. Revista Higiene Alimentar 2006; 20(147): 90-95.
12. Brasil. Ministério da Saúde. Secretaria de Vigi-lância Sanitária. Portaria nº. 2914 de 12 de De-zembro de 2011. Diário Oficial da União, Brasília, 2011. Disponível em: <http://bvsms.saude.gov.br/ bvs/saudelegis/gm/2011/prt2914_12_12_2011. html>. Acesso em: 10 set. 2013.
13. Seco BMS, Burgos TN, Pelayo JS. Avaliação bac-teriológica das águas de bebedouros do campus da Universidade Estadual de Londrina – PR. Se-mina: Ciências Biológicas e da Saúde 2012; 33( 2):193-200.
14. Coelho DA, Silva PMF, Veiga SMOM, Fiorini JE. Avaliação da qualidade microbiológica de águas minerais comercializadas em supermercados da cidade de Alfenas, MG. Revista Higiene Alimentar 2007; 21(151): 88-92.
15. Brasil. Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Secretaria de Defesa Agropecuá-ria (DISPOA). Instrução Normativa nº 62, de 26 de agosto de 2003. Disponível em: < http://www. legisweb.com.br/legislacao/?id=75773>. Acesso em: 26 ago 2013.
