Aspectos fotomorfogênicos, bioquimicos e citoquímicos durante a germinação de cyathea delgadii sternb.

Á U R E A M A R I A R A N D I A S P E C T O S F O T O M O R F O G E N I C O S , B I O Q U Í M I C O S E C I T O Q U I M I C O S D U R A N T E A G E R M I N A Ç Ã O DE E S P O R O S DE C y a t h e a d e l g a d í A STE R N B . T e s e a p r e s e n t a d a ao I n s t i t u t o de B i o l o g i a d a U n i v e r s i d a d e E s t a d u a l de C a m p i n a s , p a r a o j ) t e n ç ã o do t T t u l o de . D O U T O R E M C I Ê N C I A S , ' O R I E N T A D O R : P R O F . B R . G I L M A R T I N S F E L I P P E C A M P I N A S - SP 1 9 8 7

I N D I C E -. P ã g i n a s I N T R O D U Ç Ã O ... 1 O B J E T I V O S . ... 1 0 M A T E R I A I S E M É T O D O S ... 11 1. M é t o d o s G e r a i s ... 12 1.1 - P a d r o n i z a ç ã o da a m o s t r a g e m p a r a a c o n t j i g e m de e s p o r o s ... 13 2. F o t o m o r f o g ê n e s e ... 15 2. 1 ' - L u z v e r m e l h a n a d e t e r m i n a ç ã o do p e r í o d o de p r é - i n d u ç ã o e t r a t a m e n t o s m ú l t i p l o s ; r e v e r s ã o v e r m e l h o - v e r m e l h o e x t r e m o . . . 15 2 .2 - T r a t a m e n t o s l u m i n o s o s de l o n g a d u r a ç ã o . 17 2 . 3 - L u z a z u l ...I 8 2 . 4 - E s p e c t r o f o t o a c ú s t i c o de e s p o r o s e p a r e ­ d e s de e s p o r o s ... 19 2 . 5 - E f e i t o de t e m p e r a t u r a n a p r é - i n d u ç ã o . . 20 2 . 6 - P r é - e m b e b i ç ã o em v a p o r de á g u a ... 23 3. P r é - e m b e b i ç ã o em s o l u ç ã o o s m o t i c a de p o l i e t i l e ; n o g l i c o l ... 24 4. E f e i t o de D C M U ... 25 5. ■ P e s o f r e s c o e p e s o s e c o ... 25 6. E x t r a ç õ e s e d o s a g e n s ...27 6 .1 - E x t r a ç ã o e d o s a g e m de l i p í d i o s ... 27 6 . 1 . 1 - E s p e c t r o de t r a n s m i s s ã o de luz, do Õ l e o de e s p o r o s ...28

P ã g i n a s 6, 1.2 - A n a l i s e d o s á c i d o s g r a x o s p o r c r o m a t o g r a f i a g a s o s a ... 29 6 . 2 - E x t r a ç ã o . e d o s a g e m de c l o r o f i l a . . . . . 30 6 . 3 - E x t r a ç ã o e • d o s a g e m - de p r o t e í n a s - s o l ú v e i s - . 32 6 . 4 - E x t r a ç ã o è • d o s a g e m de a ç ú c a r e s s o l ú v e i s t o t a i s , a ç ú c a r e s r e d u t o r e s e a m i d o ... 33 6 . 4 . 1 - D o s a g e m • de a ç ú c a r e s s o l ú v e i s t o ­ t a i s ... 34 6 . 4 . 2 - D o s a g e m de a ç ú c a r e s r e d u t o r e s . . 34 6 . 4 . 3 - D o s a g e m de a m i d o ... 35 7. Gi t o q u T m i c a ... 36 7.1 - M é t o d o s g e r a i s e c i t o q u T m i c o s p a r a d e t e £ m i n a ç õ e s q u a l i t a t i v a s . ... 37 7 . 2 - D i g e s t õ e s e n z i m ã t i c a s p a r a a e x t r a ç ã o de p r o t e í n a s ... -... 38 8. A n á l i s e e s t a t í s t i c a . .. . ... 39 R E S U L T A D O S ... 41 1. P a d r o n i z a ç ã o da a m o s t r a g e m p a r a a c o n t a g e m de e s p o r o s d u r a n t e a g e r m i n a ç ã o ... 41 2. F o t o m o r f o g ê n e s e ... 41 - G e r m i n a ç ã o s o b luz b r a n c a ... 41 - D e t e r m i n a ç ã o do p e r í o d o de p r é - i n d u ç ã o ... 44 - R e v e r s ã o v e r m e l h o - v e r m e l h o e x t r e m o ... 49 - T r a t a m e n t o s l u m i n o s o s de l o n g a d u r a ç ã o ... 52 - T r a t a m e n t o s c o m lu z a z u l ... 64 E s p e c t r o f o t o a c ú s t i c o de e s p o r o s s e c o s e p a

-P á g i n a s r e d e s de e s p o r o s ... 67 - E f e i t o de t e m p e r a t u r a ... 70 - P r é - e m b e b i ç ã o em v a p o r de a g u a d u r a n t e u m a s e m a n a ... 83 3. P r é - e m b e b i ç ã o e m " s o l u ç ã o o s m õ t i c a de p o l i e t i l e " n o g 1 i co 1 ... 97 4. E f e i t o de D C M U ... 99 5. P e s o f r e s c o e p e s o s e c o ... 99 6. E x t r a ç õ e s e d o s a g e n s ... 102 - L i p í d i o s ... 102 - C l o r o f i 1 a ... 110 - P r o t e í n a s s o l ú v e i s ... 114 - A ç ú c a r e s s o l ú v e i s t o t a i s ... 114 - A ç ú c a r e s r e d u t o r e s ... 117 - A m i d o ... ...■... 122 7. A s p e c t o s . c i t o q u í m i c o s ... 125 P R I N C I P A I S C O N C L U S Ü E S ... 1 3 6 D I S C U S S Ã O ... 1 3 9 R E S U M O ... " . . • 174 R E F E R E N C I A S B I B L I O G R Á F I C A S 178

Í N D I C E D E T A B E L A S -T A B E L A 1 T A B E L A 2 T A B E L A 3 T A B E L A 4 T A B E L A 5 T A B E L A 6 T A B E L A 7 T A B E L A 8 T A B E L A 9 T A B E L A 1

Pa g inas

P a d r o n i z a ç ã o de ' a m o s t r a g e m para c o n t a g e m

de e s p o r o s dura n t e a g e r m i n a ç ã o de

.'Cya- t h e a d e l g a d i i...

42

E f e i t o de t r a t a m e n t o s l u m i n o s o s de curt a

duração, na g e r m i n a ç a o de e s p o r o s de

Cya_ t h e a d e l g a d i i 3

após um p e r T o d o de

48

h o ­

ras de e m b e b i ç ã o no escu r o ...

45

D e t e r m i n a ç ã o do p e r T o d o de p r é - i n d u ç ã o

p a r a e s p o r o s de

C y a t h e a d e l g a d i i . . . .

46

G e r m i n a ç ã o sob luz b r a n c a c o n s t a n t e e

apÕs t r a t a m e n t o de 1 m i n u t o de luz verrm;

lha (fonte b) r e a l i z a d o depo i s do p e r T o ­

do de pri-i ndu çao , p a r a e s p o r o s de

C y a ­

t h e a d e l g a d i i...

48

R e v e r s ã o do efei t o da luz v e r m e l h a de 1

m i n u t o ’

de duraçao, pelo v e r m e l h o extremo,

na g e r m i n a ç ã o de e s p o r o s de

C y a t h e a d e l ­

g a d i i ... 5 3

E f e i t o de t r a t a m e n t o s de luz azul de 1

m i n u t o de d uraçao (únicos e diãr i o s ) e de

t r a t a m e n t o s _ l o n g o s

(24, 48

e

120 -

horas)

na g e r m i n a ç a o de es p o r o s de

C y a t h e a d e l ­ g a d i i j

a

25° C ... ... 66

E f e i t o de t e m p e r a t u r a s d u r ante o p e r T o d o

de pré -indução, na g e r m i n a ç a o de espo r o s

de

C y a t h e a d e l g a d i i 3

que r e c e b e r a m t r a t a

m e n t o de 2 m i n u t o de luz v e r m e l h a apos a

p ré-i n d u ç a o ...

71

E f e i t o de t e m p e r a t u r a s d u r ante o p e r T o d o

de pré- indução, na g e r m i n a ç a o de

C y a t h e a d e l g a d i i 3

que r e c e b e r a m t r a t a m e n t o s diã-

rios de 1 m i n u t o de luz vermelha, i n t e r ­

c a l a d o s por p e r T o d o s de

24

h o r a s de escjj

r o ...

73

- E f e i t o d e _ t e m p e r a t u r a s _ _ d u r a n t e _ o s p e r T o ­

dos de p r é - i n d u ç ã o e pÕs- ind uça o, sobre

a g e r m i n a ç a o de e s p o r o s de

C y a t h e a delga_

d i i

que r e c e b e r a m t r a t a m e n t o de 1 m i n u t o

de luz vermelha, após a pré-in duç ão. . .

75

D- E f e i t o de t e m p e r a t u r a s ~ d u r a n t e os p e r T o ­

dos de p r é - i n d u ç ã o e p Õ s - i n d u ç ã o , na g e r ­

m i n a ç ã o de e s p o r o s de

C y a t h e a d e l g a d i i 3

que r e c e b e r a m t r a t a m e n t o s d i á r i o s de 1

m i n u t o de luz vermelha, i n t e r c a l a d o s por

P ã g i n a s T A B E L A T A B E L A T A B E L A T A B E L A T A B E L A T A B E L A T A B E L A T A B E L A T A B E L A 11 - E f e i t o de a l t e r n â n c i a de t e m p e r a t u r a s em c i c l o s de 8 - 1 6 h o r a s d u r a n t e a p r é - i n d j j çao, n a g e r m i n a ç a o de e s p o r o s de C y a t h e a ã e l g a ã i i q u e r e c e b e r a m t r a t a m e n t o _ d e 1 m i n u t o de l u z v e r m e l h a , a p o s a p r é - i n d j u ç a o ... 78 12 - E f e i t o de a l t e r n â n c i a de t e m p e r a t u r a s em c i c l o s de 12-12 h o r a s , d u r a n t e a p r é - i j i d u ç a o , n a g e r m i n a ç a o de e s p o r o s de C y a ­ t h e a ã e l g a ã i i q u e r e c e b e r a m t r a t a m e n t o de 1 m i n u t o de l u z v e r m e l h a , a p ó s a p r é - i n d u ç ã o ... 79 13 -■ E f e i t o de a l t e r n â n c i a de t e m p e r a t u r a s em c i c l o s de 1 6 - 8 h o r a s , d u r a n t e a p r é - i n - d u ç ã o , n a g e r m i n a ç ã o de e s p o r o s de C y a ­ t h e a ã e l g a ã i i 3 q u e r e c e b e r a m t r a t a m e n t o de 1. m i n u t o de luz v e r m e l h a , a p o s a p r é - i n d u ç ã o ... ■... 80 14 - E f e i t o de a l t e r n â n c i a de t e m p e r a t u r a s em c i c j o s de 8 - 1 6 h o r a s , d u r a n t e a p r é - i n - d u ç a o e p õ s - i n d u ç ã o , n a g e r m i n a ç a o de e s p o r o s de C y a t h e a ã e l g a ã i i , q u e r e c e b " r a m t r a t a m e n t o de 1 m i n u t o de luz v e r r n e l h a a p ó s a p r é - i n d u ç ã o ... 82 15 - E f e i t o de a l t e r n â n c i a de temperaturas" em c i c l o s d e _ 12- 12 h o r a s , d u r a n t e a p r ê - i j n d u ç ã o e p õ s - i n d u ç ã o , n a g e r m i n a ç ã o de e s p o r o s de C y a t h e a ã e l g a ã i i 3 q u e recebjí r a m t r a t a m e n t o de 1 m i n u t o de l u z v e r r n e l h a a p o s a p r é - i n d u ç ã o ... 84 16 - E f e i t o de a l t e r n â n c i a de temperaturas em c i c l o s de 1 6 - 8 h o r a s , d u r a n t e a p r é - i n ­ d u ç ã o e p Õ s - i n d u ç a o , n a g e r m i n a ç ã o de e s p o r o s de C y a t h e a ã e l g a ã i i , q u e recebjs r a m t r a t a m e n t o de 1 m i n u t o de l u z verm" l h a a p õ s a p r é - i n d u ç ã o ... 85 17 - E f e i t o de D C M U , n a g e r m i n a ç ã o de e s p o ­ r o s de C y a t h e a ã e l g a ã i i s o b 1 uz f l u o r e s _ c e n t e b r a n c a . c o n s t a n t e , a 25° C... 100 18 - P e s o f r e s c o e p e s o s e c o de e s p o r o s s e ­ c o s (dia z e r o ) de C y a t h e a ã e l g a ã i i e a p õ s 7 e 14 d i a s de g e r m i n a ç a o s o b luz f l u o r e s c e n t e b r a n c a c o n t í n u a , a 25°C. . 101 19 - R e l a ç ã o e n t r e c o n t e ú d o de l i p í d i o e p e ­ so s f r e s c o s e s e c o ( d a d o s da t a b e l a 18) em e s p o r o s s e c o s de C y a t h e a ã e l g a ã i i e a p õ s 7 e 14 d i a s de g e r m i n a ç a o s o b luz f l u o r e s c e n t e b r a n c a c o n t í n u a , a 25°C. . 104 T A B E L A 20 - C o m p o s i ç ã o de ã c i d o s g r a x o s do Õ l e o de e s p o r o s s e c o s de C y a t h e a ã e l g a ã i i . . . 109

P ã g i n a s T A B E L A T A B E L A T A B E L A T A B E L A T A B E L A 21 - R e l a ç ã o e n t r e c o n t e ú d o de c l o r o f i l a e p e s o s f r e s c o e s e c o ( d a d o s da t a b e l a 18) e m __ e s p o r o s s e c o s de C y a t h e a d e l g a d i i e a p Õ s 7 e 14 d i a s de g e r m i n a ç a o s o b luz f l u o r e s c e n t e b r a n c a c o n t í n u a , a 25°C. . 113 22 - R e l a ç ã o e n t r e c o n t e ú d o de p r o t e í n a e pe s o s f r e s c o e s e c o ( d a d o s da t a b e l a 18j em e s p o r o s s e c o s de C y a t h e a d e l g a d i i e a p Õ s 7 e 14 d i a s de g e r m i n a ç ã o s o b luz f l u o r e s c e n t e b r a n c a c o n t i n u a , a 25°C. . 116 23 - R e l a ç ã o e n t r e c o n t e ú d o de a ç ú c a r e s soljj v e i s t o t a i s e p e s o s f r e s c o e s e c o ( d a d o s ■ da t a b e l a 18), em e s p o r o s s e c o s de C y a ­ t h e a d e l g a d i - i e a p ó s 7 e 14 d i a s de ge_r m i n a ç ã o s o b luz f l u o r e s c e n t e b r a n c a co_n t T n u a , a 25°C. ... 119 24 - R e l a ç ã o e n t r e c o n t e ú d o de a ç ú c a r e s redjj t o r e s e p e s o s f r e s c o e s e c o ( d a d o s da t a b e l a 18), e m e s p o r o s s e c o s de C y a t h e a d e l g a d i i e a p ó s 7 e 14 d i a s de g e r m i n a ­ ç ã o s o b luz f l u o r e s c e n t e b r a n c a c o n t í ­ nua, a 2 5 0 C ... 121 25 - R e l a ç ã o e n t r e c o n t e ú d o de a m i d o e p e s o s f r e s c o e s e c o ( d a d o s da t a b e l a 18), em e s p o r o s s e c o s de C y a t h e a d e l g a d i i e após 7 e 14 . d i a s de g e r m i n a ç ã o s o b luz f l u o ­ r e s c e n t e b r a n c a c o n t í n u a , a 25°C. . . . 124

Í N D I C E D E F I G U R A S -F I G U R A F I G U R A F I G U R A F I G U R A F I G U R A F I G U R A F I G U R A F I G U R A F I G U R A F I G U R A F I G U R A F I G U R A F I G U R A P ã g i n a s 1 - E s p e c t r o de t r a n s m i s s a o d o s p a p é i s c e l o ­ f a n e v e r m e l h o e a z u l n a f a i x a c o m p r e e n d j " d a e n t r e 4 0 0 a 8 0 0 ... 14 2 - D i a g r a m a do e s p e c t r ô m e t r o f o t o a c ú s t i c o . 21 3 - C u r v a de g e r m i n a ç ã o s o b luz b r a n c a contj nua, a 25°C p a r a e s p o r o s de C y a t h e a d e l-gcuft " z ' * * * . • * • • • • * • • » • ■ » . 43 4 - E f e i t o de t r a t a m e n t o s m ú l t i p l o s de luz v e r m e l h a , de 1 m i n u t o de d u r a ç a o , n a g e r ­ m i n a ç ã o de e s p o r o s de C y a t h e a d e l g a d i i . . 5 0 5 - C o r r e l a ç ã o e n t r e t r a t a m e n t o s ffiúltiolos de luz v e r m e l h a e a g e r m i n a b i 1 i d a d e de e s p c » r o s de C y a t h e a d e l g a d i - L... 51 6 - D e t e r m i n a ç ã o do t e m p o de e s c a p e d a reveja sã o do e f e i t o d a l u z v e r m e l h a p e l o v e r m e _ l h o e x t r e m o , n a g e r m i n a ç a o de esporos de C y a t h e a d e l g a d i - i... 5 4 7 - C o r r e l a ç ã o e n t r e h o r a s de e s c u r o i n t e r c a i l a d a s e n t r e t r a t a m e n t o s de luz v e r m e l h a e v e r m e l h o e x t r e m o e a g e r m i n a b i 1 idade de e s p o r o s de C y a t h e a d e l g a d i - i... 5 5 8 - E f e i t o de t r a t a m e n t o s l u m i n o s o s de l o n g a d u r a ç ã o , n a g e r m i n a ç a o de e s p o r o s de C y a t h e a d e l g a d i i ., a 25° C... 57 9 - E f e i t o de t r a t a m e n t o s l u m i n o s o s de l o n g a d u r a ç a o , n a g e r m i n a ç a o de e s p o r o s de Cya t h e a d e l g a d - i i , a 25° C... 58 1 Q - E f e i t o de t r a t a m e n t o s l u m i n o s o s de l o n g a d u r a ç a o , n a g e r m i n a ç ã o de e s p o r o s de C y a t h e a d e í g a d i i , a 25° C... 5 9 1 II- E f e i t o de t r a t a m e n t o s l u m i n o s o s de l o n g a d u r a ç a o , n a g e r m i n a ç a o de e s p o r o s de Cy a t h e a d e l g a d i i . , a 25° C... 61 12!- E f e i t o de t r a t a m e n t o s l u m i n o s o s de 1 m i ­ n u t o de d u r a ç a o e de luz c o n t i n u a n a gej" mi n a ç ã o de e s p o r o s de C y a t h e a d e l g a d i i a 25° C... 62 1 H - E f e i t o de t r a t a m e n t o s l u m i n o s o s de l o n g a d u r a ç a o (24 e 48 h o r a s ) n a germinação de e s p o r o s de C y a t h e a d e l g a d - L - i , a 25°C. . . 63

P ã g i n a s F I G U R A 14 F I G U R A 15 F I G U R A 16 F I G U R A 17 F I G U R A 18 F I G U R A 19 F I G U R A 20 F I G U R A , 21 F I G U R A 22 F I G U R A 2 3 F I G U R A 24 F I G U R A 25 F I G U R A 26 F I G U R A 27 E f e i t o de t r a t a m e n t o s l u m i n o s o s de l o n ­ ga d u r a ç ã o (24 e 48 h o r a s ) n a g e r m i n a ­ ç ã o de e s p o r o s de C y a t h e a â e l g a ã i i , a 2 5 oC. . . ... ... E f e i t o de t r a t a m e n t o s l o n g o s de luz v e £ m e l h a a s s o c i a d o s a t r a t a m e n t o s l o n g o s de luz azul , n a g e r m i n a ç a o de e s p o r o s de C y a t h e a d e l g a d i i, a 25° C... 68 E s p e c t r o f o t o a c ú s t i c o de e s p o r o s s e c o s e p a r e d e s de e s p o r o s de C y a t h e a delgadii 6 9 E f e i t o da p r é - e m b e b i ç ã o d e „ e s p o r o s em v a p o r de agua, n a g e r m i n a ç a o de C y a t h e a ã e X g a d ü t a 25° C... 8 7 T r a t a m e n t o s l u m i n o s o s de 1 m i n u t o de du r a ç ã o , a p l i c a d o s a p Õ s 12 , 24, 36 e 4 "5 h o r a s de e m b e b i ç a o no e s c u r o ... 88 T r a t a m e n t o s l u m i n o s o s de 1 m i n u t o de du r a ç ã o , a p l i c a d o s a p ó s 24, 48, 72 e 9ü) " h o r a s de e m b e b i ç ã o no e s c u r o ... 90 T r a t a m e n t o s l u m i n o s o s de 1 m i n u t o de d£ r a ç ã o , ú n i c o s e d i ã r i o s , a p l i c a d o s a p ó s 24 h o r a s de e m b e b i ç a o no e s c u r o . . . . 92 T r a t a m e n t o s l u m i n o s o s de 1 m i n u t o de du r a ç ã o , ú n i c o s , a p l i c a d o s a p Õ s 24 ou 4 " 5 h o r a s de e m b e b i ç a o no e s c u r o ; d i ã r i o s a p l i c a d o s a p ó s 48 h o r a s de e m b e b i ç ã o no e s c u r o ... 94 T r a t a m e n t o s l u m i n o s o s de 8 h o r a s de du- ^ r a ç ã o , a p l i c a d o s - a p ó s 24 ou 48 horas de e m b e b i ç a o n o e s c u r o ... 96 G e r m i n a ç a o s o b luz f l u o r e s c e n t e b r a n c a C o n s t a n t e , a 25°C, p a r a e s p o r o s de C y a ­ t h e a ã e l g a d i i p r e - e m b e b i d o s em s o l u ç ã o o s m o t i c a de po 1 i eti 1 e n o g 1 i c o l ... 98 C o n t e ú d o de l i p í d i o s l i v r e s em e s p o r o s s e c o s ( d i a z e r o ) de C y a t h e a ã e l g a â i i e a p Õ s 7 e 14 d i a s de g e r m i n a ç ã o s o b luz f l u o r e s c e n t e b r a n c a c o n s t a n t e a 25°C. . 103 E s p e c t r o de t r a n s m i s s ã o de luz do ó l e o de e s p o r o s s e c o s n a f a i x a da luz v i s í ­ v e l (400 a 8 0 0 n m ) ... 106 E s p e c t r o de t r a n s m i s s ã o de luz do ó l e o de s e m e n t e s de a l g o d ã o (Gossypium hirsutum ) n a f a i x a d a luz v i s í v e l (400 a 8 0 0 nm). 107 C r o m a t o g r a f i a g a s o s a d o s á c i d o s g r a x o s c o m p o n e n t e s do Ó l e o de e s p o r o s s e c o s de C y a t h e a ã e l g a ã i i... 108

P ã g i n a s F I G U R A 28 - E s p e c t r o s de a b s o r ç a o de luz de e x t r a ­ t o s de e s p o r o s s e c o s de Cyathea delgadii . 111 F I G U R A 29 - C o n t e ú d o de c l o r o f i l a em e s p o r o s de Cya __ t h e a d e l g a d i i e. a p Õ s 7 e 14 d i a s de g e r m i n a ç a o s o b luz f l u o r e s c e n t e b r a n c a c o n s t a n t e a 25° C... 112 F I G U R A 30 - C o n t e ú d o de p r o t e í n a s s o l ú v e i s , e m " e s p o

ros se cos de

C y a t h e a d e l g a d i i

e ap Õs 7

e 14 dias de g e r m i n a ç ã o sob luz flúore s"

cente b r a n c a constante, a 25° C.

... 115 F I G U R A 31 - C o n t e ú d o de a ç ú c a r e s s o l ú v e i s t o t a i s - ' ( f r a ç ã o M C W e f r a ç a o e t a n o l 10%) em e s ­ p o r o s s e c o s de C y a t h e a d e l g a d i i e a p Õ s 7 e 14 d i a s de g e r m i n a ç ã o s o b l u z f l u o ­ r e s c e n t e b r a n c a c o n s t a n t e , a 25°C . . . 11 8 F I G U R A 32 - C o n t e ú d o de a ç ú c a r e s r e d u t o r e s ( f r a ç ã o M C W e f r a ç ã o e t a n o l 10%) em e s p o r o s s e ­ c o s de C y a t h e a d p l g a d i i e a p Õ s 7 e 14 d i a s de g e r m i n a ç a o s o b luz f l u o r e s c e n t e b r a n c a c o n s t a n t e , a 25° C... 120 F I G U R A 33 - C o n t e ú d o de a m i d o e m e s p o r o s s e c o s de C y a t h e a d e l g a d i i e a p ó s 7 e 14 d i a s de g e r m i n a ç ã o s o b luz^ f l u o r e s c e n t e b r a n c a c o n s t a n t e , a 2 5 0 C . . . . . . . . . . . 123 F I G U R A 34 - C o r t e s de e s p o r o s s e c o s de C y a t h e a d e l ­ g a d i i , c o r a d o s p e l a h e m a t o x i 1 i n a - e o s i n a . . 126 F I G U R A 35 - C o r t e s de g a m e t õ f i t o s de C y a t h e a d e l g a ­ d i i, c o m 7 d i a s de e m b e b i ç a o , c o r a d o s p e l a h e m a t o x i l i n a - e o s i n a ... 126 F I G U R A 36 - C o r t e s de e s p o r o s s e c o s de C y a t h e a d e l ­ g a d i i , c o r a d o s p e l o a z u l de t o l u i d i n a a p H 4 , 0 ... 128 F I G U R A 37 - C o r t e s de g a m e t õ f i t o s de C y a t h e a d e l g a ­ d i i, c o m 7 d i a s de e m b e b i ç a o , c o r a d o s p e l o a z u l de t o l u i d i n a a p H 4 , 0 . . . . 128 F I G U R A 38 - C o r t e s de g a m e t õ f i t o s de C y a t h e a d e l g a ­ d ii , c o m ■ 7 d i a s de e m b e b i ç a o , c o r a d o s p e lo a z u l de t o l u i d i n a a p H 4 , 0 ... 129 F I G U R A 39 - G a m e t õ f i t o i n t a c t o d e _ C y a t h e a d e l g a d i i , c o m 7 d i a s de e m b e b i ç a o , c o r a d o s p e l o a z u l de t o l u i d i n a a p H 4 , 0 ... 129 F I G U R A 40 - C o r t e s de e s p o r o s s e c o s de C y a t h e a d e l ­ g a d i i c o r a d o s p e l o a z u l de t o l u i d i n a a p H 4,0, o b s e r v a d o s em m i c r o s c ó p i o de p£ l a r i z a ç a o c o m a n a l i s a d o r e p o l a r i z a d o r c r u z a d o s ... 130

P ã g i n a s F I G U R A F I G U R A F I G U R A F I G U R A F I G U R A 41 - C o r t e s de e s p o r o s s e c o s de C y a t h e a d e l ­ g a d i i c o r a d o s p e l o x y 1 i d i n e - p o n c e a u a p H 2 , 5 ... 133 42 - C o r t e s de g a m e t Õ f i t o de C y a t h e a d e l g a— diij c o m 7 d i a s . d e e m b e b i ç ã o , c o r a d o s p e l o x y l i d i n e - p o n c e a u a p H 2 , 5 ... 133 43 - G a m e t o f i t o s i n t a c t o s de C y a t h e a delgadii, c o m 7 d i a s de e m b e b i ç ã o , c o r a d o s p e l o x y l i d i n e - p o n c e a ú a p H 2 , 5 ... 134 44 - C o r t e s de e s p o r o s s e c o s de C y a t h e a d e l ­ g a d i i s u b m e t i d o s ã d i g e s t ã o p e l a p e p s i - ' n a e p o s t e r i o r m e n t e c o r a d o s p e l o x y l i d j n e - p o n c e a u a p H 2 , 5 ... ’ 135 45 - C o r t e s de g a m e t Õ f i t o de C y a t h e a delgadii_, c o m 7 dias de e m b e b i ç ã o , s u b m e t i d o s a d i ­ g e s t ã o p e l a t r i p s i n a e a s e g u i r c o r a d o s p e l o x y l i d i n e - p o n c e a u a p H 2 , 5 ... 135

- A B R E V I A T U R A S "

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- L U Z A Z U L

CMU-3

- C L O R O F E N I L D I M E T I L U R E I “A

DC(vÍU-3-z4-

DI C L O R O F E N I LDI M E T I L U R E I A

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- E S C U R O

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• " Á C I D O G I B E R É L I C O h - H O R A .

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" L U Z C O N S T A N T E m i n - M I N U T O

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"- P O L I E T I L E N O G L I C O L _

V

- L U Z V E R M E L H A

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" V E R M E L H O E X T R E M O

- I N T R O D U Ç Ã O A g e r m i n a ç ã o de u m a s e m e n t e , u m e s p o r o ou sistema se_" m e l h a n t e c a r a c t e r i z a - s e p e l o i n í c i o do c r e s c i m e n t o em q u e o p e r í o d o de l a t ê n c i a de e s t r u t u r a s q u i e s c e n t e s o u d o r m e n - t e s é s u b s t i t u í d o p o r u m p e r í o d o a t i v o . N o s ú l t i m o s “ anos, u m a v a s t a l i t e r a t u r a s o b r e a g e r m i n a ç ã o de s e m e n t e s de a n - g i o s p e r m a s , u t i l i z a n d o - s e m é t o d o s b i o q u í m i c o s e b i o l o g i a m o l e c u l a r , . v e m se a c u m u l a n d o . A s p t e r i d o f i t a s r e p r e s e n t a m u m g r u p o q u e p r o d u z e s p o r o s p o t e n c i a l m e n t e ú t e i s p a r a a n á l i s e s f i s i o l ó g i c a s e b i o q u í m i c a s da g e r m i n a ç ã o . E s p o r o s p o d e m g e r m i n a r d i r e t a ­ m e n t e em c o n t a t o c o m a a g u a ou s o l u ç ã o s i m p l e s de s a i s m i ­ n e r a i s , - no e s c u r o c o m p l e t o ou em r e s p o s t a a u m d e t e r m i n a d o t r a t a m e n t o l u m i n o s o ou h o r m ô n i o de c r e s c i m e n t o . T o d a s as s u b s t â n c i a s o r g â n i c a s n e c e s s á r i a s p a r a a g e r m i n a ç ã o p r o v e m do m e t a b o l i s m o d a s r e s e r v a s e s t o c a d a s no p r Õ p r i o e s p o r o . A _ p r i m e i r a m u d a n ç a m o r f o l ó g i c a de u m e s p o r o em g e r ­ m i n a ç ã o e r e s u l t a d o de u m a d i v i s ã o c e l u l a r a s s i m é t r i c a , on g i n a n d o o a p a r e c i m e n t o de u m a e s t r u t u r a p a p i l a d a q u e a s e ­ guir, se d i f e r e n c i a em r i z õ i d e . A e t a p a s e g u i n t e é o a p a r e c i m e n t o d a c é l u l a p r o t a l i a l , em â n g u l o c o m o r i z õ i d e . A cé l u l a p r o t a l i a l p o d e f u n c i o n a r d i r e t a m e n t e c o m o a c é l u l a p r o t o n e m a l , ou e s t a p o d e s e r o r i g i n a d a de o u t r a d i v i s ã o ce"

2 -lu l a r . 0 p a d r ã o de d i f e r e n c i a ç ã o d o s e s p o r o s é s i m p l e s , m a s b e m d e f i n i d o . A t u a c o m o u m s i s t e m a e x p e r i m e n t a l c o n v e n i e n ­ te p a r a e s t u d o s de d e s e n v o l v i m e n t o c e l u l a r , e v i t a n d o a c o m p l e x i d a d e de s i s t e m a s m u i t i c e l u l a r e s c o m o as s e m e n t e s . Os e s p o r o s de d i v e r s a s e s p é c i e s de p t e r i d õ f i t a s r e s p o n d e m a d e t e r m i n a d o s c o m p r i m e n t o s de o n d a ou h o r m ô n i o s de c r e s c i ­ m e n t o . A s s i m s e n d o , e l e s p o d e r i a m s e r v i r c o m o m o d e l o p a r a a i n t e r p r e t a ç ã o de m e c a n i s m o s de g e r m i n a ç ã o de sementes (R_A G H A V A N , 1980). A m a i o r i a d a s p t e r i d õ f i t a s p o s s u i e s p o r o s q u e a p r e ­ s e n t a m d o r m ê n c i a q u e p o d e s e r s o b r e p u j a d a p e l a luz. M I L L E R (1968) m o s t r o u q u e e n t r e 88 e s p é c i e s e s t u d a d a s , a p e n a s 7 p o s s u i a m e s p o r o s q u e g e r m i n a v a m em n ú m e r o c o n s i d e r ã v e l , na e s c u r i d ã o c o m p l e t a , q u a n d o r e c e b i a m u m i d a d e , o x i g ê n i o e t e m p e r a t u r a s f a v o r ã v e i s . 0 e n v o l v i m e n t o do f i t o c r o m o n o c o n t r o l e d a g e r m i n a ­ ç ã o de e s p o r o s de p t e r i d õ f i t a s é c o m p l e x o e t e m s i d o e s t u ­ d a d o p o r d i v e r s o s p e s q u i s a d o r e s . De a c o r d o c o m S U G A I e F U R U Y A (1967, 1 9 6 8 ) p e l o m e ­ n o s três f o t o r r e a ç õ e s , d u a s d a s q u a i s s ã o c o n t r o l a d a s p e l o f i t o c r o m o , e s t ã o e n v o l v i d a s n a g e r m i n a ç ã o de e s p o r o s de P t e r i s v i t t a t a . A p r i m e i r a f o t o r r e a ç ã o m e d i a d a p e l o f i t o ­ c r o m o é a p r o m o ç ã o da g e r m i n a ç ã o q u e o c o r r e e m r e s p o s t a a . . - 2 - 1 luz v e r m e l h a de b a i x a e n e r g i a (400 e r g . cm . s e g d u ­ r a n t e 5 s e g u n d o s ) e q u e é r e v e r t i d a p e l o v e r m e l h o e x t r e m o - 2 - 1 ~ (7, 5 Ke r g . cm . s e g d u r a n t e 16 s e g u n d o s ) . A o u t r a r e a ç a o m e d i a d a p e l o f i t o c r o m o ê a r e v e r s ã o da i n i b i ç ã o c a u s a d a p~ la l u z azul, a p Õ s t r a t a m e n t o c o m luz v e r m e l h a e a m a n u t e n ­ ç ã o d e s s a i n i b i ç ã o , p e l o v e r m e l h o - e x t r e m o . A g e r m i n a ç ã o iji d u z i d a p e l a luz v e r m e l h a p o d e t a m b é m s e r i n i b i d a p e l a luz

3 -a z u l c o m p i c o s -a 3 8 0 e 4 4 0 nm, p -a r -a -a l g u m -a s e s p é c i e s . I s t o s e r i a e v i d i n c i a de q u e e x i s t e m f o t o r r e a ç õ e s o n d e u m pigmeji to q u e a b s o r v e l u z a z u l p a r t i c i p a ( S U G A I et al. > 1977). Es se p i g m e n t o e c h a m a d o de ^ g - N U V ( b l u e a n d n e a r - U V - l i g h t - a b s o r b i n g p i g m e n t : p i g m e n t o q u e a b s o r v e p r ó x i m o ao U V e luz a z u l ) e F U R U Y A (1983) p r o p õ e u m m o d e l o p a r a e x p l i c a r a i n t e r a ç ã o d e s s e p i g m e n t o e do f i t o c r o m o . U m f a t o r desconhj; e i d o X e s t a r i a em s u a f o r m a i n a t i v a no e s c u r o ou a p Õ s expt) s i ç ã o a l u z a z u l ou v e r m e l h o e x t r e m o e p a s s a r i a ã f o r m a a t i v a n a p r e s e n ç a - de F y e ( f i t o c r o m o v e r m e l h o e x t r e m o ) i n ­ d u z i n d o a g e r m i n a ç ã o . T r a t a m e n t o s l u m i n o s o s n ã o t ê m e f e i t o em e s p o r o s d o £ m e n t e s s e c o s (não e m b e b i d o s ) , m a s a f o t o s s e n s i b i l i d a d e d o s e s p o r o s se d e s e n v o l v e d u r a n t e u m p e r í o d o de e m b e b i ç ã o , sob c o n d i ç õ e s a e r Õ b i c a s . E s s e p e r í o d o é c h a m a d o de p e r í o d o de p r é - i n d u ç ã o ( T O W I L L è IK U M A , 1 9 7 5 a ) . A d u r a ç ã o da e m b e b i ­ ç ã o q u e c a u s a a m ã x i m a g e r m i n a ç ã o f o t o i n d u z i d a v a r i a de es" p é c i e p a r a e s p é c i e , c o m o m o s t r a F U R U Y A (1983). E s s e a u t o r m o s t r a p a r a 7 d i f e r e n t e s e s p é c i e s , p e r í o d o s de p r é - i n d u ç ã o q u e v a r i a r a m de 3 h o r a s a 4 dias. A a p l i c a ç ã o de c i c l o h e x i " mi da 0,1 m M d u r a n t e a p r é - i n d u ç ã o , i n i b i u a g e r m i n a ç ã o de e s p o r o s de O n o c l e a s e n s i b i l i s , i n d i c a n d o o p o s s í v e l e n v o l ­ v i m e n t o da s í n t e s e de p r o t e í n a s n a g e r m i n a ç ã o d e s s a e s p é ­ c i e ( T O W I L L e I K U M A , 1 9 7 5 b ) . A f a s e p o s t e r i o r ã p r é - i n d u — ção, o n d e a luz i n d u z a m ã x i m a g e r m i n a ç ã o é c h a m a d a de f a ­ se de f o t o i n d u ç ã o . 0 p e r í o d o s u b s e q u e n t e de e s c u r o , o n d e os p r o c e s s o s de f o t o i n d u ç ã o l e v a m ã d i v i s ã o c e l u l a r , e e v e n ­ t u a l m e n t e a p r o t r u s ã o v i s í v e l d a s c é l u l a s r i z o i d a l e protj) n e m a l é a f a s e de p õ s - i n d u ç ã o ( T O W I L L e I K U M A , 1 9 7 5 a ) . A t e m p e r a t u r a i n f l u e n c i a as f a s e s de p r é i n d u ç ã o e p õ s i n d u

4 -ção. C H E N e I K U M A (1979) v e r i f i c a r a m q u e t e m p e r a t u r a s de 40°C r e d u z e m o d e s e n v o l v i m e n t o da f o t o s s e n s i b i 1 i d a d e de e~ p o r o s de Onoclea s e n s i b i l i s a n í v e i s m í n i m o s , i r r e v e r s i v e l - m e n t e . A f a s e de p Õ s - i n d u ç ã o t a m b é m é s e n s í v e l a e s s a t e m ­ p e r a t u r a , h a v e n d o i n i b i ç ã o r e v e r s í v e l da g e r m i n a ç ã o de e s ­ p o r o s f o t o i n d u z i d o s q u e r e c e b e r a m t r a t a m e n t o de 40°C l o g o a p ó s o t r a t a m e n t o l u m i n o s o s i n d u t o r . T O M I Z A W A et al. (1983) e s t i m a r a m e s p e c t r o f o t o m e t r i - c a m e n t e as p o r c e n t a g e n s de. F v e i a p Õ s i r r a d i a ç õ e s c o m luz v e r m e l h a a 6 6 0 n m e e n c o n t r a r a m u m a c o r r e l a ç ã o p o s i t i v a eji t r e os n í v e i s de p o r c e n t a g e m de F v e e a g e r m i n a ç ã o d e - e s p o r o s de L y g o ã i ú m j a p o n i a u m . O b s e r v a r a m t a m b é m q u e e s p o r o s d e s s a e s p é c i e a p r e s e n t a r a m 16 a 3 4 % de F v e a p Õ s i r r a d i a ç ã o c o m luz azul, m a s a g e r m i n a ç ã o foi t o t a l m e n t e i n i b i d a . I s t o s u g e r e q u e o s i s t e m a q u e a b s o r v e l u z a z u l p o d e r i a atuar el~ m i n a n d o u m p a s s o e s p e c í f i c o do p r o c e s s o de g e r m i n a ç ã o , p o ­ r é m n ã o a f e t a n d o d i r e t a m e n t e a f o t o c o n v e r s ã o do f i t o c r o m o . F U R U Y A ( 1 985) s u g e r e q u e e m u m a a m o s t r a de e s p o r o s , o f i t j a c r o m o s o f r e as f o t o t r a n s f o r m a ç õ e s s i n c r ô n i c a e g r a d u a l m e n ­ te, m a s q u e a n e c e s s i d a d e de d e t e r m i n a d o n í v e l de F v e p a r a a g e r m i n a ç ã o , p o d e r i a s e r d i f e r e n t e p a r a c a d a e s p o r o . Q u a n t o ãs s u b s t â n c i a s de r e s e r v a s p r e s e n t e s em e s p £ r o s f o i v e r i f i c a d o q u e e s p o r o s de A n e m i a p h y l l i t i ã i s c o n ­ t é m 5 6 % de l i p í d i o s e d e s t e s 8 6 % s ã o t r i g 1 i c e r í d e o s (GEMM_ R I C H , 1977). D E M A G G I O e. G R E E N E (1 980) o b s e r v a r a m q u e e s p £ r o s de O n o ó l e a s e n s i b i l i s a p r e s e n t a m c e r c a de 2 7 % de l i p í ­ d i o s e q u e a d i m i n u i ç ã o d o s l i p í d i o s d u r a n t e a g e r m i n a ç ã o e s t ã a s s o c i a d a a u m a u m e n t o da a t i v i d a d e de e n z i m a s do c i ­ c l o do g l i o x i l a t o , t a i s c o m o i s o c i t r a t o - l i a s e e m a l a to-s iji tase. A e n z i m a l i p a s e t a m b é m é b a s t a n t e a t i v a a p õ s t r a t a

5

-m e n t o c o -m luz v e r -m e l h a , co-mo observou GEMMRICH (1982) p a r a e s p c ) _ r o s de A n e m - i a p h y l U t i d i s .

E x p e r i m e n t o s c o m autoradiografia, onde foram utilizadas tj[

m i d i n a

H,

u r i d i n a

H

e l e u c i n a

H

m o s t r a r a m que ocor r e sTntese de

DNA nuclear e ci topl asmãti co, em esporos de Pteris vittata, poucas ho_ ras apos o tratamento luminoso. Foram observadas também: a hidrólise de p r o t e í n a s granulares, a incorporação de uridina3 H nos n u c l e o

-______ _ 3

los, i n d i c a n d o sTntese de

R N A

e i n c o r p o r a ç a o de l e u cina

H

em nova s

p r o t e T n a s

( R A G H A V A N , 1 9 7 7 a ) .

. M u d a n ç a s n a composição bioquTmica de esporos em germinação tem sido estudadas por diversos autores nos últimos anos. Em esporos de Adiantvm c cc p —LH us veneris L. 3 MINAMIKANA et aZ.(1984) o b s e r v a r a m q u e g r a n d e parte das reservas são lipTdios, cujo conteúdo d i m i n u i d u r a n t e a germinação. Açúcares solúveis ou insolúveis também são im p o r t a n t e s fontes de carbono e energia durante a embebição e germi" n a ç ã o . Esses autores detectaram também duas proteTnas de reserva q u e

d e s a p a r e c e m d u r a n t e a g e r m i n a ç ã o . ■ • E s t u d o s R e a l i z a d o s n o B r a s i l , s o b r e a G e r m i n a ç ã o de E s p o r o s de P t e r i d õ f i t a s N o B r a s i l , os e s t u d o s s o b r e a g e r m i n a ç ã o de e s p o r o s ■ de p t e r i d õ f i t a s s ã o r e c e n t e s e h ã p o u c o s t r a b a l h o s p u b l i c a " dos. D e n t r e e s t e s , três f o r a m p u b l i c a d o s em p e r i ó d i c o s e os d e m a i s em a n a i s e r e s u m o s de c o n g r e s s o s . H ã d u a s teses de m e s t r a d o s o b r e a g e r m i n a ç ã o de e s p o r o s de p t e r i d õ f i t a s e u m a s o b r e d e s e n v o l v i m e n t o de g a m e t õ f i t o s em q u e s ã o apre" s e n t a d o s t a m b é m a l g u n s d a d o s s o b r e g e r m i n a ç ã o . M A R C O N D E S - F E R R E I R A e F E L I P P E (1984) v e r i f i c a r a m o e f e i t o da l u z e da t e m p e r a t u r a n a g e r m i n a ç ã o de e s p o r o s de

6 -C y a t h e a d e l g a d i i . E s s e s a u t o r e s o b s e r v a r a m q u e e s p o r o s r e ­ c é m c o l e t a d o s g e r m i n a m a 1 5, 20, 25 e 30° C, m a s s o m e n t e a 20, 25 e 30° C a p õ s 7 m e s e s de a r m a z e n a m e n t o a 4° C. D e t e r m " n a r a m q u e o p e r í o d o , de p r é - i n d u ç ã o e r a de c e r c a de 48 h o ­ r a s e o de i n d u ç ã o c o m p r e e n d i d o e n t r e 1 e 3 h o r a s . E s t u d o s s o b r e a g e r m i n a ç ã o e m o r f o l o g i a de e s p o r o s de T r i c h i p t e r i s c o r c o v a d e n s i s f o r a m r e a l i z a d o s p o r E S T E V E S et al. ( 1 985). Os a u t o r e s o b s e r v a r a m q u e os e s p o r o s s ã o f j D t o b l ã s t i c o s p o s i t i v o s e q u e a t e m p e r a t u r a Ó t i m a de g e r m i n a i ç ã o é a de 25° C. A s m a i s a l t a s p o r c e n t a g e n s de g e r m i n a ç ã o _2 o c o r r e r a m em i n t e n s i d a d e s l u m i n o s a s de 2 2 0 a 3 2 0 ; jW. cm e a g e r m i n a ç ã o o c o r r e u s o m e n t e c o m f o t o p e r l o d o s de 8 horas ou a c i m a . Os e s p o r o s a p r e s e n t a r a m p o r c e n t a g e n s c o n s t a n t e s de g e r m i n a ç ã o a t e 135 d i a s de a r m a z e n a m e n t o a 4 o C e a p õ s e s s e p e r T o d o , a g e r m i n a ç ã o fo i r e d u z i d a . A f o t o s s e n s i b i 1 i d a d e de e s p o r o s de p t e r i d õ f i t a s d o s c e r r a d o s foi e s t u d a d a p o r E S T E V E S e F E L I P P E ( 1 9 8 5 a ) . Os a u ­ t o r e s v e r i f i c a r a m q u e de 9 e s p é c i e s e s t u d a d a s , q u a i s sejam: A n e m i a f l e x u o s a3 A n e m i a v a d d i a n a3 A d i a n t h u m s e r r a t o d e n t a— t u m3 D o r y o p t e r i s c o n c o l o r 3 — P o l y p o d i u m h i r s u t i s s i m u m3 P o l y — p o d i u m l a t i p e s3 P o l y p o d i u m s g u a m u l o s u m3 P o l y p o d i u m p l e o p e l _ t i f o l i u m e P o l y p o d i u m p o l y p o d i ó i d e s 3 s o m e n t e as d u a s ú l t i ­ m a s a p r e s e n t a r a m b a i x a g e r m i n a ç ã o n o e s c u r o e a l t a n a luz. A s o u t r a s , g e r m i n a m s o m e n t e s o b l u z c o n t í n u a . H ã v a r i a s c i t a ç õ e s em a n a i s e r e s u m o s . E f e i t o de t e m p e r a t u r a n a g e r m i n a ç ã o de e s p o r o s de C y a t h e a d e l g a d i i foi v e r i f i c a d o e c o n s t a t o u - s e q u e a m e ­ l h o r t e m p e r a t u r a c o n s t a n t e p a r a a g e r m i n a ç ã o é a de 25° C e os p a r e s a l t e r n a n t e s 25-10° C, 25-20° C e 25-30° C. Os e s p o r o s sO g e r m i n a r a m e m luz c o n t i n u a . P e r í o d o s c u r t o s de l u z bra"i

7 -ca, q u a n d o os e s p o r o s e r a m m a n t i d o s a 25°C n o e s c u r o , p r o ­ m o v e r a m a g e r m i n a ç ã o ( M A R C O N D E S - F E R R E I R A è F E L I P P E , 1982a, b). E S T E V E S e F E L I P P E (1 982, 1 9 8 3 a,b) a n a l i s a r a m o e f e 2 to de t e m p e r a t u r a s s o b luz c o n t í n u a e e s c u r o , b e m c o m o r e ­ g u l a d o r e s de c r e s c i m e n t o n a g e r m i n a ç ã o de e s p o r o s de T r i - c h i p t e r i s c o v c o v a d e n s i s '. A g e r m i n a ç ã o m ã x i m a o c o r r e u a 25°C e n e n h u m d o s r e g u l a d o r e s de c r e s c i m e n t o t e s t a d o s p r o ­ m o v e u a g e r m i n a ç ã o . T r a t a m e n t o s l u m i n o s o s c o m luz v e r m e l h a , luz a zul, l u z v e r d e e. v e r m e l h o e x t r e m o i n d u z i r a m a m e s m a t a x a de g e r m i n a ç ã o . E S T E V E S e F E L I P P E ( 198 4 " , 1 9 8 5 a,b) v e r i f i c a r a m q u e e s p o r o s de P o l y p o d i u m l a t i p e s s ã o f o t o b 1 ã s t i c o s p o s i t i v o s a - 2 5 ° C ‘e q u e a m ã x i m a g e r m i n a ç ã o s o b luz c o n s t a n t e o c o r r e a p Õ s 6 d i a s de e m b e b i ç ã o . T e s t a r a m t a m b é m os e f e i t o s do p H do m e i o , do a l u m í n i o e d a s t e m p e r a t u r a s c o n s t a n t e s ou a l t e r n a d a s (em três c o n d i ç õ e s de a l t e r n â n c i a ) . V e r i f i c a r a m q u e a g e r m i n a ç ã o n ã o o c o r r e c o m os p a r e s de t e m p e r a t u r a s 25-40°C e 25-45°C. T e m p e r a t u r a de 25°C r e v e r t e o e f e i t o i n i b i t ó r i o de 35°C, n a s t r ê s c o n d i ç õ e s de a l t e r n â n c i a u t i ­ l i z a d a s . F E L I P P E et a l. ( 1 985) v e r i f i c a r a m . o e f e i t o d a luz n a g e r m i n a ç ã o de e s p o r o s de C y a t h e a d e l g a d i i e de Triohipte- r i s c o v c o v a d e n s i s . A m b a s s ã o f o t o b 1 ãs ti c a s p o s i t i v a s a 25°C. R A N A L ( 1 9.85 , 1 9 8 6 ) e s t u d o u o e f e i t o de t e m p e r a t u r a s e i n t e n s i d a d e s l u m i n o s a s n a g e r m i n a ç ã o de 8 e s p é c i e s de p t e r i d õ f i t a s c o l e t a d a s em m a t a s e c a s e m i d e c í d u a . A s e s p é ­ c i e s e s t u d a d a s f o r a m A d i a n t o p s i s v a d i a t a 3 P o l y p o d i u m h iv - sut- issvrurrij P o l y p o d i u m l a t i p e s 3 P o l y p o d i u m li.ndbergi.i3 P<2 /

p o d i u m p l e o p e l t i f o l i u m 3 P o l y p o d i u m p o l y p o d i o i d e s 3 P o l y p o — d iu m s q u a m u l o s u m e P t e r i s d e n t i e u l a t a . V e r i f i c o u q u e p a r a t o d a s as e s p é c i e s a m e l h o r g e r m i n a ç ã o o c o r r e u e n t r e 21,7°C e 25,2°C e q u e h o u v e u m a d i m i n u i ç ã o g r a d a t i v a n a g e r m i n a ­ ç ã o de e s p o r o s em i n t e n s i d a d e s l u m i n o s a s m a i s b a i x a s . R A N D I e F E L I P P E (1985, 1 9 8 6 ) o b s e r v a r a m q u e t r a t a ­ m e n t o s de luz v e r m e l h a de 1 m i n u t o de d u r a ç ã o , f o r n e c i d o s a p ó s 48 h o r a s de e m b e b i ç ã o n o e s c u r o , p r o m o v e m a g e r m i n a ­ ç ã o de C y a t h e a d e l g a d i i . V e r i f i c a r a m q u e a m e l h o r t e m p e r a ­ t u r a p a r a a p r é - i n d u ç ã o de e s p o r o s f o t o i n d u z i d o s , c o m 1 m j _ n u t o de luz v e r m e l h a é a de 25°C. A s t e m p e r a t u r a s de 35, 40 e 45°C d u r a n t e a p r é - i n d u ç ã o i n i b e m t o t a l m e n t e a g e r m i n a ­ ç ã o . R A N D I e t al. ( 1 986) v e r i f i c a r a m q u e o e f e i t o de trji t a m e n t o s d i ã r i o s de 1 m i n u t o de luz v e r m e l h a , n a g e r m i n a ­ ç ã o de e s p o r o s de C y a t h e a d e l g a d i i é a d i t i v o . E x p o s i ç ã o de 5 m i n u t o s de v e r m e l h o e x t r e m o - a p ó s o t r a t a m e n t o de 1 m i n u ­ to de luz v e r m e l h a r e v e r t e s e u e f e i t o . A g e r m i n a ç ã o m a i s a l t a o c o r r e u p a r a e s p o r o s q u e r e c e b e r a m 4 h o r a s de luz b r a n c a a p ó s o p e r í o d o de p r é - i n d u ç ã o . E S T E V E S ' ( 1 987) v e r i f i c o u o e f e i t o da luz n a g e r m i n j * ç ã o de e s p o r o s de t r e s e s p é c i e s de p t e r i d Õ f i t a s do c e r r a d o , do g i n e r o P o l y p o d i u m 3 c o n s t a t a n d o q u e as t r e s a p r e s e n t a m e s p o r o s f o t o b 1 as ti c o s p o s i t i v o s . 0 e s t u d o de luz e t e m p e r a t u r a n a g e r m i n a ç ã o d ’ e P o l y p o d i u m l a t i p e s foi r e a l i z a d o p o r E S T E V E S e F E L I P P E ( 1987). F o i v e r i f i c a d o q u e n ã o h o u v e ge_r m i n a ç ã o s o b c o n d i ç õ e s de e s c u r o em n e n h u m r e g i m e de t e m p e ­ r a t u r a t e s t a d o . A g e r m i n a ç ã o sõ o c o r r e u e n t r e as temperatjj r a s c o n s t a n t e s a 10, 15, 20, 25 e 30°C. N ã o o c o r r e u g e r m i ­ n a ç ã o n o s p a r e s a l t e r n a n t e s 25-40°C e 25-45°C.

9 -M A R C O N D E S — F E R R E I R A ( 1983) em s u a t e s e de mestrado_ ve ’ r i f i c o u o e f e i t o de luz e t e m p e r a t u r a n a g e r m i n a ç ã o de e s ­ p o r o s de C y a t h e a d e l g a d i i . 0 a u t o r c o n c l u i u q u e as m e l h o ­ r e s t e m p e r a t u r a s p a r a a g e r m i n a ç ã o em luz f o r a m as de 20 e 25°C e os p a r e s a l t e r n a n t e s 15-25°C, 20-25°C e 30-25°C. A g e r m i n a ç ã o n ã o foi a f e t a d a p e l o f o t o p e r T o d o e p a r e c e ser m e n o r em a l t a s i n t e n s i d a d e s l u m i n o s a s . O b s e r v o u q u e o c o r ­ r e u r e v e r s ã o do e f e i t o de l u z v e r m e l h a p e l o v e r m e l h o exte£ no e q u e a g e r m i n a ç ã o t a m b é m se d e u s o b l u z azul. V e r i f i ­ c o u q u e jã - oco r r e - c o n s u m o de o x i g ê n i o p e l o s e s p o r o s , no 19 d i a de e m b e b i ç ã o e q u e os l i p í d i o s l i v r e s c o r r e s p o n d e m a 4 3 , 7 % do p e s o d o s e s p o r o s . E S T E V E S ( 1 9 8 4 ) e m s u a t e s e de m e s t r a d o e s t u d o u a m o r f o l o g i a e a g e r m i n a ç ã o de e s p o r o s de T r i c h i p t e r i s coroo_ v a ã e n s i s . E s t u d o u o e f e i t o de ã c i d o i n d o l i l - 3 - a c é t i c o , a c i d o g i b e r ê l i c o , 6 - b e n z i 1 a d e n i n a e ã c i d o 2 - e t i 1 fosfoni co em c o n c e n t r a ç o e s de 0 a 100 jjg.ml1 e c o n c l u i u q u e e s s a s subjs t ã n c i a s i n i b e m a g e r m i n a ç ã o d e s s a e s p é c i e q u e p o s s u i e s p o ­ r o s f o t o b 1 ã s t i c o s p o s i t i v o s . A m e l h o r t e m p e r a t u r a p a r a a g e r m i n a ç ã o é a de 25°C. A g e r m i n a ç ã o o c o r r e u s o b luzes ve£ m e l h a , azul, v e r d e e s o b v e r m e l h o " e x t r e m o . M a i s de 5 0 % do p e s o d o s e s p o r o s é r e s u l t a n t e de l i p T d i o s e o c o n t e ú d o de p r o t e í n a s s o l ú v e i s e n c o n t r a d o foi p o r v o l t a de 10 u g . m l ~ - de e s p o r o s . N a t e s e de m e s t r a d o de R A N A L (1 983) q u e estudou o d e s e n v o l v i m e n t o de g a m e t o f i t o s , h ã a l g u n s d a d o s s o b r e a g e r ­ m i n a ç ã o de a l g u m a s e s p é c i e s de m a t a l a t i f o l i a d a s u b t r o p i ­ cal s e m i d e c í d u a . A s e s p é c i e s e s t u d a d a s f o r a m Polypodium h i r - s u t i s s i m u m 3 P. p l e o p e l t i f o l i u m 3 P. p o l y p o d i o i d e s 3 P. s q u a - m u l o s u m 3 P. l a t i p e s 3 A d i a n t o p s i s r a d i a t a 3 P t e r i s d e n t i c u l a

1 0 -ta e P o l y p o d i u m l i n d b e v g i i . A s íiiélhores t e m p e r a t u r a s p a r a a g e r m i n a ç ã o d e s s a s e s p é c i e s f o r a m as c o m p r e e n d i d a s e n t r e 21,7°C e 25,2°C. E m i n t e n s i d a d e s l u m i n o s a s a b a i x o de 2. 3 0 0 l u x a p o r c e n t a g e m de g e r m i n a ç ã o d i m i n u i u s e n s i v e l m e n t e . • O B J E T I V O S -C o m o p ô d e s e r v i s t o " s ã o p o u c o s os t r a b a l h o s a r e s ­ p e i t o da f i s i o l o g i a da g e r m i n a ç ã o de e s p o r o s de p t e r i d Õ f i - t a s r e a l i z a d o s no B r a s i l , a p e s a r da g r a n d e d i v e r s i d a d e de e s p é c i e s e x i s t e n t e s em n o s s o t e r r i t ó r i o . V ã r i a s e s p é c i e s de p t e r i d Õ f i t a s t e m s i d o c o l e t a d a s em g r a n d e s q u a n t i d a d e s p a r a o r n a m e n t a ç ã o ou f a b r i c a ç ã o de x a x i m , de u m a f o r m a i n d i s c r i m i n a d a . N a d a foi f e i t o a i n d a no s e n t i d o de se p r e s e r v a r e s s a s espéci.es, n a t i v a s em n o s ­ so pa ís. £ i n t e r e s s a n t e c o n h e c e r c o m o e s s a s e s p é c i e s prolj_ f e r a m , p r e v e n d o f u t u r o s p r o j e t o s q u e v i s e m e v i t a r u m a p o s ­ s í v e l e x t i n ç ã o . ,

E i m p o r t a n t e s a l i e n t a r t a m b é m que os e s p o r o s de pte^

ridÕfitas, por serem s i s t e m a s s i m ples r e p r e s e n t a m m a t e r i a l

de inte r e s s e no e s tudo da f i s i o l o g i a da germinação. M u i t o s

de seus m e c a n i s m o s p o d e r ã o f u n c i o n a r como m o d e l o p a r a a i£

t e r p r e t a ç ã o de s i s t e m a s mais complexos, como as s e m e n t e s

de p l a n t a s superiores.

D e c i d i u - s e e n t ã o r e a l i z a r e s t u d o s de a s p e c t o s d a f£ t o m o r f o g ê n e s e de e s p o r o s de C y a t h e a d e l g a d i i Sternb., b e m c o m o s o b r e a s p e c t o s da m o b i l i z a ç ã o e s T n t e s e de m e t a b õ l i — t o s d u r a n t e a g e r m i n a ç ã o e d e s e n v o l v i m e n t o i n i c i a l do g a m " t õ f i t o . P a r a l e l a m e n t e a o s e s t u d o s b i o q u í m i c o s , f o r a m realj_ z a d o s e s t u d o s ci toquí.mi cos.

- M A T E R I A I S E M E ’ T O D O S -C y a t h e a d e l g a d i i S t e r n b e u m a s a m a m b a i a arbórea q u e o c o r r e n a t u r a l m e n t e n a s m a t a s da R e s e r v a B i o l ó g i c a do P a r ­ q u e E s t a d u a l d a s F o n t e s do I p i r a n g a . A e s p é c i e foi i d e n t i f i c a d a p e l o Dr. P a u l o G. W i n - d i s c h . 0 m a t e r i a l foi c o l e t a d o p o r G . M . F e l i p p e , W. M a r c o n - d e s - F e r r e i r a e L . M . E s t e v e s e r e c e b e u n ú m e r o de c o l e t a ... 1 1 . 0 6 5 , e s t a n d o d e p o s i t a d o no H e r b á r i o da U n i v e r s i d a d e E s ­ t a d u a l de C a m p i n a s , s o b o n ú m e r o U E C 210. 61. E m u m e x p e r i m e n t o f o r a m u s a d a s s e m e n t e s de Gossypium h - i r s u t u m L . ( al g o d ã o ) . Os e s p o r o s . f o r a m c o l e t a d o s q u a n d o os s o r o s se a p r e ­ s e n t a v a m f e c h a d o s e c o m a c o l o r a ç ã o m a r r o m e s c u r a . Os f o - i T o l o s f o r a m c o l o c a d o s p a r a s e c a r s o b r e p a p e l de fiKro, em c â m a r a s de c r e s c i m e n t o ( B i o t r o n e t t e M a r k III) ’ i l u m i n a d a s c o m l â m p a d a s f l u o r e s c e n t e s b r a n c a s e i n c a n d e s c e n t e s , o q u e e l e v o u a t e m p e r a t u r a a t é 30°C, f a c i l i t a n d o a d e s i d r a t a ç ã o do m a t e r i a l . Os e s p o r â n g i o s a b r i r a m e l i b e r a r a m os e s p o r o s . 0 m a t e r i a l p e r m a n e c e u p o r 24 a 72 h o r a s n a s c â m a r a s , a t é a " c o m p l e t a s e c a g e m d o s f o l T o l o s . Os e s p o r o s r e t i d o s no p a p e l de f i l t r o f o r a m r e m o v i ­ d o s c o m p i n c e l e s e p a r a d o s d o s e s p o r â n g i o s p o r f i l t r a g e m a t r a v é s de f o l h a s i m p l e s de l e n ç o de p a p e l ou p a p e l de 1 e _ n

1 2 -te. F o r a m e n t a o e s t o c a d o s em f r a s c o s de v i d r o f e c h a d o s e a r m a z e n a d o s a 4°C. 1. M É T O D O S G E R A I S E s p o r o s p r e v i a m e n t e s e p a r a d o s d o s e s p o r a n g i o s f o r a m s e m e a d o s s o b r e s o l u ç ã o n u t r i t i v a de M O H R - ( 1 9 5 6 ) , m o d i f i c a ­ d a p o r D Y E R ( 1 9 7 9 ) c u j a c o n s t i t u i ç ã o e a s e g u i n t e : M g S’04. 7 H20 510 mg. Z-1 K N03 120 mg. Z_1 ca (N03) 2. 4 H20 1 440 mg. Z-1 K H2 P04 250 mg. Z-1 Solução de F e S 0 4.7H20 e Na EDTA 1 ml A s o l u ç ã o de f e r r o ê a d i c i o n a d a s o m e n t e no m o m e n t o da r e a l i z a ç ã o do e n s a i o . E - p r e p a r a d a c o m 3 3 , 2 g de N a E D T A , 3, 6 5 g de N a O H e 2 5 g de Fe S 0 4. 7 H 20 p a r a u m l i t r o de ã g u a d e s t i 1ada. F o r a m u t i l i z a d o s e r l e n m e y e r s de 125 ml, c o n t e n d o 25 ml d a s o l u ç ã o n u t r i t i v a . Os e r l e n m e y e r s f o r a m v e d a d o s c o m c h u m a ç o de a l g o d ã o e a u t o c l a v a d o s a 120°C p o r 20 m i n u t o s . A s o l u ç ã o foi a c r e s c i d a e n t ã o , de 100 u n i d a d e s de N y s t a t i n p o r m i l i l i t r o . 0s e n s a i o s f o r a m m o n t a d o s em c â m a r a asseptj_ ca de f l u x o l a m i n a r . U m a p e q u e n a q u a n t i d a d e de e s p o r o s foi r e t i r a d a do f r a s c o de e s t o c a g e m , u t i l i z a n d o - s e u m a e s p á t u ­ la. U m l e v e t o q u e n a e s p ã t u l a o c a s i o n a v a a q u e d a d o s e s p o ­ r o s s o b r e a s u p e r f í c i e da s o l u ç ã o n u t r i t i v a . A p ó s a s e m e a d u r a , os e r l e n m e y e r s c o n t e n d o os e s p o ­ r o s f o r a m c o l o c a d o s em c â m a r a s de g e r m i n a ç ã o c o m l u z e t e m p e r a t u r a s c o n t r o l a d a s . A t e m p e r a t u r a u s a d a foi a de 25°C,

c o m e x c e ç ã o d o s e x p e r i m e n t o s o n d e se t e s t o u o e f e i t o da t e m p e r a t u r a . E m g e r a l , os e x p e r i m e n t o s - t i v e r a m - c o m o c o n t r o l e , a g e r m i n a ç ã o de e s p o r o s s o b luz f l u o r e s c e n t e b r a n c a c o n s t a n ­ te. N e s s e c a s o f o r a m u t i l i z a d a s d u a s l â m p a d a s f l u o r e s c e n ­ t e s b r a n c a s de 15 W e i n t e n s i d a d e de 3 2 0 "W. cm " ( M A R C 0 N - D E S - F E R R E I R A - e F E L I P P E , 1984). 0 e s p e c t r o é m o s t r a d o p o r V A L I O e J O L Y (1979) o n d e se o b s e r v a a l t a t r a n s m i s s ã o de l u z v e r m e l h a e p o u c a de v e r m e l h o e x t r e m o . Os e n s a i o s de e s c u r o f o r a m r e a l i z a d o s e n v o l v e n d o - s e os e r l e n m e y e r s em d o i s s a c o s p l ã s t i c o s p r e t o s , f e c h a d o s c o m f i t a a d e s i v a . 1.1 - P a d r o n i z a ç ã o d a A m o s t r a g e m p a r a C o n t a g e m de

E s p o r o s

P a r a a c o n t a g e m de e s p o r o s d u r a n t e ^ a g e r m i n a ç ã o f o ­ r a m u t i l i z a d o s d o i s e r l e n m e y e r s p o r t r a t a m e n t o s e n d o contji das tris l â m i n a s p o r e r l e n m e y e r e c e m e s p o r o s p o r l â m i n a . A s c o n t a g e n s f o r a m f e i t a s u t i l i z a n d o - s e m i c r o s c ó p i o b i n o c u l a r Z e i s s , a u m e n t o de 100 v e z e s e c o n t a d o r m a n u a l H £ pe. - Os e s p o r o s f o r a m r e m o v i d o s da s o l u ç ã o n u t r i t i v a u t i l i ­ z a n d o - s e o l a d o s u p e r i o r de u m a p i p e t a P a s t e u r , c o l o c a d a em c o n t a t o c o m a s u p e r f í c i e d a s o l u ç ã o , o n d e f l u t u a v a m . 0 coji t e ú d o r e t i d o n a p i p e t a P a s t e u r f o i s o p r a d o s o b r e u m a l â m i ­ n a de v i d r o e r e c o b e r t o p o r l a m T n u l a . F o r a m considerados ge£ m i n a d o s os e s p o r o s q u e a p r e s e n t a r a m p r o t r u s ã o do r i z õ i d e . A g e r m i n a ç ã o foi s e m p r e v e r i f i c a d a a p o s s e t e d i a s de i n í c i o d o e x p e r i m e n t o , c o m e x c e ç ã o d o s e x p e r i m e n t o s o n d e foram moji t a d a s c u r v a s de g e r m i n a ç ã o , c u j a s c o n t a g e n s f o r a m feitas djj

V I3 N V 1 II fl IS N V Íd l % V IO N y il lA IS N V H l % FIGURA 1 F I G U R A 1 14 90­ 80­ 70­ 60 50 40 30 20 10 0 -100-1 100n 90 80 70 60 50 40­ 30 20 10­

0-B

X nm

X nm

Espectro de transmissão dos papéis celofane vermelho e azul na faixa compreendida entre 400 a 800 nm.

A - Papel vermelho

r a n t e d e z d i a s c o n s e c u t i v o s . N o a n o de 1 9 8 5 f o r a m r e a l i z a ­ d a s 8 c o l e t a s e f i z e r a m - s e c u r v a s de g e r m i n a ç ã o s o b 1 u z f l u o r e s c e n t e b r a n c a c o n s t a n t e p a r a c a d a l o t e de e s p o r o s oj) t i d o s p o r c o l e t a . • 2. F 0 T 0 M 0 R F 0 G Ê N E S E N o s e x p e r i m e n t o s s o b r e f o t o m o r f o g i n e s e f o r a m u s a d a s as s e g u i n t e s f o n t e s l u m i n o s a s : a) L u z f l u o r e s c e n t e b r a n c a ( d e s c r i t a em 1); b) L u z v e r m e l h a o b t i d a p e l o u s o de l i m p a d a f l u o r e s " c e n t e v e r m e l h a , m a r c a S y l v a n i a , de 20 W, c o m p i ­ co a 6 6 0 n m ( N O R O N H A et a l ., 1 9 7 8 ; R A N D I e FE L I P _ PE, 1 9 8 1 ) ; -c) L u z v e r m e l h a o b t i d a p e l o u s o de l i m p a d a f l u o r e s ­ c e n t e G r o - L u x de 20 W, m a r c a S y l v a n i a e f i l t r o f o r m a d o p o r f o l h a s i m p l e s de p a p e l c e l o f a n e v e r ­ m e l h o ; d) L u z a z u l o b t i d a p e l o u s o de l i m p a d a f l u o r e s c e n ­ te azul, m a r c a P h i l l i p s , de 15 W, c o m p i c o a 4 5 0 n m ( N O R O N H A et a l. 3 1 9 7 8 ) e f i l t r o f o r m a d o p o r folha, s i m p l e s de p a p e l c e l o f a n e azul, p a r a r e m o ­ v e r a luz v e r m e l h a , q u e -essa l i m p a d a também t r a n s " m i t e; e) V e r m e l h o e x t r e m o foi o b t i d o u t i l i z a n d o - s e l i m p a ­ da i n c a n d e s c e n t e de 40 W e f i l t r o f o r m a d o p o r três f o l h a s de p a p e l c e l o f a n e a z u l e d u a s folhas de p a p e l c e l o f a n e v e r m e l h o , c o m p i c o a 7 3 0 n m (N0_ R O N H A e t a l , 1 9 7 8 ; R A N D I e F E L I P P E , 1981).

1 6 -Os e s p e c t r o s de t r a n s m i s s ã o d o s p a p é i s c e l o f a n e v e £ m e l h o e a z u l s ã o m o s t r a d o s n a f i g u r a 1. A f i g u r a IA m o s t r a q u e o p a p e l c e l o f a n e vermelho f i_T_ t r a t o t a l m e n t e a luz a z u l e p e r m i t e a p a s s a g e m da l u z v e r ­ m e l h a e do v e r m e l h o e x t r e m o . A f i g u r a 1B m o s t r a q u e o p a ­ p e l c e l o f a n e a z u l f i l t r a t o t a l m e n t e a luz v e r m e l h a , n a f a i ­ xa c o m p r e e n d i d a e n t r e 6 0 0 a 6 8 0 nm, m a s p e r m i t e a p a s s a g e m de 9 0 % do v e r m e l h o e x t r e m o . A l - m p a d a g^To-lux a p r e s e n t a p i c o s de p e q u e n a i n t e n ­ s i d a d e a 4 4 0 n m e 5 5 0 n m e u m p i c o de g r a n d e intensidade(3,0 .. . _ 2 . . jiiW.cm ) a 6 6 0 nm. 0s p i c o s q u e o c o r r e m n a s f a i x a s da luz v e r d e e d a luz a z u l s ã o e l i m i n a d o s p e l o u s o do f i l t r o de p a p e l c e l o f a n e v e r m e l h o ( F i g u r a IA). 2 .1 - L u z V e r m e l h a n a D e t e r m i n a ç ã o do P e r T o d o de P r é - i n d u ç ã o e T r a t a m e n t o s M ú l t i p l o s ; Reve_r s ã o V e r m e l h o - V e r m e l h o - E x t r e m o T r a t a m e n t o de l u z v e r m e l h a ( d e s c r i t a e m b) de 1 m i ­ n u t o de d u r a ç ã o foi a p l i c a d o a e s p o r o s q u e permaneceram p o r 1, 3 , 6 , 1 2 , 18, 20 , 22 , 24 , 36 e 48 h o r a s em e m b e b i ç ã o e s c u r o , a 25°C. A p ó s o t r a t a m e n t o l u m i n o s o , os e s p o r o s r e ­ t o r n a r a m ao e s c u r o . C o m o u s o d a m e s m a f o n t e de luz v e r m e l h a (b) foi v e r i f i c a d o o e f e i t o de t r a t a m e n t o s m ú l t i p l o s de luz v e r m e ­ l h a de 1 m i n u t o de d u r a ç ã o , a p ó s o p e r í o d o de p r é - i n d u ç ã o . A m o s t r a s de e s p o r o s r e c e b e r a m 1, 2, 3, 4 ou 5 t r a t a m e n t o s l u m i n o s o s , i n t e r c a l a d o s p o r p e r í o d o s de e s c u r o de 24 h o r a s , c o n f o r m e a s e q l i i n c i a a s e g u i r : no

1 7 -4 8 h E - V - 5 d i a s E; 4 8 h E - V - 2 4 h E - V - 4 - d i a s E; , - 4 8 h E - V - 2 4 h E - V - 2 4 h E - V - 3 3 d i a s E; 4 8 h E - V - 2 4 h E - V - 2 4 h E - V - 2 4 h E - V - 2 d i a s E; 4 8 h E - V - 2 4 h E - V - 2 4 h E - V - 2 4 h E - V - 2 4 h E - V - l d i a E. E = escuro; V = tratamento de 1 minuto de luz vermelha.

A r e v e r s ã o do e f e i t o da luz v e r m e l h a p e l o v e r m e l h o e x t r e m o ( d e s c r i t o em e) foi v e r i f i c a d a . Os t r a t a m e n t o s l u m i n o s o s f o r a m r e a l i z a d o s a p ó s o p£ r í o d o de p r é - i n d u ç ã o . T r a t a m e n t o s de v e r m e l h o - e x t r e m o de 1 e 5 m i n u t o s de d u r a ç ã o f o r a m f o r n e c i d o s imediatamente a p o s o t r a t a m e n t o de luz v e r m e l h a ( c o n f o r m e b) de 1 m i n u t o de d u r a ç ã o . F o i d e t e r m i n a d o o - t e m p o de e s c a p e d a r e v e r s ã o do e f e i t o de l u z v e r m e l h a p e l o v e r m e l h o - e x t r e m o , p a r a t r a t a ­ m e n t o s l u m i n o s o s de c u r t a d u r a ç ã o , f o r n e c i d o s a p o s a p r é - i n d u ç ã o . O b s e r v o u - s e o e f e i t o de v e r m e l h o e x t r e m o de 5 m i ­ n u t o s de d u r a ç ã o , f o r n e c i d o a p o s 0, 4, 6 e 8 h o r a s de escjj ro i n t e r c a l a d a s ao t r a t a m e n t o de luz v e r m e l h a , de 1 m i n u t o de d u r a ç ã o . 2 . 2 - T r a t a m e n t o s L u m i n o s o s de L o n g a D u r a ç ã o A m o s t r a s de e s p o r o s q u e p e r m a n e c e r a m p o r 48 horas em e m b e b i ç ã o no e s c u r o , r e c e b e r a m t r a t a m e n t o s l u m i n o s o s de 1, 2, 4, 6, 8 e 10 h o r a s de d u r a ç ã o , p a r a a f o n t e l u m i n o s a a ou 1, 2, 4, 6 e 8 h o r a s de d u r a ç ã o p a r a as f o n t e s l u m i n o — s a s b e c. N e s s e s e x p e r i m e n t o s f o r a m f e i t o s tris t i p o s de

1 8 -c o n t r o l e s : - g e r m i n a ç ã o e m l u z c o n s t a n t e , u t i l i z a n d o - s e f o n t e l u m i n o s a u s a d a n o s o u t r o s t r a t a m e n t o s de luz; - g e r m i n a ç ã o a p ó s t r a t a m e n t o l u m i n o s o de 1 m i n u t o , u t i l i z a n d o - s e a m e s m a f o n t e l u m i n o s a d o s t r a t a m e n " t o s l o n g o s ; - t r a t a m e n t o de e s c u r o c o n s t a n t e . F o i v e r i f i c a d o t a m b é m o e f e i t o de t r a t a m e n t o s l u m i ­ n o s o s de 24, 48 o u 120 h o r a s , u t i l i z a n d o - s e as f o n t e s 1 unn_ n o s a s a ” be c. Os t r a t a m e n t o s f o r a m r e a l i z a d o s a p o s o p e ­ ríodo de p r é - i n d u ç ã o e os e x p e r i m e n t o s t i v e r a m c o m o c o n t r o " le g e r m i n a ç ã o em luz c o n s t a n t e . . 2 . 3 - L u z A z u l F o i v e r i f i c a d o o e f e i t o de t r a t a m e n t o s ú n i c o s ou m ú l t i p l o s de luz a z u l (d) de 1 m i n u t o de d u r a ç ã o , f o r n e c i ­ d o s a p ó s o p e r í o d o de p r é - i n d u ç ã o . V e r i f i c o u - s e t a m b é m o e f e i t o de t r a t a m e n t o s de l o n g a d u r a ç ã o : 24, 48 e 120 h o r a s . Os e x p e r i m e n t o s t i v e r a m c o m o c o n t r o l e s : - g e r m i n a ç ã o s o b luz f l u o r e s c e n t e b r a n c a constante; - t r a t a m e n t o de e s c u r o c o n s t a n t e ; . - g e r m i n a ç ã o s o b l u z a z u l c o n s t a n t e . V e r i f i c o u - s e t a m b é m o e f e i t o de l u z a z u l f o r n e c i d a a p ó s o t r a t a m e n t o de 8 h o r a s de luz v e r m e l h a . A luz v e r m e ­ l h a f o i a p l i c a d a a p ó s o p e r í o d o de p r é - i n d u ç ã o . T a m b é m foi v e r i f i c a d o o e f e i t o da l u z v e r m e l h a (b) f o r n e c i d a a p ó s u m t r a t a m e n t o de 48 h o r a s de l u z azul, c o n f o r m e a s e q ü i n c i a a s e g u i r :