BMM0252 - Microbiologia de Alimentos DIURNO 2021
Gabriela Louro Massaretto Nº USP: 11791161
Lina Miki Yamamoto Nº USP: 11791435
Marhya Júlia Silva Leite N° USP: 11342889
Pamella Toneli Latorre Nº USP: 11791442
Questionário da aula prática:
Prática 3
Caracterização e diferenciação de bactérias com base no seu metabolismo em
diferentes meios de cultura
Instruções:
a) Semeando bactérias em meios distintos para diferenciar com base no seu
metabolismo: a seguir se encontra o roteiro de prática e questões a responder com
base nos itens (b), (c) e (d) abaixo
b) folhetos informativos da composição e uso de meios de cultura comerciais
similares aos da prática indicada em (a)
c) resultados da prática presencial para analisar e responder às questões ao final
deste roteiro
d) vídeos de como se fazem provas bioquímica para identificar enterobactérias em
um kit API
Identificando gram negativas com kit API
https://www.youtube.com/watch?v=tkGpcdBH9N0
Caracterização e diferenciação de bactérias com base no seu metabolismo em
diferentes meios de cultura
Objetivos: Observar a inoculação de várias espécies bacterianas em diferentes
meios de cultura. Conceito de meio de cultura. Conceitos de meios seletivos e
meios diferenciais. Conceito de fator de crescimento.
Todos os meios são esterilizados por autoclavação a 121
0C por 15 minutos ou
filtrados.
*Peptona- produto da digestão de proteínas, composto de aminoácidos.
**Extrato de carne - extrato aquoso de tecido muscular, concentrado, composto por
vitaminas, sais, carboidratos e outras substâncias hidrossolúveis .
***Extrato de levedura - extrato aquoso de leveduras, concentrado, rico em
vitaminas do complexo B, além de outros compostos orgânicos, ricos em nitrogênio.
Material Biológico:
Culturas de Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella sp e
Staphylococcus aureus.
Procedimento:
As culturas indicadas acima foram semeadas em meios de cultura sólidos
indicados na tabela e incubadas a 37
oC por 24 h
Meios Bactérias
Escherichia coli Salmonella sp S. aureus Pseudomonas aeruginosa Ágar manitol salgado Não houve crescimento. O meio de cultura é seletivo, ou seja, vai favorecer somente a bactéria em estudo, S. aureus, e impedir o crescimento das outras. Não houve crescimento. O meio de cultura é seletivo, ou seja, vai favorecer somente a bactéria em estudo, S. aureus, e impedir o crescimento das outras. Houve crescimento. A colônia ficou com um tom amarelado ao redor do crescimento da bactéria. A S. aureus é uma bactéria gram-positiva. O meio de cultura possui: peptonas e extracto de bovino e cloreto de sódio. A S. aureus é positiva para a coagulase (uma adesina), por
isso, produzem colônias amarelas e
Não houve crescimento. O meio de cultura é seletivo, ou seja, vai favorecer somente a bactéria em estudo, S.
aureus, e impedir o
crescimento das outras.
um meio amarelo ao redor das colônias.
Ágar MacConkey
Houve crescimento. A colônia adquiriu uma coloração rosa
escuro. A E. coli é uma bactéria fermentadora de lactose, logo, a cor
fica rosa. O crescimento bacteriano é possível,
visto que essa bactéria é gram-negativa (mais
resistente aos sais).
Houve crescimento. A colônia ficou com
uma cor esbranquiçada/bege.
A Salmonella sp é uma bactéria gram-negativa (mais resistente aos sais), logo, seu crescimento
no meio é possível. Contudo, a cor fica bege porque a maioria
das salmonelas não fermenta lactose. Não houve crescimento. O meio de cultura é seletivo e diferencial, e inibe o crescimento de todas as bactérias gram-positivas, como a S. aureus, devido à concentração de sais biliares no meio. Houve crescimento. A colônia ficou com um tom rosa claro.
A Pseudomonas
aeruginosa é uma
bactéria fermentadora de lactose, de forma
que a colônia fica rosada. O crescimento
é possível, porque as Pseudomonas são gram-negativas (mais
resistentes aos sais).
Ágar nutriente Uma vez que este tipo de ágar comporta nutrientes necessários ao crescimento dos microrganismos, todos apresentam crescimento, já que não simboliza um meio seletivo, e sim, um meio diferencial,
assim houve crescimento, mas, neste caso, não houve
mudança de cor.
Houve crescimento, uma vez que este tipo
de ágar comporta nutrientes necessários ao crescimento dos microrganismos, todos apresentam crescimento, já que não simboliza um meio seletivo, assim
houve crescimento, mas, neste caso, não
houve mudança de cor.
Houve crescimento e, neste caso, a colônia
adquiriu uma coloração bege e dourada, relacionada à capacidade das colônias de Staphylococcus aureus de produzir pigmento carotenóide, de acordo com a cepa, do meio usado e
a idade da cultura. Houve crescimento e a colônia formada adquiriu uma coloração amarela-esverdeada, já que é classificada como gram-positiva e o nitrogênio, carbono, vitaminas e aminoácidos são fornecidos pela Digestão Enzimática de Gelatina e Extrato de Carne Bovina. Ágar verde brilhante Houve crescimento. O ágar adquiriu uma coloração amarela. Isso acontece porque
Houve crescimento. O ágar adquiriu uma
cor
predominantemente
Não houve crescimento. O ágar verde brilhante
é um meio altamente
Não há crescimento. O ágar verde brilhante
é um meio altamente seletivo, utilizado para
o corante Vermelho de Fenol é usado como indicador de pH, e a
E. coli fermenta a
lactose, deixando o meio mais ácido
(abaixo de 6.4). Portanto, a colônia
fica amarela.
rosa-avermelhada. Isso acontece porque o corante Vermelho de
Fenol é usado como indicador de pH, e a
Salmonella sp não
fermenta a lactose, deixando o meio mais básico (acima de 8.0). Portanto, a colônia fica esbranquiçada
com halo avermelhado.
seletivo, utilizado para isolar Salmonelas (exceto S. typhi). A E.
coli, por exemplo,
também pode apresentar um leve
crescimento, mas esse não é o caso das
bactérias gram-positivas, como
a S. aureus
isolar Salmonelas (exceto S. typhi). A E.
coli, por exemplo,
também pode apresentar um leve
crescimento, mas esse não é o caso das
Pseudomonas, que
são totalmente inibidas
Ágar citrato de Simmons
Este tipo de ágar verifica a capacidade da bactéria de utilizar
o citrato de sódio como única fonte de carbono, juntamente com sais de amônia, alcalinizando o meio, assim passando a modificar a coloração do meio de verde para
azul. Caso o microrganismo seja capaz de metabolizar citrato, os sais de amônio são quebrados em amônia, o que aumenta a alcalinidade. A mudança no pH transforma o indicador azul de bromotimol no meio de verde para azul acima de pH 7,6.
Levando em consideração o que foi
dito em relação à
Escherichia coli, neste
caso em relação à Salmonella sp, esta apresenta modificação da coloração do meio, já que seu crescimento garante a mudança de coloração de verde para azul.
Levando em consideração o que foi
dito em relação à
Escherichia coli, neste
caso em relação à S.
aureus, o que ocorre é
que esta apresenta características de gram-positivas e não possui a capacidade de utilizar o citrato de
sódio como única fonte de carbono, juntamente com sais de amônia, assim, não
alcalinizando o meio, e portanto, mantendo a coloração verde, uma vez que não há
crescimento da mesma.
Levando em consideração o que foi
dito em relação à
Escherichia coli, neste
caso em relação à
Pseudomonas aeruginosa, é que
esta está inserida no grupo de gram-negativas, assim, apresentando, não apenas por conta de sua denominação,
mas também pela capacidade de utilizar
o citrato de sódio como única fonte de carbono, juntamente com sais de amônia, assim, alcalinizando o
meio, o modificando de verde para azul.
Desta forma, a
Escherichia coli, não
apresenta modificação nas cores, permanecendo a coloração azulada do
meio, uma vez que não há traços de seu
crescimento. Ágar cetrimide Não houve crescimento, nem mudança de cor. O meio de cultura é seletivo e inibe o crescimento de outros microrganismos a não ser a bactéria Pseudomonas aeruginosa. Não houve crescimento, nem mudança de cor. O meio de cultura é seletivo e inibe o crescimento de outros microrganismos a não ser a bactéria Pseudomonas aeruginosa. Não houve crescimento, nem mudança de cor. O meio de cultura é seletivo e inibe o crescimento de outros microrganismos a não ser a bactéria Pseudomonas aeruginosa. Houve crescimento e mudança de cor. A colônia formada adquiriu coloração azul-esverdeada e possui fluorescência
sob luz UV. Este meio de cultura é
composto por: hidrolisado pancreático de gelatina; cloreto de magnésio; sulfato de potássio; glicerol; cetrimida; e ágar. Sua composição permite o desenvolvimento de piocianina e fluoresceína. A produção de piocianina (pigmento azul-esverdeado) é estimulada pelo cloreto de magnésio e sulfato de potássio.
Já a produção de pigmentos fluorescentes (pioverdinas) ocorre por algumas cepas de
Pseudomonas aeruginosa.
Além disso, o meio de cultivo apresenta um odor característico. Ágar Baird Parker Não houve crescimento. O meio de cultura é seletivo, ou seja, vai permitir o crescimento somente da bactéria em estudo, no caso dessas, a S. aureus, e impedir o crescimento das outras. Não houve crescimento. O meio de cultura é seletivo, ou seja, vai permitir o crescimento somente da bactéria em estudo, no caso dessas, a S. aureus, e impedir o crescimento das outras. Houve crescimento. A colônia adquiriu uma cor bem forte, escura e bem definida,
na coloração preta. Este meio é feito a partir de: glicina, peptona, cloreto de lítio e telurito de potássio e gema de ovo. Os compostos, cloreto de lítio e telurito de potássio agem como
agentes seletivos. Enquanto a gema é usada para detectar lecitinase (enzima que
hidrolisa os ésteres das lecitinas) e a atividade da lipase (enzima digestiva). E a cor preta na colônia acontece devido à redução do telurito de potássio. Não houve crescimento. O meio de cultura é seletivo, ou seja, vai permitir o crescimento somente da bactéria em estudo, no caso dessas, a S. aureus, e impedir o crescimento das outras.
