Braz. j. . vol.83 número2

(1)

www.bjorl.org

Brazilian

Journal

of

OTORHINOLARYNGOLOGY

ARTIGO

ORIGINAL

Specific

immediate

early

gene

expression

induced

by

high

doses

of

salicylate

in

the

cochlear

nucleus

and

inferior

colliculus

of

the

rat

夽

Paula

Santos

a,b

,

Lilian

Eslaine

Costa

Mendes

da

Silva

a

e

Ricardo

Maurício

Leão

b,∗

a_Universidade_de_São_Paulo_(USP),_Escola_de_Medicina_de_Ribeirão_Preto_(FMRP),_Departamento_de_Oftalmologia_e

OtorrinolaringologiaeCirurgiadeCabec¸aePescoc¸o,RibeirãoPreto,SP,Brasil

b_Universidade_de_São_Paulo_(USP),_Escola_de_Medicina_de_Ribeirão_Preto_(FMRP),_Departamento_de_Fisiologia,_Ribeirão_Preto,_SP,

Brasil

Recebidoem29deabrilde2015;aceitoem16defevereirode2016 DisponívelnaInternetem16defevereirode2017

KEYWORDS

Salicylate; Tinnitus;

Cochlearnucleus; Inferiorcolliculus

Abstract

Introduction:Salicylateathighdosesinducestinnitus inhumansandexperimentalanimals. However,themechanismsandlociofactionofsalicylateininducingtinnitusarestillnotwell known. TheexpressionofImmediateEarly Genes(IEG)istraditionallyassociated with long--termneuronalmodificationsbutitisstillnotclearhowandwhereIEGsareactivatedinanimal modelsoftinnitus.

Objectives: Herewe investigatedtheexpressionofc-fosandEgr-1,two IEGs,intheDorsal CochlearNucleus(DCN),theInferiorColliculus(IC),andthePosteriorVentralCochlearNucleus (pVCN)ofrats.

Methods:Ratsweretreatedwithdosesknowntoinducetinnitusinrats(300mg/kgi.p.daily, for 3 days), andc-fos andEgr-1 protein expressions were analyzed usingwestern blot and immunocytochemistry.

Results:Afteradministrationofsalicylate,c-fosproteinexpressionincreasedsignificantlyin theDCN,pVCNandICwhenassayedbywesternblot.Immunohistochemistrystainingshowed amoreintenselabelingofc-fosintheDCN,pVCNandICandasignificantincreaseinc-fos positivenucleiinthepVCNandIC.WedidnotdetectincreasedEgr-1expressioninanyofthese areas.

DOIserefereaoartigo:http://dx.doi.org/10.1016/j.bjorl.2016.02.011

夽 _Como_citar_este_artigo:_Santos_P,_da_Silva_LE,_Leão_RM._Specific_immediate_early_gene_expression_induced_by_high_doses_of_salicylate_in

thecochlearnucleusandinferiorcolliculusoftherat.BrazJOtorhinolaryngol.2017;83:155---61. ∗_Autor_para_{correspondência.}

E-mail:[email protected](R.M.Leão).

ArevisãoporparesédaresponsabilidadedaAssociac¸ãoBrasileiradeOtorrinolaringologiaeCirurgiaCérvico-Facial.

(2)

Conclusion:OurdatashowthatahighdoseofsalicylateactivatesneuronsintheDCN,pVCN andIC.Theexpressionofthesegenesbyhighdosesofsalicylatestronglysuggeststhatplastic changesintheseareasareinvolvedinthegenesisoftinnitus.

creativecommons.org/licenses/by/4.0/).

PALAVRAS-CHAVE

Salicilato; Zumbido; Núcleococlear; Colículoinferior

Expressãoespecíficadegenesprecocesimediatosinduzidapordoseselevadas desalicilatononúcleococlearecolículoinferiorderato

Resumo

Introdução:Salicilatoemdoseselevadasinduzzumbidonossereshumanoseemanimais expe-rimentais.Noentanto,osmecanismoselocideaçãodosalicilatonainduçãodezumbidoainda não sãobemconhecidos.A expressãodosgenes precocesimediatos (GPIs)está tradicional-menteassociadaaalteraçõesneuronaisemlongoprazo,masaindanãoestáclarocomoeonde osGPIssãoativadosemmodelosanimaisdezumbido.

Objetivos: Nopresenteestudoinvestigamosaexpressãodec-foseEgr-1,doisGPIs,nonúcleo cocleardorsal(NCD),colículoinferior(CI)enúcleococlearventralposterior(NCVp)deratos.

Métodos: Osratosforamtratadoscomdosesque,conhecidamente,induzemzumbidoemratos (300mg/kgIP/dia,portrêsdias)easexpressõesdasproteínasc-foseEgr-1foramanalisadas pormeiodeWesternbloteimunoistoquímica.

Resultados: Após a administração de salicilato, a expressão da proteína c-fos aumentou significativamentenoNCD,NCVpeCI,quandoanalisadosporWesternblot.Acoloração imu-noistoquímicamostrouumamarcaçãomaisintensadec-fosnoNCD,NCVpeCIeumaumento significativodenúcleospositivosdec-fosnoNCVpeCI.Nãodetectamosaumentodaexpressão deEgr-1emqualquerdessasáreas.

Conclusão:NossosdadosmostramqueumadosealtadesalicilatoativaneurôniosnoNCD,NCVp eCI.Aexpressãodessesgenespordosesaltasdesalicilatosugerequeasalterac¸õesplásticas nessasáreasestãoenvolvidasnagênesedozumbido.

creativecommons.org/licenses/by/4.0/).

Introduc

¸ão

Ozumbidoé umasensac¸ãosonorafantasma quepodeser a consequência de vários fatores, inclusive trauma acús-tico,drogas,distúrbiosmandibularestemporaisousurdez.1

Os mecanismos de indução e manutenção do zumbido aindasãoumaquestãodedebate,especialmenteporqueo zumbidopoderesultardediferentescondições.Doses ele-vadasdesalicilato induzem zumbidoem sereshumanos e dosesde150-400mg/kginduzemsintomascomportamentais dezumbidoemanimaisexperimentaisemmenosde24horas eesseefeitodesapareceematé72horasapósainterrupção dotratamento.2

A despeito do uso comum de salicilato como agente indutordezumbido,seusmecanismoselocideac¸ãoainda sãoobscuros.Experimentoscomimagensin vivoem ratos demonstraram que altas doses de salicilato causam hipe-ratividadeem áreasauditivasespecíficas,como ocolículo inferior(CI),onúcleococleardorsal(NCD)eocórtex audi-tivo (CA),mas nãoo núcleococlear ventral (NCV).3,4 _Por

outrolado,estudosdaexpressãodogeneprecoceimediato c-fos relataram resultados menos consistentes. Uma dose única de salicilato (350mg/kg) aumentou a expressão de

c-fos apenas no CA de gerbilos.5 _Um _estudo _anterior_não

mostrou expressão de c-fos no tronco cerebral auditivo após umaúnica dose de salicilato, mas apenas em áreas não auditivas, como o locus coeruleus e a área cinzenta periaquedutal.6 _Outro _estudo _observou _uma _diminuic_¸ão

da expressão de c-fos noCI de gerbilos.7 _Um _estudo _que

usou o tratamento crônico com salicilato (250mg/mL) mostrouumaumentodaexpressão dec-fosapenasnoCI, enãonoNCD.8_A_maioria_desses_dados_está_de_acordo_com

as observac¸ões de que o zumbido induzido por salicilato ativa as vias auditivas extralemniscais, especialmente no NCD.2,3

Aexpressãodosgenesprecocesimediatos(GPIs)é con-siderada um marcador do aumento da atividade cerebral em respostaa diversosestímulos. Essesgenes sãofatores de transcrição que desencadeiam a expressão de outros genesresponsáveisporalteraçõesdelongoprazonos neurô-nios.AexpressãodoGPIc-foséummarcadorcomumente usadodaatividadeneuronaleérapidamentesuprarregulado apósaestimulaçãoneuronal.9---12_Já_o_GPi_egr-1_é_ativada_em

(3)

Nesteestudo,nossoobjetivofoiinvestigaraativaçãode c-fos e egr-1no NCDe CIem vias auditivasde ratos sub-metidosa protocolodeadministração desalicilato, queé eficazna induçãodezumbidoem ratos(três dosesdiárias de300mg/kg).3_Devido_à_sua_proximidade_com_o_NCD,

ava-liamostambémaexpressãodessesgenesnonúcleococlear ventralposterior(NCVp).

Método

Animaisetratamentomedicamentoso

Todos os procedimentos experimentais feitos nos animais foram aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa Ani-mal da instituição (protocolo n◦ _011/2013) _e _seguiram _as orientações e recomendações dos Institutos Nacionais de Saúde sobre o tratamento dos animais. As experiências foramfeitasemratosWistarmachosentre60e65gramas. Osratosforamagrupadosemantidosemnúmerode4-5por gaiola,em ciclo claro/escuro de 12h/12h, comcomida e

águaadlibitum.

OsanimaisforaminjetadosporviaIPcom300mg/kgde salicilatodesódio(Sigma)(10␮L/g)dissolvidosemsoro

fisi-ológico, durante três dias consecutivos, com intervalo de 24 horas para cada dose. Osanimais foram,então, anes-tesiados com isofluranoe sacrificadospor decapitação no terceiro dia,três horas apósa administraçãodofármaco. Osgruposcontrolereceberamadministraçãodesoro fisioló-gicodeacordocomomesmoprotocolo.Esseprotocolode administraçãodesalicilatodemonstrousereficaznaindução dezumbidoemratos.3

Detecc¸ãodeegr-1ec-foscomousodeWestern

blotting

Ao todo, 40 animais foram usados para os experimentos: 20eramanimaiscontrolee20submetidosatratamentocom salicilato. Lâminascomsecc¸õesfrescas (90␮m) dotronco

cerebralcom NCVp,NCDeCIforamobtidasemcriostato. Para fazera biopsia daárea desejada, usamosumbisturi circular para retirada de material (punch) de 0,5mm de diâmetro.Devidoaseuspequenostamanhose localizac¸ão contígua,oNCDeNCVpforamextraídosnomesmobisturi. Umabiópsiafoiobtidadecadaumdosquatroanimaiseos materiaisretiradosforamagrupadosparaaumentara quan-tidadedeproteína.Otecidofoihomogeneizadoemtampão delisecom137mMdeNaCl;20demMTris;Igepal CA-630 a1%; glicerola 10%; 2mMdeortovanadato desódio; sul-fatodedodecilodesódioa1%;50mMdefluoretodesódio; 2mMdeEDTA;ecoqueteldeinibidoresdeprotease a10% empHde7,4.Oshomogeneizadosdetecidoforam centri-fugadosa15.000rpmpor10minutosa4◦_C._A_concentrac_¸ão de proteína nos tecidos homogeneizados foi determinada como usodeumensaiodeLowry modificado(DCProtein

Assay,Bio-Rad).Alíquotascom90␮gdeproteínaforam

dis-solvidasemtampãodecargaeaquecidasa95◦_C_por_cinco minutoseasproteínasforamseparadasporTris-glicina SDS--PAGEa7,5%(GEHealthcare-Bioscience)etransferidaspara membranasdePVDF(AmershamBiosciences).

Asimunotransferênciasforambloqueadascomalbumina a 5% e incubadas com anticorpos primários a 4◦_C. _Os

anticorposprimáriosincluíramanticorpospoliclonaiscontra c-fos e egr-1 (1:1.000;Santa Cruz Biotechnology). Após a incubac¸ão,amembranafoilavadaeincubadacom anticor-possecundários(1:10.000;ECLanti-RabbitIgG;GE Health-care)porumahoraemtemperaturaambiente.Apósas lava-gensfinais,asproteínasmarcadasforamdetectadaspor qui-mioluminescência(RPN2132;GE Healthcare).Para a strip-pingereprobing,amembranafoisubmersaemtampãode extrac¸ão(100mMde20-mercaptoetanol;sulfato de dode-cilodesódioa2%;62,5mMTris-HCl;pHde6,8)a50◦_C,_por oitominutos,lavadapor90minutossobáguadetorneira, reidratadacommetanol elavadacomTBS-Tantesde blo-queareressondarcomanticorposprimárioscontraGAPDH (1:5.000;Abcam).Asamostrasforamfotografadase quanti-ficadascomanálisedeimagem(MolecularImagingSystems).

Imunoistoquímicadec-fos

Dezratosforamusados,cincocontroleecincosubmetidosa tratamentocomsalicilato.Osratosforamperfundidos trans-cardialmentecomNaCla0,9%,seguidodeparaformaldeído a4%em0,1Mdetampãodefosfato(pHde7,4).Océrebro foiremovido, pós-fixado na mesmasoluc¸ão por umahora e crioprotegido com sacarose a 30% em 0,1M de tampão defosfatopordoisdiasa4◦_C._Os_cérebros_foram individu-almenteseccionados(50␮M) noplanotransversal comum

criostato.

As secções foram lavadas em PBS (0,01M, pH de 7,4) eincubadasem PBScomperóxidodehidrogênioa 1%por 30minutos,para inativar asperoxidasesendógenas. Após váriaslavagens em PBSpor 30minutos, assecções foram colocadasem sorodecabranormala5%(Vector)poruma horae incubadaspor 48 horas a 4◦_C _com _anticorpos pri-máriosantic-fosgeradosem coelhos(1:100; SantaCruz). DepoisdelavadasemPBS,assecçõesforamincubadaspor 1h30àtemperaturaambientecomIgGanticoelhodecabra biotinilada(1:150;Vector).Subsequentemente,foram lava-dasemPBSecolocadaspor1h30emcomplexodeperoxidase avidina-biotina(Vectastain, Vector). Aimunomarcação foi reveladaporincubaçãode5a10minutoscomtetracloreto de3,3’-diaminobenzidinaa0,05%eperóxidodehidrogênio a0,1%.Assecçõesforammontadasem lâminasrevestidas comgelatina,desidratadas,depuradascomxilenoe cober-tascomlaminulascomEntellan®.

Análisedosdados

Osdadosdatécnica deanáliseWestern blotsão apresen-tadoscomoarazãoentrec-foseaintensidadedosinalda proteínaGAPDH.Osnúcleoscoradosnassec¸õesdoCIforam manualmentecontados.Nototal,11secc¸õescomoCI,nove como NCD e seis com o NCVpforam contadaspara cada animal.Todososdadosforamexpressoscomomédia±DP. AanáliseestatísticafoifeitacomotestetdeStudent.Um valorp<0,05foiconsideradoestatisticamentesignificativo.

Resultados

(4)

150

100

50

c-fos/GAPDH

Virgens Salicilato

**

N

s o f -c a

D k 2 6

GAPDH 37 kDa

S N S N S N S N S

0

Figura1 Expressãodec-fosnoNC. Superior:quantificac¸ão daexpressãodec-fos.Aintensidadedosinaldec-fosfoi nor-malizadacomaintensidade desinal deGAPDH (**p=0,0058; n=5para cadagrupocommaterial dequatro animais). Wes-tern blost mostraa imunorreatividadedec-fose GAPDH em biópsias(punches)comoNC(N,virgens;S,salicilato).

expressãodaproteínac-fos.Emambasasáreas,aproteína c-fos estava significativamente aumentada após o trata-mento com salicilato (figs. 1 e 2). Em contrapartida, o aumentodaexpressãodaproteínaegr-1nãofoidetectado nessasregiõesapósotratamentocomsalicilato(fig.3).

Como a localização daproteína de c-fos não pôdeser identificadapeloWesternblot,fizemosaimunocitoquímica dec-fosemsecçõescomNCD,NCVpeCI.Detectamosc-fos emsecçõesdeNCD,NCVpeCI,comomostradonafigura4. Nassecçõesdosanimaisvirgensdetratamento,umafraca coloraçãodosnúcleosfoiobservadaemtodasastrêsregiões (fig. 4A). Nas seções dos animais tratados com salicilato, núcleos mais intensamente corados em NCD, NCVp e CI foram observados (fig. 4B). No NCD, essa marcação mais

100

80

60

40

20

Virgens

c-fos/GAPDH

N

62 kDa c-fos

GAPDH 37 kDa

S N S N S N S N S

Salicilato

**

0

Figura2 Expressãode c-fos noCI. Superior: quantificac¸ão daexpressãodec-fos.Aintensidadedosinaldec-fosfoi nor-malizadacomaintensidade dosinal deGAPDH (**p=0,0012; n=5para cadagrupocommaterial dequatro animais). Wes-tern blost mostraa imunorreatividadedec-fose GAPDH em biópsias(punches)contendooIC(N,virgens;S,salicilato).

CN

IC

N S N S S

S S

S N

N

82 kDa EGR 1

EGR 1 82 kDa

Figura3 Western blostmostraaimunorreatividadede egr-1embiópsias(punch)comoNCD/NCVpeCIderatosvirgens detratamentoeapósotratamentocomsalicilatodesódio(N, virgens;S,salicilato).

intensafoi observadanas camadasmaisinternas,camada profundaepossivelmenteacamadafusiforme(fig.4BeC)e observadaprincipalmentenasecc¸ãomedial/dorsaldoNCD. Não observamosmarcac¸ão na camada molecular.Também observamosaumentodarotulagemdec-fosnoNCVp adja-centeaoNCD(fig.4BeD).NoCI,observamosumaumentoda imunorreatividade,principalmentenaparte central,como podeservistonafigura4Ee4F.Nãoobservamosrotulagem naolivasuperior(nãomostrado).

Aanálisequantitativadosnúcleos queexpressam c-fos demonstrou umaumento significativodenúcleospositivos para c-fos no NCVp (controle: 155±9,2 núcleos; salici-lato:228±26,4 núcleos;p=0,04, n=4) e noCI (controle: 1190±86núcleos;salicilato:1611±79núcleos;p=0,0061, n=5),masnãonoNCD(controle:135±15 núcleos; salici-lato: 170±9,5 núcleos; p=0,1; n=4), como mostrado na figura4G.

Discussão

Nossosdadosmostramqueotratamentoportrêsdiascom doses elevadas desalicilato aumenta aexpressão do pro-dutodoGPIc-fos,masnãodeegr-1noNCVp,NCDeCIde ratos.Emboratenhamosobservadooaumentodosníveisda proteínac-foseumamarcac¸ãonuclearmaisintensanoCI, NCDeNCVpapósosalicilato,onúmerodenúcleoscorados foi significativamente maior apenasno NCVp CI, masnão noNCD.Essesdadosestãodeacordocomahiperatividade de NCD e CI observadaem ratos submetidos a um proto-colosimilardetratamentocomsalicilato3,15,16_e_em_outros

modelosanimaisdezumbido.17,18 _Por_outro _lado,

observa-mosumaumentosignificativonaexpressãodec-fosnoNCVp adjacente,umaregiãoquegeralmentenãoestárelacionada à induc¸ãode zumbido.3 _Esse _aumento_da_expressão _de

c--fosnoNCD,NCVpeCIsugerequeaexpressãodessesGPIs promoveaexpressãodeproteínasquepodemalteraras pro-priedades fisiológicase morfológicas dos neurônios dessas regiões,oquepoderiaserumsubstratoparaainduc¸ãode zumbido.

Outrospesquisadores4---7_avaliaram _a_expressão _de_c-fos

(5)

A

C

E

G

B

D

F

DCN

pVCN

DCN

IC

C I N

C V p N

C D

2.000 300

250

200

150

100

50

Virgens Salicilato

Núcleos Núcleos Núcleos

Virgens Salicilato

*

Virgens Salicilato

**

0

200

100

0

1.500

1.000

500

0

pVCN

200 µm

Figura4 Detecçãodec-fosporimunocitoquímicanoNCDeCI.A,SecçãocomoNCDeonúcleococlearventralposterior(NCVp) deumanimalvirgemdetratamento.B,SecçãocomoNCDeoNCVpdeumanimaltratadocomsalicilato.C,Detalhedosnúcleos queexpressamc-fosnoNCDapartirdoquadradomostradoemB.D,Detalhedosnúcleosqueexpressamc-fosnoNCVPapartirdo quadradomostradoemB.E,SeçãocomoCIdeumanimaltratadocomsalicilato.F,Detalhedenúcleosqueexpressamc-fosnoCI apartirdoquadradomostradoemE.G,Quantificaçãodaexpressãodec-fosnoNCD,NCVpeCI[*p=0,04;**p=0,006;n=4(NCD, NCVP)e5(CI)].

atribuídasaofatodequeusamosanimaismaisjovenseque esses estudosadministraram umadose única desalicilato desódio, em vezdas três dosesdiáriasadministradas por nós. Consistente com essa hipótese, um estudo que usou seis dias de tratamento com salicilato também observou

umaumentosignificativodenúcleospositivosparac-fosno CI,masnãonoNCD.8

Emanimaisexperimentais, otratamento comsalicilato aumentaadescargadeneurôniosemambos NCDe CI.15,16

(6)

e poderiam refletir um efeito direto do salicilato na excitabilidadeneuronaldesses neurôniosoudesuas próxi-massinapses,ouumefeitodaexpressãodosGPIsinduzido pelo salicilato. Ao contrário de um efeito excitatório diretodosalicilato, demonstrou-sequea aplicac¸ãodireta de salicilato em neurônios do NCD em fatias de cérebro diminui a descarga espontânea e evocada dos principais neurônios do NCD.19,20 _Por _outro _lado, _a _aplicac_¸ão _direta

desalicilatoaumentaadescargadamaioriadosneurônios

do CI in vitro.21 _O _salicilato _também _poderia _aumentar

a excitabilidade dos neurônios de NCD e CI e diminuir suas transmissões inibitórias glicinérgicas.22 _Porém, _as

correntesglicinérgicasemneurôniosfusiformesdoNCDnão foramafetadaspelas aplicac¸ões agudas deconcentrac¸ões milimolaresdesalicilato.20_O_salicilato_também_pode_inibir

os receptores GABAérgicos23 _e _aumentar _as _correntes _de

NMDA,24 _o_que _poderia_{potencialmente}_perturbar_o

equilí-brioentreexcitac¸ão-inibic¸ão.Comoamaioriadosneurônios do NCD é espontaneamente disparada,25 _um _aumento _da

descarga produzido por salicilato pode não aumentar de forma significativa o número de neurônios expressando c-fos,o que poderiaexplicar o efeitonãosignificativo do salicilato no número de núcleos marcados com c-fos no NCD.Poroutrolado,nossosdadosmostraramumaumento significativonaexpressãodenúcleosdec-fosnoNCVp.Isso sugere que o salicilato ativava seusneurônios e que essa regiãopoderiaserrelevanteparaapercepc¸ãodezumbido. Tanto c-fos quantoegr-1 sãoexpressosnas vias auditi-vasemrespostaàestimulac¸ãosonoraeintracoclear.10,12,26,27

Curiosamente,aexpressãodec-fosnoNCDprovocadapela estimulac¸ãointracoclearfoimaisobservadaem interneurô-niosglicinérgicos na camada molecular.27 _Essa _descoberta

é intrigante, uma vez que esses interneurônios não

rece-beminputdaviaauditivaprimária,masdasfibrasparalelas

quetransmitemprincipalmenteinformações somatossenso-riais.Amarcaçãodec-fosfoiobservadaapenaspertoouna camada profunda doNCD em ambos os grupos controle e salicilato.Issosugereque c-fosé expressoprincipalmente pelosneurônios quecomputamainformaçãoauditiva. Por outrolado,nãoencontramosaumentodeexpressãode egr-1,umGPI queestá ligado àformaçãodeplasticidade em longoprazo,13_após_o_tratamento_com_salicilato._Isso_sugere

queosalicilatonãodesencadeiaaexpressãodegenes rela-cionados com a plasticidade sináptica por muito tempo. Curiosamente,umestudoanteriorobservouumadiminuic¸ão daexpressão dogeneegr-1 noCI apóso tratamento com salicilato.28

Hásemelhanc¸asentreozumbidoeadorneuropática.29,30

Issosugerequepodemcompartilharmecanismos molecula-ressemelhantes. Por exemplo,ospacientes comzumbido muitasvezesapresentamhiperacusiaeospacientescomdor crônicaapresentamhiperalgesia,ambasreac¸ões exacerba-dasàintensidadedoestímulonormal.Comopropostoparao zumbido,31 _acredita-se_que_a_dor_crônica_seja_um_resultado

dealterac¸õesplásticasemlongoprazonosneurônios senso-riaisesinapses.32 _O_GPI_c-fos_também_é_ativado_na_medula

espinhalem modelosdedorcrônicaeinflamac¸ão.33,34_Sua

expressãoépostuladacomooprimeirosinaldealterações nessesneurôniosquelevaráàdorcrônica.Portanto,é pro-vávelquec-fosativecascatassemelhantesdeexpressãodo genenozumbidoenadorcrônica,oquelevaaalterações queseriamsubjacentesàsintomatologiadessascondições.

Conclusão

Nossos dados mostram que as doses de salicilato induto-rasdezumbido3_aumentam_a_expressão_de_c-fos,_mas_não

de egr-1 em áreas auditivas do tronco cerebral: núcleo cocleardorsal,núcleococlearposteroventralecolículo infe-riorderatos.Portanto,postulamosquec-fosativacascatas deexpressãodogenenessasáreas,oquelevaaalterac¸ões quepoderiamserabasedasintomatologiadozumbido.

Conflitos

de

interesse

Osautoresdeclaramnãohaverconflitosdeinteresse.

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