Agrodok 41
Agrodok 41
O cultivo de cogumelos em
O cultivo de cogumelos em
pequena escala - 2
pequena escala - 2
Agaricus e
© Fundação Agromisa e CTA, Wageningen, 2007 © Fundação Agromisa e CTA, Wageningen, 2007
Todos os direitos reservados. Nenhuma parte desta publicação pode ser reproduzida qual- Todos os direitos reservados. Nenhuma parte desta publicação pode ser reproduzida qual- quer que seja a forma, impressa, fotográfica ou em microfilme, ou por quaisquer outros quer que seja a forma, impressa, fotográfica ou em microfilme, ou por quaisquer outros meios, sem autorização prévia e escrita do editor.
meios, sem autorização prévia e escrita do editor. Primeira edição em português: 2007
Primeira edição em português: 2007 Autor: Bram van Nieuwenhuijzen Autor: Bram van Nieuwenhuijzen Editor: Janna de Feijter
Editor: Janna de Feijter
Illustrações: Bernard Lamote, Barbera Oranje Illustrações: Bernard Lamote, Barbera Oranje Design gráfico: Eva Kok
Design gráfico: Eva Kok
Tradução: Rob Barnhoorn; revisão: Láli de Araújo Tradução: Rob Barnhoorn; revisão: Láli de Araújo Impresso por: Digigrafi, Wageningen, Pays-Bas Impresso por: Digigrafi, Wageningen, Pays-Bas
Prefácio
Prefácio
No primeiro Agrodok sobre ‘O cultivo de cogumelos em pequena No primeiro Agrodok sobre ‘O cultivo de cogumelos em pequena es-cala’, Agrodok n
cala’, Agrodok n˚˚ 40, descreve-se a técnica do cultivo de cogumelos40, descreve-se a técnica do cultivo de cogumelos
em substratos que apenas necessitam ter um tratamento pelo calor em substratos que apenas necessitam ter um tratamento pelo calor (tra-tamento térmico). Contudo, certas espécies de cogumelos, como sejam tamento térmico). Contudo, certas espécies de cogumelos, como sejam os cogumelos de palha de arroz (
os cogumelos de palha de arroz (VolvariellaVolvariella sppspp..) e os) e os champignonschampignons
(( Agaricus Agaricus sppspp..) podem ser cultivados apenas em substrato fermentado) podem ser cultivados apenas em substrato fermentado
ou composto. Os cogumelos de palha de arroz são cultivados nos ou composto. Os cogumelos de palha de arroz são cultivados nos cli-mas quentes das regiões tropicais, enquanto que o cultivo dos
mas quentes das regiões tropicais, enquanto que o cultivo dos cham- cham- pignons
pignons se realiza, sobretudo, nos climas mais se realiza, sobretudo, nos climas mais temperados.temperados.
O processo da formação de composto para o cultivo de cogumelos é O processo da formação de composto para o cultivo de cogumelos é mais complexo do que a preparação de substratos que apenas recebem mais complexo do que a preparação de substratos que apenas recebem um tratamento térmico. Por conseguinte, pareceu-nos oportuna a um tratamento térmico. Por conseguinte, pareceu-nos oportuna a pu-blicação de um segundo Agrodok que satisfaz a procura e que blicação de um segundo Agrodok que satisfaz a procura e que com-pensa a ca
pensa a carência de rência de informação informação neste âmbitneste âmbito específico específico. o. Neste livNeste livroro tratam-se o processo completo da formação de composto a partir de tratam-se o processo completo da formação de composto a partir de resíduos agrícolas e também o cultivo das espécies apropriadas, resíduos agrícolas e também o cultivo das espécies apropriadas, su-pramencionadas. Para além disso, mostrou-se necessário tratar, de pramencionadas. Para além disso, mostrou-se necessário tratar, de modo detalhado e num capítulo separado, do processo da obtenção de modo detalhado e num capítulo separado, do processo da obtenção de semente de boa qualidade e da produção de semente.
semente de boa qualidade e da produção de semente.
Foi dada ênfase particular aos requisitos mínimos no que diz respeito Foi dada ênfase particular aos requisitos mínimos no que diz respeito às condições de cultivo, às salas de produção de cogumelos e às condições de cultivo, às salas de produção de cogumelos e equipa-mento para ambas as espécies, de forma a evitar problemas e de mento para ambas as espécies, de forma a evitar problemas e de reali-zar uma produção rentável. Também se prestou atenção à colheita e zar uma produção rentável. Também se prestou atenção à colheita e aos tratamentos pós-colheita. Nas regiões suburbanas e urbanizadas aos tratamentos pós-colheita. Nas regiões suburbanas e urbanizadas existe uma procura alta de cogumelos processados (na sua maioria existe uma procura alta de cogumelos processados (na sua maioria enlatados). Por conseguinte, os aspectos básicos do processamento de enlatados). Por conseguinte, os aspectos básicos do processamento de cogumelos são tratados num capítulo separado.
cogumelos são tratados num capítulo separado. Como o conhecimentoComo o conhecimento da comercialização no âmbito do cultivo de cogumelos em pequena da comercialização no âmbito do cultivo de cogumelos em pequena escala é ainda bastante deficiente, também nos pareceu oportuno escala é ainda bastante deficiente, também nos pareceu oportuno in-cluir um capítulo sobre a comercialização, no qual se destacam a cluir um capítulo sobre a comercialização, no qual se destacam a
im-Índice
Índice
11 Introdução Introdução 66
22 Biologia Biologia dos dos cogumelos cogumelos 88
2.1
2.1 Fungos Fungos 88
2.2
2.2 Ciclo Ciclo de de vida vida dos dos fungos fungos 99
2.3
2.3 Amplitudes de Amplitudes de temperatura temperatura para para cogumelos cogumelos cultivados cultivados 1212
33 Explorações Explorações agrícolas agrícolas de de cogumelos cogumelos 1414
44 Produção Produção de de semente semente 1818
4.1
4.1 Disponibilidade Disponibilidade de de semente semente 1818
4.2
4.2 Ambientes Ambientes limpos limpos 2121
4.3
4.3 O O processo processo de de esterilização esterilização 2424
4.4
4.4 Preparação Preparação dos dos meios meios de de cultivo cultivo 2525
4.5
4.5 Preparação de amostras em posição inclinada (Preparação de amostras em posição inclinada (slants slants ) ) 2626 4.6
4.6 Culturas Culturas 2828
4.7
4.7 A A cultura cultura iniciainicial l 2828
4.8
4.8 Culturas Culturas de de tecidos tecidos 3030
4.9
4.9 Semente-mãe Semente-mãe 3232
4.10
4.10 Preparação Preparação da da semente semente final final 3636
55 Compostagem Compostagem 3838
66 Cultivo deCultivo de Champignons Champignons (Agaricus spp.) (Agaricus spp.) 4545
6.1
6.1 Pasteurização Pasteurização ou ou aquecimento aquecimento de de pico pico 4545 6.2
6.2 Inoculação Inoculação 4646
6.3
6.3 TTerra erra de de cobertura cobertura 4747
6.4
6.4 Colheita Colheita e e recolha recolha 5050
6.5
6.5 Descrição Descrição dum dum caso caso de de Champignons Champignons 5151
77 Cultivo de Cogumelos de Palha Cultivo de Cogumelos de Palha de Arroz (de Arroz (Volvariella Volvariella
spp.) 54
7.1
7.1 Descrição dum caso do cultivo de Cogumelos de PDescrição dum caso do cultivo de Cogumelos de Palhaalha de
de Arroz Arroz 5959
88 Colheita Colheita e e tratamentos tratamentos pós-colheipós-colheita ta 6262 8.1
8.1 Colheita Colheita 6262
8.2
8.2 Mercado Mercado de de produtos produtos frescos frescos 6363
8.3 8.3 Conservação Conservação 6363 8.4 8.4 Secagem Secagem 6464 99 Comercialização Comercialização 6868 Leitura
Leitura recomendadrecomendada a 7171
Endereços
Endereços úteis úteis 7373
Apêndice
Apêndice 1: 1: Fórmulas Fórmulas 7878
Apêndice
Apêndice 2: 2: TTeste este da da qualidadqualidade e do do ar ar 7979
Apêndice
Apêndice 3: 3: Várias Várias origens origens de de contcontaminação aminação 8080 Apêndice
Apêndice 4: 4: TTransferêncransferência ia de de cultura cultura em em detalhe detalhe 8282 Apêndice
Apêndice 5: 5: Fórmulas Fórmulas de de composto composto 8484
Apêndice
Apêndice 6: 6: Sistemas Sistemas simples simples de de aquecimento aquecimento a a vapor vapor 8686
Glossário 88
1 Introdução
1 Introdução
Desde tempos imemoriais que os seres humanos foram aos campos e Desde tempos imemoriais que os seres humanos foram aos campos e às florestas colher cogumelos comestíveis. Hoje em dia, algumas às florestas colher cogumelos comestíveis. Hoje em dia, algumas es-pécies de cogumelos comestíveis também podem ser cultivadas como pécies de cogumelos comestíveis também podem ser cultivadas como culturas comerciais.
culturas comerciais.
Determinadas espécies são fáceis de cultivar enquanto que outras Determinadas espécies são fáceis de cultivar enquanto que outras re-querem ser cultivadas com uso de temperaturas e métodos mais querem ser cultivadas com uso de temperaturas e métodos mais espe-cíficos. No geral, o ciclo de vida dum cultivo é bastante curto cíficos. No geral, o ciclo de vida dum cultivo é bastante curto (varian-do entre algumas semanas a alguns meses). Quan(varian-do o ciclo de cultivo do entre algumas semanas a alguns meses). Quando o ciclo de cultivo termina, o substrato residual dos cogumelos pode ser utilizado como termina, o substrato residual dos cogumelos pode ser utilizado como condicionador (correctivo) do solo.
condicionador (correctivo) do solo.
Os cogumelos contêm teores altos de proteínas, minerais e várias Os cogumelos contêm teores altos de proteínas, minerais e várias vi-taminas B, e são considerados alimentos ou suplementos alimentares taminas B, e são considerados alimentos ou suplementos alimentares saudáveis. Para além disso, graças a certos compostos químicos que saudáveis. Para além disso, graças a certos compostos químicos que neles se encontram e que são valorizados pelas suas propriedades neles se encontram e que são valorizados pelas suas propriedades me-dicinais, os cogumelos obtêm cada vez mais interesse por parte da dicinais, os cogumelos obtêm cada vez mais interesse por parte da in-dústria de alimentos naturais e saudáveis.
dústria de alimentos naturais e saudáveis.
Neste Agrodok apresenta-se informação sobre o cultivo do Cogumelo Neste Agrodok apresenta-se informação sobre o cultivo do Cogumelo Branco de Paris (
Branco de Paris (ChampignonChampignon de Paris), que se consome em todo ode Paris), que se consome em todo o
mundo, e do Cogumelo de Palha de Arroz, que é muito apreciado na mundo, e do Cogumelo de Palha de Arroz, que é muito apreciado na Ásia. Os métodos específicos do cultivo de cada uma destas espécies Ásia. Os métodos específicos do cultivo de cada uma destas espécies são apresentados em capítulos separados.
são apresentados em capítulos separados.
Antes de se decidir sobre o cultivo dalguma das espécies Antes de se decidir sobre o cultivo dalguma das espécies supramen-cionadas, recomenda-se atentar nos
cionadas, recomenda-se atentar nos seguintes pontos:seguintes pontos:
?
? Verificar a amplitude de temperaturas no capítulo 2.3 de forma aVerificar a amplitude de temperaturas no capítulo 2.3 de forma a
poder decidir se as condições climáticas são apropriadas para o poder decidir se as condições climáticas são apropriadas para o cul-tivo desta espécie.
tivo desta espécie.
?
? Pode-se preparar o composto requerido? Quais são os tipos (e asPode-se preparar o composto requerido? Quais são os tipos (e as
quantidades) de resíduos agrícolas disponíveis para a preparação de quantidades) de resíduos agrícolas disponíveis para a preparação de
?
? É possível comprar semente de cogumelo? Caso assim não seja, oÉ possível comprar semente de cogumelo? Caso assim não seja, o
produtor está suficientemente equipado para produzir a sua própria produtor está suficientemente equipado para produzir a sua própria semente? (ver o capítulo 4)
semente? (ver o capítulo 4)
?
? Há uma procura de cogumelos na vizinhança e nos mercados pró-Há uma procura de cogumelos na vizinhança e nos mercados
pró-ximos? (ver o capítulo 9) ximos? (ver o capítulo 9)
Figura 1: Cogumelos Champignons (Agaricus
Figura 1: Cogumelos Champignons (Agaricus spp.): botão fechado spp.): botão fechado à esquerda), espécimen (de campo) maduro (no meio) e corte
à esquerda), espécimen (de campo) maduro (no meio) e corte transversal (à direita)
2
2 Biologia
Biologia dos
dos cogumelos
cogumelos
2.1 Fungos
2.1 Fungos
Os cogumelos (fungos) são muito diferentes das plantas. As plantas Os cogumelos (fungos) são muito diferentes das plantas. As plantas têm a capacidade de aproveitar directamente a energia solar, com uso têm a capacidade de aproveitar directamente a energia solar, com uso de clorofila. Os fungos carecem dessa capacidade e dependem de de clorofila. Os fungos carecem dessa capacidade e dependem de ou-tros organismos para a sua alimentação, absorvendo nutrientes do tros organismos para a sua alimentação, absorvendo nutrientes do ma-terial orgânico no qual residem. O corpo vivo do fungo não é o corpo terial orgânico no qual residem. O corpo vivo do fungo não é o corpo de frutificação acima do solo, mas é o micélio que se encontra abaixo de frutificação acima do solo, mas é o micélio que se encontra abaixo do solo, dentro das
do solo, dentro das plantas ou dentro da madeira.plantas ou dentro da madeira.
O micélio é constituído por uma teia fina de fios, as chamadas hifas. O micélio é constituído por uma teia fina de fios, as chamadas hifas. Quando as hifas são sexualmente compatíveis juntam-se e começam a Quando as hifas são sexualmente compatíveis juntam-se e começam a formar esporos sob condições específicas relativas à textura e à formar esporos sob condições específicas relativas à textura e à humi-dade. Às estruturas de maior dimensão (com um tamanho superior a 1 dade. Às estruturas de maior dimensão (com um tamanho superior a 1 mm) que produzem os esporos chamam-se cogumelos.
mm) que produzem os esporos chamam-se cogumelos.
Os nomes científicos e coloquiais dos cogumelos Os nomes científicos e coloquiais dos cogumelos
Neste Agrodok usam-se, freqüentemente, os nomes científicos de Neste Agrodok usam-se, freqüentemente, os nomes científicos de co-gumelos, visto que dão origem a menos confusão do que os nomes gumelos, visto que dão origem a menos confusão do que os nomes coloquiais. Por exemplo, o nome
coloquiais. Por exemplo, o nome champignonchampignon aplica-se a várias espé-aplica-se a várias
espé-cies diferentes de cogumelos, cada uma com as suas próprias cies diferentes de cogumelos, cada uma com as suas próprias caracte-rísticas de cultivo, como sejam uma amplitude de temperatura, cor e rísticas de cultivo, como sejam uma amplitude de temperatura, cor e taxa de crescimento óptimas. Para os produtores de cogumelos, a taxa de crescimento óptimas. Para os produtores de cogumelos, a abordagem mais prática do assunto da taxonomia consiste em confiar abordagem mais prática do assunto da taxonomia consiste em confiar nos taxonomistas. Recomenda-se encomendar estirpes a produtores nos taxonomistas. Recomenda-se encomendar estirpes a produtores renomados de semente ou de colecções de culturas.
renomados de semente ou de colecções de culturas.
Ecologia dos fungos Ecologia dos fungos
Os fungos dependem de outros organismos para a sua alimentação. Os fungos dependem de outros organismos para a sua alimentação. Pode-se distinguir entre três modos de vida:
Pode-se distinguir entre três modos de vida:
?
? Saprófitos: tais como Cogumelos de Palha de Arroz que decom-Saprófitos: tais como Cogumelos de Palha de Arroz que
decom-põem matéria já morta põem matéria já morta
Simbiontes: que vivem em conjunto com outros organismos (em Simbiontes: que vivem em conjunto com outros organismos (em
?
? Parasitas: que vivem à custa Parasitas: que vivem à custa de outros organismosde outros organismos
O modo de vida não tem qualquer relação com a comestibilidade do O modo de vida não tem qualquer relação com a comestibilidade do cogumelo, visto que nas três categorias supramencionadas se podem cogumelo, visto que nas três categorias supramencionadas se podem encontrar tanto cogumelos comestíveis como venenosos. Neste encontrar tanto cogumelos comestíveis como venenosos. Neste Agro-dok são tratados apenas os
dok são tratados apenas os saprófitos.saprófitos.
Saprófitos Saprófitos
Os fungos saprófitos necessitam de matéria orgânica para decompor. Os fungos saprófitos necessitam de matéria orgânica para decompor. Na natureza estes desenvolvem-se em folhas caídas, excrementos de Na natureza estes desenvolvem-se em folhas caídas, excrementos de animais, ou em tocos de madeira morta. Alguns estão especializados animais, ou em tocos de madeira morta. Alguns estão especializados na decomposição de pêlos de mamíferos, enquanto que outros na decomposição de pêlos de mamíferos, enquanto que outros decom-põem penas de aves. Os saprófitos decomdecom-põem as estruturas põem penas de aves. Os saprófitos decompõem as estruturas orgâni-cas, complexas, que restam de
cas, complexas, que restam de plantas e animais, para se plantas e animais, para se alimentaremalimentarem..
2.2
2.2 Ciclo
Ciclo de
de vida
vida dos
dos fungos
fungos
Os fungos propagam-se através da produção de esporos ou através do Os fungos propagam-se através da produção de esporos ou através do crescimento do micélio. Quando um esporo se estabelece num crescimento do micélio. Quando um esporo se estabelece num ambi-ente apropriado, pode germinar e ramificar-se para formar um
ente apropriado, pode germinar e ramificar-se para formar um micélio.micélio. Quando se encontram dois micélios sexualmente compatíveis, estes Quando se encontram dois micélios sexualmente compatíveis, estes podem fundir-se formando um micélio secundário, que é capaz de podem fundir-se formando um micélio secundário, que é capaz de formar corpos de
formar corpos de frutificação.frutificação.
Desenvolvimento de micélio e semente Desenvolvimento de micélio e semente
Na prática do cultivo de cogumelos comestíveis não se utilizam Na prática do cultivo de cogumelos comestíveis não se utilizam espo-ros, visto que as suas características genéticas podem diferir das dos ros, visto que as suas características genéticas podem diferir das dos seus progenitores. Para além disso, os esporos de cogumelos precisam seus progenitores. Para além disso, os esporos de cogumelos precisam de algum tempo para germinarem, enquanto que outros fungos, como de algum tempo para germinarem, enquanto que outros fungos, como os bolores verdes, germinam e disseminam-se muito mais os bolores verdes, germinam e disseminam-se muito mais rapidamen-te. O cogumelo desejado como cultura comercial deve ser capaz de te. O cogumelo desejado como cultura comercial deve ser capaz de colonizar o substrato antes de outros fungos ou bactérias. Para realizar colonizar o substrato antes de outros fungos ou bactérias. Para realizar tal processo, o micélio pré-cultivado do cogumelo (isento de
tal processo, o micélio pré-cultivado do cogumelo (isento de quaisquerquaisquer contaminantes) é inoculado num substrato estéril. Referimo-nos a este contaminantes) é inoculado num substrato estéril. Referimo-nos a este
outros fungos que têm de se desenvolver a partir de esporos outros fungos que têm de se desenvolver a partir de esporos germina-dos.
dos.
Colonização micelial Colonização micelial
Durante o seu desenvolvimento, o micélio coloniza o composto, Durante o seu desenvolvimento, o micélio coloniza o composto, usan-do os nutrientes disponíveis. Esta fase é referida, geralmente, como do os nutrientes disponíveis. Esta fase é referida, geralmente, como colonização micelial. Quando alguns nutrientes se esgotam, ou colonização micelial. Quando alguns nutrientes se esgotam, ou quan-do há uma mudança de clima, o micélio atinge outra fase: a do há uma mudança de clima, o micélio atinge outra fase: a reprodu-ção. Para a
ção. Para a maioria das maioria das espécies de cespécies de cogumelos, a ogumelos, a temperatura óptemperatura óptimatima para a colonização micelial é de, aproximadamente, 25 °C. O para a colonização micelial é de, aproximadamente, 25 °C. O desen-volvimento do micélio também pode ser provocado pelo ambiente, volvimento do micélio também pode ser provocado pelo ambiente, p.ex. uma concentração alta de CO
p.ex. uma concentração alta de CO22 é favorável para o crescimento doé favorável para o crescimento do
micélio (mas não para a produção da cultura). micélio (mas não para a produção da cultura).
Figura 4: Ciclo de vida dos
Figura 4: Ciclo de vida dos cogumelos cultivados. Isolam-se as cogumelos cultivados. Isolam-se as culturas de tecido dum
culturas de tecido dum cogumelo e propagam-se num substrato cogumelo e propagam-se num substrato apropriado.
apropriado.
Depois de ter colonizado o substrato, o micélio é capaz de produzir Depois de ter colonizado o substrato, o micélio é capaz de produzir corpos de frutificação. O número e a qualidade dos corpos de corpos de frutificação. O número e a qualidade dos corpos de frutifi-cação dependem do ambiente.
cação dependem do ambiente.
Factores essenciais para induzir a formação de
Factores essenciais para induzir a formação de corpos de frutificação:corpos de frutificação:
?
? mudança da temperaturamudança da temperatura ?
? humidade altahumidade alta ?
? deficiência de um nutrientedeficiência de um nutriente ?
? concentração de COconcentração de CO22 no arno ar
?
Estes factores diferem de cogumelo para cogumelo. A maioria das Estes factores diferem de cogumelo para cogumelo. A maioria das mudanças que estimulam a frutificação têm um efeito negativo no mudanças que estimulam a frutificação têm um efeito negativo no desenvolvimento vegetativo do micélio. Portanto, as mudanças devem desenvolvimento vegetativo do micélio. Portanto, as mudanças devem ser realizadas apenas quando o
ser realizadas apenas quando o micélio tiver colonizado completamen-micélio tiver colonizado completamen-te o substrato. Na realidade, são as condições menos favoráveis para o te o substrato. Na realidade, são as condições menos favoráveis para o desenvolvimento vegetativo que estimulam o micélio a frutificar.
desenvolvimento vegetativo que estimulam o micélio a frutificar.
No começo da fase reprodutiva formam-se pequenos primórdios No começo da fase reprodutiva formam-se pequenos primórdios (cor-pos iniciais de frutificação). Sob as condições apropriadas, estes pos iniciais de frutificação). Sob as condições apropriadas, estes pri-mórdios transformam-se em corpos de frutificação. Os nutrientes são mórdios transformam-se em corpos de frutificação. Os nutrientes são transportados do micélio para os corpos de frutificação por meio de transportados do micélio para os corpos de frutificação por meio de um fluxo constante de
um fluxo constante de humidade. humidade. A evaporação de humidade na super-A evaporação de humidade na super-fície dos cogumelos é necessária de forma
fície dos cogumelos é necessária de forma a que o a que o fluxo seja contínuo.fluxo seja contínuo. Isto explica por que a pulverização excessiva de água em cogumelos a Isto explica por que a pulverização excessiva de água em cogumelos a amadurecerem, ou um nível demasiadamente alto da humidade amadurecerem, ou um nível demasiadamente alto da humidade relati-va do ar, pode provocar estragos na
va do ar, pode provocar estragos na cultura.cultura.
2.3
2.3 Amplitudes
Amplitudes de
de temperatura
temperatura para
para
cogumelos cultivados
cogumelos cultivados
Deve-se escolher uma espécie que frutifica a uma temperatura Deve-se escolher uma espécie que frutifica a uma temperatura próxi-ma das temperaturas atmosféricas ao ar livre. Desta próxi-maneira, ma das temperaturas atmosféricas ao ar livre. Desta maneira, limitam-se investimentos no controlo climático e reduzem-limitam-se os custos de se investimentos no controlo climático e reduzem-se os custos de energia. Os dados apresentados no Quadro 1 revelam que, com efeito, energia. Os dados apresentados no Quadro 1 revelam que, com efeito, apenas algumas poucas espécies são
apenas algumas poucas espécies são apropriadas para serem cultivadasapropriadas para serem cultivadas em condições realmente tropicais. Algumas espécies de cogumelos em condições realmente tropicais. Algumas espécies de cogumelos actualmente cultivadas a temperaturas próximas ou mesmo abaixo de actualmente cultivadas a temperaturas próximas ou mesmo abaixo de 30 °C são
30 °C são Volvariella volvaceaVolvariella volvacea ee Agaricus bitorquis Agaricus bitorquis, mas a maioria, mas a maioria
das espécies preferem desenvolver-se a temperaturas mais baixas. das espécies preferem desenvolver-se a temperaturas mais baixas.
Quadro 1: Espécies de
Quadro 1: Espécies de cogumelos, amplitudes de temperatura cogumelos, amplitudes de temperatura para realizar o desenvolvimento micelial
para realizar o desenvolvimento micelial (dm), para o optimizar, e (dm), para o optimizar, e para a frutificação, e técnicas a serem aplicadas no substrato.
para a frutificação, e técnicas a serem aplicadas no substrato.
Espécies de cogumelos / Nome Espécies de cogumelos / Nome Co-mum
mum TTdmdm TTdm óptimodm óptimo TTfrutificaçãofrutificação TécnicasTécnicas Agaricus bisporus Agaricus bisporus 10-32 20-28 10-32 20-28 10-20 10-20 11 Agaricus bitorquis Agaricus bitorquis 25-31 30 25-31 30 25-30 25-30 11 Agaricus blazei Agaricus blazei n.d. n.d. 30 30 20-25 20-25 11 Volvariella Volvacea Volvariella Volvacea 20-40 30-35 20-40 30-35 30-32 30-32 1, 1, 22 T
Tdmdm: : Amplitude Amplitude na na qual qual o o micélio micélio permanece permanece viável; viável; a a rapidez rapidez de de crescimento crescimento reduz-
reduz-se tanto na extremidade alta como na extremidade baixa desta amplitude. se tanto na extremidade alta como na extremidade baixa desta amplitude. T
Tdm óptimodm óptimo: : Amplitude Amplitude óptima óptima de de temperatura requerida temperatura requerida para para o o desenvolvimento desenvolvimento micelial.micelial.
T
Tfrutificaçãofrutificação: : Amplitude Amplitude de de temperatura temperatura requerida requerida para para a a frutificação.frutificação.
Técnicas para a preparação do substrato: Técnicas para a preparação do substrato: 1
1 Substrato Substrato fermentado fermentado e e pasteurizadopasteurizado 2
3
3 Explorações
Explorações agrícolas
agrícolas de
de
cogumelos
cogumelos
A escolha dum local de exploração A escolha dum local de exploração
Ao escolher um local para a exploração de cultivo de cogumelos, Ao escolher um local para a exploração de cultivo de cogumelos, deve-se ter em consideração que
deve-se ter em consideração que os seguintes factores são essenciais:os seguintes factores são essenciais:
?
? disponibilidisponibilidade de substrato dade de substrato de boa de boa qualidadequalidade ?
? disponibilidisponibilidade de dade de água limpaágua limpa ?
? disponibilidisponibilidade de dade de mão-de-obramão-de-obra ?
? transporte adequado do produto para o transporte adequado do produto para o mercadomercado
Traçado da exploração de cultivo de cogumelos Traçado da exploração de cultivo de cogumelos
Antes de planear o traçado da exploração é indispensável decidir se a Antes de planear o traçado da exploração é indispensável decidir se a preparação do composto se realiza na exploração. Caso assim seja, preparação do composto se realiza na exploração. Caso assim seja, deve-se ter em consideração que o armazenamento dos materiais deve-se ter em consideração que o armazenamento dos materiais bási-cos e também o local de compostagem devem ser localizados o mais cos e também o local de compostagem devem ser localizados o mais afastado possível dos recintos de cultivo.
afastado possível dos recintos de cultivo.
É de igual importância saber se a semente será adquirida por compra É de igual importância saber se a semente será adquirida por compra ou preparada pelo próprio produtor. Neste caso, recomenda-se ou preparada pelo próprio produtor. Neste caso, recomenda-se vee-mentemente que o laboratório de semente não se encontre no terreno mentemente que o laboratório de semente não se encontre no terreno da exploração, de forma a prevenir que uma contaminação se da exploração, de forma a prevenir que uma contaminação se propa-gue de uma unidade para outra.
gue de uma unidade para outra.
T
Temperatura e emperatura e ventilaçãoventilação
Os recintos de cultivo numa exploração agrícola de cogumelos devem Os recintos de cultivo numa exploração agrícola de cogumelos devem fornecer condições climáticas adequadas. Particularmente a
fornecer condições climáticas adequadas. Particularmente a ventilaçãoventilação e a temperatura são essenciais para garantir uma produção razoável. e a temperatura são essenciais para garantir uma produção razoável. Na maioria dos países ocidentais, os produtores de cogumelos fazem Na maioria dos países ocidentais, os produtores de cogumelos fazem uso de controlo climático mecânico, mas isto requer investimentos uso de controlo climático mecânico, mas isto requer investimentos financeiros elevados e, por conseguinte, não são tratados neste financeiros elevados e, por conseguinte, não são tratados neste Agro-dok.
dok.
Para evitar temperaturas elevadas, cultivam-se os cogumelos que Para evitar temperaturas elevadas, cultivam-se os cogumelos que
re-grutas ou túneis velhos. Como alternativa, a exploração pode ser grutas ou túneis velhos. Como alternativa, a exploração pode ser cons-truída a uma altitude mais
truída a uma altitude mais elevada e, por conseguinte, mais fresca.elevada e, por conseguinte, mais fresca.
Como a maioria das salas de produção de baixo custo são construídas Como a maioria das salas de produção de baixo custo são construídas de bambu, madeira e plástico, uma maneira simples para realizar uma de bambu, madeira e plástico, uma maneira simples para realizar uma redução da temperatura é espalhar areia
redução da temperatura é espalhar areia molhada no chão, debaixo dasmolhada no chão, debaixo das prateleiras nos recintos de cultivo, e humedecer as esteiras de folhas prateleiras nos recintos de cultivo, e humedecer as esteiras de folhas de bambu no tecto e nas paredes
de bambu no tecto e nas paredes das salas da exploração.das salas da exploração.
Chão Chão
Muitas das vezes, as salas de cultivo de baixo custo são construídas Muitas das vezes, as salas de cultivo de baixo custo são construídas tendo um chão de terra. Contudo, é melhor serem construídas sobre tendo um chão de terra. Contudo, é melhor serem construídas sobre um chão cimentado ou
um chão cimentado ou de betão, ligeiramente inclinado. Estes tipos dede betão, ligeiramente inclinado. Estes tipos de chão podem ser limpos adequadamente e permite o fácil escoamento chão podem ser limpos adequadamente e permite o fácil escoamento da água em excesso. Ter cuidado para que o sistema de drenagem de da água em excesso. Ter cuidado para que o sistema de drenagem de cada recinto individual não esteja ligado a um outro recinto, visto que cada recinto individual não esteja ligado a um outro recinto, visto que uma doença presente num recinto de cultivo pode propagar-se uma doença presente num recinto de cultivo pode propagar-se facil-mente através de um cano de drenagem.
mente através de um cano de drenagem.
Pela mesma razão, recomenda-se fazer, frequentemente, a recolha de Pela mesma razão, recomenda-se fazer, frequentemente, a recolha de resíduos e materiais contaminados e depois de os ter recolhido resíduos e materiais contaminados e depois de os ter recolhido proce-der, imediatamente, à sua destruição.
der, imediatamente, à sua destruição.
Higiene da exploração Higiene da exploração
A higien
A higiene é e é essencial numa exploração de cogumelos. Como essencial numa exploração de cogumelos. Como o contro-o contro-lo químico de pragas e doenças não é possível no cultivo de lo químico de pragas e doenças não é possível no cultivo de cogume-los em pequena escala, as únicas medidas preventivas são a higiene e, los em pequena escala, as únicas medidas preventivas são a higiene e, até a certo ponto, a desinfecção. Isto aplica-se à unidade de produção até a certo ponto, a desinfecção. Isto aplica-se à unidade de produção de semente, ao local de produção de substrato, aos recintos de de semente, ao local de produção de substrato, aos recintos de incuba-ção e às unidades de produincuba-ção.
ção e às unidades de produção.
Local da exploração Local da exploração
Portanto, a inspecção de um local potencialmente apropriado para o Portanto, a inspecção de um local potencialmente apropriado para o estabelecimento de uma exploração de cogumelos reveste-se de muita estabelecimento de uma exploração de cogumelos reveste-se de muita
etc. Isto implica que se deve evitar a construção de uma exploração etc. Isto implica que se deve evitar a construção de uma exploração nova na vizinhança de outras explorações de cogumelos, visto que os nova na vizinhança de outras explorações de cogumelos, visto que os insectos e doenças procedentes destas explorações podem facilmente insectos e doenças procedentes destas explorações podem facilmente disseminar
disseminar-se para -se para a exploração nova.a exploração nova.
Se for possível, deverão ficar separadas as várias unidades operativas da Se for possível, deverão ficar separadas as várias unidades operativas da exploração nova
exploração nova
O laboratório de semente deve estar separado do local de cultivo. Os O laboratório de semente deve estar separado do local de cultivo. Os recintos de cultivo devem ser separados entre si por paredes fechadas recintos de cultivo devem ser separados entre si por paredes fechadas (de plástico) para que as diferentes fases de cultivo fiquem separadas. (de plástico) para que as diferentes fases de cultivo fiquem separadas. Com efeito, não se deve realizar uma incubação ou colonização Com efeito, não se deve realizar uma incubação ou colonização mice-lial no mesmo recinto onde se faz a colheita dos cogumelos.
lial no mesmo recinto onde se faz a colheita dos cogumelos.
Resíduos, sacos contaminados e substrato residual de cogumelos devem ser Resíduos, sacos contaminados e substrato residual de cogumelos devem ser removidos imediatamente dos recintos e da exploração e, preferivelmente, removidos imediatamente dos recintos e da exploração e, preferivelmente, ser transportados para um lugar
ser transportados para um lugar afastado.afastado.
Todas estas medidas são necessárias para prevenir a ocorrência de Todas estas medidas são necessárias para prevenir a ocorrência de pragas, como moscas e ácaros, e também doenças que se disseminam pragas, como moscas e ácaros, e também doenças que se disseminam a partir dos depósitos de lixos. Se o substrato residual de cogumelos a partir dos depósitos de lixos. Se o substrato residual de cogumelos for destinado para uso como terra de jardinagem, deverá ser for destinado para uso como terra de jardinagem, deverá ser transpor-tado o mais rapidamente possível e
Figura 5: Um exemplo duma unidade de produção/sala de cultivo Figura 5: Um exemplo duma unidade de produção/sala de cultivo moderna com barreira de ar e
moderna com barreira de ar e estantes com prateleiras estantes com prateleiras
Figura 6: Um exemplo dum recinto de
Figura 6: Um exemplo dum recinto de cultivo de baixo custo feito cultivo de baixo custo feito de plástico, com os sacos de
4
4 Produção
Produção de
de semente
semente
Ao material de propagação dos cogumelos referimo-nos, geralmente, Ao material de propagação dos cogumelos referimo-nos, geralmente, com o termo semente.
com o termo semente.
4.1
4.1 Disponibilidad
Disponibilidade
e de
de semente
semente
A disponibilidade de semente de boa qualidade constitui um factor A disponibilidade de semente de boa qualidade constitui um factor limitante para o cultivo de cogumelos em muitos países em vias de limitante para o cultivo de cogumelos em muitos países em vias de desenvolvimento. A importação é geralmente entravada pela desenvolvimento. A importação é geralmente entravada pela burocra-cia alfandegária, os custos altos de transporte e a dificuldade de cia alfandegária, os custos altos de transporte e a dificuldade de man-ter a semente refrigerada durante o transporte. Portanto, pode ser ter a semente refrigerada durante o transporte. Portanto, pode ser ne-cessário que o produtor de cogumelos produza o seu próprio material cessário que o produtor de cogumelos produza o seu próprio material de inoculação (semente).
de inoculação (semente).
Se for possível obter semente de boa qualidade da espécie desejada de Se for possível obter semente de boa qualidade da espécie desejada de co-gumelo, a um preço razoável, é recomendável concentrar-se no processo de gumelo, a um preço razoável, é recomendável concentrar-se no processo de cultivo de cogumelos. Caso assim não seja, a semente deve ser produzida ou cultivo de cogumelos. Caso assim não seja, a semente deve ser produzida ou propagada pelo produtor de cogumelos.
propagada pelo produtor de cogumelos.
O procedimento completo da produção de semente implica a O procedimento completo da produção de semente implica a prepara-ção do meio de
ção do meio de cultivo, o enchimento dos tubos de ensaio ou cultivo, o enchimento dos tubos de ensaio ou placas deplacas de Pétri, a sua esterilização, a inoculação com micélio e o processo de Pétri, a sua esterilização, a inoculação com micélio e o processo de inoculação com esta cultura, de recipientes de maior
inoculação com esta cultura, de recipientes de maior dimensão.dimensão.
No fundo, a produção de semente não é outra coisa que a colocação de No fundo, a produção de semente não é outra coisa que a colocação de micélio do cogumelo desejado em substratos apropriados, micélio do cogumelo desejado em substratos apropriados, esterili-zados, sob condições assépticas.
zados, sob condições assépticas. Contudo, na prática, a produção de
Contudo, na prática, a produção de semente não é tão semente não é tão fácil. fácil. As estirpesAs estirpes apropriadas das espécies de cogumelo requeridas devem ser mantidas apropriadas das espécies de cogumelo requeridas devem ser mantidas sob condições rigorosas para prevenir a sua degeneração. Se isto não sob condições rigorosas para prevenir a sua degeneração. Se isto não for possível, dever-se-á utilizar a cultura de tecidos de um cogumelo for possível, dever-se-á utilizar a cultura de tecidos de um cogumelo fresco e saudável para a produção de semente.
Para além disso, o processo completo de produção de semente requer Para além disso, o processo completo de produção de semente requer o uso de normas higiénicas muito elevadas. Por conseguinte, o recinto o uso de normas higiénicas muito elevadas. Por conseguinte, o recinto da produção de semente deve ser
da produção de semente deve ser mantido meticulmantido meticulosamente limpo paraosamente limpo para prevenir qualquer contaminação.
prevenir qualquer contaminação.
Figura 7: Desde a cultura de tecido até
Figura 7: Desde a cultura de tecido até à produção de cogumelos à produção de cogumelos – vários passos no processo do cultivo de cogumelos.
A produção de semente, particularmente a de
A produção de semente, particularmente a de Agaricus Agaricus spp., é bastante com-spp., é bastante com-plicada. Desde este pon
plicada. Desde este ponto de vista é mto de vista é muito recomendável comprauito recomendável comprar r a sementea semente a um produtor confiável.
a um produtor confiável.
Apenas no caso de ser impossível obter semente de boa qualidade a um Apenas no caso de ser impossível obter semente de boa qualidade a um pre-ço razoável é que o
ço razoável é que o produtor terá de produzir a sua produtor terá de produzir a sua própria semente.própria semente.
Unidade de produção de semente Unidade de produção de semente
Os requisitos para uma unidade de produção de semente são, no Os requisitos para uma unidade de produção de semente são, no mí-nimo:
nimo:
?
? equipamento de laboratório, como sejam placas de Pétri, tubos deequipamento de laboratório, como sejam placas de Pétri, tubos de
ensaio, balança, álcool, chama ensaio, balança, álcool, chama
?
? unidade de esterilização (panela de unidade de esterilização (panela de pressão, autoclave)pressão, autoclave) ?
? ambiente estéril: uma caixa de inoculação ou uma cabina com fluxoambiente estéril: uma caixa de inoculação ou uma cabina com fluxo
laminar do ar laminar do ar
?
? recinto de incubaçãorecinto de incubação
O equipamento supramencionado encontra-se normalmente disponível O equipamento supramencionado encontra-se normalmente disponível em hospitais, estações experimentais e
em hospitais, estações experimentais e universidades.universidades. As matérias-primas incluem:
As matérias-primas incluem:
?
? ingredientes para a preparação dos meios de ingredientes para a preparação dos meios de cultivocultivo ?
? cultura pura ou cogumelos frescos da estirpe desejada de certa es-cultura pura ou cogumelos frescos da estirpe desejada de certa
es-pécie de cogumelo pécie de cogumelo
?
? recipientes para semente (como sejam garrafas recipientes para semente (como sejam garrafas ou sacos de ou sacos de plástico)plástico)
Em países onde a produção de cogumelos quase
Em países onde a produção de cogumelos quase não se pratica, pode-se ob-não se pratica, pode-se ob-ter semente de um produtor renomado de semente, de uma universidade ou ter semente de um produtor renomado de semente, de uma universidade ou de uma instituição de investigação, no c
de uma instituição de investigação, no começo do projecto.omeço do projecto.
Ver a Secção de Endereços Úteis que inclui endereços de produtores Ver a Secção de Endereços Úteis que inclui endereços de produtores de semente.
4.2
4.2 Ambientes
Ambientes limpos
limpos
Um ambiente limpo é absolutamente essencial para a produção de Um ambiente limpo é absolutamente essencial para a produção de se-mente. Particularmente, em situações em que se tenham que abrir os mente. Particularmente, em situações em que se tenham que abrir os recipientes contendo meios de cultivo esterilizados, isto deve ser feito recipientes contendo meios de cultivo esterilizados, isto deve ser feito sob condições assépticas. O ar transporta numerosos contaminantes, sob condições assépticas. O ar transporta numerosos contaminantes, que infectam facilmente os meios de cultivo esterilizados. Portanto, é que infectam facilmente os meios de cultivo esterilizados. Portanto, é necessário utilizar armários e recintos de inoculação especiais para necessário utilizar armários e recintos de inoculação especiais para efectuar o manuseamento e a preparação das culturas (de tecidos). efectuar o manuseamento e a preparação das culturas (de tecidos). (Ver o apêndice 2 para um teste sobre a qualidade do ar).
(Ver o apêndice 2 para um teste sobre a qualidade do ar).
Figura 8: Armário
Figura 8: Armário simples, de construção caseira, simples, de construção caseira, apresentanapresentando do um vidro dianteiro, que pode ser aberto, e ori
um vidro dianteiro, que pode ser aberto, e orifícios (com mangas fícios (com mangas de pano) para manuseamento.
de pano) para manuseamento.
Recintos de inoculação Recintos de inoculação
O interior dum recinto de inoculação deve ser fabricado de materiais O interior dum recinto de inoculação deve ser fabricado de materiais que não são biologicamente degradáveis. Todas as superfícies devem que não são biologicamente degradáveis. Todas as superfícies devem ser lisas e fáceis de limpar. As prateleiras devem ser concebidas de tal ser lisas e fáceis de limpar. As prateleiras devem ser concebidas de tal
são o metal ou a fórmica. A luz UV, a ser acendida fora do horário são o metal ou a fórmica. A luz UV, a ser acendida fora do horário la-boral, ajudará a destruir os
boral, ajudará a destruir os contaminantes.contaminantes.
Armários de inoculação Armários de inoculação
Estes armários simples para inoculação são muito utilizados em todo o Estes armários simples para inoculação são muito utilizados em todo o mundo. Podem ser construídos de forma barata com uso de materiais mundo. Podem ser construídos de forma barata com uso de materiais localmente disponívei
localmente disponíveis. Deve-se poder abrir s. Deve-se poder abrir o vidro dianteiro de modoo vidro dianteiro de modo a ser possível encher o armário com meios de cultivo esterilizados. O a ser possível encher o armário com meios de cultivo esterilizados. O interior é desinfectado com uso de uma solução de 10 % de Clorox, ou interior é desinfectado com uso de uma solução de 10 % de Clorox, ou uma solução de 2% de Formalin ou 70% de álcool etílico.
uma solução de 2% de Formalin ou 70% de álcool etílico.
T
Tomar cuidado com o uomar cuidado com o uso de produtos químicos. so de produtos químicos. Alguns são venenosos e/ouAlguns são venenosos e/ou podem irritar o nariz e os olhos. Para uso seguro, seguir cautelosamente as podem irritar o nariz e os olhos. Para uso seguro, seguir cautelosamente as instruções.
instruções.
Armários com fluxo laminar do ar Armários com fluxo laminar do ar
Um sistema de fluxo laminar do ar (LAF,
Um sistema de fluxo laminar do ar (LAF, Laminar Air Flow Laminar Air Flow) é consti-) é
consti-tuído por um ventilador, uma conduta de ar, um filtro HEPA (
tuído por um ventilador, uma conduta de ar, um filtro HEPA ( High High Efficiency Particle Air /
Efficiency Particle Air / de Alta Eficiência para Partículas do Ar) e de Alta Eficiência para Partículas do Ar) e umauma
cobertura. cobertura.
Num fluxo laminar do ar, os contaminantes podem disseminar-se apenas Num fluxo laminar do ar, os contaminantes podem disseminar-se apenas numa direcção. Num fluxo turbulento do ar, é possível que os esporos se numa direcção. Num fluxo turbulento do ar, é possível que os esporos se mo-vam em diferentes direcções, provocando um maior
vam em diferentes direcções, provocando um maior grau de contaminação.grau de contaminação.
Os produtores classificam os ventiladores conforme o volume do ar Os produtores classificam os ventiladores conforme o volume do ar que podem soprar através de materiais com resistência especificada. que podem soprar através de materiais com resistência especificada. Uma velocidade do ar de, aproximadamente, 0,45 m/s é considerada a Uma velocidade do ar de, aproximadamente, 0,45 m/s é considerada a melhor para obter, de forma adequada, um fluxo laminar do ar.
melhor para obter, de forma adequada, um fluxo laminar do ar.
O ventilador deve ser regulado de forma gradual e, para além disso, O ventilador deve ser regulado de forma gradual e, para além disso, ter a capacidade de empurrar o dobro do volume do ar requerido ter a capacidade de empurrar o dobro do volume do ar requerido atra-vés do filtro para atingir a velocidade necessária do ar, de forma a vés do filtro para atingir a velocidade necessária do ar, de forma a compensar perdas de pressão provocadas quando o filtro estiver cheio compensar perdas de pressão provocadas quando o filtro estiver cheio com partículas.
Em muitos países, não se podem obter os filtros HEPA nem os ventiladores Em muitos países, não se podem obter os filtros HEPA nem os ventiladores específicos, tendo estes, portanto, de ser importados.
específicos, tendo estes, portanto, de ser importados.
Ter em consideração que um bom armário de inoculação é, Ter em consideração que um bom armário de inoculação é, geralmen-te, melhor que um sistema LAF mal construído e colocado te, melhor que um sistema LAF mal construído e colocado inadequa-damente.
damente.
Os filtros e ventiladores formam o âmago de qualquer sistema com Os filtros e ventiladores formam o âmago de qualquer sistema com fluxo laminar do ar, mas há outros factores que também devem ser fluxo laminar do ar, mas há outros factores que também devem ser tomados em consideração: as capacidades e a higiene dos operadores tomados em consideração: as capacidades e a higiene dos operadores do sistema, e a construção de condutas de ar e filtros, para assegurar do sistema, e a construção de condutas de ar e filtros, para assegurar que não seja possível que
que não seja possível que ar contaminado seja aspirado para dentro.ar contaminado seja aspirado para dentro.
Figura 9: Um sistema de Fluxo
Figura 9: Um sistema de Fluxo Laminar do Ar (à esquerda) e um Laminar do Ar (à esquerda) e um corte transversal do mesmo (à direita)
4.3
4.3 O
O processo
processo de
de esterilização
esterilização
Os grãos de cereal, a serradura e o composto contêm grandes Os grãos de cereal, a serradura e o composto contêm grandes quanti-dades de contaminantes. Um único grão
dades de contaminantes. Um único grão de cereal pode conter milhõesde cereal pode conter milhões de bactérias e fungos.
de bactérias e fungos.
Cada um destes agentes não desejados, os chamados contaminantes, é Cada um destes agentes não desejados, os chamados contaminantes, é ca-paz de provocar a deterioração dos substratos que não foram esterilizados paz de provocar a deterioração dos substratos que não foram esterilizados adequadamente ou que foram inoculados sob condições não higiénicas.
adequadamente ou que foram inoculados sob condições não higiénicas.
Um aquecimento de 20 minutos a 121 °C é geralmente suficiente para Um aquecimento de 20 minutos a 121 °C é geralmente suficiente para destruir todos os organismos. Dependendo da maneira que a unidade destruir todos os organismos. Dependendo da maneira que a unidade de esterilização/pasteurização é enchida e também da capacidade da de esterilização/pasteurização é enchida e também da capacidade da fonte de aquecimento, leva bastante tempo até que, com um tal fonte de aquecimento, leva bastante tempo até que, com um tal aque-cimento utilizando o vapor, se possa atingir esta temperatura na parte cimento utilizando o vapor, se possa atingir esta temperatura na parte central, interior
central, interior, dos , dos substratos.substratos.
Panelas de pressão (ver a Figura 10) Panelas de pressão (ver a Figura 10)
A opção mais barata é obter uma ou mais panelas de pressão grandes. A opção mais barata é obter uma ou mais panelas de pressão grandes. Escolher panelas de pressão que mantenham a pressão mesmo quando Escolher panelas de pressão que mantenham a pressão mesmo quando a temperatura extrema (final) tenha sido atingida.
a temperatura extrema (final) tenha sido atingida.
Figura 10: Corte
Figura 10: Corte transversal duma ptransversal duma panela de pressãanela de pressão o para uso para uso numa fonte de aquecimento (à esquerda) e uma panela eléctrica numa fonte de aquecimento (à esquerda) e uma panela eléctrica de pressão ou autoclave simples (à direita).
As panelas de pressão mais simples deixam sair vapor quando a As panelas de pressão mais simples deixam sair vapor quando a pres-são se torna demasiado alta. Neste caso, a prespres-são no interior descerá, são se torna demasiado alta. Neste caso, a pressão no interior descerá, geralmente, para abaixo de 1 atmosfera de
geralmente, para abaixo de 1 atmosfera de sobrepressão, provocando asobrepressão, provocando a ebulição dos meios de cultivo.
ebulição dos meios de cultivo.
4.4
4.4 Preparação
Preparação dos
dos meios
meios de
de cultivo
cultivo
A maioria das espécies desenvolvem-se nos seguintes meios de A maioria das espécies desenvolvem-se nos seguintes meios de culti-vo:
vo:
Meio de extracto
Meio de extracto de Batata-Dextrosede Batata-Dextrose-Ágar (BDA) (ver -Ágar (BDA) (ver a Figura 1a Figura 11)1) Ingredientes: 200 g de batata cortada em cubos, 20 g de pó de ágar, 20 Ingredientes: 200 g de batata cortada em cubos, 20 g de pó de ágar, 20 g de dextrose ou açúcar branco comum, 1
g de dextrose ou açúcar branco comum, 1 litro de água.litro de água.
?
? Lavar e pesar as batatas e cortá-las em pequenos pedaços.Lavar e pesar as batatas e cortá-las em pequenos pedaços. ?
? Cozer durante 15 a 20 minutos até se tornarem moles.Cozer durante 15 a 20 minutos até se tornarem moles. ?
? Retirar as batatas.Retirar as batatas. ?
? Acrescentar água ao caldo até Acrescentar água ao caldo até se obter exactamente 1 litro.se obter exactamente 1 litro. ?
? Acrescentar a dextrose e o ágar. É necessário acrescentar a quanti-Acrescentar a dextrose e o ágar. É necessário acrescentar a
quanti-dade apropriada de açúcar e
dade apropriada de açúcar e ágarágar, senão o meio de , senão o meio de cultivo tornar-se-cultivo tornar-se-á ou demasiadamente mole ou
á ou demasiadamente mole ou demasiadamentdemasiadamente duro.e duro.
?
? Mexer, de vez em quando, e aquecer suavemente até o ágar se terMexer, de vez em quando, e aquecer suavemente até o ágar se ter
derretido. O ágar deve estar quente ao verter-se nos tubos de ensaio derretido. O ágar deve estar quente ao verter-se nos tubos de ensaio ou garrafas, senão ficará encaroçado.
ou garrafas, senão ficará encaroçado.
?
? EncherEncher, aproximadamente, um quarto , aproximadamente, um quarto dos tubos de dos tubos de ensaio.ensaio. ?
? Em seguida, fechar os tubos ou as garrafas com tampões de algo-Em seguida, fechar os tubos ou as garrafas com tampões de
algo-dão. dão.
4.5
4.5 Preparação
Preparação de
de amostras
amostras em
em posição
posição
inclinada (
inclinada (
slants slants))
Depois de se encher os tubos de ensaio ou as garrafas com o meio de Depois de se encher os tubos de ensaio ou as garrafas com o meio de cultivo (ver a Figura 11, desenho 5),
cultivo (ver a Figura 11, desenho 5), estes devem ser esterilizados (verestes devem ser esterilizados (ver a Figura 11, desenho 6) antes de serem usados. As unidades de a Figura 11, desenho 6) antes de serem usados. As unidades de esteri-lização mais correntemente usadas em laboratórios de pequenas lização mais correntemente usadas em laboratórios de pequenas di-mensões são as panelas de pressão, mas também é possível utilizar mensões são as panelas de pressão, mas também é possível utilizar autoclaves.
autoclaves.
Procedimento Procedimento
?
? Deitar água Deitar água numa panela de pressnuma panela de pressão até atingião até atingir o nível do suportr o nível do suporte.e. ?
? Colocar as garrafas ou os tubos de ensaio nos suportes, cobrindo-osColocar as garrafas ou os tubos de ensaio nos suportes, cobrindo-os
com uma cobertura de plástico para prevenir que os tampões de com uma cobertura de plástico para prevenir que os tampões de al-godão sejam humedecidos por água.
godão sejam humedecidos por água.
?
? Depois, fechar bem a tampa.Depois, fechar bem a tampa. ?
? O orifício da saída de pressão deve estar aberto desde o começo doO orifício da saída de pressão deve estar aberto desde o começo do
processo para permitir que o ar possa sair. Vai durar alguns minutos processo para permitir que o ar possa sair. Vai durar alguns minutos desde o momento de ebulição até à saída do vapor.
desde o momento de ebulição até à saída do vapor.
?
? Fechar o orifício da saída de pressão. O medidor de pressão mostraFechar o orifício da saída de pressão. O medidor de pressão mostra
a subida da pressão. a subida da pressão.
?
? Esterilizar sob pressão durante 20-30 minutos.Esterilizar sob pressão durante 20-30 minutos. ?
? Não abrir o orifício da saída de pressão antes de a panela de pressãoNão abrir o orifício da saída de pressão antes de a panela de pressão
ter arrefecido completamente até à
ter arrefecido completamente até à temperatura ambiente!temperatura ambiente!
?
? Abrir a panela de pressão e retirar os tubos de Abrir a panela de pressão e retirar os tubos de ensaio ou as garrafas.ensaio ou as garrafas.
De modo a aumentar a área de superfície, os tubos de ensaio são colocadas De modo a aumentar a área de superfície, os tubos de ensaio são colocadas numa posição inclinada (p.ex. numa régua ou numa toalha enrolada ) quando numa posição inclinada (p.ex. numa régua ou numa toalha enrolada ) quando o ágar ainda está líquido.
o ágar ainda está líquido.
Ter cuidado para que o ágar não toque o tampão de algodão, de modo a Ter cuidado para que o ágar não toque o tampão de algodão, de modo a pre-venir a sua contaminação.
venir a sua contaminação.
Não mover ou manusear os tubos de ensaio até o ágar se ter Não mover ou manusear os tubos de ensaio até o ágar se ter solidifi-cado, de modo a prevenir que uma pequena parte do ágar solidifique cado, de modo a prevenir que uma pequena parte do ágar solidifique do outro lado do
algo-Figura 11: Preparação do meio extracto
Figura 11: Preparação do meio extracto de Batata-Dextrosede Batata-Dextrose-Ágar -Ágar (BDA) (desenhos 1- 4). Enchimento (desenho 5) e esterilização (BDA) (desenhos 1- 4). Enchimento (desenho 5) e esterilização
4.6 Culturas
4.6 Culturas
Os primeiros passos da produção de semente são efectuados em meios Os primeiros passos da produção de semente são efectuados em meios de cultivo artificiais. Estes devem conter suficientes nutrientes, como de cultivo artificiais. Estes devem conter suficientes nutrientes, como sejam sacarídeos/glícidos, para os cogumelos se desenvolverem e um sejam sacarídeos/glícidos, para os cogumelos se desenvolverem e um agente solidificador (ágar ou gelatina). O micélio desenvolve-se na agente solidificador (ágar ou gelatina). O micélio desenvolve-se na superfície do meio de cultivo e, mais tarde, será usado para inocular superfície do meio de cultivo e, mais tarde, será usado para inocular maiores quantidades de substrato, como sejam grãos de cereal. maiores quantidades de substrato, como sejam grãos de cereal. Po-dem-se utilizar tubos de ensaio ou placas de Pétri (ou garrafas dem-se utilizar tubos de ensaio ou placas de Pétri (ou garrafas achata-das de whisky)
das de whisky) como recipientes de culturas.como recipientes de culturas.
Em vez de trabalhar com culturas, pode-se tentar comprar pequenas Em vez de trabalhar com culturas, pode-se tentar comprar pequenas quanti-dades de semente-mãe, de boa qualidade, para a preparação da semente dades de semente-mãe, de boa qualidade, para a preparação da semente fi-nal.
nal.
4.7
4.7 A
A cultur
cultura
a inicial
inicial
Ver a figura 12: Ver a figura 12: 1
1 A A cultura inicial (ou cultcultura inicial (ou cultura-mãe) pode ser obtida dum produtor deura-mãe) pode ser obtida dum produtor de semente ou dum laboratório ou pode ser preparada utilizando-se um semente ou dum laboratório ou pode ser preparada utilizando-se um corpo de frutificação, fresco e
corpo de frutificação, fresco e saudável.saudável. 2
2 Preparam-se várias cPreparam-se várias culturas de ágar com ulturas de ágar com base na cultura inbase na cultura inicialicial
3 Inoculam-se mais tubos de ensaio com uso dos métodos descritos 3 Inoculam-se mais tubos de ensaio com uso dos métodos descritos para transferência de culturas (ver o Apêndice 4 para instruções para transferência de culturas (ver o Apêndice 4 para instruções de-talhadas).
talhadas).
4 Estas servem para inocular recipientes de maior dimensão (p.ex. 4 Estas servem para inocular recipientes de maior dimensão (p.ex. garrafas) com semente-mãe, que podem ser usadas para inocular o garrafas) com semente-mãe, que podem ser usadas para inocular o substrato para a semente final.
substrato para a semente final.
O micélio degenerar-se-á após um certo número de transferências, de O micélio degenerar-se-á após um certo número de transferências, de forma que não é possível continuar-se, ilimitadamente, as forma que não é possível continuar-se, ilimitadamente, as transferên-cias de culturas em ágar.
cias de culturas em ágar.
De modo a prevenir a degeneração da cultura para semente devem-se seguir De modo a prevenir a degeneração da cultura para semente devem-se seguir as regras seguintes:
as regras seguintes:
Nunca transferir uma cultura-mãe mais de oito vezes. Nunca transferir uma cultura-mãe mais de oito vezes.
4.8
4.8 Culturas
Culturas de
de tecidos
tecidos
Somente no caso que a cultura inicial não possa ser comprada a um produtor Somente no caso que a cultura inicial não possa ser comprada a um produtor de semente ou a um laboratório, dever-se-á produzir
de semente ou a um laboratório, dever-se-á produzir a cultura-mãe a partir dea cultura-mãe a partir de culturas de tecidos.
culturas de tecidos.
O micélio novo e vigoroso pode ser
O micélio novo e vigoroso pode ser obtido a partir dum novo corpo deobtido a partir dum novo corpo de frutificação, com uso de um bisturi, álcool, amostras em posição frutificação, com uso de um bisturi, álcool, amostras em posição incli-nada (
nada (slantsslants) esterilizadas de ágar, placas de Pétri ou garrafas com á-) esterilizadas de ágar, placas de Pétri ou garrafas com
á-gar, uma chama (sem fumo) e
gar, uma chama (sem fumo) e uma mesa limpa de trabalho ou, uma mesa limpa de trabalho ou, preferi- preferi-velmente, um Armário com Fluxo Laminar do Ar ou uma caixa de velmente, um Armário com Fluxo Laminar do Ar ou uma caixa de inoculação.
inoculação.
Ver a Figura 13: Ver a Figura 13:
?
? Lavar minuciosamente o cogumelo.Lavar minuciosamente o cogumelo. ?
? Mergulhar o bisturi em álcool e, depois, aquecer com chama até seMergulhar o bisturi em álcool e, depois, aquecer com chama até se
tornar incandescente. tornar incandescente.
?
? Deixar arrefecer durante 10 segundos.Deixar arrefecer durante 10 segundos. ?
? Romper ou rasgar o cogumelo ao comprido (não cortar com faca,Romper ou rasgar o cogumelo ao comprido (não cortar com faca,
visto que contaminantes da superfície podem pegar-se à lâmina). visto que contaminantes da superfície podem pegar-se à lâmina). Não tocar com as mãos o interior dos
Não tocar com as mãos o interior dos pedaços cortados.pedaços cortados.
?
? Usar o bisturi aquecido para remover um pequeno pedaço (2x2 mmUsar o bisturi aquecido para remover um pequeno pedaço (2x2 mm
é suficiente) do tecido interior. Ter cuidado para não incluir tecido é suficiente) do tecido interior. Ter cuidado para não incluir tecido da superfície exterior.
da superfície exterior.
?
? Abrir o tubo de Abrir o tubo de ensaio/placa de Pétri.ensaio/placa de Pétri. ?
? (Ao usar tubos de ensaio: aquecer a boca do tubo na chama para(Ao usar tubos de ensaio: aquecer a boca do tubo na chama para
destruir esporos não desejados). Depois, colocar suavemente o destruir esporos não desejados). Depois, colocar suavemente o teci-do, presente no bisturi, no centro do ágar.
do, presente no bisturi, no centro do ágar.
?
? Meter imediatamente o tampão de algodão.Meter imediatamente o tampão de algodão. ?
? InocularInocular, no , no mínimo, três culturas, mas mínimo, três culturas, mas preferivelmente ainda mais.preferivelmente ainda mais.
Incubar as placas de Pétri ou os
Incubar as placas de Pétri ou os slantsslants de ágar recém-inoculados a 25de ágar recém-inoculados a 25
°C durante, aproximadament
°C durante, aproximadamente, dez dias. Dentro de três a e, dez dias. Dentro de três a quatro dias, oquatro dias, o micélio terá coberto o tecido e ter-se-á ramificado no ágar.
Se não houver
Se não houver nenhum crescimento no ágar, controlar o seguinte:nenhum crescimento no ágar, controlar o seguinte:
?
? Possivelmente o cogumelo Possivelmente o cogumelo é demasiadamente velho. Teé demasiadamente velho. Tentar outra vez ntar outra vez comcom
um mais novo. um mais novo.
?
? Possivelmente o bisturi não arrefeceu antes de recolher a amostra do teci-Possivelmente o bisturi não arrefeceu antes de recolher a amostra do
teci-do, de forma que houve um sobreaquecimento do micélio, que
O micélio deve ser branco. Se se formarem micélios de cor amarela, azul, O micélio deve ser branco. Se se formarem micélios de cor amarela, azul, verde ou cinzenta, em outros pontos da superfície, trata-se de contaminantes verde ou cinzenta, em outros pontos da superfície, trata-se de contaminantes fúngicos. Um desenvolvimento cremoso, brilhante, geralmente indica uma fúngicos. Um desenvolvimento cremoso, brilhante, geralmente indica uma contaminação bacteriana. Ve
contaminação bacteriana. Ver o Apêndice 3: r o Apêndice 3: Várias origens Várias origens de contaminação.de contaminação.
4.9 Semente-mãe
4.9 Semente-mãe
A semente-mãe pode ser usada para inocular a semente em grãos de A semente-mãe pode ser usada para inocular a semente em grãos de cereal ou uma
Em laboratórios simples, não se deve utilizar semente-mãe para inocular Em laboratórios simples, não se deve utilizar semente-mãe para inocular ou-tra geração de semente-mãe, visto que o risco de contaminação será tra geração de semente-mãe, visto que o risco de contaminação será dema-siadamente alto.
siadamente alto.
Figura 14: (Desenhos 1-5) Preparação de semente em grãos de Figura 14: (Desenhos 1-5) Preparação de semente em grãos de cereal em garrafas
cereal em garrafas de vidro. A boca da garrafa deve ser lde vidro. A boca da garrafa deve ser limpa (3)impa (3) para prevenir a
para prevenir a germinação de esporos. (Desenhos germinação de esporos. (Desenhos 6-14) T6-14) Transfe- ransfe- rência de cultura /inoculação de um recipiente de vidro com se- rência de cultura /inoculação de um recipiente de vidro com se- mente-mãe. Incubação da semente
mente-mãe. Incubação da semente (desenhos 14-16). Ampliação: (desenhos 14-16). Ampliação: O micélio está a desenvolver-se de forma a cobrir
O micélio está a desenvolver-se de forma a cobrir todo o substrato todo o substrato na garrafa.
na garrafa.
Sacudir as garrafas ao tirá-las
