Classificação e Preparo de Meios de Cultivo

Classificação e Preparo de

Meios de Cultivo

Os meios de cultura são usados habitualmente em laboratório para o cultivo artificial de micro-organismos, devendo atender as exigências destes micro- organismos. As exigências nutritivas estão associadas a uma fonte de carbono, de nitrogênio, de energia e de sais minerias.

Alguns necessitam também de fatores de crescimento que são substâncias que eles não podem sintetizar, tais como vitaminas, aminoácidos, etc. Outras condições inerentes ao meio de cultura necessário ao seu desenvolvimento são as condições de pH, pressão osmótica, teor de umidade e temperatura adequada de incubação.

Classificação dos Meios de Cultura

Consistência

Função

Natureza

Classificação dos meios quanto a consistência

- Líquido: apresenta-se como um caldo (os nutrientes estão dissolvidos em solução aquosa), no qual o crescimento dos micro-organismos pode ser notado por meio da presença de turvação, presença de película ou ainda presença de depósito. São utilizados para ativação das culturas, repiques de micro-organismos, provas bioquímicas, entre outros. Ex: Caldo Nutriente, Caldo Lactosado.

- Sólido: o meio de cultura é adicionado de ágar (geralmente em torno de 1,5 a 1,8%), um polissacarídeo seco extraído de algas vermelhas (Rhodophyceae), utilizado como agente solidificante. O ágar funde-se em torno do ponto de ebulição da água (100ºC), e permanece no estado líquido até em torno de 40ºC. O ágar não serve como nutrientes para a maioria dos micro-organismos e não é metabolizado durante o crescimento. Ex: ágar Batata Dextrose, para crescimento de bolores e leveduras.

- Semi-sólido: o meio é adicionado de uma quantidade menor de ágar (inferior a 1,0%), permitindo o crescimento de micro-organismos em tensões variadas de oxigênio ou a verificação da motilidade.

Classificação dos meios quanto a função

- Meios de Pré-enriquecimento: são aqueles que permitem a dessensibilização de micro-organismos injuriados, isto é, para amostras que sofreram algum tipo de tratamento (térmico ou químico). Ex. Água peptonada, Caldo Lactosado.

- Meios de Enriquecimento: são aqueles que permitem o crescimento de micro-organismos exigentes, de crescimento lento, mas não inibem o crescimento de outros. Esses meios têm a propriedade de estimular o crescimento de determinados micro-organismos. Ex: PCA - Agar padrão para contagem, ágar sangue.

- Meios Seletivos: são os que contêm substâncias que inibem o desenvolvimento de determinados grupos de micro-organismos, permitindo o crescimento de outros. A maioria deles é também diferencial, permitindo diferenciar as colônias dos micro-organismos. Ex: SSA para Salmonella (SSA = Salmonella Shigella Agar), BDA - ágar batata dextrose acidificado (para isolamento de bolores e leveduras).

Classificação dos meios quanto a função

- Meios Diferenciais: quando contém substâncias que permitem estabelecer diferenças entre micro-organismos muito parecidos ou separar um grupo ou uma espécie de micro-organismo. Ex: AS - ágar sangue (diferenciação de espécies hemolíticas das não hemolíticas), ágar Baird-Parker (para isolamento e diferenciação de cocos Gram positivos).

- Meios de Manutenção: são utilizados para conservação de micro-organismos no laboratório, ou seja, garantem a viabilidade de micro-organismos. Ex: NA - ágar Nutriente.

Classificação dos meios quanto a natureza

- Animados: são constituídos de células vivas (animais de laboratório, cultivo de células).

- Inanimados: não possuem células vivas. Podem ser:

- Naturais: contêm substâncias provenientes da natureza. Ex: leite

- Sintéticos: substâncias químicas preparadas em laboratório. Ex: MSA-Manitol Salt Agar

- Semi-sintéticos: possuem componentes naturais e sintéticos. Ex: ágar sangue

Orientações para preparar o meio de cultura

constar no próprio frasco, ou segundo a literatura.

2) Adicionar o volume correto de água destilada e dissolver completamente o meio; caso necessário, medir o pH e ajustá-lo às condições específicas exigidas.

3) Se for meio de cultura sólido ou semi-sólido, acrescentar a quantidade certa de Ágar e fundir em micro-ondas; 4) Colocar o meio em frascos Erlenmeyer ou tubos de

ensaio, conforme o caso, tampar com tampões de algodão, cobrir com papel e amarrar com barbante;

5) Colocar os frascos (Erlenmeyer ou tubos) com meio para serem esterilizados em autoclave a 121ºC por 15 a 20 minutos.

Observação

Ao preparar um meio de cultura não

podemos

mantê-lo

à

temperatura

ambiente uma solução não estéril por mais

de uma hora, devido a possibilidade de

evaporação de água e de crescimento

microbiano,

o

que

torna

o

meio

contaminado com metabólitos microbianos

e com sua composição inicial alterada:

alguns componentes são utilizados pelos

micro-organismos e os demais, pelo efeito

da evaporação de água, se concentram.

Contagem direta - Meios cromogênicos

Ágar RAMBACH Colônias incolores: Proteus sp Colônias vermelhas: Salmonella sp Colônias azuis: E. coli

INDOL CITRATO Teste Bioquímico: IMVIC