CÉLIA REGINA SCOARIS GRANADO
EFEITOS DA DIETA DE CAFETERIA SOBRE O JEJUNO DE
RATOS SEDENTÁRIOS E TREINADOS
MARINGÁ
CÉLIA REGINA SCOARIS GRANADO
EFEITOS DA DIETA DE CAFETERIA SOBRE O JEJUNO DE
RATOS SEDENTÁRIOS E TREINADOS
Dissertação apresentada ao Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas (Área de concentração - Biologia Celular e Molecular) da Universidade Estadual de Maringá, para a obtenção do grau de Mestre em Ciências Biológicas.
Orientadora: Profa. Dra. Maria Raquel Marçal Natali
MARINGÁ
Dados Internacionais de Catalogação-na-Publicação (CIP) (Biblioteca Central - UEM, Maringá – PR., Brasil) Granado, Célia Regina Scoaris
G748e Efeito da dieta de cafeteria sobre o jejuno de ratos sedentários e treinados. / Célia Regina Scoaris Granado. -- Maringá : [s.n.], 2008.
79 f. : il.
Orientadora : Prof. Dr. Maria Raquel Marçal Natali.
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Maringá, Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas (Área de concentração - Biologia Celular e Molecular), 2008.
1. Obesidade - Dieta de cafeteria - Exercícios físicos. 2. Obesidade - Neurônios mientéricos - Treinamento físicos. 3. Obesidade - Parede intestinal - Análise - Treinamento físico. 4. Obesidade - Análise enzimática. 5. Obesidade - Túnica muscular - Treinamento físico. 6. Obesidade Mucosa intestinal - Treinamento físico. 7 Obesidade animal - Modelo experimental. II. Universidade Estadual de Maringá, Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas (Área de concentração - Biologia Celular e Molecular). II. Título.
BIOGRAFIA
Célia Regina Scoaris Granado, filha de José Mario Scoaris e Célia Jordão Scoaris, nasceu em Maringá, estado do Paraná no dia 7 de novembro de 1980.
Em dezembro de 2005 concluiu o curso em Ciências Biológicas pela Universidade Estadual de Maringá, Maringá, Paraná.
Em março de 2006 iniciou o Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas (Área de concentração - Biologia Celular e Molecular) em nível de Mestrado, na Universidade Estadual de Maringá, realizando estudos na área de neurônios mioentéricos e morfologia intestinal.
Sei que os Teus olhos
Sempre atentos permanecem em mim E os Teus ouvidos
Estão sensíveis para ouvir meu clamor Posso até chorar...
Mas a alegria vem de manhã És Deus de perto e não de longe
Nunca mudastes, Tu és fiel
Deus de aliança, Deus de promessas Deus que não é homem para mentir Tudo pode passar, tudo pode mudar
Mas Tua palavra vai se cumprir
Posso enfrentar o que for Eu sei quem luta por mim Seus planos não podem ser frustrados
Minha esperança está Nas mãos do grande Eu sou Meus olhos vão ver o impossível
Acontecer...
Davi Sacer, Verônica Sacer e Ronald Fonseca.
Agradeço primeiramente a Deus,
iv
“Agradecer é admitir que houve um minuto em que se precisou de alguém. Agradecer é reconhecer que o homem jamais poderá lograr para si o dom de ser auto-suficiente." (Desconhecido)
Aos meus pais, Mario e Célia,
pelo exemplo de vida e amor incondicional. Agradeço muito a Deus por serem os meus pais. Amo muito vocês.
Aos meus irmãos, Rosângela e Rogério e ao meu sobrinho Gabriel, por estarem sempre ao meu lado tornando minha vida mais segura e feliz. Ao meu marido Pedro,
que esteve ao meu lado nessa caminhada, com infinito amor, paciência e confiança. A minha orientadora, Maria Raquel Marçal Natali,
por todas as oportunidades, mas, sobretudo pelo exemplo de dedicação, sabedoria, amizade e paciência.
A todos os meus familiares principalmente a tia Marta Jordão,
nos momentos mais difíceis não me deixaram cair, sempre encontraram forças para me ajudar a levantar e continuar.
As professoras: Cecília Mareze, Célia de Godoy, Jacqueline Zanoni, Juliana Martins, Luzmarina Hernandes, Marli Pereira, Nilza Buttow, Rosane Peralta, Solange Franzói de Moraes,
com dedicação e amizade contribuíram para a minha formação. As professoras Evanilde Buzzo Romano e Marli Defani,
pela oportunidade na graduação de participar de um projeto de pesquisa, no qual tive a chance de receber um grande conhecimento e pela amizade.
A professora Ângela M. Araújo do Departamento de Estatística, pelo auxílio estatístico.
As técnicas do laboratório de Histotécnica Animal, Ana Paula de Santi, Maria dos Anjos Fortunato e Maria Euride Cancino,
nunca esquecerei a colaboração, ensinamento, paciência e amizade.
Aos amigos de longa data Adriana Santos, Letícia Pereira, Rogério Marchiosi e Vanessa Guedes Pereira,
amizade é poder confiar em alguém de olhos fechados e saber que nunca vai tropeçar.
Aos companheiros de pesquisa André Proença, Cristiano Tashima, Dionízia Scomparin, Gabriela Rizo, Eduardo Hartmann, Felipe Almeida, Ivan Domício, Laureane Masi, Luciana Roldi, Marcelo Shijima, Priscila Freitas, Renata Pereira, Renato Nachbar, Thaís Brogio,
pelas alegrias, amizade e apoio, possibilitando a conclusão deste trabalho científico.
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq), pela concessão de bolsa para a execução deste trabalho.
Ao Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas, a todos os professores e colegas, pela oportunidade e suporte para realização do Mestrado.
Aos que, embora não citados, contribuíram para a realização deste estudo.
APRESENTAÇÃO
Esta dissertação segue a Resolução Nº. 07/2007 - CPBC do Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas da Universidade Estadual de Maringá sendo composta por um artigo redigido de acordo com as normas do periódico científico: Digestive Disease Science (ISSN: 0163-2116) visando sua publicação.
RESUMO
A obesidade é considerada um grande problema de saúde pública com crescente aumento nas últimas décadas. É caracterizada por modificações hiperplásicas e hipertróficas dos adipócitos com consequente aumento no peso corporal devido a um desequilíbrio no balanço energético, o impacto deste quadro pode ser minimizado através de atividade física regular. O excesso de peso compromete a saúde com repercussões em diferentes órgãos, entre eles destacamos o intestino delgado, que é a via de entrada dos nutrientes para o desenvolvimento e a manutenção da vida.
Este órgão tem sua atividade regulada extrinsecamente pelo Sistema Nervoso Autônomo e modulado intrinsecamente pelo Sistema Nervoso Entérico (SNE). Este sistema é organizado como uma rede altamente complexa de fibras nervosas e corpos celulares de neurônios (motores, sensitivos e interneurônios) sendo responsável pela modulação de funções como a digestão e a absorção de nutrientes, secreção e motilidade intestinal. O plexo mioentérico é um dos principais plexos ganglionados que compõem o SNE, localiza-se entre a túnica muscular circular interna e longitudinal externa do tubo digestório e responde entre outras funções pelo peristaltismo.
Neste trabalho avaliamos a repercussão da dieta de cafeteria oferecida a ratos adultos sobre a população de neurônios mioentéricos e sobre os parâmetros morfométricos e enzimáticos do intestino delgado. Estes parâmetros foram avaliados em ratos sedentários e em ratos submetidos a treinamento físico.
Foram utilizados 28 ratos (Rattus norvegicus) machos com 70 dias de idade, distribuídos conforme a dieta e a condição ou não de sedentarismo durante 3 meses: ratos sedentários normoalimentados (SN), ratos sedentários alimentados com dieta de cafeteria (SCa), ratos treinados normalimentados (TN) e ratos treinados alimentados com dieta de cafeteria (TCa).
mensurados o seu comprimento naso-anal para comprovar a obesidade a partir da obtenção do Índice de Lee [peso corporal1/3(g)/comprimento naso-anal (cm) x 1000]. Após anestesia realizou-se uma laparatomia sendo retirados e pesados os tecidos adiposos periepididimal, retroperitoneal e retiradas amostras do jejuno de cada animal. Estas amostras foram destinadas aos seguintes protocolos: processamento histológico com inclusão em parafina para estudo morfométrico da túnica muscular e parede total; inclusão em historesina para avaliação morfométrica das vilosidades e criptas intestinais; técnica histoquímica para avaliar a população de células caliciformes; análise das enzimas intestinais (fosfatase alcalina, lípase, sacarase, β-galactosidase e maltase) e preparados de membrana para avaliar a população mioentérica total.
A avaliação estatística dos resultados foi realizada com o auxílio do software GraphPadPrism, sendo submetidas a análise de variância seguida do pós teste de Tukey com nível de significância de 5%.
Nossos resultados indicam que a dieta de cafeteria foi caracterizada como hiperlipídica e hipoprotéica, sendo adequada para induzir a obesidade, uma vez que o Índice de Lee (análogo ao índice de massa corporal) e o peso dos tecidos adiposos estavam significativamente aumentados nos animais dos grupos SCa e TCa. O treinamento físico não conseguiu atenuar esses parâmetros. A ausência de diferenças significativas no consumo alimentar entre todos os grupos indica que a dieta e o treinamento físico não alterou o comportamento alimentar destes animais, os quais se revelaram normofágicos.
Nos animais obesos (SCa e TCa) verificamos alterações significativas nos parâmetros intestinais analisados, com aumento na altura das vilosidades, profundidade das criptas, espessura da parede total e atividade enzimática da fosfatase alcalina e sacarase e redução no número de células caliciformes. Influência do treinamento físico foi verificada para a altura das vilosidades, profundidade das criptas, túnica muscular e população das células caliciformes.
Com relação à inervação intrínseca do jejuno, verificamos como efeito da dieta o aumento na área neuronal e redução da mesma com o treinamento físico. O número total de neurônios mioentéricos manteve-se inalterado independente do grupo estudado.
Obesity is considered a great public health issue during the latest decades. It is characterized by hyperplastic and hypertrophic modifications in adipocytes consequently increasing body weight due to the energetic imbalance, the impact in this condition can be minimized through regular physical activity. Overweighing compromises health with consequences to several organs, and the small intestine it can be highlighted, once it is the place where nutrients will come into the body for the body development and maintenance of life.
This organ has its activity extrinsically regulated by the Autonomous Nervous System and modulated intrinsically by the Enteric Nervous System (ENS). This system is organized as a high-complex net of nervous fibers and neuronal cellular bodies (motors, sensitives and interneurons) being possible to modulate functions such as digestion, nutrients absorption, secretions and intestinal motility. The myenteric plexus is one of the main ganglionated plexus which compose the ENS, placed between inner circular muscular coat and outer longitudinal muscular coat of the digest tube and responds among other functions, to peristalsis.
In this study we evaluated the repercussion of the cafeteria diet offered to adult rats over the population of myenteric neurons, morphometric and enzymatic parameters of small intestine. These parameters were evaluated in sedentary rats and rats which performed physical training.
It was used twenty-eight 70-day-old male rats (Rattus norvegicus) which distributed according to the diet and whether they trained or not during 3 months: sedentary normally-fed rats (SN), sedentary rats fed with cafeteria diet (SCa), trained normally-fed rats (TN) and trained animals fed with cafeteria diet (TCa).
Either sedentary normally-fed animals or trained normally-fed ones received pattern diet to rodents with ad libitum water and food. On the other hand, SCa and TCa received a diet consisted of usual pellets of the pattern diet and daily inclusion of aliments of: cheese or bacon flavored chips, bread, chocolate, marshmallow, peanut candy, filled cookies, wafer cookies, sausages, mortadella, besides ad libitum soda and water. The TN and TCa performed aerobic physical activity in treadmill for 1 hour/5 times a week for 12 weeks after 30days the diet being introduced.
weight1/3(g)/ naso-anal length (cm) x 1000]. After anesthesia the laparatomy was performed being taken and weighted the periepididymal, retroperitoneal adipose tissues as well as samples of the jejunum of each animal. These samples were designated to the following protocols: histological processing with inclusion in paraffin for the morphometric study of the muscular coat and the total wall; inclusion in historesin in order to evaluate intestinal villi and crypts, histochemistry technique to evaluate the goblet cells, analysis of the intestinal enzymes (alkaline phosphatase, lipase, sucrose, β-galactosidase and maltose) and whole-mount preparations to evaluate the total myenteric population.
The statistical analysis of the results were performed with the GraphPadPrism software, being submitted to variance analysis and post-test of Tukey at the significant level of 5%.
The results obtained in this study indicate that the cafeteria diet was characterized as hyperlipidic and hypoproteic, being adequate to induce obesity, once the Lee index (analog to the body mas index) and weights of the adipose tissues were significantly increased in animals in animals of SCa and TCa groups. Physical training alone could not attenuate these parameters. The absence of significant differences in the alimentary intake among all groups indicates that diet and physical training did not alter the alimentary behavior, which revealed being normophagic.
In obese animals (SCa and TCa) significant alterations in the evaluated intestinal parameters were verified, such as: increase in villi height, crypts depth, thickness of the total wall and enzymatic activity of the alkaline phosphatase and sucrase and reduction in number of goblet cells. The influence of physical training was verified for the villi height, crypts depth, muscular coat and population of goblet cells.
In relation to the intrinsic innervation of the jejunum, it was verified, as a diet effect, the increase of the neuronal area and its decrease due to physical training. The number of myenteric neurons was unchangeable independently of the studied group.
It was concluded that the cafeteria diet is an efficient experimental model to induce obesity in rats, leading to alterations in morphometric and enzymatic intestinal parameters. Physical training influenced some of these parameters.
