Efeito do Biofertilizante Agrobio e do Oxicloreto de Cobre Sobre a Flora
Microbiana do Filoplano de Pimentão.
Débora Alves Gonzaga da Silva1; Margarida Goréte Ferreira do Carmo2; Maria do Carmo Araújo Fernandes3; Mariella Camargo Rocha1; Aldir de Oliveira de Carvalho 2; Evandro Silva Pereira Costa4.
1 Discente do CPGF; 2 Docente do Dep. de Fitotecnia da UFRRJ-RJ; 3 PESAGRO (EES); 4 Discente do Curso de
Licenciatura de Ciências Agrícolas da UFRRJ/RJ. Seropédica, RJ, CEP. 23851-970. E-mail: deb.gon@globo.com
RESUMO
O filoplano abriga populações de bactérias, fungos e leveduras. Investigou-se, no período de junho a novembro de 2003, em experimento de campo, montado no Setor de Horticultura da PESAGRO-EES, a população residente no filoplano de plantas de pimentão (Capsicum
annuum L.) inoculadas com Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria e posteriormente,
pulverizadas a cada 15 dias com oxicloreto de cobre (2,4g i.a/L) e semanalmente com o biofertilizante Agrobio (5%) e água. O biofertilizante Agrobio e o oxicloreto de cobre inibiram o crescimento de X. axonopodis pv. vesicatoria e reduziram, significativamente, a população de leveduras. O efeito do Agrobio foi mais acentuado nos períodos de seca, pois, em condições de alta umidade relativa e precipitação, o mesmo não interferiu na população de leveduras, que se manteve equivalente à da testemunha água. O Agrobio, durante os períodos de temperatura mais elevada, favoreceu a popul,cão de Bacillus sp..
PALAVRAS CHAVE: Capsicum annuun, filoplano, população residente. ABSTRAC
Effect of biofertilizer Agrobio on bacterial spot and resident population in pepper plants.
Bacteria, fungi and yeast are common residents on plant surfaces. The resident leaf population was quantified inoculated with Xanthomanas axonopodis pv. Vesicatoria pepper (Capsicum
annuum L.) leaves from plants treat with copper oxycloride (2,4 ai/L), Agrobio biofertilizer (5%)
and water (control) under field conditions from June to November 2003. The effect of Agrobio was more noticeable on drought periods, since under high moisture conditions there was no effect on yeast populations. Under higher temperatures Agrobio applications increased Bacillus sp. populations.
O filoplano pode ser habitado por populações de bactérias, leveduras e fungos filamentosos. Esse desenvolvimento sobre a superfície da folha é geralmente maior quando a temperatura é moderada e o nível de umidade é alto (BEATTIE & LINDOW, 1994). Populações residentes são, geralmente, removidas pela lavagem das folhas (HIRANO & UPPER, 1989) ou mortas pela radiação ultravioleta ou desinfestação química (HENIS & BASHAN, 1986). Essa dinâmica é definida em função de quatro processos: imigração (chegada de propágulos viáveis sobre as folhas), emigração (prejuízos físicos ou remoção de propágulos viáveis), crescimento (um aumento na biomassa ou número de propágulos viáveis através da multiplicação) e morte (KINKEL, 1997). Mudanças na composição da atmosfera pela chuva ou ventos fortes e a vegetação adjacente modificam a concentração de esporos de organismos no AR (BOVALLIUS et al., 1978).
A idade e a posição que a folha ocupa na planta também interferem na população. As folhas velhas são mais permeáveis resultando em maior concentração de nutrientes em sua superfície que pode contribuir num aumento do crescimento (BEATTIE & LINDOW, 1995). Adicionalmente, folhas baixas num dossel podem apresentar ambiente físico (temperaturas mais moderadas, maior umidade relativa) mais favorável ao crescimento e sobrevivência que folhas próximas do topo da planta. Porém, as condições ambientais podem ser mais importantes que a idade ou posição da folha para se determinar o número populacional de microorganismos sobre as folhas em plantações (BEATTIE & LINDOW, 1995).
O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito do biofertilizante Agrobio sobre a população microbiana residente em folhas de plantas de pimentão inoculadas Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria comparativamente com duas testemunhas, água e o oxicloreto de cobre.
MATERIAL E MÉTODOS
O ensaio foi realizado no campo experimental do Setor de Horticultura da PESAGRO (EES), Seropédica (RJ) e no Departamento de Fitotecnia da UFRRJ entre os meses de junho a novembro de 2003. Primeiramente, avaliaram-se três cultivares de pimentão, ‘Cascadura Itaipu’, ‘Atenas’ e ‘Magali-R’ e três tratamentos, água (testemunha), oxicloreto de cobre (2,4g ia/L) e o biofertilizante Agrobio, pulverizados semanalmente. Adotou-se o delineamento de blocos ao acaso, com quatro repetições em esquema fatorial 3X3. Em 28 de junho, foi feito o primeiro isolamento utilizando-se amostras de folhas de pimentão para a quantificação da população de X. axonopodis pv. vesicatoria; Bacillus sp., leveduras, Pseudomonas
fluorescentes e fungos filamentosos utilizando-se a técnica descrita por AGUIAR (1997) e SAYÃO (2002). Retirou-se ao acaso uma folha, sem sintomas de mancha-bacteriana, da porção média de seis plantas de cada tratamento das quais foram retirados dois discos foliares com o auxílio de um furador de metal de 5 mm de diâmetro. Esses discos foram colocados em Erlenmayers com 20 mL de solução extratora (140mL de K2HPO4 + 90mL de KH2PO4 + 1,0g de
peptona bacteriológica por litro de água destilada a pH 7). Os frascos correspondentes a cada parcela foram agitados por 30 minutos em “shaker” regulado para 150 oscilações por minuto. Após esse período de agitação, alíquotas de 0,5mL foram pipetados e submetidos a diluição em série 1:10 em tampão fosfato 0,005M (pH 7). Os tubos contendo essas diluições foram agitados em um agitador Vortex por 0,5 minuto, sendo que após esse período foram distribuídas alíquotas de 0,1mL, nas concentrações 10-2 e 10-3, em placas de Petri contendo os
seguintes meios: King B (KING et al., 1954) para bactérias fluorescentes; meio BDA (TUITE, 1969) + Antibiótico para fungos filamentosos; meio MTA (GOSZCZYNSKA & SERFORTEIN, 1998, modificado) para Xanthomonas axonopodis pv vesicatoria; BDA (TUITE, 1969) para bacilos e leveduras. As placas para o isolamento de bactérias foram incubadas em BOD por 36 horas a 28ºC e as destinadas ao isolamento de fungos foram incubadas em BOD por sete dias a 25ºC.
Realizaram-se, ainda, mais quatro isolamentos, nos dias 12 de julho, 10 e 11 de outubro e 17 de novembro, quando utilizaram-se de folhas inteiras da cultivar ‘Cascadura Itaipu’. Estas foram colocadas em Erlenmayers com 20 mL de solução extratora, seguindo os procedimentos descritos acima. Essa suspensão foi submetida à diluição em série 1:10 e em seguida distribuídas em placas de Petri contendo os meios citados acima, utilizando-se 0,1mL por placa.
Concluída a leitura das placas, as médias foram transformadas em logarítimo e posteriormente submetidas a análise de variância e teste Tukey a 5% de probabilidade.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
No primeiro isolamento observou-se crescimento de Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria apenas na cultivar ‘Cascadura Itaipu’. Este resultado possivelmente está associado à maior suscetibilidade desta cultivar à mancha-bacteriana em relação às demais. Não foi observado nos diferentes tratamentos crescimento microbiano nos diferentes meios utilizados, refletindo bem as condições climáticas predominantes no período, baixa umidade relativa do ar e baixa
temperatura. Devido a este fato, a partir do registro de chuva e aumento do período de molhamento foliar, realizaram-se mais quatro isolamentos utilizando-se apenas a variedade `Cascadura Itaipu’. Nestas avaliações, foram isolados leveduras, Bacillus sp., Erwinia sp., os fungos, Cladosporium sp., Fusarium sp., Phyllosticta sp., Chrysosporium sp. e a fitobactéria X.
axonopodis pv. vesicatoria, porém, em geral, sem efeito significativo dos tratamentos água
(testemunha), oxicloreto de cobre (2,4g ia/L) e biofertilizante Agrobio (5%) sobre o desenvolvimento dessas populações.
Constatou-se efeito significativo (p< 0,05) dos tratamentos sobre a população de leveduras e de X. axonopodis pv. vesicatoria (Tabelas 1, 2 e 3) nos primeiro, segundo e terceiro isolamentos e de Bacillus sp. no último isolamento (Tabela 4). Somente o tratamento com o biofertilizante Agrobio reduziu significativamente o crescimento da população de leveduras e este mais o tratamento a base de cobre, inibiu significativamente o crescimento de X.
axonopodis pv. vesicatoria, indicando o seu uso como auxiliar no controle da mancha
bacteriana em condições de campo. No último isolamento (Tabela 4), observou-se efeito significativo dos tratamentos apenas sobre a população de Bacillus sp. no filoplano das plantas pulverizadas com Agrobio.
Tabela 1. Média das populações de Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria e de leveduras
presentes no filoplano de folhas de pimentão em meio King B e BDA no segundo isolamento. Valores expressos em UFC/cm2. Seropédica, UFRRJ, 12 de julho 2003.
Produto Leveduras X. axonopodis pv. vesicatoria
Água 7,18 x 103 a 7,56 x 104a
Cobre 6.29 x 103 a 0,00 b
Agrobio 2,11 x 103 b 0,00 b
CV % 32,53 59,04
*Médias seguidas de mesma letra não diferem estatisticamente do teste Tukey a 5% de probabilidade.
Tabela 2. Análise de variância para efeito de produto pulverizado sobre a população residente
de X. axonopodis pv. Vesicatoria , de leveduras em folhas de pimentão nos terceiro e quarto isolamentos. Seropédica, UFRRJ, 10 e 11 de outubro de 2003.
Fonte de
variação
GL Quadrado Médio
X. axonopodis pv. vesicatoria
Sete dias Um dia
Leveduras
Sete dias Um dia
Produto 2 0,94 ns 0,45 ns 0,27 ns 1,52 ns
Resíduo 6 1,65 ns 1,00 ns 0,34 ns 1,32 ns
CV% - 36,01 30,76 15,63 30,91
ns não significativo; *, ** significativo até 5% e até 1% pelo Teste F.
Dados expressos em Log (UFC/cm2)
Tabela 3. Número de unidades formadoras de colônia por área foliar de Xanthomonas
axonopodis pv. vesicatoria e de leveduras nos terceiro e quarto isolamentos. Seropédica,
UFRRJ, 10 e 11 de outubro de 2003.
Tratamento Quadrado Médio
X. axonopodis pv. vesicatoria
Sete dias Um dia
Leveduras
Sete dias Um dia
Agrobio 5% 3,10 a 4,01 a 3,12 a 3,91 a Água 4,07 a 3,67 a 3,00 a 4,23 a Oxicloreto de cobre 2,4g/L 3,55 a 3,50 a 3,64 a 3,04 a CV% 36,1 15,63 30,76 30,91
*Médias seguidas de mesma letra não diferem estatisticamente do teste Tukey a 5% de probabilidade. Dados expressos em Log (UFC/cm2).
Tabela 4 Média das populações de Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria, leveduras e de
Bacillus sp. presentes no filoplano de folhas de pimentão, quantificada por meio de isolamento
em meios de cultura (MTA e BDA) no quinto isolamento. Dados expressos em UFC/cm2
Seropédica, UFRRJ, 17 de novembro de 2003.
Tratamento UFC/cm2
X. a. vesicatoria Leveduras Bacillus sp.
Agrobio 5% 589,46 a 567,20 a 813,85 a Água 125,52 a 794,85 a 0,00 b Oxicloreto de cobre 2,4g/L 0,00 a 3.572,43 a 72,84 b CV% 88,69 68,14 43,83
*Médias seguidas de mesma letra não diferem estatisticamente do teste Tukey a 5% de probabilidade.
LITERATURA CITADA
AGUIAR, L. Identificação de isolados nacionais de Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria,
agente da mancha bacteriana do pimentão (Capsicum annuum), resistentes ao cobre e perspectivas de seu controle com formulações cúpricas e cuprorgânicas. Seropédica, RJ, 1997.
153p. Tese (Mestrado em Fitotecnia) – Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro.
BEATTIE, G.A.; LINDOW, S.E. Survival, growth and localization of epiphytic fitness mutants of Pseudomonas syringae on leaves. Appl. Environ. Microbiol, v. 60, p. 3790-3798, 1994.
BEATTIE, G.A.; LINDOW, S.E. The secret life of foliar bacterial pathogens on leaves. Annu.
Rev. Phytopathol. v. 33, p.145-172, 1995.
BOVALLIUS, A.; BUCHT, B.; ROFFEY, R.; ANAS, P. Three-years investigations of the natural airborne bacterial flora at four localities in Sweden. Appl. Environ, Microbiol. v. 35, p.847-852, 1978.
GOSZCZYNSKA, T.; SERFORTEIN, J.J. Milk-Teen agar, a semiseletive medium for isolation and diferentiation of Pseudomonas syringae pv. syringae, Pseudomonas syringae pv. phaseolicola and Xanthomonas axonopodis phaseoli. Jornal of Microbiological Methods 32 (1998) 65-72.
HENIS, Y.; BASHAN, Y. Epiphytic survival of bacterial leaf pathogens . In: Microbiology of the
phyllosphere. New York: Cambridge Univ. Press, p.252-268, 1986.
HIRANO, S.S.; UPPER,C.D. Diel variation in population size na ice nucleation activity of
Pseudomonas syringae on snap bean leaflets. Appl. Environ. Microbiol. v. 55, p.623-630,
1989.
KING, E. O.; WARD, M.K.; RANEY, D.E. Two simple media for the demontration of pyocyanin and fluorescein. J. Lab. Clin. Med. 44. 301- 307p. 1954.
KINKEL, L.L. Microbial population dynamics on leaves. Annu. Rev. Phytopathol. v.35, p.327-347, 1997.
SAYÃO, C. O biofertilizante Agrobio; composição microbiológica e seus efeitos no controle da
Mancha-Bacteriana em mudas de pimentão (Capsicum annuum). Seropédica, RJ, 2002. 49p.
Tese (Mestrado em Fitotecnia) - Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro.
TUITE, J. Plant pathological methods- Fungi and bacteria. Minneapolis: Bergess Publishing, 1969. 239p.
