IX Salão de Iniciação Científica
PUCRS
O inibidor da histona desacetilase, butirato de sódio, previne o
efeito estimulador do bloqueio de GRPR sobre a proliferação
de células de neuroblastoma
de Almeida, V. R. 1,2,3 ; Schwartsmann G. 3,4 ; Brunetto, A. L. 3,4 ; Abujamra, A. L. 3,4 ;
Roesler, R. 2,3
1
Acadêmica de Ciências Biológicas, Faculdade de Biociências, PUCRS, Porto Alegre, RS, Brasil.
2
Departamento de Farmacologia, ICBS, UFRGS, Porto Alegre, RS, Brasil.
3
Laboratório de Pesquisas em Câncer, Centro de Pesquisas, HCPA, Porto Alegre, RS, Brasil.
4
Instituto do Câncer Infantil, ICI, Porto Alegre, RS, Brasil.
Resumo
antitumoral experimental que age influenciando o relaxamento da cromatina, em células de neuroblastoma murinas, Neuro-2A.
Introdução
O neuroblastoma origina-se de células da crista neural associadas ao sistema nervoso parassimpático. O peptídeo liberador de gastrina (GRP) age como potente mitógeno para tecidos neoplásicos pela ativação do seu receptor (GRPR). O inibidor seletivo de GRPR, RC-3095, tem sido amplamente estudado como um potente agente antitumoral, devido à sua atividade anti-proliferativa em linhagens de câncer de próstata, pulmão e colorretal (ROESLER,2006). No entanto, não foi ainda avaliado em combinação com outros adjuvantes para quimioterapia em neuroblastomas. O butirato de sódio (NaB), um potente inibidor de histona desacetilase, induz parada do ciclo celular e apoptose em células malignas(ROSATO,2003). Neste estudo foi avaliado o efeito de RC-3095 sozinho ou em combinação com NaB na linhagem celular murina de neuroblastoma, Neuro-2A.
Metodologia
As células Neuro-2A foram semeadas em placas com 24- ou 96-poços com meio DMEM-LG, antibióticos, antifúngicos e soro fetal bovino a 10%. Foram tratadas com butirato de sódio (1mM) , RC-3095 (100nM, 10nM, 1nM, 0.1nM), ou uma combinação de ambos e analisadas 48h pós-tratamento. Para este ponto as células foram submetidas ao teste de exclusão por trypan blue ou ensaio de MTT, respectivamente para avaliar a proliferação celular e viabilidade.
Resultados e Discussão
Através do teste de exclusão por trypan blue, verificamos a curva de dose de RC-3095, e que a dose de 100nM de RC-3095 teve efeito proliferativo em células Neuro-2A quando comparada ao controle. O efeito pró-proliferativo do RC-3095 (100nM) foi prevenido por NaB (1mM) (Figs. 1 e 2). Proliferação Celular * ** ** ** 0 100000 200000 300000 400000 500000 600000 700000 800000
Controle RC3095 100nM RC3095 10nM RC3095 1nM RC3095 0,1nM NaB 1mM NaB 1mM + RC3095 100nM NaB 1mM + RC3095 10nM C é lu la s Vi ávei s ( c on ta gem b rut a)
Viabilidade Celular
* *** * ** 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3Controle RC 100nM RC 0.1nM NaB 1mM NaB 1mM +
RC 100nM NaB 1mM + RC 0.1nM A b so rb â n ci a ( 492 n m )
Figura 2 Ensaio MTT de células Neuro-2A pós-tratamento 48h. *p=0,21, **p=0,001, ***p=0,000
Conclusão
O antagonista GRPR RC-3095 induziu um efeito pró-proliferativo em células Neuro-2A. O co-tratamento com NaB preveniu esse efeito. Esses dados fornecem a primeira evidência de efeito estimulador de um antagonista GRPR sobre a proliferação celular e indicam o potencial antitumoral de agentes que regulem o relaxamento da cromatina em neuroblastoma.
Referências
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