Interpretação
Guia de
3M
TMPetrifilm
TM3M
TMPetrifilm
TMPlaca para Contagem de Leveduras e Bolores
Este guia apresenta resultados das placas 3M™ Petrifilm™ para Contagem de Leveduras e Bolores.
Para mais informações, contate o representante de produtos microbiológicos da 3M do Brasil Ltda.
A Placa 3M™ Petrifilm™ para Contagem de Leveduras e Bolores (YM) é um meio de cultura pronto para uso que contém
um agente geleificante solúvel em água fria, nutrientes e um corante indicador para dar contraste e facilitar a contagem.
Contagem Total = 20 Contagem de Leveduras = 16 Contagem de Bolores = 4
Esta Placa 3M™ Petrifilm™ YM contém colônias de leveduras e bolores.
Contagem de Leveduras e Bolores = 0
A figura 2 mostra uma Placa 3M™ Petrifilm™ YM sem leveduras e bolores.
Contagem Estimada de Bolores ~64
As colônias de bolores, na figura 5, estão começando a se aglomerar e sobrepor umas as outras na placa. Conte cada margem da colônia ou foco. A placa pode ser dividida em seções para facilitar a contagem.
Neste exemplo, aproximadamente 1/4 da placa foi contada, e o número de colônias contado foi multiplicado por 4 para obter a contagem estimada na placa.
A seção mostrada tem 16 bolores.
2
5
Contagem Estimada de Leveduras~INC (contagem atual > 104 )
A Placa 3M™ Petrifilm™ YM, na figura 4, contém colônias de leveduras incontáveis (INC). As colônias pequenas e azuis na borda da placa (realçadas na caixa) estão presentes na placa toda, embora menos visíveis.
Contagem Total Estimada ~500 Contagem Estimada de Leveduras ~480 Contagem de Bolores = 21
Quando o número de colônias é maior que 150, estime a contagem. Determine o número médio de colônias num quadrado (1cm2) e multiplique-o por 30 para obter a contagem
total por placa. A área inoculada é de aproximadamente 30 cm2.
A cor das colônias pode variar de pálida (como neste exemplo) a azul esverdeada.
3
As placas nas figuras 6a e 6b são da mesma amostra. A figura 6a é uma diluição 1:10 e apresenta colônias pequenas, pálidas e numerosas, tornando difícil a contagem. A figura 6b é uma diluição 1:100 e mostra como a diluição do produto, para obter uma contagem menor que 150 colônias, facilita a contagem. Como na maioria dos meios, num ambiente altamente competitivo (como a figura 6a), o crescimento de colônias típicas será inibido. Para amostras altamente contaminadas, como esta, diluições maiores são recomendadas para obter uma contagem mais precisa e maior crescimento de colônias típicas (como na figura 6b).
Contagem de Leveduras e Bolores = 0 Contagem de Leveduras e Bolores = 0
6b
7
8
As Placas 3M™ Petrifilm™ YM utilizam o corante indicador da fosfatase. Por essa razão, alguns produtos alimentícios que contêm fosfatase podem causar uma reação de cor azul na Placa 3M™ Petrifilm™ YM. Dois tipos de reações de cor são encontradas: uma coloração de fundo azul uniforme ou pontos azuis intensos. A figura 7 mostra uma coloração de fundo azul uniforme e a figura 8 mostra um ponto azul intenso, muitas vezes encontrado em condimentos e produtos granulados. A figura 8 também mostra partículas de alimentos que produzem fosfatase.
Para reduzir a reação da fosfatase, siga uma ou mais das técnicas a seguir:
1. Dilua a amostra: Diluições maiores da amostra irão minimizar a coloração azul de fundo ou reduzir o número de pontos azuis intensos.
2. Preparo da amostra: Misture a amostra e deixe sedimentar por 3 a 5 minutos antes de plaquear. Pipete a amostra da porção central
do recipiente ou use saco para homogeneização com filtro a fim de evitar o plaqueamento de partículas.
3. Observe e anote: Observe as placas dentro de 24-36 horas de incubação e anote qualquer mudança de cor a fim de auxiliar na
interpretação final.
Reação de Fosfatase
6a
Contagem de
4
5
6
2
3
Prepare a diluição da amostra. Pese ou pipete a amostra num recipiente estéril, como saco para
homogeneização ou frasco de diluição.
Misture ou homogeneize a amostra utilizando métodos de rotina. Refrigere os pacotes fechados a < 8ºC.
Use antes da data de vencimento impressa na embalagem. Antes do uso, deixe os pacotes atingirem a
temperatura ambiente para abri-los.
Para selar os pacotes abertos, dobre a extremidade e sele com fita adesiva.
Para prevenir contra a exposição à umidade, não refrigere os pacotes abertos. Mantenha os pacotes
re-selados num lugar fresco e seco por até um mês. Evite expor as placas a uma temperatura > 25ºC e/ou umidade relativa > 50%.
Petrifilm Petrifilm Petrifilm
Armazenamento
Preparo da Amostra
1
Para informações detalhadas sobre PRECAUÇÕES, REJEIÇÃO DE GARANTIAS/RECURSO LIMITADO, RESTRIÇÕES DE
RESPONSABILIDADE DA 3M, ARMAZENAMENTO E DESCARTE E INSTRUÇÕES DE USO VEJA A BULA DO PRODUTO.
Adicione a quantidade adequada de um dos diluentes estéreis a seguir: tampão fosfato de
Butterfield, água peptonada 0,1%, diluente salina peptonada (método ISO 6887-1), solução salina (0,85 – 0,90%), caldo letheen sem bissulfato ou água destilada.
Não use tampões contendo citrato, bissulfato ou tiossulfato; eles podem inibir o crescimento. Se o tampão citrato for indicado no procedimento padrão, substitua-o por um dos tampões listados acima, pré-aquecido a 40-45ºC.
Não é necessário ajustar o pH da amostra, contudo, amostras com pH ajustado podem ser usadas.
3M
TMPetrifilm
TM13
14
Petrifilm Petrifilm Petrifilm <70°FIncubação
Interpretação
Incube as Placas com a face transparente para cima, em pilhas de até 20 placas a 20-25ºC por 3 e 5 dias. (Devido ao fato de que alguns bolores podem crescer rapidamente, pode ser interessante ler e contar as placas em 3 dias, pois pequenas colônias podem ser ocultadas pelos bolores maiores, crescidos em 5 dias. Se isto acontecer, a contagem com 3 dias pode ser usada; contudo, deve ser reportada como uma contagem estimada).
As Placas 3M™ Petrifilm™ podem ser contadas em um contador de colônias comum ou outro sistema de amplificação. Coloque o difusor do Petrifilm™
Leveduras e Bolores no centro
da placa.
Distribua a amostra pressionando
delicadamente o centro do difusor.
Não gire nem arraste o difusor.
Retire o difusor. Espere 1 minuto, no mínimo, para o gel solidificar.
10
11
12
Coloque a Placa 3M™ Petrifilm™ em uma superfície plana. Levante o filme
superior.
Com a 3M™ Pipeta Eletrônica ou equivalente, posicionada
perpendicularmente a Placa 3M™
Petrifilm™, coloque 1ml da amostra no centro do filme inferior.
Inoculação
7
8
9
Desça o filme superior sobre aamostra.
Métodos Listados:
* Contagem de Leveduras e Bolores em Alimentos: Método Oficial AOAC 997.02
* Amostragem Ambiental:
Placas para Contagem de Leveduras e Bolores Método MFLP-41A
* Produtos Alimentícios e Ingredientes: Placas para Contagem de Leveduras e Bolores Método MFHPB-32
• Estados Unidos • Canadá
Contagem de Leveduras = 43
A figura 9 mostra colônias típicas de leveduras. Características típicas de leveduras incluem:
• A colônia é pequena • A colônia tem borda definida
• A cor da colônia pode variar de pálida a azul-esverdeada
• A colônia pode aparecer elevada
• A cor da colônia é uniforme sem foco no centro (centro mais escuro)
Contagem de Bolores = 29
A figura 10 mostra colônias típicas de bolores. Características típicas de bolores incluem:
• A colônia cresce espalhada • A colônia tem borda difusa
• A cor da colônia pode variar, pois os bolores produzem uma variedade de pigmentos (marrom, bege, laranja, azul-esverdeado)
• A colônia aparece plana
• A colônia usualmente tem um foco no centro (usualmente mais escuro, mas também pode ser de cor diferente)
9
10
Diferenciação Macroscópica
Se for necessário diferenciar colônias de leveduras e bolores nas Placas 3M™ Petrifilm™ Leveduras e Bolores,
procure uma ou mais das seguintes características típicas, mencionadas abaixo.
Para isolar as colônias para posterior identificação, levante o filme superior e remova a colônia do gel usando uma alça ou dispositivo similar.
Figura 11 Figura 12 Figura 13 Figura 14 Figura 15
Transfira a colônia para uma lâmina de microscópio com uma gota de água estéril e cubra com uma lamínula. Observe o microscópio de imersão (óleo).
As leveduras são tipicamente
ovais e podem mostrar brotamento.
Os bolores aparecem tipicamente como filamentos (micélio) retos ou ramificados.
Os bolores mostrados acima estão em diferentes estágios de germinação.
Leveduras e bolores estão relacionados e nem sempre podem ser distinguidos um do outro sem
exame microscópico.
Microbiologia 3M do Brasil Ltda. Via Anhanguera, km 110 13181-900 - Sumaré - SP
