Centro de Ciências Exatas e de Tecnologia
Departamento de Química
Programa de Pós-graduação em Química
ESTUDO DA VARIAÇÃO DO PERFIL QUÍMICO DE
Citrus sinensis
SOBRE
Citrus limonia
APÓS A
INOCULAÇÃO DA BACTÉRIA
Xylella fastidiosa
MÁRCIO SANTOS SOARES
Tese apresentada como parte dos requisitos para obtenção do título de DOUTOR EM CIÊNCIAS, área de concentração: QUÍMICA ORGÂNICA.
Orientadora: Dra. Maria Fátima das Graças Fernandes da Silva
*Bolsista CNPq
Ficha catalográfica elaborada pelo DePT da Biblioteca Comunitária/UFSCar
S676ev Soares, Márcio Santos. Estudo da variação do perfil químico de Citrus sinensis
sobre Citrus limonia após a inoculação da bactéria Xylella fastidiosa / Márcio Santos Soares. -- São Carlos : UFSCar,
2011. 355 p.
Tese (Doutorado) -- Universidade Federal de São Carlos, 2011.
1. Produtos naturais. 2. Fitoalexina. 3. Perfil químico. 4. Cumarinas. 5. Cromatografia líquida de alta eficiência. I. Título.
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RESUMO
ESTUDO DA VARIAÇÃO DO PERFIL QUÍMICO DE Citrus sinensis
SOBRE Citrus Limonia APÓS A INOCULAÇÃO DA BACTÉRIA Xylella
fastidiosa. O presente trabalho descreve o estudo da variação do perfil
químico de citros após a inoculação da bactéria Xylella fastidiosa,
responsável pela Clorose Variegada do Citros (CVC) que é uma das mais sérias doenças causadoras de prejuízos na citricultura brasileira. Para isso, inoculou-se a X. fastidiosa em enxertos de C. sinensis sobre C. limonia e
avaliou-se através de ferramentas quimiométricas e de desenvolvimento de métodos analíticos como HPLC-DAD, LC-MS/MS, LC-UV-SPE-NMR e HR-MAS a variação quantitativa de alguns metabólitos secundários, como cumarinas e flavonóides identificados tanto nos enxertos quanto nas matrizes C. sinensis e C. limonia. As ferramentas quimiométricas PCA e
HCA aplicadas aos dados obtidos nos estudos de HPLC-DAD e HR-MAS permitiram discriminar as plantas contaminadas com a bactéria das espécies sadias, assim como os respectivos indivíduos. Ao analisar a variação do perfil químico dos citros estudados através da HPLC-SPE-UV-NMR foi possível detectar a presença de uma nova classe de metabólitos secundários derivados do ácido p-metoxicinâmico contendo anéis
diidropirano e diidrofurano oxidados. Do mesmo modo, ao analisar os compostos de média polaridade, através da técnica de LC-MS/MS foi possível identificar, até o presente momento, nas raízes e folhas algumas cumarinas não citadas na literatura para nenhuma das duas espécies que constituem o enxerto, como diidrosuberenol, 2’,3’-diidrosuberosina, citrubutina, o limonóide limonina diosfenol e o flavonóide 3-hidroxi-3’,4’,5,7,8-pentametoxiflavona. Finalmente, observou-se que a cumarina bergapteno está presente em quantidade razoável apenas nas folhas do limão cravo, o qual é tolerante à X. fastidiosa, e quando o enxerto
xl
ABSTRACT
STUDY OF THE VARIATION IN THE CHEMICAL PROFILE INDUCED
IN Citrus sinensis GRAFTED ONTO C. limonia BY INOCULATION WITH
Xylella fastidiosa. The present work describes the study of variation in
the chemical profile of citrus after inoculation of Xylella fastidiosa, in charge of the Citrus Variegated Chlorosis is one of the most serious diseases that cause damage in Brazilian citrus. The bacterium X. fastidiosa was inoculated in Citrus sinensis grafted on C. limonia and was evaluated using chemometric tools and development of analytical methods such as HPLC-DAD, LC-MS/MS, LC-UV-SPE-NMR and HR-MAS quantitative variation of some secondary metabolites such as coumarins and flavonoids identified both in grafts and in the matrix C.
sinensis and C. limonia. The chemometric methods PCA and HCA
applied to the data obtained in studies by HPLC-DAD and HR-MAS allowed to discriminate plants contaminated with the bacteria of the species healthy, as well as the respective individuals. By analyzing the change in the chemical profile of citrus studied by HPLC-UV-SPE-NMR it was possible to detect the presence of a new class of secondary metabolites derived from p-hidroxy-cinnamic acid containing oxidized
dihydropyran and dihydrofuran rings. Similarly, when analyzing the compounds of medium polarity by LC-MS/MS technique was identified, until now, in the roots and leaves several coumarins not cited in the literature for any of the species that constitute the graft, as dihydrosuberenol, 2 ', 3'-dihydrosuberosin, citrubutin the limonoid diosfenol limonin and flavonoid 3-hydroxy-3', 4 ',5,7,8-pentamethoxyflavone. Finally, was observed that coumarin bergapten is present in reasonable quantities only in the leaves of Rangpur lime, which is tolerant to X. fastidiosa, and when the graft presents with
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