TOXICIDADE AVALIAÇÃO DA

(1)

AVALIAÇÃO DA TOXICIDADE

Profa. Dra. Patrícia da Fonseca Leite

(2)

CONTEÚDO



Definições importantes,



Parâmetros que interferem na ação tóxica,



Quando avaliar a toxicidade,



Quais os ensaios para medir a toxicidade

(3)

O QUE É TOXICIDADE?

Capacidade inerente a um agente tóxico de

produzir um efeito adverso ao organismo. Ou

seja, é a medida relativa do potencial tóxico

da substância.

(4)

EFEITO ADVERSO OU TÓXICO

Alteração anormal, indesejável ou nociva após exposição a substância potencialmente tóxica.

A morte é o efeito adverso mais drástico.

(5)

FATORES QUE INTERFEREM NA RESPOSTA TÓXICA

Composto químico/

condição de exposição

Ambiente

Indivíduo

(6)



Características físico-químcas,



Dose e/ou concentração,



Via de exposição,



Duração e frequência da exposição.

(7)



Idade,



Sexo,



Estado nutricional,



Patologias,



Fatores genéticos.

(8)



Temperatura,



Umidade,



Hora do dia,



Administração simultânea de outros agentes.

(9)

RELAÇÃO DOSE/EFEITO E DOSE/RESPOSTA

EFEITOS GRADUAIS x EFEITOS QUANTAIS

Alteração biológica individual

Proporção da população que expressa um efeito

Relação dose/efeito Relação dose/resposta

(10)

CURVA DOSE-RESPOSTA

Relação dose/resposta para uma substância hipotética em uma população homogênea (efeito medido: letalidade).

(11)

CURVA DOSE-RESPOSTA

Eficaz

50

% resposta

log dose (mg/kg)

Tóxico

100

DL50 DE50

Relação dose-resposta para o efeito eficaz e para o efeito tóxico Relação dose/resposta de três

substâncias diferentes

A B

50

log dose (mg/kg)

c

% resposta

(12)

CONSIDERAÇÕES IMPORTANTES

 O efeito é decorrente da substância?

 O efeito está associado a dose?

 Existe método confiável de se medir o

efeito?

(13)

Classificação da toxicidade

DL₅₀ (mg/kg) oral em ratos

Muito tóxica < 25

Tóxica 25 - 200

Nociva > 200

CLASSIFICAÇÃO

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AGENTE DL₅₀ (mg/kg)

Etanol 10.000

Cloreto de sódio 4.000 Sulfato ferroso 1.500

Morfina 900

Estricnina 2

Nicotina 1

Dioxina (TCDD) 0,001 Toxina botulínica 0,00001

CLASSIFICAÇÃO

(15)

RISCO

Risco = Toxicidade x Exposição

Termo que traduz a probabilidade estatística de uma substância química provocar efeitos nocivos em condições definidas de exposição

Substância com alta toxicidade mas baixa exposição  baixa probabilidade de causar intoxicações.

(16)

QUAL A FINALIDADE DOS TESTES DE TOXICIDADE?

“Fornecer dados que possam ser utilizados para

avaliação do risco do uso de substâncias químicas

para o homem e estabelecer limites de segurança na

exposição aos agentes químicos”

(17)

OUAIS SUBSTÂNCIAS DEVEM SER AVALIADAS NOS TESTES DE TOXICIDADE?



Substâncias que pretendem ser comercializadas



Provável de produção e emprego,



Potencial de acumulação no meio ambiente,



Tipo e magnitude das populações que estarão

expostas.

(18)

AVALIAÇÃO DA TOXICIDADE

Toxicidade aguda

Estudos de toxicidade in vitro

Toxicidade sub-crônica

Toxicocinética

Reprodução/

teratogenicidade

Toxicidade crônica

Mutagenicidade/Oncoge nicidade

Identificação do composto Caracterização química

Revisão da literatura Correlação estrutura -

atividade

(19)

AVALIAÇÃO DA TOXICIDADE

(20)

INFORMAÇÕES PRELIMINARES



Substância química caracterizada,



Grau de impureza,



Características físico-químicas,



Estimar níveis prováveis de exposição pela população,



Estabelecimento de correlação estrutura - atividade

(21)

PARÂMETROS AVALIADOS

Sinais

 Consumo ração,

 Peso,

 Cor e textura pelagem,

 Alterações circulatórias e respiratórias,

 Anormalidades motoras e de comportamento,

 Aumento de massas de tecidos.

Anátomo-patológico,

 Avaliação hematológica e bioquímica,

Exame de urina.

Exames

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TOXICIDADE AGUDA

Dose/ período

Via de administração

Espécies Sexo

Observação

Única ou múltiplas em 24 horas

Uma ou mais, oral ou a via pretendida

Ao menos uma Ambos

14 dias

(23)

INTERPRETAÇÃO DO TESTE



Estimativa da toxicidade intrínseca,



Identificar possíveis órgãos ou sistemas sensíveis,



Severidade dos efeitos,



Avaliar a suscetibilidade das espécies



Delineamento dos estudos posteriores.

(24)

Dose fixa

10 animais na dose de 500mg/kg

s/ toxicidade c/ morte

Não é classificado

c/ toxicidade

Nociva

c/ toxicidade

Tóxica

c/ morte

c/ toxicidade ou morte

Muito tóxica

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TOXICIDADE SUBCRÔNICA

Dose/ período

Via de administração Espécies

Sexo

Observação

3 doses /21-90 dias Pretendida

Duas, 1 roedora e 1 não roedora

Ambos

Ao menos um vez ao dia

(26)

TOXICIDADE SUBCRÔNICA

 Estabelecer os níveis onde não se observam efeitos tóxicos (NOAEL),

 Avaliar se o efeito é devido ao acúmulo da substância,

 Identificar e caracterizar os órgãos afetados e a severidade após exposição repetida,

 Fornecer dados para a escolha das doses do estudo de toxicidade crônica.

(27)

TOXICIDADE CRÔNICA

Dose/ período

Número de animais

3 doses – maior dose tolerada / 6 meses – anos em roedores e 1 ano em não roedores 50

PODE APRESENTAR CONSIDERAÇÕES SOBRE O POTENCIAL CARCINOGÊNICO

(28)

ESTUDO DE MUTAGENICIDADE

Células germinativas - Problemas de fertilidade

- Mutações nas gerações futuras

Células somáticas - Neuplasias

- Envelhecimento

(29)

ESTUDO DE MUTAGENICIDADE

 Ensaios in vivo,

 Danos cromossômicos em células de medula óssea em metáfase,

 Aparecimento de micronúcloes em linfócitos,

 Teste do dominante letal.

 Ensaio in vitro

 AMES (1975) – cepas de Salmonella typhimurim

(30)

TESTE DE AMES

Positivo quando índice de mutagenicidade > 2,0, p<0,05

(31)

EFEITOS LOCAIS SOBRE PELE E OLHOS



Coelho ou cobaia (somente pele),



Teste de Draize (1944),



Lesão não reversível: aquela que persiste por período superior a 14 dias.



Parâmetros avaliados:

o pele: eritema, escara, edema e corrosão,

o olhos: córnea, conjuntiva e íris

(32)

TESTES DE IRRITAÇÃO



Irritação local ou aguda,



Irritação cumulativa,



Irritação induzida fotoquimicamente.

(33)

TESTE DE DRAIZE

• Aplicação do produto (0,5g ou mL - pele, 0,1mL- olhos),

• Observação 24, 48 , 72hrs e 7 dias após a aplicação,

• Escala de Draize.

(34)

TESTE DE DRAIZE

(35)

TESTE DE DRAIZE

(36)

MÉTODOS ALTERNATIVOS

-

Membrana córion-alantóide de ovo embrionado de galinha,

-

Teste de opacidade e

permeabilidade de córnea

bovina.

(37)

PONTOS IMPORTANTES



O que deve ser testado?



Seleção da dose!



Quais testes devem ser realizados?



Como interpretar os resultados?

(38)

(39)

Fases do desenvolvimento clínico



1 - um medicamento experimental é administrado pela primeira vez em seres humanos. Os ensaios focam-se principalmente na segurança e tolerância ao medicamento. Pacientes não doentes, avaliação da farmacocinética



2 - foca-se na eficácia do medicamento experimental no tratamento de uma doença ou condição médica.

Normalmente doentes, número maior que a fase 1,

estabelecimento de melhor via de administração

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Fases do desenvolvimento clínico



3 - testam os resultados dos ensaios clínicos

anteriores mas em populações maiores e recolhem informação adicional acerca da eficácia e segurança do medicamento experimental. Muitos pacientes.

