M E I O S DE C U L T U R A E PRODUÇÃO DE C O N Í D I O S EM Metarhizium anisopliae ( M e t s c h ) S o r o k i n * S i l v i a M a r i a F r i g o * * J o ã o L ú c i o d e A z e v e d o * * RESUMO F o i e s t u d a d a a p r o d u ç ã o d e c o n í d i o s em m e i o c o m p l e t o e em m e i o c o n t e n d o d i f e r e n t e s c o n c e n t r a ç õ e s d e f a r i n h a d e a r -r o z , n o f u n g o e n t o m o p a t o g ê n i c o Meta-rhi- Metarhi-zium anisopliae. A s l i n h a g e n s m a i s p r o ¬ d u t i v a s em m e i o c o m p l e t o f o r a m M, E6, A4 e E9 ; em m e i o d e a r r o z , v e r i f i c o u - s e q u e m a i o r p r o d u ç ã o o c o r r i a q u a n d o o a r -r o z e -r a a d i c i o n a d o n a c o n c e n t -r a ç ã o d e 6 0 g / l . INTRODUÇÃO A s u p e r i o r i d a d e d o m e i o d e a r r o z , em r e l a ç ã o a o d e a m i d o e b a t a t a d e x t r o s e n o d e s e n v o l v i m e n t o e e s p o r u l a -* E n t r e g u e p a r a p u b l i c a ç ã o em 3 0 / 0 4 / 8 6 . * * D e p a r t a m e n t o d e G e n é t i c a , E s c o l a S u p e r i o r d e A g r i c u l -t u r a " L u i z d e Q u e i r o z " , U n i v e r s i d a d e d e S ã o P a u l o .
ç i o d o f u n g o e n t o m o p a t o g ê n i c o Metarhizium anisopliae j ã f o i c o m p r o v a d a p o r MARQUES S V I L A S BOAS ( 1 9 7 3 ) , A Q U I N O ( 1 9 7 * 0 e V A L E e t a l i i ( 1 9 8 0 ) . M O U R A - C O S T A & MAGALHÃES ( 1 9 72* ) e V I L A C O R T A ( 1 9 7 8 ) u t i l i z a r a m e s s e m e i o d e c u l t i -v o p a r a p r o d u ç ã o d e c o n í d i o s d e Metarhizium anisopliae. E s s e f u n g o é u t i l i z a d o n o c o n t r o l e b i o l ó g i c o d c c i g a r r i -n h a d a c a -n a - d e - a ç ú c a r e d e p a s t a g e -n s em s u b s t i t u i ç ã o a o s i n s e t i c i d a s q u í m i c o s . P a r a t a l , h á n e c e s s i d a d e d e p r o d u ç i o em l a r g a e s c a l a d e c o n í d i o s o q u e é f e i t o em m e i o d e a r r o z , e s p e c i a l m e n t e a r r o z a u t o c l a v a d o em s a c o s d e p o l i p r o p i l e n o o u f r a s c o s d e v i d r o . M O U R A - C O S T A & MAGA~ L H Â E S ( 1 9 7 * 0 , u t i l i z a r a m também a f a r i n h a d e a r r o z , obt_i_ d a com a u x í l i o d e um m o i n h o e p o s t e r i o r m e n t e p a s s a d a em p e n e i r a d e m a l h a s f i n a s , v e r i f i c a n d o bom c r e s c i m e n t o e e s p o r u l a ç i o em m e i o com c o n c e n t r a ç ã o d e 5% d e f a r i n h a d e a r r o z , 1% d e ã g a r em pó e á g u a d e s t i l a d a . DAOUST & R O -B E R T S ( I 9 8 3 ) u t i l i z a n d o s e i s d i f e r e n t e s t i p o s d e m e i o s m i c o l ó g i c o s e t r ê s t i p o s d e a r r o z c o n c l u í r a m q u e p a r a p r o d u ç ã o d e c o n í d i o s o m e i o d e a r r o z f o i o q u e p r o d u z i u r e -s u l t a d o -s m e l h o r e -s e m a i -s e c o n ô m i c o -s me-smo c o m p a r a d o a o -s m e i o s m i c o l ó g i c o s c o m p l e x o s . 0 p r e s e n t e t r a b a l h o f o i c o n d u z i d o , v i s a n d o e s t u d a r a c o n i d i a ç ã o d e l i n h a g e n s d e Metarhizium anisopliae em r e l a ç ã o a s u a v a r i a b i 1 i d a d e n a t u r a l p a r a p r o d u ç ã o d e c o -n í d i o s em m e i o com d i f e r e -n t e s c o -n c e -n t r a ç õ e s d e f a r i -n h a d e a r r o z e em c o m p a r a ç ã o com um m e i o c o m p l e x o , d e n o m i n a -d o -d e c o m p l e t o e u t i l i z a -d o l a r g a m e n t e em l a b o r a t ó r i o s -d e G e n é t i c a d e f u n g o s f i 1 a m e n t o s o s . M A T E R I A L E MÉTODOS L i n h a g e n s e M e i o s d e C u l t u r a A s l i n h a g e n s d e Metarhizium anisopliae u t i l i z a d a s f o r a m :
Como m e i o d e c u l t u r a u t i l i z o u - s e o m e i o c o m p l e t o (MC) d e s c r i t o p o r P 0 N T E C 0 R V 0 e t a l i i ( 1 9 5 3 ) m o d i f i c a d o p o r A Z E V E D O & C O S T A ( 1 9 7 3 ) e m e i o d e a r r o z (MA) m o d i f i c a do a p a r t i r d o m e i o p r o p o s t o p o r AQUINO ( 1 9 7 * 0 A s l i -n h a g e -n s v i e r a m d o s e s t o q u e s d o D e p a r t a m e -n t o d e G e -n é t i c a d a E S A L Q e e r a m m a n t i d a s em MC i n c l i n a d o . P r o d u ç ã o d e C o n í d i o s em M e i o C o m p l e t o e M e i o d e A r r o z C o n í d i o s d a s l i n h a g e n s A 4 , C , E g , K , M e P E d e M. anisopliae f o r a m i n o c u l a d a s i s o l a d a m e n t e em q u a t r o p o n -t o s e q u i d i s -t a n -t e s d e p l a c a s d e P e -t r i , c o n -t e n d o m e i o s com c o n c e n t r a ç ã o c r e s c e n t e d e f a r i n h a d e a r r o z ( 1 5 , 3 0 , ^ 5 , 6 0 , 7 5 e 9 0 g / l ) e também em m e i o c o m p l e t o . A p ó s 10 d i a s d e i n c u b a ç ã o , a t r a v é s d e um c i l i n d r o m e t á l i c o o c o , d e 7 mm d e d i â m e t r o f o r a m r e t i r a d a s a m o s t r a s d a r e g i ã o c e n -t r a l d e -t r ê s c o l ô n i a s d e c a d a l i n h a g e m . P a r a c o n -t a g e m d o s c o n í d i o s , c o l o c a r a m - s e e s s a s a m o s t r a s em 2 , 5 ml d e s o l u ç ã o a q u o s a d e t w e e n 80 ( 0 , 1 ¾ v / v ) e , a p ó s f o r t e a g i -t a ç ã o d e -t e r m i n o u - s e o n ú m e r o d e c o n í d i o s em c â m a r a d e N e u b a u e r . 0 n ú m e r o d e c o n í d i o s p o r á r e a d e c r e s c i m e n t o d o i d e t e r m i n a d o c a l c u l a n d o - s e a s u p e r f í c i e d a s a m o s t r a s c i r c u l a r e s a t r a v é s d a f ó r m u l a : T T R2 o n d e : 7T = c o n s t a n t e e R = r a i o d a a m o s t r a .
R E S U L T A D O S E D I S C U S S Ã O Como s e o b s e r v a n a T a b e l a 1, e x i s t e uma c o n c e n t r a -ç ã o ó t i m a d e a r r o z p a r a c a d a l i n h a g e m ; em g e r a l , e s s a cont c e n t r a ç i o s i t u a - s e a o r e d o r d e 60 g / l . Em t e r m o s d e p r o d u ç ã o r e l a t i v a , o n ú m e r o d e c o n í -d i o s f o r m a -d o s p o r c m ^ a p ó s o 1 0 ? -d i a -d e c r e s c i m e n t o , f o i m a i o r n a s l i n h a g e n s P E , M e E ^ .
E s t e s r e s u l t a d o s s u g e r e m q u e m e i o s m u i t o r i c o s o u m u i t o p o b r e s , a c a r r e t a m d i m i n u i ç ã o n a p r o d u ç ã o e n q u a n t o q u e m e i o s i n t e r m e d i á r i o s p r o m o v e m um a u m e n t o d e p r o d u ç ã o . N o t a - s e q u e a s l i n h a g e n s e n s a i a d a s , a u m e n t a r a m d e 1 a 5 v e z e s a e s p o r u l a ç ã o em m e i o d e arroz, em r e l a ç ã o a o MC. T o r n a s e e v i d e n t e ( F i g u r a 1) q u e o MC n ã o f a v o r e -c e u a p r o d u ç ã o d e -c o n í d i o s -com e x -c e ç ã o d a l i n h a g e m A ^ , e n q u a n t o q u e m e i o d e a r r o z em uma c o n c e n t r a ç ã o m é d i a d e 60 g / l p r o p i c i o u a m e l h o r c o n i d i a ç ã o d a m a i o r i a d e l a s . A l i n h a g e m A / | é d e n t r e a s l i n h a g e n s d e M.anisopliae e s t u d a _ d a s p o r v á r i o s a u t o r e s ( V A L L E , 1 9 8 5 ; L U N A , 1 9 8 5 ) a m a i s a t í p i c a o q u e l e v o u a s u a c l a s s i f i c a ç ã o como uma o u t r a v a r i e d a d e o u mesmo uma n o v a e s p é c i e d e n t r o d o g ê n e r o
Me-tarhizium ( L U N A , 1 9 8 5 ) . B A S T O S e t a l i i ( 1 9 7 6 ) u t i l i z a r a m f a r i n h a d e m i l h o , f a r i n h a d e a r r o z , d e t r i g o e m i s t u r a d e s s e a m i l ã c e o s e v e r i f i c a r a m q u e a e s p o r u l a ç ã o f o i s e m p r e m e l h o r n o s m e i o s em q u e a f a r i n h a d e t r i g o e n t r o u n a c o m p o s i ç ã o . D e s s a ma n e i r a , uma s u g e s t ã o s e r i a em s e i n t r o d u z i r f a r i n h a d e tri_ g o j u n t a m e n t e com a c o n c e n t r a ç ã o i d e a l d e arroz p a r a a p r o d u ç ã o d e c o n í d i o s . Os d a d o s o b t i d o s n o p r e s e n t e t r a -b a l h o s ã o d e i m p o r t â n c i a n a o -b t e n ç ã o d e c o n í d i o s em l a -b o r a t ó r i o s , q u a n d o s e q u e r o b t e r q u a n t i d a d e r a z o á v e l d o s mesmos p a r a e s t u d o s g e n é t i c o s . Uma v e z q u e a s l i n h a g e n s u t i l i z a d a s f o r a m m a n t i d a s em m e i o a r t i f i c i a l p o r m u i t o s a n o s em l a b o r a t ó r i o s e s u b m e t i d a s a r e p i q u e s s u c e s s i v o s o n ú m e r o d e c o n í d i o s o b t i d o s n ã o p o d e s e r c o m p a r a d o a o d e o u t r o s t r a b a l h o s , e s p e c i a l m e n t e o s q u e v i s a m p r o d u ç ã o i n d u s t r i a l d o s m e s m o s . MURAYAMA e t a l i i ( 1 9 8 1 ) j á d e m o n sr t r o u , p o r e x e m p l o , q u e a p ó s v á r i o s r e p i q u e s a p r o d u ç ã o de c o n í d i o s d o f u n g o d e c a i . E n t r e t a n t o , f i c o u m a i s uma v e z d e m o n s t r a d a a a l t a v a r i a b i 1 i d a d e g e n é t i c a q u e o c o r r e n a e s p é c i e em q u e s t ã o .
C O N C L U S Õ E S P e l o s r e s u l t a d o s o b t i d o s a s s e g u i n t e s c o n c l u s õ e s p o dem s e r t i r a d a s : - P a r a c a d a l i n h a g e m d e M. anisopliae e x i s t e uma c o n c e n t r a ç ã o ó t i m a d e a r r o z p a r a p r o d u ç ã o d e c o n í d i o s , o q u e d e m o n s t r a a v a r i a b i l i d a d e g e n é t i c a , e x i s t e n t e d e n t r o d o g ê n e r o . A c o n c e n t r a ç ã o ó t i m a e s t á e n t r e t a n t o , a o r e -d o r -d e 60 g / l . - M e i o s m u i t o r i c o s o u p o b r e s , c o n d i c i o n a m uma p r o d u ç ã o d e c o n í d i o s m e n o r q u e n o s m e i o s i n t e r m e d i á r i o s . SUMMARY
C U L T U R E M E D I A AND C O N I D I A T I O N I N Metarhizium ani-sopliae ( M e t s c h . ) S o r o k i n . I t w a s d e t e r m i n e d t h e p r o d u c t i o n o f Metarhizium anisopliae c o n i d i a i n P e t r i d i s h e s c o n t a i n i n g b o t h c o m p l e t e m e d i u m a n d m e d i a w i t h d i f f e r e n t s r i c e c o n c e n t r a t i o n s , T h e m o r e p r o d u c t i v e i s o l a t e s w e r e M, P a n d E9 a n d i t w a s n o t e d t h a t i n r i c e m e d i u m h i g h c o n i d i a p r o d u c t i o n w h e r e o b t a i n e d w i t h 6 0 g o f r i c e p e r l i t e r . R E F E R Ê N C I A S B I B L I O G R Á F I C A S A Q U I N O , M . L . N . , 1 9 7 4 . 0 f u n g o e n t o m ó g e n o Metarhizium anisopliae ( M e t s c h ) S o r o k i n , n o E s t a d o d e P e r n a m b u c o . B o l e t i m T é c n i c o d o I n s t i t u t o d e P e s q u i s a s A g r o n ô m i c a s , 7 2 : 1 - 2 6 . R e c i f e .
A Z E V E D O , J . L . & C O S T A , S . O . P . d a , 1 9 7 3 E x e r c í c i o s p r á -t i c o s d e G e n é -t i c a , C i a E d i -t o r a N a c i o n a l e E d i -t o r a d a U S P , 2 8 8 p B A S T O S , C . N . ; M A T T A , E . A . F . & F I G U E I R E D O , J . M . , 1 9 7 6 . ES¬ p o r u l a ç ã o d e Metarhizium anisopliae ( M e t s c h ) S o r o k i n , em m e i o s d e c u l t u r a d e d i f e r e n t e s c o m p o s i ç õ e s . B o l e -t i m d o I n s -t i -t u -t o B i o l ó g i c o d a B a h i a . 1 5 : 9 - 1 1 . D A O U S T , R . A . & R O B E R T S , D . W . , 1 9 8 3 - S t u d i e s o n t h e p r o l o n g e d s t o r a g e o f Metarhizium anisopliae c o n i d i a : E f f e c t o f g r o w t h s u b s t r a t e o n c o n i d i a l s u r v i v a l a n d v i r u l e n c e a g a i n s t m o s q u i t o e s . J o u r n a l I n v e r t e b r a t e P a t h o l o g y 4 1 : 1 6 1 - 1 7 0 . L U N A , E . A . , 1 9 8 5 . C a r a c t e r í s t i c a s c i t o l ó g i c a s e g e n é t i -c a s d e l i n h a g e n s s e l v a g e n s , m u t a n t e s e d i p l ó i d e s d e Metarhizium anisopliae ( M e t s h ) S o r o k i n . T e s e D o u t o r a ¬ d o , U n i v e r s i d a d e F e d e r a l d o R i o d e J a n e i r o , 2 6 0 p . M A R Q U E S , E . J . & V I L L A S B O A S , A . M . , 1 9 7 3 . C o n t r i b u i ç ã o a o e s t u d o d a c u l t u r a e a p l i c a ç ã o d e Metarhizium a n i ¬ pliae ( M e t s c h ) n o c o n t r o l e d a c i g a r r i n h a d a f o l h a ( M a h a n a r v a posticata S t a l ) n o N o r d e s t e d o B r a s i l . A¬ n a i s d a Iª R e u n i ã o A n u a l d a S o c i e d a d e E n t o m o l ó g i c a d o B r a s i l , V i ç o s a , MG. p . 7 0 . MOURA C O S T A , M . D . & M A G A L H Ã E S , C D . , 1 9 7 4 . Um n o v o m e i o d e c u l t u r a p a r a o f u n g o e n t o m ó g e n o Metarhizium aniso-pliae ( M e t s c h ) S o r o k i n , p a r a s i t o d a " c i g a r r i n h a " d a s p a s t a g e n s . B o l e t i m d o I n s t i t u t o B i o l ó g i c o d a B a h i a , 1 3 : 5 7 - 6 0 . MURAYAMA, M . T . ; A L V E S , S . B . & A L M E I D A , L . C . , 1 9 8 1 . E f f e c t s o f s e r i a l t r a n s f e r s i n a r i c e m e d i u m i n t h e p a t h o g e n i c i t y m o r p h o l o g y a n d s p o r e p r o d u c t i o n o f Me-tarhizium anisopliae ( M e t s c h ) S o r o k i n . E n t o m o l o g y N e w s l e t t e r 1 1 : 1 6 .
P O N T E C O R V O , G . ; R O P E R , J . A . ; HEMMONS, L . M . ; M c D O N A L D , K . D . & B U F T O N , A . W . J . , 1 9 5 3 . T h e g e n e t i c s o f Asper-gillus nidulans. A d v a n c e s i n G e n e t i c s , 5 : 1 4 1 - 2 3 8 . V A L E , T . L . ; F R I G O , S . M . ; A Z E V E D O , J . L . S M E S S I A S . C . L . , 1 9 8 0 . V a r i a b i l i d a d e em l i n h a g e n s h a p l ó i d e s d i p l ó i ¬ d e s d e Metarhizium anisopliae. R e s u m o s d o V I I C o n -g r e s s o B r a s i l e i r o d e E n t o m o l o -g i a , C a m p i n a s , p . 3 4 7 . V I L A C O R T A , A . , 1 9 7 8 . E f e i t o d a t e m p e r a t u r a e n u t r i ç ã o s o b r e o d e s e n v o l v i m e n t o d e v á r i o s i s o l a d o s d e M e t a r h i ¬ zium anisopliae S o r o k i n . R e s u m o s d o I I I C o n g r e s s o La¬
