APLICAÇÃO DO DIODO EMISSOR DE LUZ PARA A PROLIFERAÇÃO DE CÂNDIDAS ALBICANS: ESTUDO IN VITRO

APLICAÇÃO DO DIODO EMISSOR DE LUZ PARA A

PROLIFERAÇÃO DE CÂNDIDAS ALBICANS: ESTUDO IN VITRO

J. P.

RESUMO: O objetivo foi analisar a influência do diodo emissor de luz (LED) caneta 660nm - 68mw, dose: 2 J/cm² em fungo Candida albicans. O estudo foi realizado in vitro em quatro dias, no primeiro: preparado o meio, no segundo: ativação do fungo, terceiro: irradiação do fungo e quarto: contagem com espectrofotômetro. Analisou-se que houve proliferação do fungo após a contagem. Palavras-Chave: Fungo; Candida albicans; Diodo.

ABSTRACT: The objective was to analyze the influence of the light

emitting diode (LED) pen 660nm - 68mw, dose: 2 J / cm ² in the fungus Candida albicans. The study was conducted in four days in vitro, the first: the medium prepared in the second: activation of the fungus, thirdly, the fungus and irradiation room count with a spectrophotometer. It was analyzed that proliferation occurred after the count of the fungus. KeyWords: fungus; Candida albicans; diode.

INTRODUÇÃO

Os fungos são organismos eucariontes, e maior parte considerado seres aeróbios e heterotróficos, que realizam respiração celular para adquirir energia (NOWOTNY, 2011; MOLINARO, 2009). Uma das formas morfológicas principais de fungos são as leveduras que apresentam características arredondadas e unicelulares. Um exemplo é o fungo, Candida albicans (SPICER, 2002).

As leveduras Candida albicans são hóspedes naturais do tubo digestivo do homem e em menor quantidade na árvore brônquica e cavidade vaginal. Quando há um desequilíbrio da microbiota a C. albicans se torna patogênica (MOLINARO, 2009).

O fungo zoopatogênico C. albicans foi o primeiro genoma sequenciado, sendo possível realizar uma variedade de experimentos (BARBEDO, 2010).

As células fúngicas e células animais são muito semelhantes, por isso se torna difícil tratar uma delas sem comprometer a outra, ou seja, os efeitos que a célula fúngica sofrer em uma irradiação, a célula animal possivelmente sofrera igual (NOWOTNY, 2011).

A partir da década de 80 foram realizados os primeiros trabalhos científicos para estabelecer as bases para a compreensão dos mecanismos moleculares associados aos efeitos da luz sobre as células (SIQUEIRA et al., 2009).

A resposta celular à fotoestimulação, não esta relacionada com a característica específica da luz laser, como a coerência, permitindo trabalhos com outras fontes sem alteração dos efeitos da terapia, como por exemplo, os diodos emissores de luz – LEDs (SIQUEIRA et al., 2009).

A fotoestimulação decorrente dessa luz atua sobre a permeabilidade da célula, sobre tudo nas mitocôndrias, acarretando o aumento da síntese de ATP, acelerando assim os processos cicatriciais e também no rejuvenescimento da pele (MEYER et al., 2010).

Ainda não se encontra um protocolo completo que seja suficiente para a compreensão dos efeitos reais, pois os trabalhos publicados não apresentam rigor científico por terem utilizado metodologias não reproduzíveis, apesar de se comprovar por pesquisas a aceleração do processo de reparo tecidual. (CHAVANTES, 2009).

Pela uniformização da amostra, os experimentos realizados in vitro estão sendo muito utilizando para serem obtidos resultados de maneira precisa e amostras homogêneas (CANEVALLI, 2001).

O objetivo deste trabalho foi analisar por estudo in vitro a influência do LED em fungo patogênico Candida albicans.

REFERENCIAS METODOLÓGICAS:

1° Dia – Preparo dos materiais e Meio de cultura: O estudo foi

conduzido no Laboratório de Microbiologia do Centro Universitário de Maringá – Unicesumar. O meio de cultura utilizado para o cultivo de Candida albicans foi Caldo Sabouraud com dextrose a 2%, e Salina a 0,85% para diluição. Anteriormente ao uso, o meio, estante com ponteira e dois Erlenmeyer lacrados

com boneca de algodão e papel craft foram devidamente acondicionados e esterilizados.

2° Dia – Ativação do fungo Candida albicans: Dentro do fluxo laminar em temperatura ambiente foi retirado uma alçada do fungo C. albicans e transferida para um tubo de ensaio contendo Caldo Sabouraud para sua ativação. Em seguida, o tubo contendo a levedura foi levado à estufa para o crescimento por um período de 24 horas em temperatura de 36,5ºC.

3° dia - Irradiação das leveduras: Após 24 horas, o tubo de ensaio contendo C. albicans foi retirado da estufa para que a mesma atingisse a temperatura ambiente, sendo levado ao fluxo laminar. Dentro do fluxo, foram transferidas três a cinco gotas da suspensão de C. albicans com o auxilio de pipeta automática para um tubo de ensaio contendo 6,0 mL de solução salina 0,85%, onde foi utilizado o tubo número cinco da escala de MacFarland, como padrão de comparação.

Em duas placas 96 wells, foram pipetados em cada poço 190 µl de Caldo Sabouraud e 10 µl da suspensão de levedura preparada em salina. Foram utilizados 24 poços de cada placa sendo eliminados os poços ao redor para que durante a aplicação do LED o feixe de luz não interferisse nos resultados dos poços próximos. Uma placa foi utilizada para ser o grupo irradiado pelo LED e outra placa para ser o grupo controle, que não sofreu a ação do LED.

O aparelho de LED que foi fabricado no laboratório de engenharia elétrica do Unicesumar, calibragem: Caneta 660nm - 68mw, dose: 2 J/cm², profundidade: superficial, frequência: contínuo, dosimetria: densidade J/cm².

Foram retirados 200 µl dos 24 poços do grupo controle, sendo depositados em um Erlenmeyer fechado com rolha de algodão e papel craft. O mesmo procedimento foi realizado com o grupo irradiado e assim os dois recipientes foram levados à estufa em 36,5ºC por um período de 24 horas.

4° Dia – Contagem: Após 24 horas de incubação foi feita a contagem com o auxílio de espectrofotômetro, com frequência de 540 nm e descontado o valor do branco (meio de cultura). Antes da leitura, as amostras foram diluídas, onde foi colocado 0,2 mL de Caldo Sabouraud em 2,8 mL de água destilada.

CONCLUSÃO

A amostra foi dividida em dois grupos: cinco do grupo irradiado e cinco do grupo controle.

Foi utilizado o programa estatístico SPSS statistics 17.0 para analisar os resultados parciais do trabalho. Apurou-se a média e o desvio padrão da amostra.

Observa-se na Tabela 1 que o grupo irradiado apresentou diferença estatística em relação ao grupo controle.

Tabela 1.

Grupo _{Nº Média DP p*}

CONTROLE 5 0,33 ±0,027 0,00*

IRRADIADO 5 0,48 ±0,070 0,00*

Analisou-se no trabalho que bioestimulação causada pelo LED, no fungo Candidas albicans na densidade de energia 2J/cm², é eficaz para a proliferação da mesma.

REFERÊNCIAS:

BARBEDO, L. S.; SGARBI, D. B. G. Candidíase. Jornal brasileiro de

Doenças Sexualmente Transmissíveis, Rio de Janeiro, v. 22, n. 1, p. 22-38,

2010.

CARNEVALLI, C. M. M. Efeito da radiação do diodo laser (λ=830nm) em

cultura de fibroblastos (CHO-k1). 2001. 69f. Dissertação (Mestrado em

Engenharia Biomédica) - Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento da Universidade do Vale do Paraíba, São José dos Campos, 2001.

CHAVANTES, M., C. Laser em Biomedicina: Princípios e Prática. São Paulo: Atheneu, 2009.

MEYER, P. F.; ARAÚJO, H.G.; CARVALHO, M.G.F.; TATUM, B.I.S.; FERNANDES, I.C.A.G.; RONZIO,O.A.; PINTO, M.V.M.Avaliação dos efeitos do LED na cicatrização de feridas cutâneas em ratos Wistar. Fisioterapia Brasil , São Paulo, v. 11, n. 6, p. 428-432, nov./dez.2010.

MOLINARO, E. M.; CAPUTO, L. F. G.; AMENDOEIRA, M. R. R.Conceitose

Métodos para formação de profissionais em laboratórios de saúde. Rio de

NOWOTNY, J. P. Influência da associação da terapia fotodinâmica e azul

de metileno na respiração do fungo patogênico Paracoccidioides

brasiliensis. 2011. 61f. Dissertação (Mestrado em Bioengenharia) -

Universidade do Vale do Paraíba, Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento, São José dos Campos, 2011.

SIQUEIRA, C. P. C. M.; TOGINHO FILHO, D. O. T.; LIMA,F. M.; SILVA, F. P.; DURANTE, H.; DIAS, I. F. L.;DUARTE, J. L.; KASHIMOTO, R. K.; CASTRO, V. A. B. Efeitos biológicos da luz: aplicação de terapia de baixa potência empregando LEDs (Light Emitting Diode) na cicatrização da úlcera venosa: relato de caso.Semina: Ciências Biológicas e da Saúde, Londrina, v. 30, n. 1, p. 37-46, jan./jun. 2009.

SPICER, W. John. Bacteriologia, micologia e parasitologia clínicas: um texto ilustrado em cores. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2002.