Rev. Inst. Med. trop. São Paulo
31(6): 377-383, novembro-dezembro, 1989
POTENTIAL INFECTIVITY OF BLOOD FROM HBsAg ASYMPTOMATIC CARRIERS DUE TO THE
PRESENCE OF HBV-DNA AND COMPARISON WITH OTHER MARKERS OF HBV INFECTION
M . V a l e r i a T E D E S C H I ( 1 ) , C l á u d i a F i g u e i r e d o P A D I L L A ( 1 ) , I n á F e r r a z d e C A M A R G O (2) & C l a r a F . T a c h i b a n a Y O S H I D A ( 1 ) .
S U M M A R Y
S e r u m s a m p l e s f r o m 3 5 6 H B s A g p o s i t i v e a s y m p t o m a t i c c a r r i e r s , w h i c h w e r e t i t r a t e d b y r e v e r s e p a s s i v e h e m a g g l u t i n a t i o n , w e r e a n a l y s e d f o r t h e p r e s e n c e o f H B V - D N A , H B s A g a n d I g M a n t i - H B c . T h e s a m p l e s w e r e d i v i d e d i n t h r e e c l a s s e s , a c c o r d i n g t o t h e t i t e r s o f H B s A g a n d I g M a n t i - H B c a n d t h e d i s t r i b u t i o n o f H B V - D N A a n d H B s A g a m o n g t h e s e c l a s s e s w a s s t u d i e d . I n t h e h i g h t i t e r c l a s s o f H B s A g , 6 5 % o f s a m p l e s h a v e o n e o r b o t h m a r k e r s a g a i n s t o n l y 1 9 % i n t h e l o w t i t e r c l a s s . F r o m t h e t o t a l o f 3 5 6 s a m p l e s , 121 g a v e p o s i t i v e r e s u l t s f o r I g M a n t i - H B c ( 3 3 . 9 % ) . F r o m t h e s e , 3 8 . 9 % o f H B V - D N A a n d 4 7 . 9 % o f H B e A g w e r e o b s e r v e d , w h e r e a s i n s a m p l e s w i t h a b s e n c e o f I g M a n t i - H B c , 1 8 . 3 % a n d 1 6 . 6 % w e r e r e s p e c t i v e l y f o u n d .
A h i g h e r f r e q u e n c y o f a g r e e m e n t b e t w e e n a l l t h e s e m a r k e r s w a s f o u n d i n t h e c l a s s o f h i g h t i t e r s o f H B s A g ; h o w e v e r , H B V - D N A w a s d e t e c t e d i n t h e l o w t i t e r c l a s s o f H B s A g a n d l i t t l e o r n o I g M a n t i - H B c , s h o w i n g p o t e n t i a l b l o o d i n f e c t i v i t y e v e n i n H B s A g p o s i t i v e b o r d e r l i n e s a m p l e s .
K E Y W O R D S : H B V - D N A ; H B s A g ; I g M a n t i - H B c A s y m p t o m a t i c c a r r i e r s .
I N T R O D U C T I O N
T h e H e p a t i t i s B v i r u s ( H B V ) i s o n e o f t h e v i r u s e s t h a t c a u s e h e p a t i t i s i n m a n , a n d t h e c l i n i -c a l p i -c t u r e i s e x t r e m e l y v a r i a b l e , -c a u s i n g a -c u t e a n d c h r o n i c f o r m s w i t h d i f f e r e n t p r o g n o s i s a n d d e g r e e s o f s e v e r i t y , i n c l u d i n g c i r r h o s i s a n d a s t r o n g e p i d e m i o l o g i c a l a n d b i o c h e m i c a l e v i d e n c e f o r a s s o c i a t i o n w i t h h e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o -m a .
T h e i n f e c t i o n i s e n d e m i c i n m a n y p a r t s o f t h e w o r l d a n d i n o u r c o u n t r y i t p o s e s a s i g n i f i c a n t p r o b l e m , w i t h h i g h f r e q u e n c i e s o f t h e i n f e c
-t i o n b e i n g f o u n d i n s o m e a r e a s2 1 2 2 9, m a i n l y
i n W e s t A m a z o n w h e r e i t s p r e s e n c e i s o f t e n a s s o -c i a t e d t o t h e D e l t a v i r u s3 1 3.
T h e d i a g n o s i s o f H B V i n f e c t i o n i s u s u a l l y a c h i e v e d b y a s s a y o f t h e H B V s u r f a c e a n t i g e n ( H B s A g ) b u t t h i s m a r k e r d o e s n o t i n d i c a t e t h e p r e s e n c e o f i n f e c t i o u s p a r t i c l e s i n t h e b l o o d . I n i n d i v i d u a l s , i n f e c t e d w i t h H B V , H B s A g i s f o u n d p r e d o m i n a n t l y i n t h e f o r m o f 2 2 n m n o n i n f e c -t i o u s p a r -t i c l e s a n d a l s o a s p a r -t o f s u r f a c e a n -t i g e n p r e s e n t i n c o m p l e t e H B V p a r t i c l e s8. T h e s e c o m
-(1) D e p a r t a m e n t o d e V i r o l o g i a , F u n d a ç ã o O s w a l d o C r u z , R i o d e J a n e i r o , B r a z i l . (2) B i o - M a n g u i n h o s , F u n d a ç ã o O s w a l d o C r u z , R i o d e J a n e i r o , B r a z i l .
p l e t e p a r t i c l e s a l s o h a v e a n i n n e r c o r e w h i c h c o n -t a i n s -t h e H e p a -t i -t i s B c o r e a n -t i g e n ( H B c A g ) a n d H B e A g i n a c r y p t i c f o r m1 2 4 , 3 1. T h e p r e s e n c e o f
H B e A g i n t h e s e r u m a s a s o l u b l e p r o t e i n i s a s s o -c i a t e d w i t h t h e p r o d u -c t i o n o f -c o m p l e t e v i r i o n2 5,
a n d i s t h e r e f o r e u t i l i z e d a s a m a r k e r o f i n f e c -t i v i -t y .
I n s i d e t h e c o r e , a d o u b l e - s t r a n d e d c i r c u l a r D N A a n d a v i r u s s p e c i f i c D N A p o l y m e r a s e c a n b e f o u n d1 5'1 6-2 0.
D i f f e r e n t t e c h n i q u e s a r e a v a i l a b l e f o r t h e d e -t e c -t i o n o f c o m p l e -t e v i r u s b u -t -t h e y a r e e i -t h e r o f l o w s e n s i t i v i t y , l i k e e l e c t r o n m i c r o s c o p y , H B c A g d e t e c t i o n a n d D N A p o l y m e r a s e a s s a y o r i n d i r e c t l i k e t h e d e t e c t i o n o f H B e A g .
R e c e n t l y , t h e u s e o f m o l e c u l a r h y b r i d i z a t i o n a n a l y s i s a l l o w e d t h e s e r o l o g i c a l d e t e c t i o n o f H B V D N A b y n u c l e i c a c i d h y b r i d i z a t i o n , p r o v i -d i n g a -d i r e c t a n -d h i g h l y s e n s i t i v e m a r k e r o f v i r a l r e p l i c a t i o n4'5'6 2 8.
I n t h i s w o r k , w e s o u g h t t o e s t a b l i s h t h e p o -t e n -t i a l i n f e c -t i v i -t y o f H B s A g p o s i -t i v e s e r a f r o m a s y m p t o m a t i c c a r r i e r s a s d e t e r m i n e d b y t h e p r e -s e n c e o f H B V - D N A . T h e c o r r e l a t i o n o f H B e A g , I g M a n t i - H B c a n d H B s A g l e v e l s w i t h H B V - D N A p o s i t i v i t y w a s s t u d i e d .
M A T E R I A L S A N D M E T H O D S
H B s A g p o s i t i v e s e r u m s a m p l e s f r o m 3 5 6 b l o o d d o n o r s o f d i f f e r e n t b l o o d b a n k s f r o m R i o d e J a n e i r o w e r e a n a l y s e d .
D e t e c t i o n o f s e r o l o g i c a l H B V m a r k e r s
H B s A g d e t e c t i o n — T h e s e s a m p l e s w e r e c o n f i r m e d b y E l i s a — F I O C R U Z7 a n d t i t r a t e d
b y R - P H A ( B i o - M a n g u i n h o s — F I O C R U Z )3 0.
H B e A g d e t e c t i o n — H B s A g p o s i t i v e s a m -p l e s w e r e t e s t e d f o r t h e -p r e s e n c e o f H B e A g u s i n g E l i s a K i t s f r o m O r g a n o n a s w e l l a s r e a g e n t s p r o -d u c e -d a n -d s t a n -d a r -d i z e -d i n o u r l a b o r a t o r y1 9.
I g M a n t i - H B c d e t e c t i o n — A l l s a m p l e s w e r e t e s t e d w i t h r e a g e n t s s t a n d a r d i z e d i n t h e C e n t e r s f o r D i s e a s e s C o n t r o l , A t l a n t a , U S A , u s i n g H B c A g o b t a i n e d f r o m c l o n e d E . c o l i B r i e f l y , 1 2 5 fil o f g o a t a n t i - h u m a n I g M ( / x- c h a i n s p e c i f i c , S i g m a ) ,
d i l u t e d i n 50 m M c a r b o n a t e b u f f e r p H 9.6 w e r e c o a t e d i n p o l y s t i r e n e m i c r o p l a t e s . A f t e r o v e r n i g h t i n c u b a t i o n , t h e p l a t e s w e r e w a s h e d 4 t i m e s i n B S A ( 0 . 5 % ) i n P B S , a n d 1 0 0 o f d i l u t e d s a m -p l e s (2 x 1 03 i n N H S - P B S ) w e r e i n c u b a t e d f o r
l h / 3 7 C . T h e p l a t e s w e r e w a s h e d a g a i n , 1 0 0 fú o f p u r i f i e d H B c A g ( 5 0 n g / m l ) d i l u t e d i n 1% N H S / P B S w a s a d d e d a n d t h e r e a c t i o n w a s i n c u b a t e d f o r 1 h o u r a t 3 7 C . A f t e r w a s h i n g t h e p l a t e s , 100 fjá o f r a b b i t a n t i - H B c c o n j u g a t e d t o p e r o x i d a s e d i l u t e d i n 10%) N H S / 1 0 % N R S / P B S w e r e a d d e d a n d i n c u b a t i o n p r o c e e d e d f o r l h / 3 7 C . A f t e r w a -s h i n g , 100 fú o f -s u b -s t r a t e (1.2 m l o f l O X -s u b -s t r a t e b u f f e r + 10.8 m l d i s t i l l e d w a t e r a n d 0 . 2 5 m l o f 5 m g T M B / m l D M S O ) w e r e a d d e d a n d a f t e r 30 m i n u t e s a t r o o m t e m p e r a t u r e , t h e r e a c t i o n w a s s t o p p e d w i t h 100 /xl o f 4 N S u l f u r i c A c i d . ( T h e c o m p o n e n t s o f 1 0 X s u b s t r a t e b u f f e r a r e S o d i u m A c e t a t e 3 4 . 0 g , C i t r i c A c i d 0 . 7 3 g , i n 2 5 0 m l o f d i s t i l l e d w a t e r a n d 0.3 m l H202 3 0 % ) . T h e r e a c
t i o n i s r e a d a t 4 5 0 n m . T h e c u t o f f v a l u e i s c a l c u -l a t e d u s i n g t h e m e a n n e g a t i v e c o n t r o -l + 0.1 m e a n p o s i t i v e c o n t r o l . N e g a t i v e c o n t r o l s a r e c o -l o u r -l e s s ( e x t i n c t i o n a r o u n d 0 . 0 5 ) a n d p o s i t i v e c o n t r o l s g i v e a c o l o u r t h a t i s c l e a r l y d i s c e r n i b l e f r o m t h e n e g a t i v e c o n t r o l .
P r e p a r a t i o n o f s a m p l e s a n d m o l e c u l a r h y b r i -d i z a t i o n
T h e s e r u m s a m p l e s w e r e t r e a t e d a s d e s c r i -b e d -b y S C O T T O e t a l .2 3. T o 5 0 o f s a m p l e , t h e
s a m e v o l u m e o f 2 M N a C l w a s a d d e d p l u s t w o v o l u m e s o f 1 M N a O H . F o l l o w i n g a 10 m i n u t e s i n c u b a t i o n a t r o o m t e m p e r a t u r e , t h e s a m p l e s w e r e s p o t t e d b y f i l t r a t i o n t h r o u g h a B R L H y b r i -d o t o n t o n i t r o c e l l u l o s e f i l t e r s p r e w e t w i t h 6 X S S C ( I X S S C : 0 . 0 1 5 M N a c i t r a t e , 0 . 1 5 M N a C l , p H 7 . 0 ) . N e u t r a l i z a t i o n w a s c a r r i e d o u t b y a d d i -t i o n o f 2 0 0 j x l o f 0.5 M T r i s p H 7.4, 3 M N a C l , e v e r y f i v e s a m p l e s . T h e p o s i t i v e a n d n e g a t i v e c o n t r o l s a d d e d t o t h e f i l t e r s w e r e t r e a t e d i n t h e s a m e w a y .
3 7 ° C f o r 1 5 - 1 8 h s , f o l l o w e d b y t w o 2 0 m i n u t e s w a s h e s i n 2 X S S C , 0 . 1 % S D S a t 6 5 ° C a n d t w o 20 m i n u t e s w a s h e s i n 0 . 1 X S S C , 0 . 1 % S D S a t 6 5 ° C . t h e f i l t e r s w e r e e x p o s e d t o S a k u r a X - r a y f i l m s f o r 2 4 h s .
T h e p r o b e u s e d i n t h i s w o r k w a s t h e p l a s m i d p C P I O w h i c h w a s a g i f t f r o m D r . P i e r r e T i o l l a i s f r o m t h e I n s t i t u t P a s t e u r . T h i s p l a s m i d c o n s i s t s o f t h e v e c t o r p B R 3 2 2 , c o n t a i n i n g t w o c o p i e s o f t h e H B V g e n o m e . I n s o m e e x p e r i m e n t s t h e w h o l e p l a s m i d w a s u s e d a s a p r o b e , w h e r e a s i n o t h e r s t h e H B V D N A w a s p u r i f i e d b y e l e c t r o e -l u t i o n f r o m a g a r o s e g e -l s . T h e p r o b e w a s -l a b e -l -l e d b y n i c k t r a n s l a t i o n2 2 w i t h 32P t o a s p e c i f i c a c t i
-v i t y o f 1-2 x 1 07 c p m/ / i, g o f D N A . T h e 3 2P a l p h a
-d A T P w a s s u p p l i e -d b y D r . J o s é C a r l o s M a i a , f r o m t h e U n i v e r s i t y o f S ã o P a u l o .
R E S U L T S
T h e d i s t r i b u t i o n o f 3 5 6 s a m p l e s w a s a n a l y -s e d a c c o r d i n g t o t h e h e m a g g l u t i n a t i o n t i t e r -s o f H B s A g . T h e t i t e r s v a r i e d f r o m 1/16 t o g r e a t e r t h a n 1 / 4 0 9 6 , o f w h i c h 2 8 . 4 % w e r e h i g h t i t e r e d , w i t h R - P H A t i t e r g r e a t e r t h a n 1 / 2 0 4 8 .
T h e r e s u l t s o f t h e h y b r i d i z a t i o n t e s t s w e r e e v a l u a t e d b y t w o i n d e p e n d e n t o b s e r v e r s a n d d o u b t f u l c a s e s w e r e r e p e a t e d . 9 4 o u t o f 3 5 6 s e r u m s a m p l e s w e r e p o s i t i v e w h e n h y b r i d i z e d t o p C P I O , a s e x e m p l i f i e d i n F i g u r e 1. A s i t h a s b e e n r e p o r t e d t h a t f a l s e p o s i t i v e c a s e s m a y a r i s e , p o s s i b l y a s a r e s u l t o f b a c t e r i a l c o n t a m i n a t i o n d u -r i n g s t o -r a g e1 0, a l l p o s i t i v e s a m p l e s w e r e h y b r i
d i z e d t o p B R 3 2 2 , t h e v e c t o r i n w h i c h t h e H B V -D N A w a s c l o n e d . I n d e e d , o u t o f 9 4 , t e n s a m p l e s w e r e f o u n d t o h y b r i d i z e a l s o t o p B R 3 2 2 a n d w e r e t h e r e f o r e h y b r i d i z e d t o t h e p u r i f i e d H B V - D N A i n s e r t . T o a s c e r t a i n t h e p u r i t y o f t h e i n s e r t , p B R 3 2 2 D N A w a s a l s o s p o t t e d o n t o t h e f i l t e r , g i v i n g a n e g a t i v e r e s u l t . F i v e o f t h e t e n p B R 3 2 2 p o s i t i v e s a m p l e s w e r e s h o w n t o b e p o s i t i v e a l s o f o r t h e c l o n e d H B V D N A , b e i n g t h e r e f o r e i n c l u d e d a m o n g t h e H B V p o s i t i v e s a m p l e s , w h i c h w e -r e a t o t a l o f 9 0 .
T h e s e r o l o g i c a l m a r k e r s H B V - D N A , H B e A g a n d I g M a n t i H B c d e t e c t e d i n t h e p r e s e n t s a m -p l e s w e r e c o r r e l a t e d w i t h t h e c o n c e n t r a t i o n o f H B s A g , s e m i - q u a n t i t a t i v e l y r e p r e s e n t e d b y t h e R P H A t i t e r , d i v i d e d i n t h r e e g r o u p s : 1 0 6 s a m -p l e s w i t h l o w t i t e r ( u n d e r 1 / 1 2 8 ) , 1 4 9 s a m -p l e s w i t h
i n t e r m e d i a t e t i t e r s ( 1 / 2 5 6 t o 1 / 1 0 2 4 ) a n d 101 s a m -p l e s w i t h h i g h t t i t e r s ( o v e r 1 / 2 0 4 8 ) . T h e -p e r c e n t a g e o f H B V - D N A , H B e A g a n d I g M a n t i - H B c i n c r e a s e s a s t h e c o n c e n t r a t i o n o f H B s A g i n c r e a s e s ( T a b l e I ) .
T A B L E 1
C o r r e l a t i o n b e t w e e n H B V s e r o l o g i c a l m a r k e r s a n d h e m a g g l u t i n a t i o n titer of H B s A g .
R P H A * n u m b e r H B V - D N A H B e A g I g M t i t e r of s a m p l e s (c/r) (c/c ) a n t i - H B c (CA )
u n d e r 1/128 106 14 (12.3) 10 ( 9.4) 28 (26.4)
1/256 to 1/1024 149 18 (12.1) 21 (14.1) 52 (34.9)
o v e r 1/2048 101 58 (57.4) 66 (65.3) 41 (40.6)
T o t a l 356 90 (25.0) 97 (27.2) 121 (33.9)
A c l e a r r e s u l t c a n b e o b s e r v e d w h e n t h e p e r -c e n t a g e o f H B V - D N A a n d / o r H B e A g m a r k e r s i s c o r r e l a t e d w i t h t h e t i t e r o f H B s A g . I n h i g h t i t e r
s a m p l e s 6 5 % h a v e o n e o r b o t h o f t h e s e m a r k e r s a g a i n s t o n l y 1 9 % i n l o w t i t e r s a m p l e s ( F i g u r e 2 ) .
HBsAg
R-PHA *UNDER 1/128
LOW T I T E R
N= 106
H B s A g
R - P H A 1/256
INTERMEDIATE
N= 149
TO 1/1024
T I T E R
H B s A g
R - P H A OVER
HIGH T I T E R
101
1/1024
ED HBV-DNA
£3 HBeAg
* R - P H A R E V E R S E PASSIVE HEMAGGLUTINATION T I T E R OF HBsAg
F i g . 2 — P e r c e n t a g e of H B V D N A a n d or H B e A g m a r k e r s of H B V i n f e c t i o n i n r e l a t i o n to H B s A g h e m a g g l u t i n a t i o n titer.
T A B L E 2
C o r r e l a t i o n of a n t i H B c I g M a n t i b o d i e s w i t h H B V D N A a n d H B e A g s e r o l o g i c a l m a r k e r s of H B V i n f e c t i o n .
I g M a n t i H B c n u m b e r of
s a m p l e s H B V D N A (
c'< ) H B e A g {<'()
N E G 235 43 (18.3) 39 (16.6)
P / N < 10 90 34 (37.7) 39 (59.2)
P N 11 50 27 10 (37.1) 16 (59.2)
P / N > 50 4 3 (75.0) 3 (75.0)
356 90 (25.2) 97 (27.2)
P N : O D s a m p l e / O D n e g a t i v e i n E l i s a .
T a b l e 2 s h o w s t h e c o r r e l a t i o n o f I g M a n t i -H B c a n t i b o d i e s w i t h -H B V - D N A a n d -H B e A g . F r o m t h e t o t a l o f 3 5 6 s a m p l e s , 121 g a v e p o s i t i v e r e s u l t s f o r I g M a n t i - H B c ( 3 3 . 9 % ) . I n s a m p l e s w i t h P / N l e s s t h a n 10 ( w e a k l y p o s i t i v e ) a n d b e t w e e n 1 1 5 0 , a p p r o x i m a t e l y t h e s a m e p r e s e n c e o f H B V D N A a n d H B e A g w a s s e e n ( 3 7 % a n d 5 9 % r e s p e c -t i v e l y ) . I -t i s i m p o r -t a n -t -t o n o -t i c e -t h a -t i n s a m p l e s w i t h o u t I g M a n t i H B c m a r k e r , 1 8 . 3 % o f H B V D N A a n d 1 6 . 6 % o f H B e A g w e r e o b s e r v e d , s h o
-w i n g t h a t e x c e p t f o r s t r o n g l y p o s i t i v e s a m p l e s , t h e p r e s e n c e o f I g M a n t i H B c s e e m s t o b e i n d e -p e n d e n t o f t h e -p r e s e n c e o f e i t h e r H B V - D N A o r H B e A g b l o o d i n f e c t i v i t y m a r k e r s i n a s y m p t o -m a t i c c a r r i e r s .
D I S C U S S I O N
L e s s s e n s i t i v e m e t h o d s f o r t h e d e t e c t i o n o f H B s A g , l i k e h e m a g g l u t i n a t i o n , a r e a u s e f u l t o o l t o m e a s u r e t h e l e v e l o f a n t i g e n p r e s e n t i n b l o o d s p e c i m e n s . I n s e r a o f a s y m p t o m a t i c c a r r i e r s o f H B s A g , s c r e e n e d f r o m b l o o d d o n o r s , a w i d e v a r i a t i o n o f t i t e r s w a s f o u n d . I t w a s e x p e c t e d t h a t i n s p e c i m e n s w i t h a h i g h c o n c e n t r a t i o n o f H B s A g , o t h e r m a r k e r s o f v i r a l r e p l i c a t i o n , s p e c i f i c a l l y H B V p a r t i c l e s , w o u l d a l s o b e p r e s e n t .
T h e d e t e c t i o n o f I g M a n t i - H B c a n t i b o d i e s w a s a l s o c a r r i e d o u t t o c o m p a r e H B V - D N A a n d H B e A g m a r k e r s o f i n f e c t i v i t y , o n c e i t c o u l d b e a s s o c i a t e d w i t h v i r a l r e p l i c a t i o n .
D N A i n c r e a s e s i n t h e g r o u p w i t h h i g h e r t i t e r s o f H B s A g . I n t h i s g r o u p ( o v e r 1 / 1 0 2 4 ) t h e r e i s a v e r y h i g h a s s o c i a t i o n o f H B V - D N A a n d H B e A g , s i m i l a r t o l e v e l s d e s c r i b e d i n t h e l i t e r a t u r e . I n t h i s c l a s s , 9 6 % o f H B V - D N A p o s i t i v e s e r a a r e a l s o p o s i t i v e f o r H B e A g , w h e r e a s a m o n g t h e t o t a l n u m b e r o f H B e A g p o s i t i v e c a s e s , o n l y 81 % s h o w e d a p o s i t i v e s i g n a l f o r H B V - D N A . T h i s i s i n a g r e e m e n t w i t h t h e f i n d i n g s o f o t h e r a u t h o r s1 8 2 3 , 2 7 a n d m i g h t b e e x p l a i n e d , a c c o r d i n g t o T A
-K A H A S H I e t a l .2 6, b y t h e a s s o c i a t i o n o f H B e A g
w i t h i m m u n o g l o b u l i n G c a u s i n g a l o w e r c l e a -r a n c e -r a t e .
T h i s c o r r e l a t i o n i s m u c h d e c r e a s e d a m o n g t h e i n t e r m e d i a t e t i t e r s o f H B s A g , a l t h o u g h t h e t e n d e n c y f o r h i g h e r p r o p o r t i o n s o f H B V D N A n e g a t i v e / H B e A g p o s i t i v e i n d i v i d u a l s i s m a i n t a i -n e d . A m o -n g t h e l o w a -n d i -n t e r m e d i a t e t i t e r s o f I g M a n t i H B c ( T a b l e 2 ) , t h e p e r c e n t a g e o f i n d i v i -d u a l s c a r r y i n g H B e A g i s a l s o c o n s i s t e n t l y h i g h e r t h a n t h a t o f H B V - D N A p o s i t i v e c a s e s . H o w e v e r , t h i s i s n o l o n g e r t r u e f o r t h e g r o u p o f i n d i v i d u a l s w i t h v e r y l o w t i t e r o f H B s A g ( F i g . 1 ) , w h e r e a r e l a t i v e l y h i g h n u m b e r o f c a s e s , 1 1 % , w a s f o u n d w h i c h w e r e p o s i t i v e f o r H B V D N A w h i l e n e g a -t i v e f o r H B e A g a n d y e -t s o m e o f -t h e m s h o w e d a v e r y s t r o n g h y b r i d i z a t i o n s i g n a l . T h i s o b s e r v a -t i o n r e i n f o r c e s -t h e c u r r e n -t i d e a -t h a -t H B e A g i s n o t a v e r y g o o d m a r k e r o f H B V r e p l i c a t i o n1 8. R e
-g a r d i n -g I -g M a n t i - H B c , o n l y t h r e e o u t o f t h e s e 11 s e r a w e r e p o s i t i v e f o r t h i s m a r k e r a n d t h e y w e r e o n l y w e a k l y p o s i t i v e . T h e s a m e t r e n d i s a g a i n o b s e r v e d i n t h e g r o u p o f i n d i v i d u a l s n e g a t i v e f o r I g M a n t i H B c : a l t h o u g h f o r a s l i g h t m a r -g i n , c a r r i e r s o f H B V - D N A a r e m o r e f r e q u e n t t h a n H B e A g p o s i t i v e o n e s . T h e e x p l a n a t i o n f o r t h i s k i n d o f s i t u a t i o n i s n o t k n o w n . J u d g i n g f r o m t h e m a r k e r s w e h a v e , i t w o u l d a p p e a r t h a t t h e r e i s a c o n s i d e r a b l e l e v e l o f v i r a l g e n o m e r e p l i c a t i o n , c o e x i s t i n g w i t h a l o w e x p r e s s i o n o f v i r a l a n t i -g e n s . I t w o u l d b e i n t e r e s t i n -g t o h a v e a l s o t h e H B c A g s t a t u s o f t h e s e s a m p l e s .
I g M a n t i - H B c w a s d e t e c t e d i n 3 3 . 9 % o f t h e s a m p l e s b u t o n l y 2 5 . 6 % o f t h e m r e p r e s e n t a c o n -s i d e r a b l e t i t e r o f a n t i b o d i e -s . T h e g r e a t m a j o r i t y s h o w e d a l o w t i t e r , w i t h P / N l e s s t h a n 10. R O G G E N D O R F e t a l .2 1 f o u n d t h e s a m e p r e v a l e n c e
i n h e a l t h y c a r r i e r s , w h i l e o t h e r a u t h o r s r e p o r t e d m u c h h i g h e r n u m b e r s , s u c h a s 7 5 % , 8 1 % a n d 8 2 9 c1 1 1 4 1 7. T h i s a p p a r e n t d i s c r e p a n c y m i g h t b e
d u e t o a h i g h e r c u t - o f f v a l u e e m p l o y e d b y u s , s i n c e i n s p e c t i o n o f t h e a b o v e m e n t i o n e d p a p e r s s h o w s t h a t a g r e a t p r o p o r t i o n o f t h e r e p o r t e d t i t e r i s l o w , i f c o m p a r e d t o t h o s e f o u n d i n a c u t e o r c h r o n i c h e p a t i t i s .
T h i s p r o f i l e o f I g M a n t i - H B c i s c o m m o n l y f o u n d i n b l o o d d o n o r s , w h o a r e r o u t i n e l y s c r e e n e d f o r c l i n i c a l l y i n a p p a r e n t H B V i n f e c t i o n , b y t h e p r e s e n c e o f H B s A g . U s u a l l y , i n t h e s e c a s e s , t h e p r e s e n c e o f I g M a n t i - H B c i s m o r e l i k e l y t o r e p r e s e n t a r e s i d u a l m a r k e r f r o m a n e a r l i e r i n f e c t i o n t h a n a n a c t u a l m a r k e r o f r e p l i c a t i o n , a s i t c a n b e f o u n d i n a c u t e c a s e s , w h e r e i t i s o f t e n o b s e r v e d i n v e r y h i g h t i t e r . I t i s a l s o w o r t h n o t i -c i n g t h a t i n t h e s e l a t t e r -c a s e s , t h e t i t e r o f I g M a n t i - H B c i s l i k e l y t o d e c r e a s e s h a r p l y , w h i l e i t h a s b e e n d e m o n s t r a t e d t h a t i n c h r o n i c c a s e s m o -d e r a t e t i t e r s a r e f o u n -d , w h i c h -d e c r e a s e s l o w l y a n d p e r s i s t f o r a v e r y l o n g t i m e9 1 4. I n o u r s a m
-p l e s , h i g h -p o s i t i v i t y f o r I g M a n t i - H B c w a s f o u n d i n o n l y 4 o u t o f 121 c a s e s ( 1 3 . 3 % ) a n d 3 o f t h e m w e r e a l s o p o s i t i v e f o r H B V - D N A a n d H B e A g , i n d i c a t i n g a s i t u a t i o n s i m i l a r t o a n e a r l y s t a g e o f H B V i n f e c t i o n . T h u s , i t a p p e a r s t h a t w h e n t h i s a n t i b o d y i s f o u n d i n v e r y h i g h t i t e r s ( i n t h i s w o r k , t h e c l a s s r e p r e s e n t e d b y P / N > 5 0 ) , i t m i g h t b e r e g a r d e d a s a n i n d i c a t o r o f v i r a l r e p l i c a t i o n . H o w e v e r , i n g r o u p s w h i c h s h o w i n t e r m e d i a t e o r l o w p o s i t i v i t y f o r I g M a n t i - H B c , t h e f r e q u e n c y o f t h e o t h e r m a r k e r s a s s o c i a t e d t i ) H B V r e p l i c a t i o n i s m o d e r a t e a n d v e r y s i m i l a r . T h i s i n d i c a t e s t h a t i n t h e m a j o r i t y o f b l o o d d o n o r s , w h e r e I g M a n t i H B c i s p r e s e n t i n m e d i u m t o l o w t i t e r s , i t c a n n o t b e a s s o c i a t e d t o v i r a l r e p l i c a t i o n a n d s h o u l d b e c o n s i d e r e d j u s t a n e v i d e n c e o f a p a s t i n f e c t i o n .
R e g a r d i n g o u r d a t a a s a w h o l e , i t c a n b e s e e n t h a t t h e r e a r e m a n y c a s e s i n w h i c h H B V D N A i s p r e s e n t , e v e n i n g r o u p s w i t h v e r y l o w l e v e l s o f H B s A g a n d l i t t l e o r n o I g M a n t i - H B c , s h o w i n g t h a t b o r d e l i n e p o s i t i v i t y f o r H B s A g c a n m e a n p o t e n t i a l b l o o d i n f e c t i v i t y . T h e r e f o r e , w h e n e v e r p o s s i b l e , i t i s b e t t e r t o s c r e e n b l o o d d o n o r s f o r m a r k e r s o f H e p a t i t i s B b y a m o r e s e n s i t i v i t y a s s a y , l i k e E L I S A , w h i c h i n t h e c a s e o f H B s A g h a s t h e a b i l i t y t o d e t e c t u p t o 5 - 1 0 n a n o g r a m s o f a n t i g e n7.
R E S U M O
P o t e n c i a l d e i n f e c t i v i d a d e e m s a n g u e d e p o r t a -d o r e s a s s i n t o m á t i c o s -d e H B s A g c a r a c t e r i z a -d o p e l a p r e s e n ç a d e H B V - D N A e c o m p a r a ç ã o c o m
E m 3 5 6 s o r o s H B s A g p o s i t i v o s d e p o r t a d o r e s
a s s i n t o m á t i c o s , t i t u l a d o s p o r h e m a g l u t i n a ç ã o
p a s s i v a r e v e r s a , f o i a n a l i s a d a a p r e s e n ç a d e
H B V - D N A , H B e A g e I g M a n t i - H B c , d a s e g u i n t e
f o r m a : a s a m o s t r a s f o r a m d i v i d i d a s e m t r ê s
c l a s s e s d e a c o r d o c o m o t í t u l o d e H B s A g e I g M
a n t i H B c e f o i v e r i f i c a d a a d i s t r i b u i ç ã o d e H B V
-D N A e H B s A g n e s t a s c l a s s e s .
E m a m o s t r a s c o m t í t u l o s e l e v a d o s d e H B s A g ,
6 5 % d a s a m o s t r a s t i v e r a m u m o u a m b o s o s
m a r c a d o r e s H B V - D N A e H B s A g e a s m e s m a s
f o r a m e n c o n t r a d a s e m a p e n a s 1 9 % d a s a m o s t r a s
c o m b a i x o t í t u l o d e H B s A g . D o t o t a l d e 3 5 6
a m o s t r a s , 121 f o r a m p o s i t i v a s p a r a I g M a n t i
-H B c ( 3 3 . 9 % ) . D e s t a s , 3 8 . 9 % d e -H B V - D N A e 4 7 . 9 %
d e H B e A g f o r a m o b s e r v a d a s , a o p a s s o q u e e m
a m o s t r a s c o m a u s ê n c i a d e I g M a n t i - H B c , 1 8 . 3 %
e 1 6 . 6 % f o r a m r e s p e c t i v a m e n t e e n c o n t r a d o s .
A c o n c o r d â n c i a e n t r e o s t r ê s m a r c a d o r e s f o i
e n c o n t r a d a e m . a m o s t r a s c o m a l t o t í t u l o d e
H B s A g , e n t r e t a n t o H B V D N A f o i t a m b é m d e
-t e c -t a d o e m g r u p o d e b a i x o -t í -t u l o d e H B s A g n a
a u s ê n c i a d e I g M a n t i - H B c o u e m n í v e i s b a i x o s ,
m o s t r a n d o o p o t e n c i a l d e i n f e c t i v i d a d e m e s m o
e m a m o s t r a s d e H B s A g c o m v a l o r e s p r ó x i m o s
a o l i m i t e d a p o s i t i v i d a d e .
A C K N O W L E D G E M E N T S
T h e a u t h o r s g r a t e f u l l y a c k n o w l e d g e M e s s i a s
d a S i l v a , L u i z A n t o n i o C . M e r c a d a n t e a n d S e r g i o
d a S i l v a e M o u t a J r . f o r t e c h n i c a l a s s i s t a n c e .
C l a u d i a F . P a d i l l a w a s a t r a i n e e i n o u r D e p a r t
-m e n t w i t h a f e l l o w s h i p f r o -m C N P q .
P a r t o f t h i s w o r k w a s s u p p o r t e d b y C N P q ,
g r a n t n u m b e r 4 0 . 0 0 8 1 . 8 9 . 0 .
R E F E R E N C E S
1. A L M E I D A , J . D . ; R U B I N S T E I N , D . & S T O T T , E . J . — N e w a n t i g e n a n t i b o d y s y s t e m i n A u s t r a l i a a n t i g e n p o s i t i v e h e p a t i t i s . L a n c e t , 2: 1225-1227, 1971.
2. B E N S A B A T H , G . ; H A U L E R , S . C ; P E R E I R A S O A R E S , M. C ; F I E L D S , H . & M A Y N A R D , J . E . — E p i d e m i o l o g i c a n d s e r o l o g i c s t u d i e s of a c u t e v i r a l h e p a t i t i s i n B r a z i l ' s A m a z o n B a s i n . B u l l . P a n A m e r . H l t h . O r g . , 2 1 : 16 27, 1987 3. B E N S A B A T H , G . ; H A D L E R , S . C ; P E R E I R A S O A R E S ,
M. C ; F I E L D S , H . ; D I A S , L . B . ; P O P P E R , H . & M A Y N A R D , J . — H e p a t i t i s D e l t a v i r u s i n f e c t i o n a n d L a b r e a H e p a t i t i s p r e v a l e n c e a n d r o l e i n f u l m i n a n t H e p a t i t i s in t h e A m a z o n B a s i n . J . A m e r . m e d . A s s . , 258: 479-483, 1987.
4. B E R N I N G E R , M.; H A M M E R . M.; H O Y E R , B . & G E R I N , J . — A n a s s a y for t h e d e t e c t i o n of t h e D N A g e n o m e of H e p a t i t i s B v i r u s i n s e r u m . J . m e d . V i r o l , 9: 57-68, 1982. 5. B R E C H O T , C . & H A D C H O U E L , M.; S C O T T O , J . ; D E
G O S , F . ; C H A R N A Y , P . ; T R E P O , C . & T I O L L A I S , P . — D e t e c t i o n of H e p a t i t i s B v i r u s D N A i n l i v e r a n d s e r u m : A d i r e c t a p p r a i s a l of t h e c h r o n i c c a r r i e r s t a t e . L a n c e t , 2: 765 768, 1981.
6. B O N I N O , F . ; H O Y E R , B . ; N E L S O N , J . ; E N G L E , R . ; V E R M E , G . & G E R I N , J . — H e p a t i t i s B v i r u s D N A i n t h e s e r a of t h e H B s A g c a r r i e r s : a m a r k e r of a c t i v e h e p a t i t i s B v i r u s r e p l i c a t i o n i n t h e l i v e r . H e p a t o l o g y , 1: 386 391, 1981.
7. C A M A R G O , I . F . ; G A S P A R , A . M. C . & Y O S H I D A , C . F . T . — C o m p a r a t i v e E L I S A r e a g e n t s for d e t e c t i o n of H e p a t i t i s B s u r f a c e a n t i g e n ( H B s A g ) . M e m . I n s t . O s w a l d o C r u z , 8 2 : 181-187, 1987.
8. D A N E , D . S . ; C A M E R O M , C . H . & B R I G G S , M. — V i r u s l i k e p a r t i c l e s i n s e r u m of p a t i e n t s w i t h A u s t r a l i a a n t i g e n a s s o c i a t e d h e p a t i t i s . L a n c e t , 1: 695-698, 1970.
9. D E I N H A R D T , F . — P r e d i c t i v e v a l u e of m a r k e r s of H e p a t i t i s v i r u s i n f e c t i o n . J . i n f e c t . D i s . , 141: 299 305, 1980. 10. D I E G U T I S , P . S . ; B U R N E T T , L . ; N I G H T I N G A L E , B . N . ;
L O W E , S . B . ; G I U N E Y , R . C ; C O S S A R T , Y . E . ; K E I R N A N , E . ; W I L L I A N S , G . ; P A R S O N S , C ; M c C A U G H A N , G . ; F R E I M A N , J . ; B R I T T O N , W . J . & G A L L A G E R , N . D . — R e l a t i o n s h i p b e t w e e n h e p a t i t i s B v i r u s D N A i n b l o o d a n d s e r o l o g i c a l m a r k e r s of h e p a t i t i s B i n f e c t i o n . M e d . J . A u s t . , 144: 351-355, 1986.
11. D O R M E Y E R , H . H . ; A R N O L D , W.; K R Y G E R , P . ; N I E L S E N , J . O . & M E Y E R Z U M B U S C H E N F E L D E , K . H . — I g M a n t i b o d y to h e p a t i t i s B c o r e a n t i g e n ( a n t i H B c I g M ) i n " h e a l t h y " H B s A g c a r r i e r s : A l o n g i t u d i n a l s t u d y of 75 c a r e s . K l i n . W s c h r . , 59: 675 678, 1981.
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13. F I G U E I R E D O M E N D E S , F . ; S I M O N E T T I , J . P . ; F O N S E -C A , J . -C . F . ; S I M O N E T T I , S . R . R . ; P I T E L L A , A . M.; S C H A T Z M A Y R , H . G . ; L I M A F E R R E I R A , L . C ; M I R A N D A S A N T O S , I . K . ; M E X A S , P . P . F . & H E R B E R T , B . A . — O i m p a c t o d a h e p a t i t e D e l t a . M o d . H e p a t . , 9: 16 22, 1984.
14. G E R L I C H , W . H . ; L U E R , W . ; T H O M S S E N , R . & t h e s t u d y g r o u p for v i r a l h e p a t i t i s of t h e D e u t s c h e F o r s c h u n g s g e -m e i n c h a f t . — D i a g n o s i s of a c u t e a n d i n a p p a r e n t h e p a t i t i s B v i r u s i n f e c t i o n s b y m e a s u r e m e n t of I g M a n t i b o d y to h e p a t i t i s B c o r e a n t i g e n . J . i n f e c t . D i s . , 142: 95-101, 1980.
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16. K A P L A N , P . M.; G R E E N M A N , R . L . ; G E R I N , J . L . ; P U R C E L L , R . H . & R O B I N S O N , W . S . — D N A p o l y m e r a s e a s s o c i a t e d w i t h h u m a n h e p a t i t i s B a n t i g e n . J . V i r o l . , 12: 995-1005, 1973.
17. K R Y G E R , P . ; M A T H I E S E N , L . R . ; A L D E R S H V I L E , J . & N I E L S E N , J . O . — P r e s e n c e a n d m e a n i n g of a n t i H B c I g M a s d e t e r m i n e d b y E L I S A i n p a t i e n t s w i t h a c u t e t y p e B h e p a t i t i s a n d h e a l t h y H B s A g c a r r i e r s . H e p a t o l o g y , 12: 50 53, 1982.
18. M A T S U Y A M A , Y . ; O M A T A , M.; Y O K O S U K A , O . ; I M A Z E K I , F . ; I T O , Y . & O K U D A , K . — D i s c o r d a n c e of H e p a
-t i -t i s B e A n -t i g e n / A n -t i b o d y a n d H e p a -t i -t i s B Virus D e o x y r i
19. M E R C A D A N T E , L . A . C ; E N N E S , I . C ; G A S P A R , A . M. C . & Y O S H I D A , C . F . T . — A n e n z y m e i m m u n o a s s a y for t h e d e t e c t i o n of h e p a t i t i s e a n t i g e n a n d i t s a n t i b o d y . I n : E N C O N T R O N A C I O N A L D E V I R O L O G I A , 3., S ã o L o u r e n ç o , M G , 1986. R e s u m o s p. 36.
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21. R O G G E N D O R F , M.; D E I N H A R D I , F . ; F R O S N E R , G . G . ; S C H E I D , R . ; B A Y E R L , B . & Z A C H O U V A L , R . — I m m u n o g l o b u l i n M a n t i b o d i e s to h e p a t i t i s B c o r e a n t i g e n : e v o -l u t i o n of e n z y m e i m m u n o a s s a y for d i a g n o s i s of h e p a t i t i s B v i r u s i n f e c t i o n . J . c l i n . M i c r o b i o l . , 13: 618 626, 1981. 22. R I G B Y , P . W . I . ; D I E C K M A N N , M.; R H O D E S , C . &
B E R G , P . — L a b e l l i n g d e o x y n u c l e i c a c i d to h i g h s p e c i f i c a c t i v i t y i n v i t r o b y n i c k t r a n s l a t i o n w i t h D N A p o l y m e r a s e . J . m o l e c . B i o l . , 113: 237 251, 1977.
23. S C O T T O , J . ; H A D C H O V E L , M.; H E R Y , C ; Y U A R T , J . ; T I O L L A I S , P . & B R E C H O T , C . — D e t e c t i o n of h e p a t i t i s B v i r u s D N A i n s e r u m b y a s i m p l e s p o t h y b r i d i z a t i o n t e c h n i q u e : c o m p a r i s o n w i t h r e s u l t s of o t h e r v i r a l m a r k e r s . H e -p a t o l o g y , 3: 279 284, 1983.
24. T A K A H A S H I , K . ; A K A H A N E , Y . ; G O T A N D A , T . ; M I S H I R O , T . ; I M A I , M.; M I Y A K A W A , Y . & M A Y U M I , M . — D e m o n s t r a t i o n of h e p a t i t i s B e a n t i g e n i n t h e c o r e of D a n e p a r t i c l e s . J . I m m u n o l . , 122: 275-279, 1979.
25. T A K A H A S H I , K . ; I M A I , M.; T S U D A , F . ; T A K A H A S H I , T . ; M I Y A K A W A , Y . & M A Y U M I , M. — A s s o c i a t i o n of D a n e p a r t i c l e s w i t h e a n t i g e n i n t h e s e r u m of a s y m p t o m a t i c c a r r i e r s of h e p a t i t i s s u r f a c e a n t i g e n . J . I m m u n o l , 117: 102-105, 1976.
26. T A K A H A S H I , K . ; M I Y A K A W A , Y . ; G O T A N D A , T . ; M I S H I R O , T . ; I M A I , M. & M A Y U M I , M . — S h i f t f r o m " s m a l l " H e p a t i t i s B e A n t i g e n to I g G - b o u n d " l a r g e " f o r m i n t h e
c i r c u l a t i o n of h u m a n b e i n g s a n d c h i m p a n z e e a c u t e l y i n f e c t e d w i t h H e p a t i t i s B V i r u s . G a s t r o e n t e r o l o g y , 7 7 : 1193-1199, 1979.
27. T H I E R S , V . ; B O U C H A R D E A U , F . ; C O U R O U C É , A . M.; T I O L L A I S , P . & B R E C H O T , C . — L ' A D N d u v i r u s d e 1 ' h é p a t i t e B c o m m e m a r q u e u r d e m u l t i p l i c a t i o n v i r a l e : c o m p a r i s o n a v e c l ' a n t i g e n e H B e et l ' a n t i c o r p s a n t i H B e . P r e s s e m é d . , 15: 1219-1222, 1986.
28. W E L L E R , I . V . D . ; F O W L E R , M. J . F . ; M O N J A R D I N O , J . & T H O M A S , H . C . — T h e d e t e c t i o n of H B V D N A i n s e r u m b y m o l e c u l a r h y b r i d i z a t i o n : A m o r e s e n s i t i v e m e t h o d for the d e t e c t i o n of c o m p l e t e H B V p a r t i c l e s . J . m e d . V i r o l , 9: 273-280, 1982.
29. Y O S H I D A , C . F . T . ; M E R C A D A N T E , L . A . C ; G A S P A R , A . M. C ; G O M E S , D . F . D . L . & S C H A T Z M A Y R , H . G . — I d e n t i f i c a t i o n of a n e n d e m i c a r e a to H B V ( h e p a t i t i s B v i r u s ) i n f e c t i o n i n a r u r a l p o p u l a t i o n of t h e s o u t h e a s t of B r a z i l . H e p a t i t i s S c i e n t i f i c M e m o r a n d a : 32 34, M a r c h 1986.
30. Y O S H I D A , C . F . T . ; M E R C A D A N T E , L . A . C ; G A S P A R , A . M . C ; M A I A , M. M. S . ; B E R R , O . J . ; A L M E I D A , E . C . C . & S C H A T Z M A Y R , H . G . — A n t i c o r p o s a n t i H B s o b t i d o s e m c o e l h o s e s u a u t i l i z a ç ã o c o m o r e a g e n t e s p a r a t e s t e s s o r o l ó g i c o s n o d i a g n ó s t i c o d a H e p a t i t e B . M e m . I n s t . O s w a l d o C r u z , 79: 329 336, 1984.
31. Y O S H I Z A W A , H . ; I T O H , Y . ; S I M O N E T T I , J . P . ; T A K A H A S H I , T . ; M A C H I D A , A . ; M I Y A K A W A , Y . & M A Y U M I , M. — D e m o n s t r a t i o n of h e p a t i t i s B e a n t i g e n i n h e p a t i t i s B c o r e p a r t i c l e s o b t a i n e d f r o m t h e n u c l e u s of h e p a t o c y t e s i n f e c t e d w i t h h e p a t i t i s B v i r u s . J . g e n . V i r o l . , 4 2 : 513 519, 1979.
