UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS FACULDADE DE ODONTOLOGIA DE PIRACICABA
ISABEL FERREIRA BARBOSA
INFLUÊNCIA DE AGENTES PIGMENTANTES COM ADIÇÃO DE
AÇÚCAR NO CLAREAMENTO DENTAL
INFLUENCE OF PIGMENTING AGENT WITH SUGAR IN DENTAL
BLEACHING
Piracicaba 2019
ISABEL FERREIRA BARBOSA
INFLUÊNCIA DE AGENTES PIGMENTANTES COM ADIÇÃO DE
AÇÚCAR NO CLAREAMENTO DENTAL
INFLUENCE OF PIGMENTING AGENT WITH SUGAR IN DENTAL
BLEACHING
Tese apresentada à Faculdade de Odontologia de Piracicaba da Universidade Estadual de Campinas como parte dos requisitos exigidos para a obtenção do título de Doutora em Clínica Odontológica, na Área de Dentística.
Thesis presented to the Piracicaba Dental School of the University of Campinas in partial fulfillment of the requirements for the degree of Doctor in Clinical Dentistry, in Operative Dentistry area.
Orientador: Prof. Dr. Flavio Henrique Baggio Aguiar ESTE EXEMPLAR CORRESPONDE À VERSÃO FINAL DA TESE DEFENDIDA PELA ALUNA ISABEL FERREIRA BARBOSA, E ORIENTADA PELO PROF. DR. FLAVIO HENRIQUE BAGGIO AGUIAR.
Piracicaba 2019
Ficha catalográfica
Universidade Estadual de Campinas
Biblioteca da Faculdade de Odontologia de Piracicaba Marilene Girello - CRB 8/6159
Barbosa, Isabel Ferreira,
B234i BarInfluência de agentes pigmentantes com adição de açúcar no clareamento dental / Isabel Ferreira Barbosa. – Piracicaba, SP : [s.n.], 2019.
BarOrientador: Flavio Henrique Baggio Aguiar.
BarTese (doutorado) – Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba.
Bar1. Dentes - Clareamento. 2. Dieta. 3. Corantes. 4. Café. 5. Vinho e
vinificação. I. Aguiar, Flavio Henrique Baggio, 1977-. II. Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Odontologia de Piracicaba. III. Título.
Informações para Biblioteca Digital
Título em outro idioma: Influence of pigment solutions with sugar in dental bleaching Palavras-chave em inglês:
Teeth - Bleaching Diet
Coloring agents Coffee
Wine and wine making
Área de concentração: Dentística
Titulação: Doutora em Clínica Odontológica Banca examinadora:
Flavio Henrique Baggio Aguiar [Orientador] Giselle Soares Almeida
Luis Alexandre Maffei Sartini Paulillo Lúcia Trazzi Prieto
Maíra do Prado
Data de defesa: 22-02-2019
Programa de Pós-Graduação: Clínica Odontológica
Identificação e informações acadêmicas do(a) aluno(a)
- ORCID do autor: https://orcid.org/0000-0001-7328-4858
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UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS Faculdade de Odontologia de Piracicaba
A Comissão Julgadora dos trabalhos de Defesa de Tese de Doutorado, em sessão pública realizada em 22 de Fevereiro de 2019, considerou a candidata ISABEL FERREIRA BARBOSA aprovada.
PROF. DR. FLAVIO HENRIQUE BAGGIO AGUIAR
PROFª. DRª. GISELLE SOARES ALMEIDA
PROFª. DRª. MAÍRA DO PRADO
PROF. DR. LUIS ALEXANDRE MAFFEI SARTINI PAULILLO
PROFª. DRª. LÚCIA TRAZZI PRIETO AURELIANO
A Ata da defesa, assinada pelos membros da Comissão Examinadora, consta no SIGA/Sistema de Fluxo de Dissertação/Tese e na Secretaria do Programa da Unidade.
AGRADECIMENTOS
Em primeiro lugar, agradeço a Deus, por me conceder força e me conduzir ao longo desta jornada recompensadora e me proporcionar uma família maravilhosa e amigos amorosos que são insubstituíveis na minha vida;
Agradeço à Faculdade de Odontologia de Piracicaba da Universidade de Campinas, na pessoa do seu diretor, Prof. Dr. Francisco Haiter Neto;
À Coordenadoria de Pós-Graduação da Faculdade de Odontologia Piracicaba da Universidade de Campinas, na pessoa da coordenadora, Profª. Dra Karina Gonzales Silvério Ruiz. À Coordenadoria do curso de Pós-Graduação em Clínica Odontológica da Faculdade de Odontologia Piracicaba da Universidade de Campinas, na pessoa do coordenador, Prof. Dr. Valentim Adelino Barão;
Agradeço aos membros componentes da banca de qualificação, Profª. Drª. Giselle Maria Marchi, ao Prof. Dr. Giancarlo De La Torre Canales e à Profª. Drª. Juliana Públio por toda contribuição que deram a esse trabalho;
Ao meu orientador, Prof. Dr. Flavio Henrique Baggio Aguiar, que na reta final de um ciclo esteve prontamente disposto a assumir mais uma orientada. Assumir esse novo desafio mostra a grandeza e a preocupação que o senhor demanda à sua profissão. Uma simples ligação antes da defesa acalma nosso coração e nos encoraja. Não existem palavras para te agradecer, pois sem sua orientação e apoio seria impossível terminar esse ciclo;
Ao Prof. Dr. Luís Alexandre Maffei Sartini Paulillo, por toda paciência e atenção despendida durante esses anos. Nos momentos que precisei ele estava ao meu lado com palavras amigas, de confiança e força, me mostrando que o caminho poderia ser difícil, mas que era nossa escolha ser feliz. E nos momentos em que eu, com certeza, poderia ter sido melhor, com suas palavras que destroem o coração e nos fazem crescer;
A Profa. Dra. Débora Alves Nunes Leite Lima, seu ensinamento ultrapassou a sala de aula. Seu exemplo e a forma como me abordou para podermos conversar sobre os acontecimentos da vida, me mostraram o exemplo de pessoa que eu desejo ser. A senhora é aquela pessoa que marca nossa vida para sempre. Meu eterno, emocionado e de todo coração muito obrigada;
Aos professores da Área de Dentística, Prof. Dra. Giselle Maria Marchi, Prof. Dr. Luis Roberto Marcondes Martins, Prof. Dr. Marcelo Giannini e Profa. Vanessa Cavalli, pela colaboração em minha formação acadêmica;
A COPPE – UFRJ por ter disponibilizado os equipamentos necessários para a execução dessa pesquisa. Por toda ajuda e paciência do técnico de microscopia de força atômica, Heleno Souza da Silva;
A aluna de graduação, amiga e iniciação científica Nathalia Nery, por toda ajuda laboratorial, inestimável para a realização desse trabalho;
Aos meus professores e colegas de trabalho Gisele Damiana e Paulo Campos, por seu brilhantismo profissional e amor pela arte do ensino que foram chave da inspiração. Aos meus colegas de trabalho na Unigranrio, pelos desafios diários e ensinamentos adquiridos.
Aos alunos da graduação que me ajudaram a crescer como profissional e principalmente que me mostraram uma nova forma de ver o mundo;
Aos meus irmãos de orientação de Doutorado da Pós-Graduação em Clínica Odontológica – Área de Dentística: Erick Kamiya Coppini, obrigada pela ajuda em todos os momentos e por sua eterna disponibilidade e sorriso no rosto. Josué Junior Araujo Pierote, precisaria de algumas páginas para lhe agradecer corretamente, e certamente me esqueceria de algum agradecimento. Portanto só tenho a te dizer: você é um gênio, acredite nisso e corra atrás dos seus sonhos, muito obrigada por tudo;
À Mônica Barnabé, funcionária da área de Dentística, por todos os serviços e pela amizade, pelo abraço amigo e pelas palavras de apoio, sempre disposta a ajudar. Que mesmo aposentada me ajudou por e-mail, whatsapp e como ela mesma disse: “fui até a FOP só por você”. Pode ter certeza que isso nunca será esquecido;
Aos meus pais, Paulo e Fátima, e meu irmão Pedro, por serem as maiores bênçãos da minha vida. Por terem me apoiado nas maiores decisões da minha vida, por terem sido pacientes e por terem me cobrado o retorno a dedicação ao esforço. Vocês são o principal motivo dos meus esforços, pois fazê-los felizes e orgulhosos, foi o que me fez ter forças de concluir mais essa jornada acadêmica. Amo vocês;
Ao meu futuro marido, Tiago Andrade, por me mostrar novos horizontes, me explicar as broncas do meu orientador, por sempre acalmar meu coração, por acreditar em mim muitas vezes mais que eu mesma. Obrigada por toda ajuda com essa tese, por todo tempo que você ficou assistindo seriado sozinho, pela água de coco, pelo pote de sorvete, por encontar os erros, pelos layouts e formatações. Obrigada por entrar na minha vida e me ensinar a não sofrer por antecedência, ou pelo menos tentar. A me mostrar que tudo tem jeito e que sonhos podem sim se tornar realidade;
Agradeço aos meus amigos de sempre, Liene Barros e Michelle Zappa vocês estão desde o começo comigo e participaram de cada vitória, cada conquista, riram e choraram
comigo, me deram força e conselhos, obrigada por saber que a qualquer momento eu tenho vocês;
Um agradecimento especial a minha amiga Lívia Menezes, obrigada por toda sua ajuda na execução desse trabalho, por ter mudado minha vida e por estar sempre ao meu lado mesmo longe;
A minha amiga, quase irmã, Paola Freitas, desde quando comecei a estudar para passar na prova do mestrado sua disponibilidade e competência me ajudaram a conquistar meus objetivos. Na vida pessoal existem vários motivos para te agradecer, mas no meio do desespero de estudar para a prova do doutorado encontrar seus recados no meu caderno e os artigos traduzidos para facilitar meus estudos não tem preço;
Aos amigos que fiz na pós-graduação, Guilherme Henrique, Erika Clavijo, Mariana Flor, Victor Muñoz e Marília Zeczkowski, pelo companheirismo e amizade. Amigos da faculdade para a vida;
O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior – Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001
Agradeço a todos que direta ou indiretamente me auxiliaram e tornaram este projeto em uma realidade, muito obrigada.
RESUMO
O objetivo desse estudo foi avaliar, in vitro, o potencial de pigmentação dental de bebidas com corantes, com ou sem adição de açúcar, no tratamento clareador em relação à percepção visual de mudança de cor, rugosidade superficial e composição do esmalte. Foram utilizados setenta e dois incisivos bovinos hígidos divididos de forma randomizada em 12 grupos experimentais formados pela interação dos fatores, técnica de clareamento: clareamento caseiro (Ca) e clareamento de consultório (Co), e soluções: água deionizada sem açúcar (AS), água deionizada com açúcar (AC), vinho tinto sem açúcar (VS), vinho tinto com açúcar (VC), café sem açúcar (CS) e café com açúcar (CC). Para obtenção das amostras a coroa foi separada da raiz à 1mm da junção cemento-esmalte e um segundo corte realizado no sentido mesio-distal na altura da câmera pulpar. As amostras foram armazenadas em saliva artificial, em estufa com temperatura de 37°C. O clareamento caseiro foi realizado com peróxido de carbamida 10% por 30 dias consecutivos, permanecendo em contato com a superfície em esmalte por 2 horas/dia, conforme recomendação do fabricante. Para a técnica de clareamento de consultório foi selecionado o gel de peroxido de hidrogênio 37,5% que permaneceu em contato com a superfície do esmalte por 24 mintutos distrubuidos em 3 aplicações de 8 minutos cada, foram realizadas um total de 3 sessões de tratamento, com intervalo de 7 dias entre cada sessão. As superfícies vestibulares das amostras foram submetidas diariarmente as soluções teste durante 45 minutos, em seguida foram enxaguadas com água destilada por 5 minutos e armazenadas novamente em saliva artificial até a próxima sessão de clareamento ou manchamento. A análise de cor do esmalte foi realizada de forma objetiva, através da utilização de espectrofotômetro e a variação de cor após o clareamento foi determinada através dos parâmetros variação de cor (ΔE) e variação de luminosidade (ΔL). A análise de rugosidade foi realizada por microscopia de força atômica (MFA) e por microscopia eletrônica de varredura (MEV). A composição do esmalte foi determinada por espectrometria de energia dispersiva de raios-X (EDS). Os resultados foram submetidos à analise de variância (ANOVA) um fator para ΔE e ΔL e dois fatores para MFA e EDS. Para ΔE e ΔL não houve diferença estatistica significativa entre os grupos testados. A MFA apresentou diferença estatística nos fatores solução corante, técnica clareadora e sua interação, corroborando com as imagens encontradas em MEV. Foi observado aumento da rugosidade na superficie do esmalte quando exposto a solução de água com açúcar para o clareamento caseiro e os outros resultados mostram que a rugosidade é dependente da interação técnica de clareamento e solução. Na composição do esmalte dental observou-se menor concentração de
Ca e P na análise por EDS na presença de açúcar na solução de água deionizada. Apesar das limitações decorrentes de um estudo in vitro, podemos concluir que o resultado do clareamento dental independe da concentração do gel clareador. O contato de soluções contendo ou não açúcar não influenciaram no potencial de clareamento, porém a presença do açúcar na solução de água deionizada aumentou a rugosidade superficial do esmalte para o peróxido de carbamida 10% e diminui a concentração de Ca e P no esmalte.
ABSTRACT
The objective of this study was to evaluate, in vitro, the potential of dental pigmentation of beverages with dyes, with or without added sugar, in the bleaching treatment in relation to the visual perception of color change, surface roughness and enamel composition. Seventy-two bovine incisors bovine incisors, recently extracted, free of caries, crack or any enamel defects, were randomly divided into 12 experimental groups formed by the interaction of factors, whitening technique: at-home bleaching (Ca) and in-office bleaching (Co), and solutions: deionized water without sugar (AS), deionized water with sugar (AC), red wine without sugar (VS), red wine with sugar (VC), coffee without sugar (CS) and coffee with sugar (CC). To obtain the samples the crown was separated from the root at 1 mm from the cement-enamel junction and a second cut performed in the distal mesium direction at the height of the pulp chamber. The samples were stored in artificial saliva in an oven with a temperature of 37 ° C. At-home bleaching was performed with 10% carbamide peroxide for 30 consecutive days, remaining in contact with the enamel surface for 2 hours/day, according to the manufacturer's recommendation. For the in-office bleaching technique, 37.5% hydrogen peroxide gel was used, which remained in contact with the enamel surface for 24 minutes in 3 applications of 8 minutes each. A total of 3 treatment sessions were performed, with interval of 7 days between each session. The vestibular surfaces of the samples were subjected daily to the test solutions for 45 minutes, then rinsed with distilled water for 5 minutes and stored again in artificial saliva until the next bleaching or staining session. The enamel color analysis was performed in an objective way, through the use of spectrophotometer and the color variation after bleaching was determined through the parameters color variation (ΔE) and variation of luminosity (ΔL). The roughness analysis was performed by atomic force microscopy (MFA) and by scanning electron microscopy (SEM). The enamel composition was determined by X-ray dispersive energy spectrometry (EDS). The results were submitted to analysis of variance (ANOVA) one factor for ΔE and ΔL and two factors for MFA and EDS. For ΔE and ΔL there was no statistically significant difference between the groups tested. The MFA presented a statistical difference in the factors dye solution, bleaching technique and its interaction, corroborating with the images found in SEM. Increased surface roughness of the enamel was observed when water solution with sugar was exposed for home bleaching and other results show that the roughness is dependent on the technical interaction of whitening and solution. In the composition of dental enamel was observed lower concentration of Ca and P in the analysis by EDS in the presence of sugar in the solution of deionized water. Despite the
limitations of an in vitro study, we can conclude that the result of tooth whitening is independent of the whitening gel concentration. The presence of sugar in the solution of deionized water increased the surface roughness of the enamel to 10% carbamide peroxide and decreased the concentration of Ca and P in the enamel.
SUMÁRIO
1 INTRODUÇÃO 13
2 ARTIGO: INFLUENCE OF SOLUTIONS WITH SUGAR IN DENTAL
BLEACHING 15
3 CONCLUSÃO 30
REFERÊNCIAS 31
APÊNDICE 1: METODOLOGIA ILUSTRADA 35
ANEXOS
ANEXO 1: VERIFICAÇÃO DE ORIGINALIDADE E PREVENÇÃO DE
PLÁGIO 48
1 INTRODUÇÃO
Os tratamentos estéticos ocupam um lugar importante dentro da área odontológica, porque possuem influência direta na autoestima e na vida pessoal e profissional dos pacientes (CASADO, 2018, OLIVEIRA, 2018). Dentre esses procedimentos estéticos, o clareamento dental é um tratamento eficaz e previsível (GRAZIOLI, 2018, LEE, 2018).
O planejamento para um tratamento clareador bem-sucedido depende de um correto diagnóstico da razão da alteração de cor (MOREIRA, 2016), que pode ser produzida por fatores intrínsecos ou extrínsecos. O escurecimento intrínseco é causado por doenças genéticas, patologias fetais ou adquiridas pós-natal, sendo pigmentos integrados a estrutura mineral do esmalte e/ou dentina durante o desenvolvimento dental, portanto, difíceis de serem removidas (GOLDBERG et al., 2010). Além disso, os dentes podem ter sua coloração alterada no processo de envelhecimento, devido à associação de menor espessura de esmalte e uma dentina mais escura/opaca (KIHN, 2007). Por outro lado, fatores extrínsecos estão relacionados a comidas, bebidas ou hábitos que contenham pigmentos, como tabaco, medicações, exposição a sais metálicos, clorexidina e outros (WATTS e ADDY, 2001; KIHN, 2007; CANEPPELE., 2009).
A pigmentação extrínseca de dentes por agentes corantes como chá, vinho tinto, cacau, café, uva, açaí, cravo, canela, entre outros, são o resultado da deposição de taninos na superfície do dente (KARADAS & SEVEN, 2014). Essa alteração de cor pode ser explicada pelo fato de que normalmente os agentes pigmentantes ficam na película adquirida da saliva e ocorrem devido a adesão de cromógenos à depósitos da superfície dental como a película ou biofilme (HATTAB, 1999; SHEEN., 2001; WATTS e ADDY, 2001). A permeabilidade do esmalte permite trocas iônicas entre o dente e a saliva, o que facilita a entrada de íons e substâncias com baixo peso molecular na estrutura dental. Junto à essas substâncias podem advir pigmentos encontrados nos alimentos e bebidas (HEGEDEUS, 1999; GÖKAY, 2000) que penetram no esmalte e na dentina (GARBEROGLIO, 1974; SULIEMAN, 2003), causando alteração na coloração natural do dente, sendo de difícil remoção mecânica (VISCIO, 2000; AZRAK, 2010).
A forma de remoção desses pigmentos seria pela técnica clareadora, que contém como componente ativo, o peróxido de hidrogênio (H2O2) ou seu precursor, o peróxido de
carbamida, em diferentes concentrações (ABOUASSI, 2011; ALQAHTANI, 2014). Os agentes clareadores são oxidantes com concentrações entre 3% e 40%, que se dissocia em
radicais livres de oxigênio, penetram no esmalte dentário e eliminam as substâncias corantes (RODRIGUES, 2017). Estes agentes clareadores, muitas vezes de natureza ácida, podem dissolver o conteúdo mineral do esmalte, levando à perda de cálcio e fosfato, o que resulta em um cristal de hidroxiapatita de tamanho reduzido e espaços intercristalinos aumentados dentro do esmalte (OLIVEIRA, 2018).
Embora o clareamento dentário seja considerado um tratamento não invasivo, o efeito oxidativo não específico pode comprometer a morfologia da estrutura dentária, causando aumento da rugosidade superficial do esmalte (RODRIGUES, 2017). Nesta condição, o esmalte se torna mais suscetível à penetração de substâncias corantes (MORI, 2015, PÚBLIO, 2013; MONTEIRO., 2017) e, clinicamente, há um aumento significativo da retenção de biofilme (RODRIGUES, 2017). A fim de evitar esse efeito adverso, os pacientes são aconselhados a manter, durante o tratamento clareador, uma dieta livre de pigmentos ou a reduzir a ingestão de comidas como frutas escuras e alimentos com corantes (KARADAS e SEVEN, 2014; MATIS., 2015).
Somado a isso, bebidas ácidas, como café e vinho tinto, promovem maior escurecimento dental devido ao baixo valor do pH, (LIPORONI, 2010 e AZER, 2010) no entanto, há estudos que indicam que o potencial de pigmentação também está relacionado aos diferentes tipos de corantes e o tempo de exposição com na superfície dental (ATTIN, 2003; ATTIA, 2009). Além disso, o manchamento dos dentes pode estar relacionado com a presença de açúcar nas bebidas corantes (AZER, 2010; TÉO, 2010).
Alterações morfológicas na estrutura dentária podem estar associadas à desmineralização do esmalte por causa do baixo pH (RODRIGUES, 2017). Sabe-se que o esmalte quando exposto a soluções com pH abaixo de 5,5 desmineraliza (RODRIGUES,2017), aumentando os efeitos adversos do clareamento.
Devido a isso, a rugosidade superficial do esmalte pode estar diretamente ligada ao processo oxidativo do agente clareador e também pode estar relacionado à subtâncias encontradas na dieta. Assim, há o questionamento se a adição de açúcar aos alimentos com corantes pode influenciar seu potencial de pigmentação dental durante o tratamento clareador com relação à percepção visual de mudança de cor, somado a isso, também permanecem dúvidas se as composições das soluções corantes podem influenciar a rugosidade superficial e a composição do esmalte.
2 ARTIGO: INFLUENCE OF SOLUTIONS WITH SUGAR IN DENTAL
BLEACHING
Artigo submetido ao periódico Brazilian Oral Research (Anexo 2)
Autoria: Isabel Ferreira Barbosa
Josué Junior Araujo Pierote
Lívia Rodrigues Menezes
Paola Ferreira de Freitas
Luís Alexandre Maffei Sartini Paulillo
Flavio Henrique Baggio Aguiar
Abstract
Solutions with and without sugar could interfere in dental bleaching treatment considering color change, superficial roughness and enamel composition. This, in vitro, study with bovine incisives evaluated the interaction of bleaching technique: At-home, In-office, and solutions: deionized water with and without sugar, red wine with and without sugar, coffee with and without sugar. The samples were stored in artificial saliva, in a greenhouse with temperature of 37C. Bleaching as manufactures instructions, for 30 days. The vestibular surface of each sample was submerged, 45min daily, in the solutions according to each experimental group. The analyses of enamel color variation (ΔE) and variation of luminosity (ΔL) (n=6) was performed with spectrophotometer. Roughness analyses was done by atomic force microscopy (MFA) (n=4) and by scanning electron microscopy (SEM) (n=2). The enamel composition was determined by dispersive X-ray energy spectrometry (EDS) (n=2). The findings were submitted to variance analysis (ANOVA) 1 or 2 criteria. For ΔE and ΔL there was no statistical difference between the studied groups. The AFM presented statistical difference for the solution factors, bleaching technique and its interaction, corroborating with the images obtained in SEM. At EDS was observed lower concentration of Ca and P in deionized water with sugar. Despite the limitations of the study, we can conclude that the result of tooth whitening is independent of the whitening gel concentration. The presence of sugar in deionized water increased the surface roughness of the enamel to 10% carbamide peroxide and decreased the concentration of Ca and P in the enamel.
Introduction
The aesthetic treatments play a very important role in dentistry, due to its direct influence in self-esteem along with personal and professional lives of the patients1,2. From the aesthetic procedures, dental bleaching has proven to be effective and predictable treatment3,4.
Extrinsic pigmentation by coloring agente like tea, red wine, cocoa, coffee, grape, acai, cinnamon, clove, among others, are the result of tanini deposit on the dental surface5. The color alterations are due to chromogens adhesion on the dental surface through the biofilm or acquired film6,7. Another explanation to the pigment deposit on the dental surface is due to binding of tanini or other polyphenols to the hidroxiapatite components of the enamel, this binding can be accentuated by salivary proteins8.
The permeability of the enamel allows for ionic transfers between teeth and saliva, facilitating the entrance of ions and low molecular weight substances, it may occur from the pigments found in beverages and foods9,10 that penetrate enamel and dentin11,12 causing alterations in the natural color of the tooth, making it hard for manual removal13,14.
The bleaching material are oxidants agents, usually composed of hydrogen peroxide with concentrations of 3% and 40% that penetrate the tooth enamel and eliminate the pigments15. These bleaching agents generally from acid nature, may dissolve the mineral content of the enamel, leading to calcium and phosphate loss, that results in smaller sized hidroxiapatite cristals and bigger intercrystalline gaps15. Though dental bleaching is not considered an invasive treatment, the not specified oxidative effect may compromise the dental morphological structure, causing superficial rugosity15. Taking this into consideration the enamel becomes more susceptible to the coloring agents16,17,18 and therefore clinically increasing significantly the biofilm retention15.
In order to avoid this side effect, patients are advised to maintain, during the bleaching treatment, a diet free pigment or to reduce the intake of dark colored fruits and food containing pigments, and even more, beverages like coffee, tea, cola sodas and wine5,19. On the other hand, studies by Attin et al., 200320; Correa et al., 201221 say that these foods and beverages during the bleaching does not interfere in its final result.
Beyond the commonly known pigmentating agents, there are other substances found in the dietary intake that may increase the pigmentating potential of the food22,23. Among them is sugar, that when added to beverages, make up for an acid way. In this manner, morphological alterations in dental structure may be associated to the demineralization of the enamel due to low pH15. It is known that when the enamel is exposed to solutions with pH5.5, it begins to dissolve15, increasing the bleaching side effects.
Moreover, the superficial enamel roughness is directly linked to the oxidating process of the bleaching agent and may also be related to substances found in the diet. There has not been scientific proof of the results of sugar addition in pigmented beverages as to how it can influence the bleaching results as to the visual perception of color change, superficial roughness and enamel composition.
The goal of this study was to evaluate, in vitro, the influence of pigmented beverages containing or not sugar among the bleaching treatment. The hypothesis of the study was:
1) The bleaching gel concentration does not interfere with the quality of the treatment in the presence of pigmented beverages containing or not sugar;
2) The presence of pigmented beverages containing or not sugar, reduce the efficacy of the bleaching gels during the bleaching treatment;
3) The presence of sugar in pigmented beverages will increase enamel superficial roughness;
4) The presence of sugar will alter the composition of the bleached enamel.
Materials and Methods
Seventy-two sound bovine incisor (Frigorífeco Mondelli, Indústria de Alimentos S/A, Santa Teresa, Bauru, SP) which were devoid of stain, enamel cracks or fractures were selected and stored in 0,1% thymol solution (UFRJ – CCMN – Department of Biochemistry, Rio de Janeiro, Brazil), pH 7,0 at a temperature of 4 °C.
The crown was separated from the root using a double-sided diamond disk (KG Sorensen, Ind. Com. Ltda, Barueri, SP, Brazil) on a low-speed handpiece under constant irrigation at 1mm from the cement- enamel junction. To obtain the samples, the coronary portion of the bovine incisor crown was sectioned mesiodistally at the height of the pulp chamber, sectioning the buccal portion of the lingual. This cut was performed by Diamond Cutting Disc (Extec Dia. Wafer Blade 102 x 0.3 x 12.7mm) coupled in a Metallographic Cutter (Isomet 1000, Buehler Ltda. Lake Buff, IL, USA).
The vestibular surfaces of the samples were polished sequentially, in order of decreasing granulation, with silicon carbide (Carborundum / 3M from Brazil Ltda., Sumaré, SP, Brazil), from granulations # 400, # 600 and # 1200 in a polystyrene (Arotec Ind. Com., Cotia, SP, Brazil) in constant cooling with water. Polishing was carried out with felts and diamond pastes of 1 цm, 1/4 цm (Arotec). Between each of the planning and polishing steps, the samples were cleaned in ultrasonic tub for 15 minutes (Ultracleaner 1450A / Unique - Marconi).
After polishing, the dental fragments were randomly divided into 12 experimental groups formed by the interaction of the factors, whitening technique: at-home bleaching (Ca) and in-office bleaching (Co), and solutions: water without sugar (AS), water with sugar (AC), red wine without sugar (VS), red wine with sugar (VC), coffee without sugar (CS) and coffee with sugar (CC).
Bleaching Protocols
For at-home bleaching procedure, 10% carbamide peroxide (Polanight 10% - SDI) was applied to the surface of the enamel for 30 consecutive days, remaining in contact with this surface for 2 hours daily, according to the manufacturer's recommendation. The in-office bleaching technique, the 37.5% hydrogen peroxide gel (Polaoffice + - SDI) remained in contact with the enamel for 3 applications of 8 minutes each, in a total of 3 treatment sessions, with a 7-day interval between each session. During the sessions, the specimens remained exposed at room temperature. The removal from the gel was performed with flexible plastic swabs with cotton at its ends (Swabs - Johnson & Johnson, Brazil), and then the specimens were washed thoroughly with tap water and dried with absorbent paper (Kleenex-Kimberly-Clark, Brazil).
Solutions Protocols
Six solutions were used: deionized distilled water, deionized distilled water with sugar (the supernatant of 50 mL of deionized distilled water saturated with sugar was used), red wine with sugar (soft red wine - Pergola Tinto Suave Seleção), red wine without sugar (dry red wine - Almadén Carbernet - Safra 2016), coffee without sugar and coffee with sugar, 10 grams of crystal sugar (Cristalçúcar União) for every 300 mL. For the preparation of the coffee solution, 3.6 grams of the soluble coffee (Nescafé Clássico - Nestlé) and 10 grams of crystal sugar (Cristalçúcar União) were diluted in 300 mL of boiling distilled water, according to the manufacturer's recommendation, and stirred for 10 minutes with a spoon.
The addition of sugar was performed mechanically for the coffee and water solutions. The red wine has the incorporation of sugar during its manufacture, the dry one contains up to 5 grams of sugar per liter, corresponding to the sugar of the own fruit. Soft wine has a concentration above 20 grams per liter, established by Decree n. 99,066 / 1990 - Regulates Law No. 7,678, of November 8, 1988, which regulates the production, circulation and marketing of wine and wine and grape derivatives in Brazil, and their addition is necessary during production.
The enamel vestibular surface of each dental fragment was immersed for 45 minutes a day in the test solutions, then the samples were rinsed with distilled water for 5 minutes and
stored again in artificial saliva until the next bleaching or staining session, saliva was replaced daily to maintain its properties. The immersion time was made based on the daily consumption of coffee. According to the manufacturers, the average time of consumption of a cup of coffee is 15 minutes, and among coffee drinkers, the average amount of daily consumption is 3.2 cups16.
Color Analysis
Performed on the enamel at two different times: initial before bleaching (t0) and final one week after the last bleaching session (tf) (n=6). To perform the color readings, the bovine teeth were placed in an addition silicone mold to standardize the positioning of the Vita Easyshade® Advance 4.0 spectrophotometer (VITA Zahnfabrik H. RauterGmbH & Co, Bad Säckingen, Germany) previously calibrated according to the manufacturer's recommendations.
The shade was determined using the parameters of the Easyshade device, which indicated the following values: L*, (a*) and (b*). L* represents a value from 0 (black) to 100 (white), and (a*) and (b*) represent the shade where a* is the measurement along the red–green axis and b* is the measurement along the yellow–blue axis. The color comparison before and after the weeks of treatment was determined by the differences between the two colors (ΔE), which was calculated using the formula: ΔE = [(ΔL*)2+(Δa*)2+(Δb*)2]1/2.
Atomic Force Microscopy (MFA)
After the trataments 4 dental fragment (n=4) were submitted for analysis of the roughness. Topographic images in size of 10 µm x 10 µm were obtained through the profile coupled to the atomic force microscope (JPK Instruments, Bruker) operating in an intermittent mode, with a constant of 5 N/m and a length of 225µm with a resonance frequency of 160kHz. The image processing was performed by Gwyddion software (Gwyddion 2.29, GNU General Public License).
Scanning electron microscope (SEM)
Two dental fragment from each group (n=2) was prepared for the SEM test. To determine the area to be analyzed, adhesive tape was used to cover the incisal and cervical third of the sample, leaving only the middle third visible. Semples were fixed on stubs, and sputter-coated with gold (SCD 005, Balti Tec, Balzers, Liechtenstein). Surface morphology analysis was performed on a high vacuum scanning electron microscope (Quanta 250, FEI Company). All samples were evaluated at 500x, 1000x and 2000x increase.
The same samples from SEM was used (n=2). The EDS point analysis (Quanta 250, FEI Company) was performed on the enamel surface to determine the elemental presence of Na, Mg, Al, Si, P and Ca and the elemental levels (% by weight) of Ca, Na and P. For each sample, five points were randomly selected, and mean values were calculated.
Statistica Analysis
The data was analyzed by Shapiro- Wilk test and the normal distribution was confirmed. Then, the data from Color Variation (ΔE) and Luminosity Variation (ΔL), was analyzed by one-way ANOVA. For Roughness (MFA) and EDS, was analyzed by two-way ANOVA and Tukey’s test using SAS Estat 9.3. (Cary, North Carolina, USA). The significance level was set at p≤0.05.
Results
Table 1: Statistical results for the enamel color variation test - ΔE and ΔL.
Group N ΔE Mean (SD) ΔL Mean (SD) ACCo 6 8,8 (4,7) a -3,9 (1,95) b ACCa 6 20,0 (4,7) a 3,3 (10,3) b ASCo 6 18,9 (2,4) a -3,1 (6,4) b ASCa 6 12,3 (2,0) a 1,7 (6,4) b CCCo 6 17,2 (1,6) a -7,9 (10,2) b CCCa 6 17,2 (7,4) a -1,9 (15,5) b CSCo 6 11,14 (1,87) a -3,8 (3,2) b CSCa 6 22,9 (9,2) a -2,3 (6,7) b VCCo 6 18,7 (1,6) a -6,9 (4,8) b VCCa 6 10,5 (3,8) a 0,0 (4,7) b VSCo 6 12,0 (4,4) a -2,5 (3,1) b VSCa 6 24,6 (4,8) a 11,4 (9,9) b
Different lower letters in the columns represent significant statistical difference (p <0.05).
The result for the statistical analysis of color variation (ΔE) and luminosity variation (ΔL) in enamel did not show significant statistical difference at the 5% probability level (p> 0.09123 and p> 0.08761 respectively) and the result of this analysis is shown in Table 1.
Statistical analysis for atomic force roughness used the Ra measure and the two way Anova result showed the F value equal to 5.81, which is significant at the 5% probability level. There was a statistically significant difference between the solution (p <0.0003), bleaching technique (p <0.0444) and interaction (p <0.0001). Thus, the Tukey test for multiple comparisons was applied for the interaction and the result of this analysis is presented in Table 2.
Table 2: Statistical result for the Roughness (Ra)
Group N In-Office Mean (SD) At-home Mean (SD) AC 5 5,585(2) aA 90,143(1) aB AS 5 10,014(4) aA 4,700(3) bA CC 5 9,590(6) aA 37,042(5) abA CS 5 66,362(8) bA 39,698(7) abA VC 5 43,298(10) abA 49,440(9) abA VS 5 32,456(12) abA 21,730(11) bA
Different lower letters in the columns represent significant statistical difference (p <0.05). Different capital letters on the line represent significant statistical difference (p <0.05)
Comparing the solutions in each bleaching technique, it can be observed for in-office bleaching that the highest roughness average was presented by coffee without sugar (66,362), which presented a statistically significant difference for coffee with sugar and water without and with sugar. For at-home bleaching, the highest roughness average was presented by water with sugar (90,143), which presented a statistically significant difference for water without sugar and wine without sugar, but did not present a statistically significant difference for the other solutions. This result shows that the roughness is dependent on the interaction of bleaching technical and solution. On the other hand, when comparing the behavior of the
same solution in the two techniques tested it is observed that only water with sugar solution showed a statistically significant difference between the two techniques of bleaching.
SEM analysis revealed increased roughness or irregularities in the enamel topography in relation to the presence of sugar in the deionized water associated with the in-office bleaching agent. Figure 1B shows a larger exposure of the enamel prisms to the solution in water with sugar when compared to the solution of water without sugar (Figure 1A).
Figure 1: Scanning Electron Microscopy image in 1000x magnification 1A) Water without sugar home bleaching; 1B) Water with sugar home bleaching
The statistical analysis for EDS was done separately for the chemical elements Calcium (Ca), Phosphorus (P) and Oxygen (O2). Results for the EDS for Ca showed the F value equal
to 26.54, significant at the 5% probability level (p <0.0015). However, when analyzing the factors and their interaction, the two-way ANOVA showed that only the solutions factor presented a statistical difference between the groups (p <0.0003) and the result of this analysis is presented in Table 3.
The result of the EDS for P showed the F value equal to 7.86, significant at the 5% probability level (p <0.0006). However, when analyzing the factors and their interaction, the two way-Anova result showed that only the solutions factor presented statistical difference between the groups (p <0.0001) and the result of this analysis is presented in Table 3. Result for the O2 EDS showed the F value equal to 1.67, not significant at the 5% probability level (p
Table 3: Statistical result of EDS for the chemical elements Calcium, Phosphorus and Oxygen
Ca P O2
Solution N Mean (SD) N Mean (SD) N Mean (SD)
AC 4 5,213(2,809) b 4 5,675(2,600) b 4 48,203(0,384) a AS 4 21,455(7,160) a 4 17,823(1,004) a 4 40,825(0,384) a CC 4 21,808(4,228) a 4 15,335(3,462) a 4 40,860(7,660) a CS 4 23,575(6,366) a 4 16,168(1,875) a 4 41,505(5,239) a VC 4 25,120(1,511) a 4 15,960(1,306) a 4 40,370(2,774) a VS 4 31,710(11,704) a 4 17,580(3,410) a 4 41,525(9,234) a Different lower letters in the columns represent significant statistical difference (p <0.05).
For Calcium and Phosphorus, the lowest mean was presented by the sugar water solution, which presented statistical difference of the other studied solutions, which did not show any difference between them. In the presence of water and sugar, there was a greater loss of these minerals. For Oxygen, there was no statistical difference between the solutions.
Discussion
The results of color variation (ΔE) and luminosity variation (ΔL) of this study, show that the studied solutions did not interfere with the bleaching gels actions independently of its concentration and the presence of sugar.
The first hypothesis this study was that the bleaching gel concentration did not interfere with the quality of the treatment despite the presence of pigmented beverages, with or without sugar, this hypothesis was sustained, once there was no statistical significance among the tested groups. When the ΔE is superior to 3.3, it is considered a difference to the naked eye and by untrained people. When between 3.3 and 1, it will be considered an acceptable clinical difference and noted by trained eyes, and when ΔE is lower than 1, the difference was not noted by the naked eye24. The results shown on table 1, indicate that the means of ΔE were higher than 3.3, therefore there was a color alteration seen by the naked eye24 showing that it does not depend of the clinical technique and the solution with which the teeth were bleached.
The second hypothesis is that pigmented beverages with or without sugar reduced the efficacy of the bleaching gels during the treatment, and accordingly with the results it was declined. Once there was no statistical difference between the studied groups considering color and luminosity alteration, as shown in Table 1.
Beverages such as coffee and red wine do tend to cause dental pigmentation due to the substances found in them, the polyphenols that may permeate the dental tissue extrinsically pigmenting the dental enamel25. The pigmentation potential of this compounds is related to several factors that include pH of the food and length of exposure of the tooth to these factors16,26,27. Although the pigmentation agents have flavonoids, compounds of low molecular weight, the tanini, that present a higher potential for pigmentation, have high molecular weight28, and this would explain the difficulty to penetrate the dental substrate within the time of the study.
As to beverages containing sugar, it was no observed the increase of the pigmentation potential. This behavior was not expected since sugar lowers the pH of the solution and therefore causing tooth morphological structure changes that could increase the pigmentation capacity15,23. The result may be consequence of a possible interaction between tanini with sugar, and this could limit the diffusion capacity along dental tissue, corroborating with another study that did not show the increase in pigmentation in face of sugar addition29.
The third tested hypothesis was that the presence of pigmented beverages containing sugar would increase superfial enamel rugosity, and it was proven, once there was statistical significance in the interaction of the bleaching agent and the solution.
Taking into consideration the results the rugosity of enamel surface was observed a higher rugosity on the surface of the enamel exposed to in-home bleaching when compared to in-office in the presence of deionized water containing sugar, both in the atomic force microscopy as the SEM, as seen in table 2 and in figure 1. The importance of the exposure frequency to sucrose in demineralization was demonstrated experimentally30,31, and is related to the dissolution of the minerals in an acid way.
When evaluating pH of the deionized water without sugar, it was found a value of 7.0 meaning a neutral pH; however, in the same analyses for distilled deionized water with sugar the pH was 5.5. It is believed that the demineralization process that occurs due to bleaching may be intensified by the presence of sugar and therefore the bleaching gel concentration has a lower influence when in the presence of sugar. This way, the dental surface rugosity may be linked to numerous factors and not only gel composition. According to Cvikl et al.32
Bleaching gels with longer exposure to the dental element have a negatice impact for the superficial rugosity.
It has been demonstrated that the side effects of the bleachers on the enamel may depend upon the type of bleaching agent or the hydrogen peroxide concentration or the length of bleaching treatment33. In the presente study, both the in-home and in-office bleaching did not result in a significant increase in enamel rugosity. The evidence shown here plays along with the one obtained by Mushashe et al., where the authors tested bleaching with 35% hydrogen peroxide and 10% carbamide peroxide, that also results in an insignificant effect on the microstrengh of the enamel surface.
The obtained results for the solutions in each bleaching technique show that rugosity is dependent upon the interaction of the technique and solution. It has to be considered that because the solutions were different there was a difference in the composition that could mask the effect of the sugar within this group for better elucidation of this hypothesis it is necessary the characterization of solutions by spectroscopy techniques aiming to stablish the composition of each one.
The fourth analyzed hypothesis was that the presence of sugar would alter the composition of the bleached enamel, and it was proven. Even though the solutions containing sugar not having statistical difference among the other groups, the water with sugar group presented a lower concentration of calcium and phosphorus.
As previously mentioned, sucrose acts in the dental demineralization process30,31 and therefore is strictly related with calcium and phosphorus reduction. Moreover, its presence in the pigmentation agents and water influenced on composition of the tooth enamel only on the watery solution. One hypothesis for this behavior is the difference of sugar dilution found in each solution.
In soft wine the incorporation is made industrially and by this in a more homogenous way. Coffee, its high temperature, makes it possible for a better sugar dilution which in its crystallized way has a higher difficulty of dissolution due to a smaller surface area when compared to coffee powder of fine granulometry of refined sugar. Considering this, sugar may have interacted with coffee and wine components, not having free sucrose to interact with the enamel. However, in the water with sugar solution, there was free sucrose to interact with the enamel allowing the loss of calcium and phosphorus to the mean. Meaning that the sugar difference concentration in each solution generates different sucrose free chemical potentials and therefore with different calcium and phosphorus reactions with the enamel.
Despite de limitations due to the in vitro study, we can infer:
- The immersion of the dental fragments in pigmented solutions containing or not sugar, did not interfere on the bleaching gels action despite its concentration
- The presence of sugar in the deionized water increased the enamel superficial rugosity to the carbamide peroxide 10%
- The presence of sugar in the deionized water reduced the concentration of calcium and phosphorus on the enamel for the deionized water solution.
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3 CONCLUSÃO
Independente da concentração dos géis clareadores, a imersão de fragmentos dentais em soluções com e sem adição de açúcar não influênciou a ação dos géis clareadores no clareamento dental caseiro ou em consultório. A presença de açúcar na solução de água deionizada aumentou a rugosidade superficial do esmalte para o clareamento caseiro e diminuiu a concentração de Ca e P no esmalte. Portanto, difeferenças no potencial químico da sacarose livre na solução associado ao agente clareador a base de peróxido de carbamida pode influenciar na rugosidade superficial e na composição de Ca e P do esmalte.
* De acordo com as normas da UNICAMP/FOP, baseadas na padronização do International Committee of Medical Journal Editors - Vancouver Group. Abreviatura dos periódicos em conformidade com o PubMed.
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APÊNDICE 1 – METODOLOGIA ILUSTRADA
Para a realização dessa pesquisa foram utilizados os materiais listados na tabela.
Tabela 1: Materiais utilizados na pesquisa
MARCA COMERCIAL COMPOSIÇÃO FABRICANTE
Saliva Artificial 1,5 mmol/L – Cálcio 0,9 mmol/L – Fósforo 150 mmol/L - Cloreto de Potássio 0,1 mol/L (100mmol) – Tris pH: 7,0 Farmácia de manipulação - UFRJ Nescafé Clássico Café solúvel Grãos de café Água Nestle, Switzerland
Cristalçúcar União Açúcar cristal
Camil Alimentos S/A - Zona
Industrial Sertãozinho -
SP - Brasil
Vinho Almadén Cabernet - Safra 2016 Fermentado de uvas Conservantes Miolo Wine Group Vintivinucultura LTDA - Bento Gonçalves - RS - Brasil
Vinho Pérgola Tinto Suave Seleção Fermentado de uvas Açúcar Conservadores Vinícula Campestre Ltda – Campestre da
Serra – RS - Brasil Polaoffice+ Peróxido de Hidrogênio 37,5% Nitrato de Potassio SDI Limited – Bayswwatwer – Victoria - Australia
Polanight Peróxido de carbamida
10%
SDI Limited – Bayswwatwer –
Victoria - Australia
Estudo in vitro cego randomizado
Unidades experimentais: 72 dentes bovinos
Fatores em estudo: Agente clareador em 2 níveis: Peróxido de hidrogênio 35% e Peróxido de carbamida 10%
Soluções em 6 níveis: vinho tinto seco, vinho tinto suave, café com açúcar, café sem açúcar, água destilada e deionizada e água destilada e deionizada com açúcar.
Variáveis de resposta: Alteração de cor (ΔE) e alteração de luminosidade (ΔL) (n=6) Espectroscopia de energia dispersiva (EDS) (n=2)
Microscopia eletrônica de varredura (MEV) (n=2)
Rugosidade superficial (Força atomica) (MFA) (n=4)
Grupos experimentais
As 72 unidades experimentais foram divididas, aleatoriamente, nos grupos experimentais: ➢Grupo 01 - Clareamento com peróxido de Hidrogênio 35% por 24 minutos uma vez por semana por 4 semanas + imersão em água destilada deionizada com adição de açúcar por 45 minutos ao dia durante 4 semanas + armazenamento em saliva artificial
➢Grupo 02 - Clareamento com peróxido de carbamida 10% por 2 horas ao dia durante 4 semanas + imersão em água destilada deionizada com adição de açúcar por 45 minutos ao dia durante 4 semanas + armazenamento em saliva artificial
➢Grupo 03 - Clareamento com peróxido de Hidrogênio 35% por 24 minutos uma vez por semana por 4 semanas + imersão em água destilada deionizada por 45 minutos ao dia durante 4 semanas + armazenamento em saliva artificial
➢Grupo 04 - Clareamento com peróxido de carbamida 10% por 2 horas ao dia durante 4 semanas + imersão em água destilada deionizada com açúcar por 45 minutos ao dia durante 4 semanas + armazenamento em saliva artificial
➢Grupo 05 - Clareamento com peróxido de Hidrogênio 35% por 24 minutos uma vez por semana por 4 semanas + imersão em café sem açúcar por 45 minutos ao dia durante 4 semanas + armazenamento em saliva artificial
➢Grupo 06 - Clareamento com peróxido de carbamida 10% por 2 horas ao dia durante 4 semanas + imersão em café sem açúcar por 45 minutos ao dia durante 4 semanas+ armazenamento em saliva artificial
➢Grupo 07 - Clareamento com peróxido de Hidrogênio 35% por 24 minutos uma vez por semana por 4 semanas + imersão em café com açúcar por 45 minutos ao dia durante 4 semanas + armazenamento em saliva artificial
➢Grupo 08 - Clareamento com peróxido de carbamida 10% por 2 horas ao dia durante 4 semanas + imersão em café com açúcar por 45 minutos ao dia durante 4 semanas+ armazenamento em saliva artificial
➢Grupo 09 - Clareamento com peróxido de Hidrogênio 35% por 24 minutos uma vez por semana por 4 semanas + imersão em vinho tinto seco por 45 minutos ao dia durante 4 semanas + armazenamento em saliva artificial
➢Grupo 10 - Clareamento com peróxido de carbamida 10% por 2 horas ao dia durante 4 semanas + imersão em vinho tinto seco por 45 minutos ao dia durante 4 semanas+ armazenamento em saliva artificial
➢Grupo 11 - Clareamento com peróxido de Hidrogênio 35% por 24 minutos uma vez por semana por 4 semanas + imersão em vinho tinto suave por 45 minutos ao dia durante 4 semanas + armazenamento em saliva artificial
➢Grupo 12 - Clareamento com peróxido de carbamida 10% por 2 horas ao dia durante 4 semanas + imersão em vinho tinto suave por 45 minutos ao dia durante 4 semanas+ armazenamento em saliva artificial
Setenta e dois dentes incisivos bovinos hígidos foram obtidos (Frigorífico Mondelli, Indústria de Alimentos S/A, Santa Teresa, Bauru, SP.) e armazenados em solução de timol 0,1% (UFRJ– CCMN- Departamento de Bioquímica, Rio de Janeiro- RJ- Brasil), pH 7 a uma temperatura de 37°C para desinfecção até o início da seleção dos espécimes. Antes da preparação dos espécimes, os dentes foram examinados sob lupa (Zeiss-Carl Zeiss do Brasil) com aumento de quatro vezes para verificar a presença de trincas ou manchamento, que eventualmente pudessem influenciar nos resultados do estudo (Figura 1).
Figura 1: Dentes incisivos bovinos hígidos
A coroa foi separada da raiz, com a utilização de disco diamantado dupla face (KG Sorensen, Ind. Com. Ltda, Barueri, SP, Brasil) montado em peça reta de mão em baixa rotação sob irrigação constante, à 1mm da junção cemento-esmalte (Figura 2A e 2B). Para obtenção das amostras, a porção coronária do dente bovino foi fixada através da face vestibular em placa de acrílico com cera utilidade e cola quente, para serem seccionadas no sentido mésio-distal, na altura da câmera pulpar, seccionando a porção vestibular da lingual. Esse corte foi realizado através de disco de corte diamantado (Extec Dia. Wafer Blade 102 x 0,3 x 12,7mm) acoplado em uma Cortadeira Metalográfica (Isomet 1000, Buehler Ltda. Lake Buff, IL, USA) (Figura 2C e 2D).
Imagem 2: 2A) Marcação para realização do corte à 1mm da junção cemento-esmalte. 2B) Disco diamantado dupla face montado em peça reta de mão em baixa rotação seccionando a coroa da raiz. 2C) Coroa após ser seccionada da raiz. 2D) Fragmento dental obtido oela secção na altura da camera pulpar.
As superfícies vestibulares das amostras foram polidas sequencialmente, em ordem de granulação decrescente, com lixas de carbeto de Silício (Carborundum/3M do Brasil Ltda., Sumaré, SP, Brasil), de granulações #400, #600 e #1200 em uma politriz elétrica giratória (Arotec Ind. Com., Cotia, SP, Brasil) em constante refrigeração com água. Realizou-se o polimento com feltros e pastas diamantadas de 1 цm, 1⁄4 цm (Arotec) (Figura 3). Entre cada um dos passos de planificação e polimento as amostras foram submetidas à limpeza em cuba ultrassônica, por 15 minutos (Ultracleaner 1450A/Unique - Marconi).
