LeucoScreen
MÉTODO DE COLORAÇÃO DE LEUCÓCITOS "USO EM DIAGNÓSTICO IN VITRO" I - NOME TÉCNICO OU NOME COMERCIAL DO PRODUTO:
LeucoScreen
II - RAZÃO SOCIAL E ENDEREÇO DO FABRICANTE LEGAL, JUNTO COM UM NÚMERO DE TELEFONE OU FAX OU ENDEREÇO DE SÍTIO ELETRÔNICO ONDE SEJA POSSÍVEL OBTER ASSISTÊNCIA TÉCNICA (SERVIÇO DE ATENDIMENTO AO CONSUMIDOR):
IMPORTADOR:
INTERMEDICAL EQUIPAMENTOS UROLÓGICOS LTDA
AV. PRESIDENTE VARGAS, N° 590 - SALAS 2109, 2110, 2111 E 2118 – CENTRO RIO DE JANEIRO-RJ
CEP: 20074-900 01.856.395/0001-91 FABRICANTE LEGAL:
FertiPro N.V. - Industriepark Noord 32 8730 Beernem, Belgium
URL: http://www.fertipro.com E-mail: info@fertipro.com
III - FINALIDADE E MODO DE USO DO PRODUTO, INCLUINDO INDICAÇÃO DE QUE É PARA "USO EM DIAGNÓSTICO IN VITRO":
INTRODUÇÃO
A maioria dos homens ejacula conteúdo leucocitário (Wolff and Anderson, 1988; Aitken and West, 1990; Barratt et al, 1990), sendo o neutrófilo o tipo celular predominante the predominant. A presença dessas células em excesso (leucoespermia) pode indicar a existência de infecção no trato reprodutor.
Além disso, leucoespermia pode estar associada com defeitos nos parâmetros seminais, incluindo reduções do volume ejaculado, da concentração de espermatozóide e da motilidade dos espermatozóides, assim como perda de função dos mesmos como resultado do estresse oxidativo (Aitken et al, 1989; Aitken and West, 1990) and/or secretion of cytotoxic cytokines (Hill et al, 1987).
É difícil de definir uma concentração limite de leucócitos, além da qual a fertilidade estará debilitada. O impacto dessas células depende do local através do qual os leucócitos entram no sêmen, o tipo de leucócitos envolvidos e seu estado de ativação.
Como regra geral, um ejaculado normal não deve conter mais de 5x 106 células redondas/ml, enquanto o número de leucócitos não deve exceder 1x 106/ml (WHO, 1992). Quando o sêmen contém mais
1x 106/ml de glóbulos brancos, testes microbiológicos devem ser realizados para investigar se há uma infecção de glândula acessória.
Nota: A ausência de leucócitos não exclui a possibilidade de infecção de glândula acessória. MÉTODO (ENDTZ, 1972)
1. Preparação da solução de trabalho:
Adicione 30 µl do reagente 2 em 1 ml do reagente 1. Essa solução de trabalho se mantém estável por 1 dia.
2. Misture 1 gota (10µl) de esperma com 1 gota (10 µl) da solução de trabalho, usando o limite da lamínula. Misture minuciosamente por, pelo menos, 1 minuto.
3. Cubra com a lamínula aproximadamente dois minutos após a mistura inicial, evitando bolhas de ar. A formação de pequenas bolhas de ar é normal e devida à reação da peroxidase. Quanto maior a concentração de células peroxidase positivas, mais bolhas serão formadas.
Nota: No caso de formação excessiva de bolhas, interprete a lâmina imediatamente.
4. Interprete o resultado após 2 minutos com um aumento de 400x (interprete pelo menos 20 campos microscópicos separados).
IV - USUÁRIO PRETENDIDO, QUANDO APLICÁVEL:
LeucoScreen é um método diagnóstico in vitro (IVD) somente para uso profissional. Os usuários pretendidos são profissionais de IVF (técnicos de laboratório, embriologistas ou médicos).
V - INDICAÇÕES DE CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO OU DE MANUSEIO APLICÁVEIS:
ARMAZENAMENTO: 1. Armazenar a 2-25 ° C
2. Manter apenas no recipiente original longe de (sol) luz direta. 3. Manter o recipiente fechado quando não estiver em uso. 4. Não congelar.
5. Não use após a data de validade.
6. extra para reagente 2: Mantenha em local à prova de fogo. TRANSPORTE:
Adequado para transporte ou curto tempo de armazenamento a temperaturas elevadas (até 5 dias a 37°C).
VI - PRINCÍPIO DE FUNCIONAMENTO DO TESTE OU DO INSTRUMENTO:
PRINCÍPIO DO TESTE
Os grânulos nos leucócitos neutrofílicos e polimorfos contêm peroxidase, a qual junto ao peróxido de hidrogênio forma água e íons de oxigênio livre, esses íons de oxigênio oxidam a benzidina que se torna marrom, tingindo as células de marrom. O Reagente 1 também contém um contraste fluido vermelho para diferenciar células redondas peroxidase positivas das peroxidase negativas.
VII - TIPOS DE AMOSTRAS OU MATRIZES A UTILIZAR, QUANDO APLICÁVEL:
Esperma ou liquido seminal.
VIII - CONDIÇÕES PARA COLETA, MANUSEIO, PREPARO E PRESERVAÇÃO DE AMOSTRAS:
COLETA
A coleta de sêmen deve ser feita em recipiente estéril e encaminhado ao laboratório. Deve ficar a temperatura ambiente até liquefação. Após liquefação, é iniciada a análise.
A amostra deve ser analisada na câmara de Makler para avaliar a concentração de células redondas. Caso a concentração de células redondas seja maior ou igual a 1 milhão de células redondas por ml, recomenda-se a análise da amostra utilizando-se o Kit Leucoscreen.
MANUSEIO
A amostra deve ser manuseada com luvas e dentro de uma cabine de fluxo laminar, pois todas as amostras devem ser consideradas como potencialmente infectantes.
PREPARO DA AMOSTRA DE SÊMEN
Após liquefação a amostra deve ser processada dentro de 1 hora, para assegurar o resultado da análise.
A amostra deve ser homogeneizada com o uso de uma pipeta estéril, antes de iniciar a análise.
IX - DESCRIÇÃO DO PRODUTO, INCLUINDO OS ACESSÓRIOS E QUAISQUER LIMITAÇÕES PARA SEU USO, COMO UTILIZAÇÃO DE INSTRUMENTO DEDICADO, E SE APLICÁVEL, VERSÃO DO SOFTWARE:
O kit consiste nos seguintes reagentes: LEUCO - LeucoScreen
Código Nome do produto - componente
LEUCO_1 Reagente 1 - Corante (Contém: benzidina, cianosina e metanol) – 20 ml LEUCO_2 Reagente 2 - Peróxido de hidrogênio 30% – 0.25 ml
X - ESTABILIDADE EM USO DO PRODUTO, EXCETO PARA INSTRUMENTOS, INCLUINDO CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO APÓS ABERTURA DE EMBALAGENS PRIMÁRIAS, BEM COMO CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DE SOLUÇÕES DE TRABALHO, QUANDO RELEVANTE:
ARMAZENAMENTO: 1. Armazenar a 2-25 ° C
2. Manter apenas no recipiente original longe de (sol) luz direta. 3. Manter o recipiente fechado quando não estiver em uso. 4. Não congelar.
6. extra para reagente 2: Mantenha em local à prova de fogo. TRANSPORTE:
Adequado para transporte ou curto tempo de armazenamento a temperaturas elevadas (até 5 dias a 37°C). Armazene reagentes entre 2°C-25°C.
OBSERVAÇÕES:
A formação de um sedimento no Reagente 1 é normal. Para eliminar o sedimento apenas despeje o Reagente 1 em um filtro de papel.
XI - DETALHES DE QUALQUER TRATAMENTO OU MANUSEIO DOS PRODUTOS ANTES DE ESTAREM PRONTOS PARA USO, COMO INSTALAÇÃO, RECONSTITUIÇÃO, CALIBRAÇÃO, ENTRE OUTROS:
Não se aplica.
XII - QUANDO APLICÁVEL, RECOMENDAÇÕES PARA PROCEDIMENTOS DE CONTROLE DE QUALIDADE:
Não se aplica.
XIII - PROCEDIMENTO DE ENSAIO, INCLUINDO CÁLCULOS E INTERPRETAÇÃO DE RESULTADOS:
CÁLCULO DA CONCENTRAÇÃO DE GLÓBULOS BRANCOS
CONCENTRAÇÃO CONHECIDA DE ESPERMATOZÓIDES
Conte o número de glóbulos brancos (GB) e o número de espermatozóides. Calcule a concentração de GB baseado nessa formula: (Número de GB / Número de espematozóides) x Concentração de esperma (mill/ml)
Esse método irá funcionar somente se a amostra de sêmen contiver espermatozóides (preferencialmente mais de 10 milhões/ml).
CONCENTRAÇÃO DESCONHECIDA DE ESPERMATOZÓIDES
Nesse caso a concentração de GB pode ser determinada pela multiplicação do número de GB por um fator conhecido, baseado no tamanho de um campo microscópico e a altura entre a lamínula e a lente objetiva (ou a profundidade da amostra de sêmen).
O diâmetro do campo microscópico pode ser medido utilizando um micrômetro. A área da superfície em um campo é igual ao quadrado do raio multiplicado por pi (a = π r2).
e.g. Diâmetro = 250 µm raio = 125 µm área da superfície = 49086µm2
A distância entre a lente objetiva e a lamínula pode ser calculada através da formula: altura (em µm) = volume (em µl) / (comprimento x largura da lamínula em mm)
ex. volume da amostra = 20 µl, lamínula = 24 x 40 mm Altura = 20 / (24 x 40) = 0.0208mm ou 20.8µm
Sabendo esses dados, um fator pode ser determinado utilizando esta fórmula: Fator = 1 000 000 / (área da superfície x altura)
ex. Fator = 1 000 000 µm3 / (49086 µm2 x 20.8 µm) = 0.98
Isso significa que se 5 GB são contados em um campo microscópico, a concentração correspondente seria de 4.9 milhões/ml.
INTERPRETAÇÃO
Células coradas de amarelo para marrom são leucócitos neutrofílicos polimorfos peroxidase positivos.
Células coradas de rosa: todas as outras células.
XIV - INFORMAÇÃO SOBRE SUBSTÂNCIAS INTERFERENTES OU LIMITAÇÕES QUE PODEM AFETAR O DESEMPENHO DO ENSAIO:
Não se aplica.
XV - CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO, TAIS COMO SENSIBILIDADE, ESPECIFICIDADE, EXATIDÃO E PRECISÃO, EXCETO PARA INSTRUMENTOS:
SENSITIVIDADE E ESPECIFICIDADE
Em estudo comparativo Politch, et al (Politch, 1993) concluíram que a sensitividade e especificidade de marcação de peroxidase positivos para leucoespermia é de 90% se comparado com teste imunohistológico.
Com limiar para marcação da peroxidase de 1 milhão GB/ml e para o teste imunohistoquímico de 2 milhões GB/ml.
XVI - RISCOS RESIDUAIS IDENTIFICADOS:
LIMITAÇÕES DO MÉTODO
LeucoScreen marca apenas glóbulos brancos peroxidase positivos, outros tipos de células brancas (ex. Linfócitos e monócitos) não podem ser detectados pelo método.
XVII - INTERVALOS DE REFERÊNCIA, QUANDO APLICÁVEL:
Não se aplica.
XVIII - QUANDO RELEVANTE, REQUISITOS DE INSTALAÇÕES ESPECIAIS (COMO SALA LIMPA) OU TREINAMENTO ESPECIAL (COMO EM SEGURANÇA CONTRA RADIAÇÃO) OU QUALIFICAÇÕES ESPECÍFICAS DO USUÁRIO DO PRODUTO;
Não se aplica.
XIX - SE O PRODUTO É FORNECIDO ESTÉRIL, INSTRUÇÕES DE COMO AGIR SE A EMBALAGEM ESTIVER DANIFICADA ANTES DO USO:
XX - INFORMAÇÃO DE OUTROS PRODUTOS, MATERIAIS OU INSTRUMENTOS NECESSÁRIOS PARA A REALIZAÇÃO DO ENSAIO OU REAÇÃO:
Não há nenhum acessório ou outros produtos para serem usados com o kit. O material não incluso no kit consiste em:
- Lente objetiva - Lamínula - Pipetas
XXI - ALERTAS OU PRECAUÇÕES A SEREM TOMADAS COM RELAÇÃO AO DESCARTE DO PRODUTO, DE SEUS ACESSÓRIOS E DOS CONSUMÍVEIS USADOS, INCLUINDO RISCOS DE INFECÇÃO OU MICROBIOLÓGICOS, AMBIENTAIS E FÍSICOS:
Toda a amostra de sêmen deve ser considerada potencialmente infectada. Manejar todas as amostras como potenciais transmissores de HIV ou hepatites. O Reagente 1 contém benzidina e cianosina e methanol, os quais são altamente venenosos por via inalatória, pelo contato com a pele e por ingestão. Há risco de dano irreparável. Retire o vestuário contaminado imediatamente. Use vestuário de proteção. No caso de qualquer acidente, procure assistência médica. Reagente 2 contém H2O2: corrosivo, causa queimaduras. Após contato com a pele, lavar imediatamente com água e sabão. Usar proteção para olhos e face.
XXII - PARA PRODUTOS DESTINADOS A USUÁRIOS LEIGOS, AS CIRCUNSTÂNCIAS NAS QUAIS O USUÁRIO DEVE CONSULTAR UM PROFISSIONAL DE SAÚDE:
Não se aplica.
XXIII - DATA DE EMISSÃO OU ÚLTIMA REVISÃO DAS INSTRUÇÕES DE USO E, QUANDO APROPRIADO, UMA IDENTIFICAÇÃO NUMÉRICA:
Referencia do Forncedor: Ref. doc.: FP09 I05 R01 B.8, Atualização: 30/09/2014. Revisão Intermedical: Ver 01: 01/03/2016.
XXIV - INDICAÇÃO DOS TERMOS E CONDIÇÕES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO.
Cada lote do produto é testado e os resultados são fornecidos relativos a um Certificado de Análise específico para o lote, disponível sob pedido.
Se ocorrer problemas usando este produto, favor entre em contato com nosso Atendimento ao Consumidor – (021) 2196-6100.
RESPONSÁVEL TÉCNICO
Ronaldo Reis Fontoura CRM 5251022-5
REPRESENTANTE LEGAL
