A r t i g o
Resumo
A investigação de fungos presentes no ar em ambientes interiores, climatizados artifi-cialmente ou em microrregiões de clima transitório entre quente e úmido, é de particular importância uma vez que a concentração maior ou menor de fungos pode refletir no grau de sensibilização alérgica em indivíduos atópicos com manifestações de asma e rinite. O obje-tivo dessa pesquisa foi realizar uma análise quantitativa e qualitativa de fungos anemófilos presentes nos laboratórios de informática de uma instituição de ensino superior em Maceió, AL, bem como caracterizar os fungos potencialmente patogênicos causadores de proces-sos alérgicos. Foram obtidas 211 amostras, sendo as das superfícies e filtros de condiciona-dores de ar coletadas com auxilio de Swabs embebidos em água destilada esterilizada adi-cionada de antibiótico, e as demais adquiridas a partir da exposição de placas no ambiente climatizado (Ar). Foram obtidas 1101 UFC, representadas pelos gêneros Aspergillus sp., Aureobasidium sp., Chaetomium sp., Cladosporium sp., Cunninghamella sp., Curvularia sp., Exophiala sp., Fusarium sp., Moníiliella sp., Mycelia sterilla, Paecilomyces sp., Penicillium sp., Phoma sp., Rhodotorula sp., Stachybotris sp., Trichoderma sp., Ulocladium sp., Veronaea sp. Podemos então supor que a grande quantidade de UFC fúngicas isolados nos laborató-rios ocorre devido aos maus hábitos higiênicos por parte dos usuálaborató-rios, ao grande fluxo de pessoas e limpeza incorreta ou até mesmo não periódica dos mesmos.
Palavras-chave: Fungos anemófilos, fungos em superfícies, fungos, laboratórios
Abstract
The investigation of airborne fungi in indoor environments, or artificially conditioned micro climate transitional between warm and humid is of particular importance since higher or lower concentration of fungi may reflect the degree of allergic sensitization in atopic individuals with asthma and rhinitis. The objective of this research was to conduct a quantitative and qualitative analysis of airborne fungi present in the computer labs of a higher education institution in Maceió, AL, and characterize potentially pathogenic fungi that cause allergic processes. We obtained 211 samples, the surfaces and filters of air conditioners collected with the aid of swabs soaked in sterile distilled water with added antibiotics, and the other acquired from the exposure of plates in air conditioned environment (air). 1101 CFU were obtained, represented by the genera Aspergillus sp., Aureobasidium sp., Chaetomium sp., Cladosporium sp., Cunninghamella sp., Curvularia sp., Exophiala sp., Fusarium sp., Moníiliella sp., Mycelia sterilla, Paecilomyces sp., Penicillium sp., Phoma sp., Rhodotorula sp., Stachybotris sp., Trichoderma sp., Ulocladium sp., Veronaea sp. We can then assume that the large amount of fungal isolates in laboratories UFC is due to poor hygiene on the part of users, the large influx of people and improper cleaning or even non-periodic them.
Keywords:
Airborne fungi, surfaces fungi, fungi, laboratoriesJoão Paulo dos Santos1
Mayara Belleane Tomaz Avelino2
Rebecka Cordeiro de Figueirêdo Leal3
Maria Anilda SantosAraújo4
1Biomédico, Faculdade de
Ciências Biológicas e da Saúde, FEJAL-CESMAC, Especialista em Hemoterapia e Imuno-Hematologia, Departamento de Oncologia Clínica e Experimental, Disciplina de Hematologia e Hemoterapia da Universidade Federal de São Paulo, UNIFESP – EPM, Mestrando em hematologia, Departamento de Oncologia Clínica e Experimental, Disciplina de Hematologia e Hemoterapia da Universidade Federal de São Paulo UNIFESP – EPM, Analista de Hemoterapia, Grupo de Apoio ao Adolescente e a Criança com Câncer-Graacc
2Biomédica, Faculdade de Ciências
Biológicas e da Saúde, FEJAL-CESMAC
3Biomédica, Faculdade de Ciências
Biológicas e da Saúde, FEJAL-CESMAC
4Doutora em Biologia de
Fungos, Universidade Federal de Pernambuco, UFPE, Professora da Disciplina de Micologia Clinica, Faculdade de Ciências Biológicas e da Saúde, FEJAL-CESMAC
Correspondências:
João Paulo dos Santos joaobiome@hotmail.com
Isolamento de fungos anemófilos em laboratórios
de informática de uma instituição de ensino
superior de Maceió, AL
ambiente climatizado, estão as partículas microbianas, in-cluindo algas, fungos, bactérias, esporos e vírus, que são provenientes do ar externo, do sistema de climatização, da construção, mobiliário, carpete e, principalmente, de seus ocupantes (GONTIJO et al., 2000).
Os fungos são microrganismos eucariontes que precisam de calor e umidade para se desenvolver. O clima tropical com umidade em torno ou acima de 80% é ideal para proliferação desses microrganismos que podem se apresentar em duas formas, filamentosa ou leveduriforme, espalhando-se na natu-reza através do ar atmosférico ou por outras vias como água, insetos, homem e animais (MENEZES et al., 2004; SOUZA et al., 2008; LACAZ et al., 2002; MARSDEN, 2007).
A investigação de fungos presentes no ar em ambientes interiores, climatizados artificialmente ou em microrregiões de clima transitório entre quente e úmido, ou seja, onde as condi-ções de clima, umidade e temperatura favorecem o desenvol-vimento desses microrganismos é de particular importância uma vez que a concentração maior ou menor de fungos pode refletir no grau de sensibilização alérgica em indivíduos atópi-cos com manifestações de asma e rinite (CARMO et al., 2007; Dalfré et al. (2007;SIQUEIRA et al., 2003).
Na patologia médica, diante da asma e das rinites os fun-gos anemófilos: Aspergillus sp., Penicillium sp., Cladosporium sp., Myceila sterilia, Fusarium sp., Rhizopus sp., Drechslera sp., Absidia sp. e Alternaria sp que são encontrados na poeira e no ar desempenham uma ação importante, como elementos alergizantes sendo responsáveis geralmente por tais patolo-gias (MENEZES et al., 2006).
Neste sentido, o estudo da microbiota fúngica anemófila fila-mentosa e leveduriforme tem sido considerado de relevante im-portância, pois seus esporos são responsáveis por manifestações clínicas do trato respiratório humano (SIDRIM; ROCHA, 2004).
Baseado no exposto recentemente, têm surgido docu-mentos legais enfocando o problema. A Resolução RE Nº 9, de 16 de janeiro de 2003, define orientação técnica sobre Qualidade do Ar Interior em ambientes climatizados artificial-mente de uso público e coletivo, considerando o interesse sanitário na divulgação do assunto, bem como a preocupa-ção com a saúde, segurança, bem-estar e conforto dos ocu-pantes dos ambientes climatizados (CARTAXO et al., 2007).
O objetivo dessa pesquisa foi realizar uma análise quanti-tativa e qualiquanti-tativa de fungos anemófilos presentes nos labo-ratórios de informática de uma instituição de ensino superior em Maceió, AL, bem como caracterizar os fungos potencial-mente patogênicos causadores de processos alérgicos.
Material e Métodos
Este estudo foi desenvolvido através de uma análise transversal analítica de três laboratórios de informática da Fa-culdade de Ciências Biológicas e da Saúde, FEJAL-CESMAC.
cadeiras dos laboratórios.
Para a coleta das amostras dos ambientes climatizados (Ar) foram expostas cinco placas de Petri contendo Agar Sa-bouraud acrescido de antibiótico (Cloranfenicol na concen-tração de 50mg/L) em cinco pontos equidistantes a um metro de altura do piso, as quais foram mantidas expostas por 30 minutos de acordo com Gambale et al. (1993). Posteriormen-te, foram incubadas à temperatura ambiente (± 28ºC) e obser-vadas diariamente por um período de sete dias. À medida que as colônias surgiam, eram realizadas as análises quantitativas e qualitativas.
As amostras dos filtros de condicionadores de ar foram semeadas em duplicatas por esgotamento na superfície de ágar Sabouraud acrescido de Cloranfenicol a 50 mg/L, conti-dos em placas de Petri, seguido de incubação à temperatura ambiente (± 28ºC) e observadas diariamente por um período de sete dias seguindo a técnica preconizada pela Associação Americana de Saúde Pública (APHA).
A coleta das amostras das superfícies foi realizada com swabs esterilizados, os quais foram acondicionados em tubos de ensaio contendo 5 mL de água destilada esterilizada com antibiótico. Em resumo, foram escolhidos cinco diferentes computadores por laboratório, para cada computador ana-lisaram-se seis superfícies, sendo estas o monitor, mouse, teclado, CPU, cadeiras e bancadas, totalizando 30 swabs por local avaliado.
Todas as amostras foram devidamente etiquetadas, acondicionadas e transportadas ao Laboratório de Mico-logia da Faculdade de Ciências Biológicas e da Saúde, FEJAL-CESMAC.
Realizaram-se purificações das colônias obtidas por transferência de estruturas fúngicas para preparo de uma suspensão em água destilada esterilizada acrescida de Clo-ranfenicol a 50 mg/L e, em seguida, foi realizado o semeio por esgotamento em ágar Sabouraud adicionado com Cloranfe-nicol (50mg/L), com as placas mantidas à temperatura am-biente (± 28ºC) para o desenvolvimento de colônias isoladas. Os fragmentos de colônias isoladas foram repicados para superfície do meio ágar Sabouraud simples, contido em tubos de ensaio e mantidos à temperatura ambiente (± 28ºC) até o crescimento da colônia por um período de sete dias, para posteriormente efetuar a identificação com base na observa-ção das características macro e micromorfológicas, seguindo os critérios adotados por Hoog et al. (2000), Lacaz et al. (2002) e Sidrim e Rocha (2004). Após identificação os isolados foram preservados em água destilada e óleo mineral esterilizado.
A análise quantitativa foi realizada através da contagem do número de Unidades Formadoras de Colônias (UFC) desen-volvidas durante o período de incubação, enquanto que na análise qualitativa foi especificado o gênero/espécie fúngica.
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Resultados e Discussões
Durante o período estudado foram analisadas 211 amos-tras, das quais 158 (74,9%) foram positivas. A maior positivi-dade de amostras ocorreu no laboratório 3 com 62 (39,2%), seguido do laboratório 2 com 50 (31,6%) e laboratório 1 apre-sentando positividade em 46 (29,2%) amostras, como mostra a Tabela 1.
Segundo Souza et al. (2008), a grande diversidade e a elevada frequência de isolamento de fungos anemófilos é um fato preocupante, visto que estes ambientes apresentam uma demanda apreciável de pessoas expostas constante-mente à contaminação.
Para o controle da propagação fúngica em ambientes cli-matizados é aconselhado que no mesmo seja mantida uma adequada ventilação, temperatura e umidade, bem como a higiene e a desinfecção rotineira destes ambientes (WARRIS; VERWEIJ, 2005).
Dos laboratórios analisados foi obtida maior média de Unidades Formadoras de Colônias (UFC) no laboratório 3 com 116 UFC (67,05%) isoladas nas superfícies, seguido do laboratório 2 com 37,4 UFC (21,62%), e o laboratório 1 apre-sentando 19,6 UFC (11,33%), como mostra o Gráfico 2. Tabela 1. Amostras positivas e negativas nos laboratórios
de informática de uma instituição de ensino superior
Amostras Lab. 1 Lab. 2 Lab. 3 Total
Positivas 46 50 62 158
Negativas 25 19 9 53
Total 71 69 71 211
Os valores elevados de positividade nesse estudo po-dem ser explicados pelo grande fluxo de pessoas que circulam nos laboratórios de pesquisa. Também pode ser atribuída a estes índices a precariedade de limpeza nos laboratórios, bem como a falta de higiene das pessoas que os utilizam. Fato este constatado por Coutinho et al. (2007) em sua pesquisa em telefones públicos, que atribuiu a alta positividade das amostras à falta de manutenção ou lim-peza inadequada, favorecendo o contágio de micoses nos usuários, já que esses aparelhos são utilizados por pes-soas sadias à imunocomprometidos de diferentes classes sociais e hábitos variados.
Das 158 amostras positivas, 132 (83,5%) foram prove-nientes das superfícies, seguidos de 15 (9,5%) amostras dos filtros de condicionadores de ar e 11 (7%) dos ambien-tes climatizados (Gráfico 1).
Gráfico 1. Amostras positivas obtidas das superfícies, filtros de condicionadores de ar e ambientes climatizados nos Laboratórios de Informática de uma Instituição de Ensino Superior
Gráfico 2. Média de Unidades Formadoras de Colônias (UFC) por placa, nos Laboratórios de Informática de uma Instituição de Ensino Superior
Os dados analisados demonstram uma grande quantidade de propágulos fúngicos dispersos no laboratório 3, este fato pode estar relacionado à permanência constante de pessoas e a diminuição da frequência de manutenção do ambiente. Segundo Mezzari et al. (2003), a ocorrência de grande número de esporos de fungos comprova a necessidade de estudos sobre os fungos anemófilos em nossa cidade e também em nosso país, pois os fungos anemófilos são considerados pos-síveis causadores de patogenicidade.
Os fungos anemófilos compreendem uma grande diversi-dade de gêneros que colonizam diferentes ambientes, onde de-senvolvem estruturas reprodutivas como esporos, os quais são veiculados por correntes de ar, dispersos com muita facilidade e com alto potencial de contaminação (SIDRIM; ROCHA, 2004).
Podemos então apontar os ambientes fechados, clima-tizados, como locais possivelmente contaminados. Em sua pesquisa, Addington (2004) revelou que a concentração de poluentes em ambientes internos poderia ser superior àque-las no ar externo.
mes; e do ambiente climatizado (Ar), foram isoladas 15,5 UFC filamentosas e 1,5 UFC leveduriformes (Gráfico 3).
A alta incidência de fungos filamentos pode está relacio-nada à quantidade de esporos fúngicos. Lacaz (2002) rela-cionou o maior isolamento de fungos filamentosos à grande capacidade de produção de propágulos fúngicos.
O Gráfico 4 mostra a média e o desvio padrão das UFC isoladas nas superfícies dos laboratórios de informática, sen-do observada maior incidência de UFC nas seguintes super-fícies: CPU com 186 UFC, seguida do monitor, com 167 UFC e teclado com 161 UFC. Quando comparamos a incidência de UFC entre os laboratórios podemos observar que no labo-ratório 1 a superfície com maior quantidade de UFC isoladas foi o mouse com 36 UFC, já no laboratório 2 a superfície de maior incidência foi o teclado, com 60 UFC e no laboratório 3 foi a CPU com 120 UFC. A partir destes dados podemos constatar que o laboratório 3 sempre apresentou o maior nú-mero de UFC.
Gráfico 4. Média e desvio padrão dos fungos isolados nos laboratórios de informática de uma Instituição de Ensino Superior
Gráfico 3. Unidades Formadoras de Colônias (UFC) de fungos filamentosos e leveduriformes, nos laboratórios de informática de uma Instituição de Ensino Superior
Mattei et al. (2009) isalaram UFC fúngicas em todas as superfícies que os mesmos analisaram, obtendo também um maior predomínio de UFC filamentosas.
Foram identificados 17 diferentes gêneros de fungos. Dentre os isolados obtivemos colônias de Aspergillus sp., Aureobasidium sp., Chaetomium sp., Cladosporium sp., Cunninghamella sp., Curvularia sp., Exophiala sp., Fusa-rium sp., Moníiliella sp., Mycelia sterilla, Paecilomyces sp., Penicillium sp., Phoma sp., Rhodotorula sp., Stachybotris sp., Trichoderma sp., Ulocladium sp., Veronaea sp, como mostra a Tabela 4.
Tabela 4. Gêneros identificados nos laboratórios de informática de uma Instituição de Ensino Superior
Gêneros Lab. 1 Lab. 2 Lab. 3 UFC
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Os gêneros isolados de maior prevalência foram, res-pectivamente, Aspergillus sp. e Cladosporium sp.. Menezes et al. (2006), em sua pesquisa de fungos em periódicos de uma determinada biblioteca, isolaram Aspergillus sp. (100%), Penicillium sp. (80%), Curvularia sp. (60%), Cladosporium sp. (50%). Fungos estes também isolados em nossa pesquisa, diferindo apenas o percentual.
Um fungo pouco isolado em nossa pesquisa com apenas três UFC foi o Stachybotrys sp., fungo esse que tem muita importância, pois foi relatado em alguns estudos como cau-sador de hemossiderose pulmonar em crianças – isso ocorreu devido à inalação dos esporos desse fungo (SOUZA, 2009).
O gênero Exophiala são leveduras distribuídas na natureza, em especial solo, madeira e materiais vegetais em decomposição, que possuem melanina na parede celular e formam colônias marrom, verde-oliva ou preta. As infecções causadas por essa levedura são divididas em três tipos: feo-hifomicoses, cromoblastomicose e micetoma; essas infec-ções ocorrem geralmente em pacientes com AIDS, trans-plantados, diabéticos, pacientes que estão fazendo uso de terapias com corticoesteroides, mas também pode aparecer em pacientes imunocompetentes (GARCÍA-MARTOS; MÁR-QUEZ; GENÉ et al., 2002).
Em cultivo, Rhodotorula sp. apresenta-se com aspecto mucoide, coloração rosa a vermelha (ROCHA et al., 2004) e está relacionada a casos de fungemia, endocardite, peritoni-te, meningite e infecções associadas a cateteres e dispositi-vos intravenosos (GOMEZ; LOPES et al., 2005).
Os fungos incluídos na forma-ordem Agonomycetales são frequentemente chamados de Mycelia sterilia, já que não produzem conídeos. Sua reprodução é realizada atra-vés de fragmentos ao acaso da hifa. Não há nenhuma ca-racterística específica das hifas ao exame microscópico. Foi relatado na literatura um caso de Feo-hifomicose por Mycelia sterilia (PIRES et al., 1996). Estes fungos são oni-presentes e importantes patógenos de plantas em todo o mundo. A predominância deste fungo pode ser explicada por sua capacidade de competir por espaço e nutrientes; e principalmente sua atividade antifúngica através da pro-dução de metabólitos (VINNERE et al., 2010).
É importante relatar que as leveduras não foram identificadas, porque houve uma perda das mesmas durante o período da pesquisa. Este fato ocorreu devido a uma conta-minação proveniente de fungos filamentosos.
Os três gêneros considerados principais agentes pato-gênicos mais isolados na pesquisa foram, respectivamente, Aspergillus sp., com 267 UFC, seguido de Cladosporium sp., com 224 UFC e Penicillium sp., com 44 UFC.
A incidência desses fungos variou de acordo com a área coletada. Nas superfícies o fungo mais isolado foi Cladospo-rium sp., com 114 UFC, isolada no laboratório 3, dos filtros de condicionadores de ar o Aspergillus sp. foi o mais isolado com 39 UFC, isolado no laboratório 1, a última amostra foi obtida dos ambientes climatizados (Ar) e nestes o fungo mais isolado foi Penicillium sp., com 30 UFC, laboratório 2.
Gráfico 7. Gêneros causadores de patogenicidade mais isolados nos ambientes climatizados (Ar) dos laboratórios de informática de uma Instituição de Ensino Superior.
Gráfico 5. Gêneros causadores de patogenicidade mais isolados nas superfícies dos laboratórios de informática de uma Instituição de Ensino Superior
Gráfico 6. Gêneros causadores de patogenicidade mais isolados nos filtros de condicionadores de ar dos laboratórios de informática de uma Instituição de Ensino Superior
Fonte: Dados da pesquisa
De acordo com a pesquisa realizada por Mezzari (2003), os fungos anemófilos são responsáveis por 15,38% das sen-sibilizações alérgicas em indivíduos atópicos com manifesta-ções de asma e/ou rinite.
podem ser causadas por esse gênero (SILVA; SAAD, 2009). Algumas espécies são produtoras de micotoxinas que podem ter ação cancerígena (JOHANNESSEN et al., 2007).
Os Aspergillus sp. são fungos facilmente veiculados pelo ar e se depositam em qualquer objeto ou superfície e contaminam todo o ambiente (WARRIS; VERWEIJ, 2005). A aspergilose pode ser definida como: invasiva, saprofítica ou alérgica. As doenças invasivas incluem infecções do tra-to respiratório inferior, dos seios paranasais e da pele como porta de entrada. O SNC, o sistema cardiovascular e outros tecidos podem ser infectados como resultado de dissemina-ção hematogênea ou extensão direta de focos contíguos de infecção. O envolvimento saprofítico inclui otomicose causa-da por Aspergillus e aspergiloma pulmonar. As doenças alér-gicas incluem sinusite alérgica por Aspergillus e aspergilose broncopulmonar alérgica (WALSH et al., 2008).
Sidrim e Rocha (2004) apontam o gênero Cladosporium sp. como um dos gêneros causadores de cromomicose que é uma infecção fúngica subcutânea, podendo ainda causar feo-hifomicose.
nosso dia a dia, principalmente em ambientes fechados, climatizados que facilitam a dispersão dos propágulos fúngicos, mas isso não significa que as pessoas que per-maneçam nestes determinados ambientes adquiram pa-tologias causadas por fungos encontrados no ambiente interno.
Os processos alérgicos geralmente são as manifesta-ções mais comuns quando é expressa a patogenicidade dos fungos em ambientes climatizados, condicionando estes ambientes como contaminantes quando várias pes-soas que estão constantemente nesse ambiente e expres-sam manifestações alérgicas.
Nos três laboratórios a variável analisada que apre-sentou maior frequência de fungos foram as superfícies, atribuímos isso então aos hábitos higiênicos dos usuários.
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