Nd-EDTA
Complexes Domaine de
linéarité (mol.L-1) LOQ (mol.L-1) Test ANOVA Test terme quadratique
Coefficient de régression linéaire (r2) Sm-DTPA 9,9.10-6 - 1,6.10-4 9,9.10-6 validé validé 0.9990 Nd-DTPA 9,8.10-6 - 1,5.10-4 9,8.10-6 validé validé 0.9976 Sm-EDTA 6,2.10-6 - 1,4.10-4 6,2.10-6 validé validé 0.9997 Nd-EDTA 1,7.10-5 - 2,7.10-4 1,7.10-5 validé validé 0.9988
Tableau 22 : Limites de quantification et domaines de linéarité de chaque complexe validés par tests statistiques
Le domaine de linéarité validé de manière statistique est compris entre 1.10-5 et 1,5.10-4 mol.L-1 pour les complexes de DTPA, de 6.10-6 à 1,4.10-4 mol.L-1 pour les complexes [Sm-EDTA]- et de 1,7.10-5 - 2,7.10-4 pour le complexe [Nd-EDTA]-.
Comme le montre la Figure 56, les deux derniers niveaux de concentration pour les complexes de DTPA et Sm-EDTA sont en dehors du domaine de linéarité. Ceci indique une évolution non linéaire de l’efficacité d’ionisation le long de la gamme de concentration. Le complexe Sm-EDTA n’est pas détecté dans le premier échantillon 2.10-
5 mol.L-1 comme indiqué précédemment. Le domaine de linéarité de ce complexe a été déterminé avec 6 niveaux de concentration. Le complexe Nd-EDTA n’est pas détecté dans les deux échantillons de plus faible concentration, à savoir 2.10-5 et 5.10-5 mol.L-1 en lanthanide total. Le domaine de linéarité a été déterminé sur les 7 niveaux de concentration les plus élevés.
Par ailleurs, les 9 niveaux de concentration pour les complexes de DTPA et Sm-EDTA ont été intégrés dans le calcul de la régression linéaire afin d’évaluer leur impact sur la linéarité du domaine. Les tests statistiques ont été effectués et les coefficients de régression linéaire calculés à nouveau. Les données sont regroupées dans le Tableau 23.
Complexes Domaine de
linéarité (mol.L-1) LOQ (mol.L-1) Test ANOVA Test terme quadratique
Coefficient de régression linéaire (r2) Sm-DTPA 9,9.10-6-2,7.10-4 9,9.10-6 Non-validé Non-validé 0.9971 Nd-DTPA 9,8.10-6-2,3.10-4 9,8.10-6 Non-validé Non-validé 0.9972 Sm-EDTA 6,2.10-6-2,0.10-4 6,2.10-6 Non-validé Non-validé 0.9977 Tableau 23 : Limites de quantification et domaines de linéarité de chaque complexe en
intégrant l’ensemble des niveaux de concentration
Même si les tests statistiques ne sont pas validés pour ces domaines, la variation du coefficient de régression est inférieure à 0,2 % suivant le domaine de linéarité considéré.
La détermination de la concentration inconnue d’un échantillon ne devrait donc pas différer selon le domaine de linéarité sélectionné. Suivant les performances analytiques en termes d’incertitude et de justesse à atteindre, les niveaux de concentration pourront être choisis, soit dans le domaine de linéarité validé par tests statistiques soit dans le domaine de linéarité étendu.
Stabilité et justesse de la mesure du signal par HILIC ESI-MS
En spectrométrie de masse et notamment en ESI-MS, la réponse du signal à un niveau de concentration peut varier au cours du temps. Afin d’évaluer la stabilité du signal, un échantillon se trouvant au milieu du domaine de linéarité a été injecté 24 fois sur une période de 6 heures. Cet échantillon est composé du samarium et du néodyme en présence d’EDTA et de DTPA dans les proportions lanthanides:EDTA:DTPA 2:0,75:1,75.
La concentration de cet échantillon est de 2.10-4 mol.L-1 en lanthanide total. La stabilité de la mesure a été évaluée à l’aide de l’écart-type de la concentration mesurée sur les 24 échantillons, rapporté à la valeur moyenne. La justesse de la mesure a été calculée à l’aide de l’Équation 9 :
RSTUVTTV 1 WéU− WéYZ WéYZ
Équation 9 : calcul de la justesse avec Cét, la concentration obtenue avec la droite d’étalonnage et Céch, la concentration dans l’échantillon
Les données de stabilité et de justesse de la mesure par HILIC ESI-MS sont présentées dans le Tableau 24.
Complexes Domaine de linéarité statistique Domaine de linéarité étendu Stabilité (écart-type) (%) Justesse (%) Stabilité (écart-type) (%) Justesse (%)
Sm-DTPA 2.63 2.88 2.82 4.43
Nd-DTPA 2.95 3.94 3.12 5.31
Sm-EDTA 4.08 1.41 4.38 2.00
Nd-EDTA 3.52 -0.01 3.52 -0.01
Tableau 24 : données expérimentales de stabilité et de justesse de la mesure par HILIC ESI-MS (n = 24)
D’après les données du Tableau 24, les écarts-types sont de l’ordre de 3-4 % pour les deux domaines de concentration. Ces résultats démontrent que la réponse du signal des complexes de lanthanides obtenue par HILIC ESI-MS est stable au cours de temps. Ainsi l’ajout d’un étalon interne pour corriger la dérive instrumentale ne semble pas dans un premier temps nécessaire. L’étalonnage externe sans étalon interne semble donc être une méthode de quantification adéquate pour les complexes de lanthanides. Concernant
linéarité validé par tests statistiques et inférieures à 6 % pour le domaine de linéarité étendu. Ainsi quel que soit le domaine de linéarité sélectionné, les performances analytiques de la méthode de quantification sont du même ordre de grandeur.
Une première méthode de quantification des complexes de samarium et de néodyme à ligands DTPA et EDTA a été mise au point par HILIC ESI-MS. Aucun des différents essais d’étalons internes de complexes Tb-DTPA, Tm-DTPA, Tb-EDTA et Tm-EDTA n’a abouti à cause de la modification de la distribution des espèces de lanthanides lors de l’addition d’un étalon interne. En conséquence, une approche de quantification par étalonnage externe sans étalon interne a été sélectionnée. Le mode d’acquisition « fullscan » a été conservé puisque le mode « SRM » et par conséquent le mode « MRM » n’ont pas pu être mis en place pour la quantification des complexes de lanthanides à cause d’une baisse de sensibilité de la mesure trop importante.
Les limites de quantification des complexes de lanthanides par HILIC ESI-MS en mode fullscan ont été évaluées et sont de l’ordre de 1.10-5 mol.L-1 pour les complexes de DTPA, de 6,2.10-6 mol.L-1 pour le complexe Sm-EDTA et de 1,7.10-5 mol.L-1 pour le complexe Nd-EDTA.
Les domaines de linéarité de la réponse en ESI-MS ont été déterminés par tests statistiques (ANOVA, prédominance du terme quadratique) pour l’ensemble des complexes de DTPA et d’EDTA et s’étendent sur 1,5 ordre de grandeur de concentration, de 2.10-5 mol.L-1 à 1,5.10-
4 mol.L-1 environ, pour chaque lanthanide. Des domaines de linéarité étendus, de 1.10-5 mol.L-1 à 2,5.10-4 mol.L-1 environ, pour lequel une variation de justesse inférieure à 2 % a été obtenue ont également été déterminés pour chaque lanthanide. La stabilité et la justesse de la mesure par HILIC ESI-MS ont également été évaluées. La variation de la mesure au cours du temps et la justesse de la mesure sont toutes deux inférieures à 5 %.
Ainsi la méthode de séparation des complexes de samarium et de néodyme à ligands EDTA et DTPA par HILIC ESI-MS permet non seulement d’obtenir des données de spéciation comme la caractérisation structurale des complexes et mais aussi leur quantification.