Na Figura 15 estão apresentados os resultados de uma das replicatas para a amostra de suplemento em comprimidos usando o método eletroquímico. Os voltamogramas de onda quadrada são mostrados na Figura 15A, com o branco (curva a), amostra (curva b) e amostra com adições sucessivas de solução padrão de VB12(curvas c-f).
Figura 15. (A) Voltamogramas de onda quadrada para (a) branco, (b) 100,0 µL de amostra de
suplemento em comprimido, e (c-f) adições sucessivas de 100,0 µL de solução padrão de VB120,1
mmol L−1em solução tampão B-R 0,3 mol L−1(pH 10,0) empregando o BDDE. (B) Curva de adição de
padrão de VB12(a) e curva de calibração de VB12(b).
As correntes de pico aumentaram linearmente com as adições da solução padrão, fornecendo a curva de adição de padrão da Figura 15B, juntamente apresentada
com a curva de calibração construída anteriormente (Seção 5.6) para comparação. Novamente, como as inclinações são semelhantes, é possível concluir que não houve interferência dos componentes da matriz na análise realizada.
Os resultados para uma das replicatas para a quantificação de VB12 na
amostra de suplemente em comprimido pelo método espectrométrico estão dispostos na Figura 16. Os espectros UV-vis para o branco (curva a), amostra (curva b) e adições sucessivas de solução padrão de VB12 (curvas c-g) são mostrados na
Figura 16A. A curva de adição de padrão, bem como a curva de calibração construída anteriormente, são mostradas na Figura 16B. Como as inclinações da curva de calibração e da curva de adição de padrão mais uma vez são semelhantes, é possível concluir que os componentes da matriz não interferiram no resultado obtido.
Figura 16. (A) Espectros UV-vis para (a) branco, (b) 50,0 µL de amostra de suplemento em
comprimido, (c-g) adições sucessivas de 50,0 µL de solução padrão de VB120,1 mmol L−1 em água.
(B) Curva de adição de padrão de VB12(a) e curva de calibração de VB12(b).
A Tabela 4 reúne os resultados das análises para as duas amostras por ambos os métodos, bem como os testes estatísticos envolvendo os mesmos. As concentrações de VB12 determinadas tanto nos comprimidos, como na pasta de
dente, foram bastante próximas das concentrações declaradas nos rótulos dos produtos.
Os testes t de Student e F são aplicados com o objetivo de se comparar resultados obtidos por métodos diferentes, avaliando as precisões e as médias. As equações usadas para o cálculo desses testes são dispostas em seguida.50
2 1 2 1 1 1 n n S x x t a
Onde: é o valor médio das amostras obtido pelo método voltamétrico; é o valor médio das amostras obtido pelo método comparativo; Sa é a estimativa do desvio
padrão agregado; n é o número de repetições e SD é o desvio padrão amostral. O teste F foi usado para comparar a precisão entre os resultados obtidos pelo método voltamétrico e pelo UV-vis. Os valores de F calculado são exibidos na Tabela 4. Para as amostras, os valores de F calculado foram inferiores ao F crítico, indicando que não existe diferença significativa entre a precisão dos dados obtidos por ambos os métodos.
Tabela 4. Determinação de VB12em diferentes amostras pelo método voltamétrico e espectrométrico.
Amostra Comprimido Pasta de dente
Valor rotulado (g g-1) 15000 100,0
Técnica SWV UV-vis SWV UV-vis
Valor encontrado (g g-1) 14866 ± 1476 15549 ±408 102,1 ± 3,76 104,6 ± 2,76 Er(%) −4,4 −2,4 tcalculado 0,57 1,49 Fcalculado 13,09 1,24 an = 3.
bEr= erro relativo entre as técnicas. ctcrítico= 2,78.
dFcrítico= 19,00.
Para a comparação das médias fornecidas pelos dois métodos, foi aplicado o teste t de Student. O valor de t tabelado é obtido a partir da tabela de distribuição de Student para (n1 + n2 − 2) graus de liberdade e nível de confiança de 95%. Os
valores de t para as amostras são encontrados na Tabela 4. Todos os valores de t calculados foram inferiores ao valor de t crítico, indicando que não houve diferença significativa entre as médias obtidas pelos dois métodos.
2 2 menor maior SD SD F
6 CONCLUSÃO
A metodologia eletroanalítica desenvolvida neste trabalho mostrou-se apta à
detecção e quantificação da vitamina B12 em amostras de produtos de
suplementação.
A superfície do BDDE foi primeiramente avaliada quanto a aplicação dos tratamentos catódico e anódico usando como sonda redox [Fe(CN)6]3−/4−. Como
resultado, obteve-se uma melhora na resposta analítica quando aplicado um tratamento catódico de −2,0 V durante 1 h; o que proporcionou uma melhora na transferência eletrônica em virtude da superfície rica em H, juntamente com a adsorção do analito, que promoveu a transferência eletrônica por esfera interna.
Em relação ao comportamento eletroquímico da VB12 sobre o BDDE, os
voltamogramas cíclicos mostraram dois picos de redução e dois picos de oxidação da VB12, correspondendo aos pares redox Co(I/II) e Co(II/III), com uma transferência
de elétrons mais rápida para o primeiro par.
As condições experimentais foram otimizadas juntamente com os parâmetros da técnica de voltametria de onda quadrada a afim de se desenvolver uma metodologia sensível para o monitoramento da VB12. A curva de calibração foi obtida
na faixa de concentração de 0,25 a 5,0 µmol L−1 com limites de detecção e
quantificação iguais a 110,0 e 335,0 nmol L−1, respectivamente.
O BDDE foi aplicado com sucesso na determinação de VB12 em duas
amostras de produtos de suplementação usando como método a adição de padrão, a qual não apresentou interferência dos componentes da matriz das amostras. Os resultados foram avaliados quanto a exatidão e precisão, usando como comparação o método espectrométrico UV-vis;
Por fim, aplicou-se testes estatísticos nos resultados obtidos. O teste F indicou que não existe diferença significativa entre a precisão dos valores obtidos pelos dois métodos. Assim como, não houve diferença significativa entre as médias de ambas as metodologias, como evidenciado pelo teste t.
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