Análise do perfil eletroforético obtido para o grupo de

O perfil eletroforético obtido para as amostras de plantas do grupo controle (irrigadas somente com água) é apresentado na Figura

plantas pôde-se identificar, por meio da análise das imagens dos géis empregando o programa ImageMaster 2D Platinum 6.0,

correlação de 70% entre réplicas (n=3) para géis preparados de maneira independente desde a etapa de extração das proteínas a partir das folhas. Considerando a reprodutibilidade da técnica de eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida, pode-se afirmar que valores superiores a 70% indicam boa correlação entre as réplicas.

Figura 3.17. Perfil eletroforético obtido após separação de proteínas de folhas de

girassol (Helianthus annuus aplicada no gel foi de 485 µg.

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. Análise do perfil eletroforético obtido para o grupo de

amostras controle e de plantas tratadas com selênio

O perfil eletroforético obtido para as amostras de plantas do grupo controle (irrigadas somente com água) é apresentado na Figura 3.17. Para este grupo de se identificar, por meio da análise das imagens dos géis empregando ImageMaster 2D Platinum 6.0, 499 ± 8 spots proteicos

correlação de 70% entre réplicas (n=3) para géis preparados de maneira e desde a etapa de extração das proteínas a partir das folhas. Considerando a reprodutibilidade da técnica de eletroforese bidimensional em gel se afirmar que valores superiores a 70% indicam boa correlação entre as réplicas.

Perfil eletroforético obtido após separação de proteínas de folhas de Helianthus annuus L.) de plantas do grupo controle. A massa de proteína aplicada no gel foi de 485 µg.

. Análise do perfil eletroforético obtido para o grupo de

O perfil eletroforético obtido para as amostras de plantas do grupo controle . Para este grupo de se identificar, por meio da análise das imagens dos géis empregando proteicos com uma correlação de 70% entre réplicas (n=3) para géis preparados de maneira e desde a etapa de extração das proteínas a partir das folhas. Considerando a reprodutibilidade da técnica de eletroforese bidimensional em gel se afirmar que valores superiores a 70% indicam boa

Perfil eletroforético obtido após separação de proteínas de folhas de L.) de plantas do grupo controle. A massa de proteína

Para as amostras tratadas com selênio o perfil eletroforétic

observado na Figura 3.18. Géis deste grupo de plantas apresentaram 483 spots com uma correlação de 73% entre replicas. Novamente, pode

que o procedimento de extração de proteínas e o protocolo adotado para separação eletroforética das mesmas apresentam

de resultados reprodutíveis.

Figura 3.18. Perfil eletroforético obtido após separação de proteínas de folhas de

girassol (Helianthus annuus selênio (352 mg de Se2O3-

aplicada no gel consistia em 485 µg.

Avaliando, ainda, a correlação entre as diferentes réplicas de géis para as plantas tratadas com selênio, a Figura

correlação entre os spots das diferentes réplicas de géis. Observe que exibe diversos vetores (em azul), um para cada

localizados numa dada região do gel estão orientados para uma mesma direção, o 129

Para as amostras tratadas com selênio o perfil eletroforético obtido pode ser observado na Figura 3.18. Géis deste grupo de plantas apresentaram 483

com uma correlação de 73% entre replicas. Novamente, pode

que o procedimento de extração de proteínas e o protocolo adotado para separação eletroforética das mesmas apresentam-se adequados para obtenção de resultados reprodutíveis.

Perfil eletroforético obtido após separação de proteínas de folhas de Helianthus annuus L.) de plantas do grupo irrigado com solução de adicionados ao longo de 44 dias) . A massa de proteína aplicada no gel consistia em 485 µg.

Avaliando, ainda, a correlação entre as diferentes réplicas de géis para as plantas tratadas com selênio, a Figura 3.19 exibe um diagrama que confirma a boa

das diferentes réplicas de géis. Observe que

exibe diversos vetores (em azul), um para cada spot. Nota-se que os vetores localizados numa dada região do gel estão orientados para uma mesma direção, o o obtido pode ser observado na Figura 3.18. Géis deste grupo de plantas apresentaram 483 ± 13 com uma correlação de 73% entre replicas. Novamente, pode-se afirmar que o procedimento de extração de proteínas e o protocolo adotado para se adequados para obtenção

Perfil eletroforético obtido após separação de proteínas de folhas de L.) de plantas do grupo irrigado com solução de adicionados ao longo de 44 dias) . A massa de proteína

Avaliando, ainda, a correlação entre as diferentes réplicas de géis para as exibe um diagrama que confirma a boa das diferentes réplicas de géis. Observe que esta figura se que os vetores localizados numa dada região do gel estão orientados para uma mesma direção, o

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que valida a correlação de 73% descrita anteriormente para estas amostras. Caso os vetores se apresentassem dispostos de maneira aleatória os dados de correlação não teriam validade, pois o software não estaria conseguindo correlacionar um determinado spot para as diferentes réplicas.

Figura 3.19. Imagem de um gel de eletroforese obtido após separação de

proteínas de folhas de girassol para uma planta irrigada com solução de selenito. Na figura são exibidos os spots identificados (circulados em vermelho) e os vetores (em azul) que correlacionam os spots desta réplica com aqueles encontrados nas demais réplicas do mesmo grupo de plantas. Os números indicados nas caixas representam referências que auxiliam o software na correlação dos spots.

Quando se compara os géis obtidos a partir de plantas do grupo controle com aqueles das plantas tratadas com selênio, observa-se que a correlação entre

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os géis é reduzida para 64%. Embora esse número seja pouco inferior ao limite de tolerância de 70% entre réplicas, pode-se dizer que existem pequenas variações sob o ponto de vista de expressão de proteínas quando se compara as plantas controle com aquelas tratadas com selênio. No entanto, não se pode eliminar a possibilidade de utilização da técnica de DIGE (Differential Gel Electrophoresis) para avaliação dos resultados obtidos, uma vez que, neste caso, qualquer variação causada em função do procedimento de separação seria eliminado, visto que as proteínas de cada amostra são marcadas com diferentes fluoróforos e separadas na mesma corrida eletroforética e em um único gel de poliacrilamida [51], resultando na obtenção de resultados ainda mais conclusivos em função da redução de variações experimentais.