A capacidade do Im-DHP como agente biológico fora testado frente a citotoxicidade nas células de linfoma de Burkitt e de Leucecima linfoblástica aguda de células T. Os experimentos de viabilidade celular foram realizados através da metodologia da redução do MTT (Figura 25), que avalia a atividade metabólica celular. Os testes foram conduzidos em pareceria com o Laboratório de Oncologia Experimental e Hematopatias (LOEH) na UFSC.
55 Figura 25 – Estrutura do MTT e sua reação de redução no metabolismo de celulas. (Imagem Autoral).
Os resultados preliminares mostram que houve a redução do composto. Por se tratar de células cancerígenas o resultado indica que o Im-DHP não apresentou atividade contra estas células, que permaneceram ativas e reduziram o substrato. Porém o composto também é um análogo do NADH, que esta presente no sítio ativo de redutases, as 1,4-DHP’s conhecidamente apresentam atividade como agente redutor, sendo possível que a reação de redução tenha sido realizada no exterior da celula, pelo Im-DHP. Sendo assim o resultado obtido foi inconclusivo para a metodologia adotada, não excluindo a possibilidade dos derivados apresentarem atividade biológica.
A atividade do composto frente a capacidade como bloqueador de cálcio não fora avaliada, no entanto a literatura revela que outros derivados imidazólicos de 1,4- DHP’s, como aqueles representados pela Figura 26 possuem tal atividade.51
Figura 26 – Derivado imidazólico que apresenta atividade como bloqueador do canal de cálcio.(Adaptado de Iman, et al. 2011).51
56 A atividade destes compostos depende do substituinte lateral, R’s volumosos alcançaram atividade como bloqueador de cálcio superiores a droga comercial nifedipina.51 Sendo um bom indício para novos derivados do Im-DHP.
57 6.CONCLUSÃO
Através dos estudos realizados fora possível sintetizar o novo composto, nomeado de Im-DHP e 3 derivados, compostos 6a-6d. Os rendimentos obtidos foram entre 27-93%, sendo que os catalisadores heterogêneos utilizados se mostraram uma alternativa verde para o procedimento de síntese destes compostos, onde pode-se notar uma melhora de 8-30% no rendimento dos produtos obtidos. A síntese mostrou influência na estrutura dos reagentes, com a adição de cadeias laterais volumosas notou-se um decréscimo no rendimento, onde o volumoso substituinte tert-butil reduziu o rendimento em 41% quando comparado ao substituinte metil.
Os testes de fotoestabilidade mostraram que a inserção de um anel aromático promove incremento na estabilidade dos compostos, mostrando uma cinética de oxidação 1,54x menor quando comparado ao composto sem a presença do anel imidazólico. Efeito semelhante se processa pela presença de solventes, onde o clorofórmio demonstrou oxidação 85x mais rápida do Éster de Hantzsch quando comparado ao solvente etanol, este efeito se deve a facilidade de formação que compostos halogenados tem de formar radicais. A presença do grupo fenil na estrutura que promoveu redução de 2,14x na velocidade de oxidação em etanol quando comparado a estrutura sem o substituinte, sendo este um resultado semelhante ao obtido pela presença do imidazol (redução de 1,54x), confirmando que a presença de grupos aromáticos promove redução na velocidade de oxidação, se mostrando uma boa estratégia para aumento da fotoestabilidade dos fármacos desta classe de compostos.
Os testes como sensor fluorescente mostraram boa sensibilidade ao Zn2+,
mostrando um incremento de 2,28x na intensidade de emissão quando comparado ao Im-DHP livre, o plot de Job indica a formação de complexo de coordenação com estequiometria 1:1 com o zinco. O aumento no sinal da intensidade de emissão pode ser atribuido ao efeito quelato, que promove aumento na rigidez estrutural, aumentando a intensidade de emissão do composto. Alêm disso a confirmação do processo de síntese de compostos de coordenação expande o leque de aplicações dos compostos sintetizados, a química de coordenação com 1,4-DHP’s ainda é pouco explorada no meio acadêmico, possibilitando novos estudos com resultados inéditos.
58 O teste de aplicabilidade como agente biológico não apresentou boa citotoxicidade, inibindo o composto Im-DHP de prosseguir nos testes biológicos para as tratamento de linfoma de Burkitt e de Leucecima linfoblástica aguda de células T. O resultado no entanto não excluí a aplicabilidade do composto no tratamento de outras doenças, basta a continuidade dos testes eventuais descobertas.
O processo de síntese de um novo derivado apresentou boa viabilidade como experimento verde, com um alto rendimento atômico na reação, processo de síntese que não utiliza solventes, o processo ocorre por precipitação se mostrou o procedimento mais verde, com redução de 75x no uso de solventes, menor uso de equipamentos e tempo no processo de síntese e obtenção do produto sólido.
Como perspectivas pretende-se expandir o leque de derivados sintetizados, alterando a estrutura dos reagentes laterais, bem como novas otimizações e rotas sintéticas que promovam reduções no uso de solventes, reagentes e energia. Novos estudos da aplicabilidade destes compostos devem ser feitos, com testes de aplicabilidade para os compostos de coordenação e novas aplicações biológicas, principalmente testes que avaliem a principal capacidade desta classe de moléculas, a de atuar como bloqueadoras do canal de cálcio.
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63 APÊNDICE.
APÊNDICE 1 – Espectro de UV-Vis do éster de Hantzsch.
64 APÊNDICE 3 – Cinética de fotooxidação do HEH em etOH.
APÊNDICE 4 – Cinética de fotooxidação do HEH em CHCl3.