Problema Possíveis causas Solução
1. Controles fora da validação.
1a. Temperatura, pipetagem
ou tempo incorretos. Verifique o procedimento.Repita o ensaio.
1b. Preparação inadequada dos reagentes, erro na diluição, reagentes não bem misturados.
Verifique o procedimento. Repita o ensaio.
1c. Contaminação cruzada
dos controles. Pipete cuidadosamente.troque as tampas. Repita o Não ensaio.
1d. Filtro de leitura incorreto. Verifique se o comprimento
de onda do filtro utilizado é de 450 nm. Se não for utilizado o filtro de referência de 620 - 630 nm, a absorbância aumenta aproximadamente 0,050.
1e. Interferência no caminho
óptico. Verifique o leitor.seque o fundo da microplaca. Limpe ou Verifique se há bolhas de ar. Repita a leitura.
1f. Componentes de
diferentes lotes utilizados.
Não utilize componentes de diferentes lotes, já que os mesmos são ajustados para cada lote liberado.
1g. Reagentes com data de validade vencida.
Verifique a data de validade do kit. Utilize um kit cuja data de validade não tenha expirado.
2. Ausência de cor ou cor clara desenvolvida no fim do ensaio.
2a. Um ou mais reagentes não adicionados ou adicionados na sequência errada. Verifique o procedimento. Repita o ensaio. 2b. Conjugado inativo. Diluição incorreta do conjugado 2 concentrado. Conservação inadequada. Verifique quanto à contaminação. Verifique o procedimento. Repita o ensaio. 2c. Microplaca inativa: Conservação inadequada.
Sempre mantenha as tiras não utilizadas na bolsa muito bem fechada com o
dessecante dentro. Repita o ensaio. 2d. Substrato TMB inativo: Conservação inadequada. O recipiente utilizado afeta a estabilidade do substrato TMB, contaminação cruzada com a solução de paragem.
Utilize recipientes
descartáveis ou lave com ácido ou etanol e enxágue com água deionizada antes da reutilização. Verifique o procedimento. Repita o
ensaio.
2e. Reagentes muito frios. Espere que os reagentes atinjam a temperatura ambiente antes do uso.
bioelisa: Guia de problemas
Problema Possíveis causas
Solução
3. Muita cor em todos os poços da microplaca.
3a. Solução do substrato TMB contaminada ou oxidada.
Verifique se o substrato está incolor, descarte se estiver azul. Utilize recipientes lavados com ácido ou etanol, ou recipientes descartáveis. Repita o ensaio. 3b. Reagentes contaminados ou preparados inadequadamente. Verifique quanto à contaminação: aparência turva. Verifique as diluições.
Repita o ensaio.
3c. Solução de lavagem
contaminada (1x). Verifique a qualidade da água destilada ou deionizada utilizada para a diluição. Repita o ensaio.
3d. Lavagem insuficiente ou não consistente: volume de enchimento e/ou aspiração insuficiente ou não uniforme. Número insuficiente de ciclos de lavagem, dispositivo contaminado.
Verifique o dispositivo de lavagem. Encha os poços com solução de lavagem até quase a boca, aspire
completamente. Aumente o
número dos ciclos de lavagem.
3e. Uso de uma solução de lavagem diferente da do fabricante.
Use apenas a solução de lavagem fornecida com o kit. 4. Baixa reprodutibilidade
ou alto número de amostra reativas não repetitivas.
4a. Problemas de lavagem. Consulte 3c, 3d, 3e.
4b. Pipetas não calibradas ou pontas não bem
ajustadas. Pipetagem inadequada.
Utilize apenas pipetas calibradas, com pontas bem ajustadas e pipete
cuidadosamente, sem formar bolhas e respingar. Repita o ensaio.
4c. Reagentes muito frios ou mal misturados antes do uso.
Equilibre os reagentes à temperatura ambiente e misture bem antes de usar.
4d. Correntes de ar através da microplaca durante as incubações.
Mantenha a microplaca protegida das correntes de ar.
4e. Período muito longo para adicionar as amostras e/ou reagentes. Inconsistência nos intervalos de tempo. Bolhas de ar.
Realize uma técnica consistente e uniforme.
4f. Interferência no caminho óptico.
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN 3000-1172_R00_05.2014_procedural flow chart.doc
bioelisa HIV-1+2 Ag/Ab
3000-1172 1 x 96 TESTS
3000-1173 5 x 96 TESTS (480)
Procedural flow chart / Esquema del procedimiento / Schematischer Ablauf / Schéma de la procédure / Schema del procedimento / Esquema do procedimento
Pipette Sample Diluent: 100 µL/well Dispensar el Diluyente de Muestras: 100 µL/pocillo Proben verdünnungsmittel verteilen: 100 µL/Vertiefung
Dispenser le Diluant des Échantillons: 100 µL/puits Dispensare il Diluente dei Campioni: 100 µL/pozzetto
Pipetar o Diluente de Amostras: 100 µL/pocinho
Ð
Pipette Samples and Controls: 100 µL/well Dispensar Muestras y Controles: 100 µL/pocillo Proben und Kontrollen verteilen: 100 µL/Vertiefung
Dispenser Échantillons et Contrôles: 100 µL/puits Dispensare Campioni e Controlli: 100 µL/pozzetto Pipetar Amostras e Controles: 100 µL/pocinho
Ð
Incubate 60 minutes at 37°C ± 1°C Incubar 60 minutos a 37°C ± 1°C 60 Minuten bei 37°C ± 1°C inkubieren
Incuber 60 minutes à 37°C ± 1°C Incubare 60 minuti a 37°C ± 1°C Incubar 60 minutos a 37°C ± 1°C Ð Wash 5x / Lavar 5x Waschen 5x / Laver 5x Lavare 5x / Lavar 5x Ð
Pipette Conjugate 1: 200 µL/well Dispensar el Conjugado 1: 200 µL/pocillo Konjugat pipettieren 1: 200 µL/Vertiefung
Pipeter le Conjugué 1: 200 µL/puits Dispensare il Coniugato 1: 200 µL/pozzetto
Pipetar o Conjugado 1: 200 µL/pocinho
Ð
Incubate 30 minutes at 37°C ± 1°C Incubar 30 minutos a 37°C ± 1°C 30 Minuten bei 37°C ± 1°C inkubieren
Incuber 30 minutes à 37°C ± 1°C Incubare 30 minuti a 37°C ± 1°C Incubar 30 minutos a 37°C ± 1°C Ð Wash 3x / Lavar 3x Waschen 3x / Laver 3x Lavare 3x / Lavar 3x Ð
Pipette Conjugate 2: 200 µL/well Dispensar el Conjugado 2: 200 µL/pocillo Konjugat pipettieren 2: 200 µL/Vertiefung
Pipeter le Conjugué 2: 200 µL/puits Dispensare il Coniugato 2: 200 µL/pozzetto
Pipetar o Conjugado 2: 200 µL/pocinho Ð
Incubate 30 minutes at 37°C ± 1°C Incubar 30 minutos a 37°C ± 1°C 30 Minuten bei 37°C ± 1°C inkubieren
Incuber 30 minutes à 37°C ± 1°C Incubare 30 minuti a 37°C ± 1°C Incubar 30 minutos a 37°C ± 1°C Ð Wash 5x / Lavar 5x Waschen 5x / Laver 5x Lavare 5x / Lavar 5x Ð
Pipette Substrate-TMB: 150 µL/well Dispensar el Sustrato-TMB: 150 µL/pocillo Substrat-TMB pipettieren: 150 µL/Vertiefung
Dispenser le Substrat-TMB: 150 µL/puits Dispensare il Substrato-TMB: 150 µL/pozzetto
Pipetar o Substrato-TMB: 150 µL/pocinho
Ð
Incubate 30 minutes at RT Incubar 30 minutos a TA 30 Minuten bei RT inkubieren
Incuber 30 minutes à TA Incubare 30 minuti a TA Incubar 30 minutos a TA
Ð
Pipette Stopping Solution: 100 µL/well Dispensar la Solución de Parada: 100 µL/pocillo
Stopplösung zufügen: 100 µL/Vertiefung Pipeter la Solution d’Arrêt: 100 µL/puits Dispensare la Soluzione Bloccante: 100 µL/pozzetto
Pipetar a Solução de Bloqueio: 100 µL/pocinho
Ð Cut-off: NCx + 0.170 Valor umbral: CNx + 0,170 Schwellenwert: NCx + 0,170 Valeur seuil: CNx + 0,170 Valore di soglia: CNx + 0,170 Cut-off: CNx + 0,170 Read at 450 nm Leer a 450 nm Bei 450 nm ablesen Lire à 450 nm Leggere a 450 nm Ler a 450 nm
bioelisa HIV-1+2 Ag/Ab
3000-1172 1 x 96 TESTS
3000-1173 5 x 96 TESTS (480)
Bibliography - Bibliografía - Literatur - Bibliographie - Bibliografia - Bibliografia
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