Problema Possíveis causas Solução
1. Controles fora de validação.
1a. Temperatura, incubação ou pipetagem incorreta.
Verificar o procedimento. Repetir o ensaio.
1b. Preparação incorreta de reativos, erro de diluição. Reativos não homogeneizados. Verificar o procedimento. Repetir o ensaio. 1c. Contaminação cruzada entre controles.
Pipetar cuidadosamente. Não intercambiar as tampas dos frascos. Repetir o ensaio.
1d. Filtro de leitura incorreto. Comprovar que o filtro de leitura seja de 450 nm. Se não se usa filtro de referência de 620-630 nm, as
absorbâncias aumentam aproximadamente 50 miliunidades.
1e. Interferência no caminho ótico.
Verificar o leitor. Limpar ou secar o fundo dos pocinhos. Comprovar que não hajam bolhas de ar. Repetir a leitura.
1f. Foram utilizados
componentes de lotes diferentes.
Não utilizar componentes de lotes diferentes já que os mesmos são ajustados para cada lote.
1g. Reativos vencidos. Verificar a data de validade do kit. Não utilizar kits vencidos.
2. Sem cor ou pouca cor ao final do ensaio.
2a. Um ou mais reativos não adicionados ou adicionados em seqüência incorreta. Verificar o procedimento. Repetir o ensaio. 2b. Conjugado inativo: conservação incorreta. Verificar se há contaminação visível. Verificar o procedimento. Repetir o ensaio. 2c. Microplaca inativa: conservação incorreta.
Manter sempre as tiras não utilizadas na bolsa de
plástico, bem fechada, com o dessecante dentro. Repetir o ensaio. 2d. Substrato inativo: conservação ou diluição incorreta, o recipiente utilizado afeta a estabilidade do substrato, contaminação cruzada com a solução de bloqueio.
Utilizar sempre uma diluição recém preparada de TMB em tampão substrato. Utilizar recipientes descartáveis ou lavados com ácido ou etanol e enxaguados com água deionizada. Verificar o procedimento. Repetir o ensaio.
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bioelisa: Guia de problemas
Problema Possíveis causas Solução
3. Demasiada cor em todos os pocinhos da
microplaca.
3a. Substrato contaminado, oxidado ou preparado incorretamente.
Comprovar que o substrato preparado seja incolor, descarte-o caso se torne azul. Assegurar-se de que o TMB esteja completamente líquido antes de utilizá-lo. Misturar bem o TMB com o tampão substrato. Utilizar frascos ou recipientes descartáveis de plástico ou de vidro lavados com ácido ou etanol. Repetir o ensaio.
3b. Reativos contaminados
ou preparados incorretamente.
Verificar se há contaminação (aspecto turvo). Comprovar as diluições. Repetir o ensaio.
3c. Solução de lavagem (1x) contaminada.
Verificar a qualidade da água destilada/deionizada utilizada para preparar a diluição. Repetir o ensaio.
3d. Lavagem insuficiente ou não uniforme: volume dispensado ou aspiração insuficiente ou não uniforme, número de ciclos de lavagem insuficiente. Lavador contaminado.
Verificar o lavador. Encher totalmente e aspirar
completamente os pocinhos. Aumentar o número de ciclos de lavagem. Bater a placa invertida sobre papel absorvente. Repetir o ensaio.
3e. Foi utilizada solução de lavagem de outro fabricante.
Utilizar somente a solução de lavagem de biokit.
4. Reprodutibilidade pobre ou elevado Número de amostras reativas que não se repetem.
4a. Problemas de lavagem. Ver itens 3c, 3d, 3e.
4b. Pipetas mal calibradas ou ponteiras mal
encaixadas. Técnica de pipetagem incorreta.
Utilizar pipetas calibradas, com ponteiras bem encaixadas. Pipetar cuidadosamente sem fazer bolhas nem salpicar. Repetir o ensaio.
4c. Reativos e/ou amostras muito frios ou não homogeneizados antes de usar.
Deixar os reativos e amostras alcançarem a temperatura ambiente e misturá-los bem antes de usar.
4d. Correntes de ar sobre a microplaca durante as incubações.
Manter a microplaca
protegida de correntes de ar.
4e. Demasiada demora na adição de amostras e/ou reativos. Inconsistência nos intervalos de tempo, bolhas de ar.
Desenvolver uma técnica uniforme e reprodutível.
4f. Interferência no caminho ótico.
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bioelisa anti-HBc
3000-1102 1 x 96 TESTS
Procedural flow chart / Esquema del procedimiento / Schematischer Ablauf / Schéma de la procédure / Schema del procedimento / Esquema do procedimento
Pipette Samples and Controls: 50 µl/well Dispensar Muestras y Controles: 50 µl/pocillo Proben und Kontrollen verteilen: 50 µl/Vertiefung
Dispenser Échantillons et Contrôles: 50 µl/puits Dispensare Campioni e Controlli: 50 µl/pozzetto Pipetar Amostras e Controles: 50 µl/pocinho
Ð
Add Conjugate: 50 µl/well Añadir el Conjugado: 50 µl/pocillo Konjugat hinzugeben: 50 µl/Vertiefung
Ajouter le Conjugué: 50 µl/puits Aggiungere il Coniugato: 50 µl/pozzetto
Adicionar o Conjugado: 50 µl/pocinho
Ð
Incubate 1 hour at 37°C Incubar 1 hora a 37°C 1 Stunde bei 37°C inkubieren
Incuber 1 heure à 37°C Incubare 1 ora a 37°C Incubar 1 hora a 37°C Ð Wash 4x / Lavar 4x Waschen 4x / Laver 4x Lavare 4x / Lavar 4x Ð
Pipette Substrate: 100 µl/well Dispensar el Sustrato: 100 µl/pocillo Substrat pipettieren: 100 µl/Vertiefung
Dispenser le Substrat: 100 µl/puits Dispensare il Substrato: 100 µl/pozzetto
Pipetar o Substrato: 100 µl/pocinho
Ð
Incubate 30 minutes at RT Incubar 30 minutos a TA 30 Minuten bei RT inkubieren
Incuber 30 minutes à TA Incubare 30 minuti a TA Incubar 30 minutos a TA
Ð
Pipette Stopping Solution: 100 µl/well Dispensar la Solución de Parada: 100 µl/pocillo
Stopplösung zufügen: 100 µl/Vertiefung Dispenser la Solution d’Arrêt: 100 µl/puits Dispensare la Soluzione Bloccante: 100 µl/pozzetto
Pipetar a Solução de Bloqueio: 100 µl/pocinho
Ð Cut-off: (NCx + PCx) x 0.4 Valor umbral: (CNx + CPx) x 0,4 Schwellenwert: (NKx + PKx) x 0,4 Valeur seuil: (CNx + CPx) x 0,4 Valore di soglia: (CNx + CPx) x 0,4 Cut-off: (CNx + CPx) x 0,4 Read at 450 nm Leer a 450 nm Bei 450 nm ablesen Lire à 450 nm Leggere a 450 nm Ler a 450 nm
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bioelisa anti-HBc
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