Características do atual modelo de avaliação (Decreto Regulamentar nº26/2012 de

Nous avons vu précédemment que les hétérozygotes pour le double

mutant abd-A' Abd-B' , même en l'absence d'appariement possible entre les

deux copies du complexe, sont significativement moins transformés que les

hémizygotes pour la déficience complète de BX-C (figure 9C). Ce résultat

suggère que les régions iab laissées intactes par la double mutation sont

capables d'agir en trans pour réprimer l'apparition des LD, même si

l'appariement des deux copies de BX-C est empêchée.

Les phénotypes décrits ci-dessus sont toujours plus marqués dans les

segments antérieurs et décroissent progressivement de segment en segment

vers le pôle postérieur de l'animal (figures 8, 9 et 10). Ces résultats suggèrent

une accumulation de fonctions suppressives de LD dans les segments

postérieurs du SNC. Cette idée implique que :

1/ dans chaque segment une nouvelle fonction suppressive de LD est

activée. L'hypothèse la plus simple est sans doute que chaque région iab, il

en existe une par segment, possède une fonction suppressive de LD.

2/ Lorsqu'une fonction suppressive de LD est activée dans un segment,

elle demeure active dans les segments postérieurs au segment d'activation.

Nous avons effectivement constaté que abd-A est nécessaire de A2 à A6, et

41/ Délétions prop:-essives de BX-C

L'analyse des phénotypes hétérozygotes pour une série de déficiences du

complexe de plus en plus grandes confirme partiellement cette hypothèse

(figure 10). Toutes les déficiences de la série ont déjà été décrites

précédemment. Elles emportent toutes la partie gauche du complexe (domaine

Uhx). Leur étendue dans la région abdominale est rappelée. Ces délétions de

la plus petite à la plus étendue sont :

1/ Df(3R)P10 s'étend jusque dans l'unité de transcription abd-A, et

enlève une partie de son extrémité 3'. Le phénotype ne fait apparaître des LD

pratiquement qu'en A2, mais la transformation dans ce segment est plus

prononcée que celle de l'hétérozygote abd-A^^^! + (figure 10, histogramme en

noir, et figure IIA).

2/ Df(3R)P2 et Df(3R)P13 délètent toutes deux l'unité de transcription

abd-A et la région iab-3 en plus de la région iab-2. Ces deux délétions

produisent des LD jusqu'en A6 (figure 10, histogramme ombré sombre).

3/ Df(3R)Ubx^^^ emporte tout le domaine abd-A, et fait aussi

apparaître des LD jusqu'en A6. Mais le phénotype est plus transformé que

celui des deux déficiences précédentes (figure 10, histogramme ombré clair).

4/ Df(3R)iab-7^^0enlève tout le complexe, sauf l'unité de transcription

Abd-B. Les hétérozygotes pour cette déficience montrent des LD jusqu'en A7

(figure 10, histogramme en trait moyen).

5/ Enfin, Df(3R)BX-Cl + est encore plus extrême que Df(3R)iab-7^^0/ +

dans les segments A5 à A7 (figure 10, histogramme en trait fin).

Pour que cette série soit complète, il manque deux déficiences dont les

points de rupture seraient localisés entre les fonctions iab-5 et iab-6, et iab-6

et iab-7. Néanmoins, ces résultats indiquent l'existence d'une fonction

suppressive de LD pour chacune des régions iab-2, iab-3, iab-4 et au moins

une fonction suppressive de LD pour les régions iab-5, iab-6, et iab-7.

Ces résultats permettent également de préciser les domaines d'action

de ces fonctions. La différence entre abd-A^^^!■¥ et Df(3R)P10/(figure

IIA) montre que iab-2 est au moins nécessaire en A2 (tableau 5, génotype b).

La différence de phénotype entre Df(3R)P10 et Df(3R)P2 indique que abd-A

et/ou iab-3 sont requis pour la suppression des LD au moins dans les

segments A2 à A6. Nous avons vu précédemment que abd-A est nécessaire

dans les segments A2 à A6 (figure 8). La contribution de iab-3 à la

suppression des LD est déduite de la figure 9B (histogrammes ombré et à

trait épais). En effet, la délétion de l'unité de transcription abd-A et de la

région iab-3 engendre un phénotype plus extrême dans les segments A3 à A5,

Figure 11. La fonction suppressive de LD

d'iab-2.

A/ Trait épais : abd-AP10/+,

trait fin : Df(3R)P10/+.

B/ Noir : iab-2S3/iab-2S3,

ombré : abd-AP10/+

trait épais :

Dp(l;3)BX-C/+;abd-API0/Df(3R)BX-C,

qu'un mutant abd-A' extrême dont les chromosomes 3 homologues ne peuvent

s'apparier. La comparaison de Df(3R)P2 et de Df(3R)Ubx^09 montre que

iab-4 est requis dans les segments A3 à A6 (tableau 5, génotype e). De même, la

ou les fonctions suppressives de LD contenues dans les régions iab-5, iab-6, et

iab-7 sont nécessaires au moins en A6 (tableau 5, génotype g). Enfin, la

délétion totale du complexe par rapport à Df(3R)iab-7^^^ élimine non

seulement l'unité de transcription Abd-B, mais aussi les fonctions iab-8 et

iab-9, toutes deux localisées au sein de cette unité de transcription. Il n'est

pas possible de distinguer l'effet sur la suppression des LD, lié à chacune de

ces trois composantes. Cependant, le fait que la différence de phénotype

entre ces deux délétions se marque dans les segments A5 à A7 indique que

cette différence est liée exclusivement à Abd-B en A5 et A6, et sans doute

principalement, si pas complètement, en A7. En effet, seul iab-8 dont le

domaine d'action est le PS 13 (A7 postérieur, et A8 antérieur) pourrait aussi

réprimer l'apparition des LD en A7.

42/ Mutations iab

Pour chaque région iab, nous avons testé de 1 à 3 mutations

différentes, soit à l'état homozygote lorsque cette combinaison est viable

jusqu'au troisième stade larvaire, soit à l'état hétérozygote. Toutes les

combinaisons montrent un phénotype sauvage, sauf l'homozygote

iab-2^^ /iab-2^^ qui montre une très faible transformation en A2 (figure IIB,

histogramme en noir). Ce résultat confirme qu'iab-2 est nécessaire à la

suppression des LD en A2 (tableau 5, génotype a). Notons que l'homozygote

iab-2^3 /iab-2^^ produit une transformation nettement moindre que

Df(3R)P10/ + (figure IIA, histogramme en trait fin). Ce résultat s'explique

certainement par la nature des deux lésions. Alors que le point de rupture

d'iab-2^^ se situe à l'extrémité proximale de la région iab-2, la Df(3R)P10

emporte toute la région iab-2 (figure 7).

Les combinaisons /mns-hetérozygotes entre dexix mutations iab de régions

différentes sont sauvages.

Une série de combinaisons irans-hétérozygotes entre des mutations

abd-A' et des mutations iab' du domaine abd-A ont été analysées :

1/ abd-A/iab-2. abd-A^!iab-2^^^^, ei abd-A^^/iab-2^^ ont an

phénotype respectivement semblable à abd-A^^^ I + et abd-A^^ /+.

abd-A^^O/iab-2^^ est nettement plus extrême que abd-A^^^/ + en A2, et

légèrement plus extrême dans les segments A3 à A5 (figure IIB,

AJ Ombré : abd-AP10/+,

trait épais : Dp(l;3)BX-C/+;abd-APJ0/Df(3R)BX-C

trait fin : abd-API0/iab-3Uab4.

B/ Trait épais : abd-AMX2/+,

trait fin : abd-AMX2/iab-3B277.

Figure 13 (ci-contre). La fonction

suppressive de LD d'iab-4.

Trait épais ; Df(abd-A iab-3)/+,

Cependant, nous avons vu plus haut que le chromosome ahd-A^^^ est encore

capable d'interagir avec le chromosome homologue afin d'assurer la

suppression des LD. En effet, rappelons que lorsque ce chromosome

abd-est empêché de s'apparier par le transfert de la copie BX-C sauvage du

chromosome homologue sur le chromosome X, le phénotype mutant engendré

est accentué (figure 8D, histogrammes ombré et en trait épais).

iab-2^^ étant une inversion interne au chromosome 3, elle devrait aussi

entraîner l'impossibilité de transvection entre les deux complexes

homologues. Par conséquent, afin d'évaluer la contribution de la fonction

suppressive de LD à'iab-2, il faut comparer le phénotype des larves

iab-2^3/abd-APlO à celui des individus Dp(l;3)BX-C/+;abd-AP10/Df(3R)BX-C

(figure IIB, histogrammes en trait fin et en trait épais, respectivement). Les

deux phénotypes sont équivalents. En définitive, cette comparaison ne

permet pas de tirer d'information supplémentaire sur le domaine d'action de

la fonction suppressive de LD d'iab-2.

2/ abd-A/iab-3. Nous avons testé les quatre combinaisons possibles

entre les allèles PIO et MX2 pour abd-A', et les allèles B277 et Uab4 pour

iab-3'. Ces combinaisons montrent un phénotype plus grave que les

combinaisons abd-A' / + correspondantes, dans les segments A2 à A6 (figure

12).

Les mutations ia6-3-®^^^et ia6-3^®^‘^sont également provoquées par des

points de rupture qui empêchent vraisemblablement les possibilités de

transvection entre les deux copies BX-C homologues. Dès lors, afin de définir

la contribution de la fonction iab-3 dans la suppression des LD, ainsi que son

domaine d'action, le phénotype des ^rans-hétérozygotes abd-A' /iab-3' doit

être comparé à celui de Dp(l;3)BX-C! +;abd-A' !Df(3R)BX-C où la

transvection est aussi prévenue. Les individus abd-AF^^! iab-3P^'^'^

montrent un phénotype équivalent à Dp(l;3)BX-C! -\-;abd-AP^3/ j)f(2R)BX-C

dans le segment A2, mais dans les segments A3 à A6, leur phénotype est

nettement plus transformé. Les larves abd-AP^3ÜQ^ij.^Uabé montrent,

quant à elles, une transformation significativement plus importante que

Dp(l;3)BX-C! ■¥; abd-AP^3/ j)f(3R)BX-C dans tous les segments A2 à A6

(figure 12A, histogrammes en trait fin et épais, respectivement). Les

résultats des frans-hétérozygotes abd-A' ! iab-3' confirment non seulement

que la fonction iab-3 est suppressive de LD dans les segments A3 à A5 (confer

résultats des déficiences progressives), mais ils montrent aussi que cette

fonction opère également dans les segments A2 et A6 (tableau 5, génotype d).

3/ abd-A!iab-4303 Lgg allèles abd-AP^^, abd-A^^^, abd-A^^

que les hétérozygotes abd-A' /+ respectifs. De plus, la combinaison

Df(abd-A iab-3)Iiab-4^0^ montre une transformation plus sévère que

Df(abd-A iab-3)l + , dans les segments A3 à A6 (figure 13 ; tableau 5, génotype

e)).

Ces résultats confirment l'existence d'une fonction suppressive de LD

associée à chacune des régions iab-2, iab-3 et iab-4. Ils confirment également

les domaines d'action définis plus haut pour iab-2 et iab-4, respectivement le

segment A2 et les segments A3 à A6. Quant à iab-3, son action est nécessaire

dans les segments A2 à A6.

Des imns-hétérozygotes entre des mutations abd-A ' et des mutations

iab' du domaine Abd-B ont également été examinées. Les combinaisons

abd-A'/iab' testées, où iab' peut être iab-5', iab-6', iab-7', ou iab-8',

montrent un phénotype semblable à l'hétérozygote abd-A' /+ correspondant.

Ces résultats confirment également que les effets d'une mutation dans

le domaine abd-B ne sont pas détectables même lorsqu'une des deux copies

abd-A est mutée. Cette observation suggère que les fonctions du domaine

abd-A subsistant dans les hétérozygotes abd-A' / + testés, sont suffisantes

pour assurer la suppression des LD dans les segments postérieurs.

IL La région iab-3 : test de l'effet trans

Les résultats exposés dans la partie précédente suggèrent que l'action

des régions iab sur la suppression des LD s'exerce en trans. Soit, ces régions

codent pour des ^m/zs-activateurs des unités codantes adjacentes, abd-A et/ou

Abd-B, qui sont, elles, responsables de la suppression effective des LD. Soit,

ces régions codent pour des suppresseurs effectifs et directs de LD.

Pour tester l'hypothèse d'une action en trans d'iab-3 , le principe de

l'expérience est d'isoler du complexe bithorax la région d'ADN contenant la

fonction iab-3 , et de la réinsérer à un autre endroit du génome. De cette

manière les fonctions cis -régulatrices de iab-3 seront éliminées, seules

subsisteront les éventuelles fonctions trans.

La région iab-3 est définie moléculairement par la localisation de

quatre points de rupture se situant entre +54,5 et +64,5 sur la carte physique

du complexe (cet intervalle comprend les régions d'imprécision sur la

localisation des mutants), soit une dizaine de kb (figure 7). Cette région doit

être insérée dans un élément transposable P, élément génétique mobile

servant de vecteur pour intégrer de l'ADN dans le génome de la drosophile.

Cette technique permettra de générer au moins une lignée héréditairement

stable où la région iab-3 se localisera en dehors du complexe bithorax.

Cette lignée sera alors croisée à Df(3R)Ubx^^^{délété toute la partie

gauche du complexe, domaine abd-A compris), et le phénotype des LD sera

examiné. Si iab-3 contient une fonction suppressive de LD agissant en trans,

nous nous attendons à une atténuation du phénotype par rapport à

Df(3R)Ubxl09/^_

L'obtention de la région iab-3 dans l'élément P et la transformation du

transposon dans les mouches ont été réalisées dans le laboratoire du

1/ Obtention de la région iab-3 dans l'élément P

No documento A avaliação do desempenho docente e o trabalho colaborativo os professores (um estudo de caso) (páginas 45-49)