MELOXICAM 57
Figura 4.22– MTX e Ara-C - Isobolograma.
4.4
Caso de estudo IV- Sunitinib malate e
Meloxicam
Este caso de estudo ´e baseado num artigo desenvolvido na Universidade de Tr´as- os Montes e Alto Douro, com o intu´ıto de verificar o efeito in vitro dos f´armacos Meloxicam e Sunitinib Malate em c´elulas cancer´ıgenas da bexiga (Arantes-Rodrigues et al., 2013a).
Para realizar este estudo foram utilizadas trˆes linhas celulares diferentes, T24, 5637 e HT1376 (Figura4.23). Os dados utilizados para este caso de estudo apresentam-se como percentagem de prolifera¸c˜ao celular e est˜ao presentes nas tabelas4.7,4.8e4.9. Estes dados foram compilados na aplica¸c˜ao InterPharm e os resultados obtidos dos parˆametros dose-efeito, CI e DRI est˜ao presentes na tabela 4.10. Neste terceiro caso verifica-se que os valores obtidos na aplica¸c˜ao desenvolvida s˜ao semelhantes aos presentes no artigo.
Para este quarto caso de estudo verificou-se que o componente Sunitinib malate ´e mais forte que o componente Meloxicam, tal pode-se comprovar atrav´es das unidades de cada dosagem (Tabelas 4.7,4.8,4.9).
58 CAP´ITULO 4. APRESENTAC¸ ˜AO E DISCUSS ˜AO DOS RESULTADOS
Figura 4.23 – An´alise Imunofluorescente. Apoptose celular apresenta-se a fluorescente (Arantes-Rodrigues et al.,2013a).
Tabela 4.7– Meloxicam aumenta sinergicamente o efeito in vitro de Sunitinib malate (T24).
Meloxicam Sunitinib 0 1.9 nM 3.7 nM 7.5 nM 11 nM 0µM 100 79,83809 70,5 63,04797 48,47602 50µM 100 80,3 73,1 43,8 38,1 100µM 100 73,1 62,6 36,9 38,9 200µM 100 61,6 57,2 34,5 35,7 400µM 100 46,2 48,5 33,9 36,6
4.4. CASO DE ESTUDO IV- SUNITINIB MALATE E
MELOXICAM 59
Tabela 4.8– Meloxicam aumenta sinergicamente o efeito in vitro de Sunitinib malate (5637).
Meloxicam Sunitinib 0 1.9 nM 3.7 nM 7.5 nM 11 nM 0µM 100 70,6837 62,920 61,703 59,2699 50µM 100 88,8 63 53,9 45,9 100µM 100 72 61,4 52,7 46 200µM 100 60,9 54,6 43 42,4 400µM 100 52,7 46,9 39 41,7
Tabela 4.9 – Meloxicam aumenta sinergicamente o efeito in vitro de Sunitinib malate (HT1376). Meloxicam Sunitinib 0 1.9 nM 3.7 nM 7.5 nM 11 nM 0µM 100 88,700 63,846 67,066 50,936 50µM 100 76,6 51 46,2 42,1 100µM 100 67,8 54 46 42,7 200µM 100 62,5 52 46 41,4 400µM 100 51,7 55 38,4 36
60 CAP´ITULO 4. APRESENTAC¸ ˜AO E DISCUSS ˜AO DOS RESULTADOS
Tabela 4.10 – Resultados obtidos pelo InterPharm no caso de estudo IV
Resultados do artigo Resultados gerados pelo InterPharm Cell Sunitinib Meloxicam CI50 DRI50 Sunitinib Meloxicam CI50 DRI50 lines (IC50µM) (IC50µM) (IC50µM) (IC50µM) (IC50µM) (IC50µM) T24 5.69 800 0.73 Sunitinib:5.69 5.69 800 0.73 Sunitinib:5.69 Meloxicam:2 Meloxicam:2 5637 20 600 0.75 Sunitinib:20 20 600 0.75 Sunitinib:20 Meloxicam:1.5 Meloxicam:1.5 HT1376 6 600 0.94 Sunitinib:6 6 600 0.94 Sunitinib:6 Meloxicam:1.5 Meloxicam:1.5
Na linha celular T24 pode-se verificar a existˆencia de sinergismo, sendo que no gr´afico do efeito mediano (Figura4.25) a reta de ajuste da combina¸c˜ao dos f´armacos apresenta-se acima das retas dos f´armacos isolados e possui declive positivo (m> 0).
Figura 4.24– Curva dose-efeito. Figura 4.25– Gr´afico efeito mediano.
No gr´afico do ´Indice de Combina¸c˜ao (Figura4.26) os valores da experiˆencia encontram- se a baixo da reta y=1 e o valor da tabela4.10´e 0.73 (CI< 1), o que indica sinergismo.
4.4. CASO DE ESTUDO IV- SUNITINIB MALATE E
MELOXICAM 61
Figura 4.26– Gr´afico CI. Figura 4.27– Gr´afico log(CI).
Os valores de DRI de Meloxicam e de Sunitinib malate s˜ao superiores a 1 (Figura
4.10), o que ´e favor´avel pois possibilita a diminui¸c˜ao da toxicidade dos f´armacos no corpo.
Observando o Isobolograma (Figura 4.28) verifica-se que as doses da combina¸c˜ao do f´armaco Sunitinib malate com o f´armaco Meloxicam para os efeitos de 30%, 40% e 50% encontram-se claramente abaixo das respetivas linhas de aditividade, o que indica claro sinergismo para a linha celular T24.
62 CAP´ITULO 4. APRESENTAC¸ ˜AO E DISCUSS ˜AO DOS RESULTADOS
Figura 4.29– T24 - Superf´ıcie de ajuste.
Quanto `a linha celular 5637 pode-se concluir a existˆencia de sinergismo, pois observando o gr´afico do efeito mediano (Figura4.31) verifica-se que a reta de ajuste da combina¸c˜ao, desenhada a verde, encontra-se acima da reta y=0 e bastante acima das retas de ajuste dosf´armacos isolados.
4.4. CASO DE ESTUDO IV- SUNITINIB MALATE E
MELOXICAM 63
Tamb´em o gr´afico do ´Indice de Combina¸c˜ao corrobora a existˆencia de efeito sin´ergico, visto que o valor da experiˆencia ser de 0.75 (Tabela 4.10) e os valores da figura 4.32
estarem abaixo de 1.
Figura 4.32– Gr´afico CI. Figura 4.33– Gr´afico log(CI).
Os valores de DRI obtidos pela experiˆencia (Tabela 4.10) s˜ao satisfat´orios pois apresentam-se acima de 1.
Para esta linha celular efetuou-se um isobolograma com valores de efeito de 0.3, 0.4 e 0.5, pois ´e a zona que mais interessa a este estudo. Pelo m´etodo do Isobolograma confirma-se a existˆencia de sinergismo, visto que os valores da mistura para os v´arios efeitos se encontram bastante abaixo das isobolas (Figura 4.34).
64 CAP´ITULO 4. APRESENTAC¸ ˜AO E DISCUSS ˜AO DOS RESULTADOS
Figura 4.34– 5637 - Isobolograma.
Figura 4.35– 5637 - Superf´ıcie de ajuste.
Analisando agora o caso da linha celular HT1376, atrav´es do gr´afico do efeito mediano da teoria de Chou (Figura 4.37), pode-se inferir que existe sinergismo pois a combina¸c˜ao dos f´armacos encontra-se acima das retas dos f´armacos isolados.
4.4. CASO DE ESTUDO IV- SUNITINIB MALATE E
MELOXICAM 65
Figura 4.36– Curva dose-efeito. Figura 4.37– Gr´afico efeito mediano.
No gr´afico de CI (Figura 4.38) pode-se concluir que existe sinergismo para efeitos inferiores a 61%, assim para 50% do efeito (que ´e o efeito de maior interesse para este estudo) existe leve sinergismo pois o valor de CI ´e 0.94 (Tabela 4.10), menor que 1 por´em muito pr´oximo.
Figura 4.38– Gr´afico CI. Figura 4.39– Gr´afico log(CI).
Os valores de DRI para os f´armacos Sunitinib malate e Meloxicam obtidos pela experiˆencia (Tabela 4.10) s˜ao bastante aceit´aveis pois apresentam-se na zona de redu¸c˜ao da dose favor´avel (Figura 2.8).
66 CAP´ITULO 4. APRESENTAC¸ ˜AO E DISCUSS ˜AO DOS RESULTADOS
O isobolograma (Figura 4.40) da combina¸c˜ao do Sunitinib malate com o Meloxicam na linha celular HT1376 indica sinergismo para os valores de efeito de interesse desta experiˆencia (0.3, 0.4 e 0.5), visto que os pares das doses obtˆem o mesmo efeito mas com menores quantidades de f´armaco.
Figura 4.40– HT1376 - Isobolograma.
5
Conclus˜ao e trabalho futuro
No ˆambito da presente disserta¸c˜ao, houve necessidade de efectuar pesquisa sobre o estado da arte em v´arias ´areas cient´ıficas. Come¸cou-se pela ´area da farmacologia para perceber que efeitos existem na combina¸c˜ao de f´armacos, seguiu-se para a pesquisa de m´etodos existentes na an´alise e determina¸c˜ao do efeito, e por ´ultimo, investigou-se na ´area da Engenharia Biom´edica que programas j´a s˜ao utilizados com o prop´osito de estudar a intera¸c˜ao de f´armacos.
Com a descoberta de novas terapias e a administra¸c˜ao simultˆanea de f´armacos para a cura de v´arias patologias em simultˆaneo no paciente, ´e necess´ario estudar e analisar quais os efeitos da combina¸c˜ao administrada. No contexto desta necessidadee devido ao elevado custo dos software existentes, foi elaborado uma aplica¸c˜ao, InterPharm, gerada em MATLAB R
, que permite ao utilizador introduzir os dados de cada f´armaco e da combina¸c˜ao destes e atrav´es de algoritmos cl´assicos obter an´alises e as conclus˜oes acerca da terapia.
Para cada tipo de efeito existente (antagonismo, sinergismo e aditividade) foram realizados casos de estudo e a an´alise dos dados gerados foram semelhantes aos de outros software onde foram compilados os mesmos casos de estudo.
68 CAP´ITULO 5. CONCLUS ˜AO E TRABALHO FUTURO
Pelos resultados dos testes efectuados, o software proposto nesta disserta¸c˜ao pode ser utilizado para analisar o efeito da combina¸c˜ao de dois f´armacos, observando-se os valores de CI, DRI e Dm e os gr´aficos de dose-efeito, efeito mediano, CI, log(CI), DRI, log(DRI), isobolograma e a superf´ıcie de ajuste.
Grande parte dos objetivos inicialmente estabelecidos foram alcan¸cados: foi desenvolvida uma interface gr´afica que pode ser utilizada por investigadores ou m´edicos para inferir do sinergismo/ antagonismo/ aditividade da combina¸c˜ao de dois f´armacos mesmo sem conhecerem os algoritmos que suportam esta an´alise.
Como trabalho futuro poder-se-ia desenvolver uma aplica¸c˜ao mobile para SmartPhones com sistema operativo Android/ iOS de forma a facilitar uma primeira an´alise do efeito da combina¸c˜ao de dois f´armacos. Uma vez que o MATLAB R
´e um software de ”espectro largo”que n˜ao tem como objetivo principal o desenvolvimento de interfaces gr´aficas a aplica¸c˜ao desenvolvida do ponto de vista gr´afico ficou um pouco aqu´em do pretendido de modo que com outro tipo de linguagem de programa¸c˜ao seria poss´ıvel desenvolver uma interface mais funcional.
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