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Curvas padrão dos genes em estudo nas experiências de RT-PCR em tempo real para determinação da eficiência das reacções

Curva Padrão – AGP1

Figura 1: Resultado da curva padrão para o gene da AGP1. O declive é de -3,201 sendo a eficiência da reação de

105,3%, e o R=0,999. A curva foi realizada utilizando o programa iQ52.0, Standard Edition Optical System Software

versão 2.0 (Biorad).

Curva Padrão – UBC9

Figura 2: Resultado da curva padrão para o gene da UBC9. O declive é de -3,262 sendo a eficiência da reação de

102,6%, e o R=0,992. A curva foi realizada utilizando o programa iQ52.0, Standard Edition Optical System Software

Curva Padrão – AGP9

Figura 3: Resultado da curva padrão para o gene da AGP9. O declive é de -3,525sendo a eficiência da reação de 92,2%, e o R=1. A curva foi realizada utilizando o programa iQ52.0, Standard Edition Optical System Software versão 2.0 (Biorad).

Curva Padrão – UBC9

Figura 4: Resultado da curva padrão para o gene da UBC9. O declive é de -3,511 sendo a eficiência da reação de

92,7%, e o R=0,972. A curva foi realizada utilizando o programa iQ5 2.0, Standard Edition Optical System Software

Curva Padrão – AGP10

Figura 5: Resultado da curva padrão para o gene da AGP10. O declive é de -3,504sendo a eficiência da reação de 92,9%, e o R=1. A curva foi realizada utilizando o programa iQ52.0, Standard Edition Optical System Software versão 2.0 (Biorad).

Curva Padrão – UBC9

Figura 6: Resultado da curva padrão para o gene da UBC9. O declive é de -3,444sendo a eficiência da reação de 95,1%, e o R=0,999. A curva foi realizada utilizando o programa iQ5 2.0, Standard Edition Optical System Software

Curva Padrão – AGP12

Figura 7: Resultado da curva padrão para o gene da AGP12. O declive é de -3,370sendo a eficiência da reação de 98%, e o R=0,998. A curva foi realizada utilizando o programa iQ5 2.0, Standard Edition Optical System Software

versão 2.0 (Biorad).

Curva Padrão – UBC9

Figura 8: Resultado da curva padrão para o gene da UBC9. O declive é de -3,239sendo a eficiência da reação de 103,6%, e o R=0,998. A curva foi realizada utilizando o programa iQ52.0, Standard Edition Optical System Software

Curva Padrão – AGP15

Figura 9: Resultado da curva padrão para o gene da AGP15. O declive é de -3,517sendo a eficiência da reação de 92,4%, e o R=0,998. A curva foi realizada utilizando o programa iQ52.0, Standard Edition Optical System Software

versão 2.0 (Biorad).

Curva Padrão – UBC9

Figura 10: Resultado da curva padrão para o gene da UBC9. O declive é de -3,239sendo a eficiência da reação de 103,6%, e o R=0,998. A curva foi realizada utilizando o programa iQ52.0, Standard Edition Optical System Software

Curva Padrão – AGP20

Figura 11: Resultado da curva padrão para o gene da AGP20. O declive é de -3,284sendo a eficiência da reação de 101,6%, e o R=0,982. A curva foi realizada utilizando o programa iQ52.0, Standard Edition Optical System Software

versão 2.0 (Biorad).

Curva Padrão – UBC9

Figura 12: Resultado da curva padrão para o gene da UBC9. O declive é de -3,239sendo a eficiência da reação de 103,6%, e o R=0,998. A curva foi realizada utilizando o programa iQ52.0, Standard Edition Optical System Software

Anexo V – Resultado da sequenciação das construções obtidas após recombinação com o vector pENTR/D-TOPO

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP1 inserido no vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP1) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido universal M13uni, da construção obtida após recombinação da sequência promotora como vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP1_M13uni). O alinhamento das sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html).

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP1 inserido no vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP1) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido de iniciação esquerdo utilizado para amplificação da sequência por PCR, da construção obtida após recombinação da sequência promotora como vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP10_pAGP1rv). O alinhamento das sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html).

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP9 inserido no vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP9) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido universal M13uni, da construção obtida após recombinação da sequência promotora como vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP9_M13uni). O alinhamento das sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html).

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP9 inserido no vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP9) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido de iniciação esquerdo utilizado para amplificação da sequência por PCR, da construção obtida após recombinação da sequência promotora como vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP9_pAGP9rv). O alinhamento das sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html).

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP10 inserido no vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP10) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido universal M13uni, da construção obtida após recombinação da sequência promotora como vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP10_M13uni). O alinhamento das sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html).

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP10 inserido no vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP10) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido de iniciação esquerdo utilizado para amplificação da sequência por PCR, da construção obtida após recombinação da sequência promotora como vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP10_pAGP10rv). O alinhamento das sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html).

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP12 inserido no vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP12) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido universal M13uni, da construção obtida após recombinação da sequência promotora como vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP12_M13uni). O alinhamento das sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html).

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP12 inserido no vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP12) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido de iniciação esquerdo utilizado para amplificação da sequência por PCR, da construção obtida após recombinação da sequência promotora como vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP12_pAGP12rv). O alinhamento das sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html).

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP15 inserido no vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP15) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido universal M13uni, da construção obtida após recombinação da sequência promotora como vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP15_M13uni). O alinhamento das sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html).

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP15 inserido no vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP15) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido de iniciação esquerdo utilizado para amplificação da sequência por PCR, da construção obtida após recombinação da sequência promotora como vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP15_pAGP15rv). O alinhamento das sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html).

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP20 inserido no vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP20) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido universal M13uni, da construção obtida após recombinação da sequência promotora como vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP20_M13uni). O alinhamento das sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html).

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP20 inserido no vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP20) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido de iniciação esquerdo utilizado para amplificação da sequência por PCR, da construção obtida após recombinação da sequência promotora como vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP20_pAGP20rv). O alinhamento das sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html).

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP23 inserido no vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP23) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido universal M13uni, da construção obtida após recombinação da sequência promotora como vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP23_M13uni). O alinhamento das sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html).

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP23 inserido no vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP23) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido de iniciação esquerdo utilizado para amplificação da sequência por PCR, da construção obtida após recombinação da sequência promotora como vector pENTR/D-TOPO (TOPOAGP23_pAGP23rv). O alinhamento das sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html).

Anexo VI – Resultado da sequenciação das construções obtidas após recombinação do vector pENTR/D-TOPO, contendo a sequência promotora de cada AGP, com o vector pNLS3xGFPnost-pGII

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP1 inserido no vector pNLS3xGFPnost-pGII (pAGP1NLS3GFP) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido universal M13uni, da construção obtida após recombinação do vector pENTR/D-TOPO, contendo a sequência promotora da AGP1, com o vector pNLS3xGFPnost-pGII (pAGP1NLS3GFP_M13uni). O alinhamento das

sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP9 inserido no vector pNLS3xGFPnost-pGII (pAGP9NLS3GFP) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido universal M13uni, da construção obtida após recombinação do vector pENTR/D-TOPO, contendo a sequência promotora da AGP9, com o vector pNLS3xGFPnost-pGII (pAGP9NLS3GFP_M13uni). O alinhamento das

sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP10 inserido no vector pNLS3xGFPnost-pGII (pAGP10NLS3GFP) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido universal M13uni, da construção obtida após recombinação do vector pENTR/D-TOPO, contendo a sequência promotora da AGP10, com o vector pNLS3xGFPnost-pGII (pAGP10NLS3GFP_M13uni). O alinhamento das

sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP12 inserido no vector pNLS3xGFPnost-pGII (pAGP12NLS3GFP) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido universal M13uni, da construção obtida após recombinação do vector pENTR/D-TOPO, contendo a sequência promotora da AGP12, com o vector pNLS3xGFPnost-pGII (pAGP12NLS3GFP_M13uni). O alinhamento das

sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2

Alinhamento da sequência esperada para o fragmento da região promotora para o gene da AGP15 inserido no vector pNLS3xGFPnost-pGII (pAGP15NLS3GFP) com o resultado da sequenciação, com o oligonucleótido universal M13uni, da construção obtida após recombinação do vector pENTR/D-TOPO, contendo a sequência promotora da AGP15, com o vector pNLS3xGFPnost-pGII (pAGP15NLS3GFP_M13uni). O alinhamento das

sequências foi efectuado recorrendo ao programa ClustalW2

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