DADOS DO PARECER

Protocolo de pesquisa sob numeração do CEP/INCA N° 117/12. Estudo retrospectivo, epidemiológico molecular, multicêntrico e multidisciplinar. Estudo cooperativo entre o Instituto Nacional de Câncer (INCA/MS) e o Institute of Cancer Research da Inglaterra que visa identificar alterações celulares e genômicas nas leucemias de células T pediátrica através de testes imunofenotípicos e moleculares.

JUSTIFICATIVA:

As leucemias linfóides de células T (LLA-T) são na sua grande maioria, associadas a um prognóstico sombrio, com baixas taxas de sobrevida. A LLA-T se comporta como leucemia de alto risco de recaída e de mau prognóstico independentemente da escolha do protocolo terapêutico. Especula-se que algumas translocações com fusões gênicas anômalas, ou mutações em genes de vias de sinalização celular desempenham papel importante na sua patogênese. Algumas destas alterações são vistas hoje como alvoterapêutico.

METODOLOGIA:

Apresentação do Projeto:

Área 1. Genética Humana.

(Trata-se de pesquisa em que esteja prevista a dissociação irreversível dos dados dos sujeitos de pesquisa.);

Área 8. Pesquisa com cooperação estrangeira.

Coordenação de Pesquisa

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnologico ((CNPq))

Patrocinador Principal: 20.231-092 (21)3207-4550 E-mail: cep@inca.gov.br Endereço: Bairro: CEP: Telefone:

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INSTITUTO NACIONAL DE CÂNCER/ INCA/ RJ

Serão analisadas amostras de 200 crianças e adolescentes (menores ou iguais a 21 anos) com LLA-T (subtipos T0-T4), enviadas ao laboratório do PHOP para diagnóstico (2006-2012). Estas amostras são provenientes de aspirados de medula óssea (aMO) e sangue periférico (SP) obtidas antes de qualquer tratamento específico para leucemias, e ao longo do protocolo de tratamento para avaliação de doença residual mínima. Células mononucleares devidamente armazenadas (-80°C), após caracterização imunofenotípica e molecular ao diagnóstico (Prot. CEP 107/06) serão sistematicamente rastreados para biomarcadores propostos neste estudo. Objetivando realizar um estudo longitudinal, serão utilizados também cartões de filtro neonatais de pacientes com menos a 24meses para rastreamento de alterações ao nascimento.

Os testes diagnósticos incluirão uma análise morfológica das células linfoides e imunofenotipagem por citometria de fluxo usando um painel de anticorpos monoclonais estabelecidos para identificação de células T. A citometria de fluxo também será utilizada para avaliar a expressão do receptor de IL-7R alfa (CD127) nas células leucêmicas.

DNA genômico e RNA serão extraídos com conjunto de reagentes comerciais. O RNA será retrotranscrito em cDNA usando métodos convencionais. Métodos moleculares estabelecidos serão utilizados para avaliar alterações (mutações e rearranjos) envolvendo os genes TCR, NOTCH1, SIL, TAL1, FBXW7 e HOX11L2.

Para os experimentos de mapeamento genômico (número de cópias e de perda de heterozigose) amostras de DNA tumoral e não-tumoral (amostras de remissão) de cada paciente será preparadas de acordo com o protocolo do ensaio do Genome-Wide SNP Array 6.0 (Affymetrix) e analisadas utilizando softwares apropriados. Os achados moleculares terão sua significância estatística calculada através do teste do Quiquadrado e as análises serão processadas utilizando o pacote estatístico SPSS. A sobrevida global será estimada pelo método de Kaplan-Meier. Teste estatísticos apropriados serão utilizados para estimar as associações de riscos entre variáveis genômicas, e interação gene-gene.

Acompanham ao projeto: Carta acordo com o Institute of Cancer Research da Inglaterra (Dr. Anthony M. Ford); Termo de Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE) para responsável de paciente pediátrico ( T C L E _ L L A _ T _ A d o l e s c e n t e _ R e v i s a d o _ 1 1 . 0 3 . 1 3 ) e p a r a p a c i e n t e s a d o l e s c e n t e s ( T C L E _ L L A _ T _ i n f a n t i l _ R e v i s a d o _ 1 1 . 0 3 . 1 2 ) . 20.231-092 (21)3207-4550 E-mail: cep@inca.gov.br Endereço: Bairro: CEP: Telefone:

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OBJETIVOS PRIMÁRIOS:

- Identificar alterações celulares e genomicas nas leucemias de células T pediátrica através de testes imunofenotípicos e moleculares;

- Avaliar possíveis correlações entre as numero de cópias genomicas adicionais (CNAs) com as alterações imuno-moleculares identificadas ao diagnóstico em uma série de casos LLA-T estratificando diferentes faixas etárias [menor ou igual a 24 meses; >2anos-12anos e maior ou igual 13-21 anos].

OBJETIVOS SECUNDÁRIOS:

- Determinar o perfil de expressão do receptor de IL-7 (IL-7Ra) e quantificar os níveis de expressão de IL- 7Ra em membrana celular em células leucêmicas de LLA-T através da citometria de fluxo;

- Determinar se alterações moleculares características de LLA-T (SIL-TAL1, HOX11L2, MLL-ENL, NUP214- ABL1, mutações dos genes NOTCH1 e FBXW7) estão associadas ao nível de expressão celular do IL-7Ra - Avaliar o papel prognóstico do perfil de expressão imunofenotípica (CD127) e molecular (numero de copias genômicas alteradas, CNA) entre idade ao diagnóstico;

- Delinear os eventos genômicos adicionais requeridos para acelerar o surgimento franco da leucemia; - Investigar a correlação entre idade ao diagnóstico e o acúmulo de anormalidades adicionais.

Objetivo da Pesquisa:

Os riscos e benefícios foram devidamente ponderados.

Avaliação dos Riscos e Benefícios:

Estudo pertinente, devidamente justificado, com metodologia adequada aos objetivos propostos.

Comentários e Considerações sobre a Pesquisa:

1) Folha de Rosto Para Pesquisa Envolvendo Seres Humanos: Preenchida apropriadamente; 2) Projeto de Pesquisa: Adequado, após atender às pendências solicitadas pelo CEP/INCA;

3) Orçamento financeiro e fontes de financiamento: Apropriado, após atender às pendências solicitadas pelo CEP/INCA;

4) Termo de Consentimento Livre e Esclarecido: Foram apresentadas 2 (duas) versões de TCLE para responsável de paciente pediátrico e para pacientes adolescentes adequadas após atender às pendências solicitadas pelo CEP/INCA;

Considerações sobre os Termos de apresentação obrigatória:

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O presente projeto, seguiu nesta data para análise da CONEP e só tem o seu início autorizado após a aprovação pela mesma.

5) Formulário para Submissão de Estudos no INCA: Apropriado, após atender às pendências solicitadas pelo CEP/INCA.

6) Cronograma: Adequado aos objetivos propostos

7) Currículo do pesquisador principal e demais colaboradores: Apresentados

A fim de atender a regulamentação vigente, sugere-se consultar também a Res. CNS N° 292/99, que incorpora todas as disposições contidas na Res. CNS N°196/96 e é parte complementar da área temática específica "Pesquisas com participação estrangeira e pesquisas que envolvam remessa de material biológico para o exterior¿ (item VIII.4.c.8).

Recomendações:

Respostas ao Parecer Consubstanciado do CEP N° 226.109, submetidas à Plataforma Brasil (PB) em 17/04/2013:

Pendências decorrentes do currículo dos demais colaboradores: Atendidas

Conclusões ou Pendências e Lista de Inadequações:

Aprovado

Situação do Parecer:

Sim

Necessita Apreciação da CONEP:

Diante do exposto, o Comitê de Ética em Pesquisa do Instituto Nacional de Câncer (CEP-INCA), de acordo com as atribuições definidas na Resolução CNS 196/96, manifesta-se pela aprovação do projeto de pesquisa proposto.

Ressalto o(a) pesquisador(a) responsável deverá apresentar relatórios semestrais a respeito do seu estudo.

Considerações Finais a critério do CEP:

RIO DE JANEIRO, 18 de Abril de 2013

Carlos Henrique Debenedito Silva (Coordenador) Assinador por: 20.231-092 (21)3207-4550 E-mail: cep@inca.gov.br Endereço: Bairro: CEP: Telefone:

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ANEXO X (Declaração direitos autorais)