4.3.1 Desenho do estudo
O estudo clínico não cego e não controlado foi desenvolvido no período de janeiro a maio de 2012 envolvendo 15 indivíduos do sexo masculino e 15 indivíduos do sexo feminino, na faixa etária de 18 a 65 anos. O ensaio clínico fase I foi seguido conforme as diretrizes e normas regulamentadoras de pesquisas envolvendo seres humanos respaldando-se na Resolução no 251/97 do Conselho Nacional de Saúde (CNS) do Ministério da Saúde, e consiste em estudo em seres humanos de pequenos grupos de voluntários saudáveis de um novo princípio ativo ou nova formulação. Esta pesquisa propõe estabelecer uma evolução preliminar da segurança e não foi realizado o perfil farmacocinético.
4.3.2 Local da Pesquisa
Os ensaios clínicos fase I foram realizados no ambulatório de clínica médica do Hospital Universitário Lauro Wanderley (HULW) da UFPB, com a infraestrutura necessária ao desenvolvimento da pesquisa, inclusive para atender eventuais problemas resultantes da mesma. Os exames bioquímicos e hematológicos foram realizados no Laboratório de Análises Clínicas do HULW/UFPB.
4.3.3 Estudo Clínico
O estudo foi realizado com participação livre e espontânea de acordo com as diretrizes e normas regulamentadoras de pesquisa envolvendo seres humanos, contidas nas Resoluções no 466/12 (aprova as diretrizes e normas regulamentadoras de pesquisa envolvendo seres humanos) e 251/97 (determina as normas de pesquisa envolvendo seres humanos para a área temática de pesquisa com novos fármacos, medicamentos, vacinas e testes diagnósticos) do Conselho Nacional de Saúde (CNS) do Ministério da Saúde e após ter sido submetido e devidamente autorizado pelo Comitê de Ética do HULW da UFPB sob o protocolo n0 016/11 (anexo B). Após os devidos esclarecimentos, os voluntários assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido (apêndice A), no qual se encontrava todas as informações relativas ao estudo de forma simples e direta, como também a autorização dos mesmos concordando em participar da pesquisa e autorizando a publicação dos resultados da experiência em eventos de divulgação científica.
Durante todo o curso dos experimentos, os voluntários foram instruídos a comunicarem aos pesquisadores qualquer sinal ou sintoma clínico que porventura apresentassem.
4.3.3.1 Probandos
Foram convidados 38 indivíduos, de ambos os sexos, na faixa etária de 18 a 65 anos, porém 8 abandonaram a pesquisa por motivos particulares, contabilizando 8 perdas. Destes, foram estudados 15 indivíduos do sexo masculino e 15 indivíduos do sexo feminino, divididos em dois grupos, considerados clinicamente sadios, após minuciosa anamnese e exame físico completo, e recrutados da comunidade universitária da UFPB e do quadro de
funcionários do Hospital Universitário Lauro Wanderley, através de campanhas nas referidas instituições.
4.3.3.2 Critérios de inclusão
Indivíduos do sexo masculino ou feminino entre 18 e 65 anos, saudáveis, que deram o seu consentimento livre e esclarecido por escrito e que se comprometeram em seguir o protocolo experimental.
4.3.3.3 Critérios de exclusão
Foram considerados critérios de exclusão, os voluntários que demonstraram alterações laboratoriais nos exames de análise clínicas, que revelaram disfunção hepática, renal, diabetes, alterações cardíacas, grávidas, alcoólatras (80 mL de álcool/dia), fumantes ou em uso de alguma medicação.
4.3.3.4 Período de administração
Os voluntários pré-selecionados foram distribuídos em dois grupos de quinze indivíduos cada (15 homens e 15 mulheres). Os dois grupos foram tratados diariamente, no turno da noite, por via dermal, com aproximadamente 0,5 g do creme dermatológico celodenina 4%, por um período de 4 semanas. Cada efeito adverso (dermatológico ou não dermatológico) foi registrado.
4.3.4 Protocolo experimental
Foi elaborado um protocolo experimental para cada voluntário, com o objetivo de registrar todo o acompanhamento durante o período do experimento. No protocolo foi elaborada uma agenda de acompanhamento e datas para a realização dos exames. Os demais registros foram referentes aos dados de identificação dos voluntários, parâmetros hematológicos e parâmetros bioquímicos (apêndice C). Após o convite para participar da pesquisa com explicação, verbal e escrita dos procedimentos, assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido, os voluntários compareceram ao Hospital Universitário Lauro Wanderley, pela manhã respeitando período de jejum de 12 horas, e após anamnese e
exame físico, foi-lhes coletado o sangue em tubos com anticoagulante EDTA para determinação dos parâmetros hematológicos e em tubos com gel separador – Microtainer
Becton Dickson – para obtenção do soro para determinação de parâmetros bioquímicos. Para
as mulheres, foi solicitado -HCG. Depois de analisados os resultados, respeitando- se os critérios de exclusão, foi entregue o creme celodenina 4% (figura 17), acondicionado em reservatórios de 15 gramas, utilizado pelos voluntários diariamente durante a noite, sendo retirado pela manhã, durante 4 semanas.
Figura 17 - Celodenina 4%, em reservatórios de 15 gramas, utilizado pelos voluntários
Fonte: Cunha, 2012
Nos dias previstos da agenda de acompanhamento, semanalmente durante 1 mês, os voluntários foram avaliados, através da história clínica e exame físico e responderam o questionário referente ao estudo. Após o término da utilização do creme, os mesmos foram novamente submetidos a exames hematológicos e bioquímicos. Durante todo o período, os participantes permaneceram em suas atividades diárias normais e não houve restrição na dieta. O fluxograma do estudo está representado na figura 18.
Figura 18 - Fluxograma do estudo clínico fase I
4.3.5 Parâmetros hematológicos
As análises hematológicas constaram do estudo das séries vermelha (eritrograma) e série branca (leucograma) e contagem de plaquetas. No hemograma foram analisados os seguintes parâmetros: contagem de hemácias, dosagem da hemoglobina, leucometria com diferencial de neutrófilos e contagem de plaquetas. Estas determinações foram realizadas no analisador celular CELL DYN 3500 DA ABBOTT® e CELL DYN RUBY DA ABBOTT®. Os esfregaços sanguíneos foram corados através da coloração de Leishmann e analisados em microscópio Olympus®, para confirmação e controle da contagem das células. Os valores de referência adotados encontram-se ilustrados no quadro 13.
ENTREGA DO CREME CELODENINA 4%
CONVITE PARA PARTICIPAR DA PESQUISA: EXPLICAÇÃO VERBAL E ESCRITA DOS PROCEDIMENTOS
ASSINATURA DO TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
AVALIAÇÃO CLÍNICA + EXAMES LABORATORIAIS (INICIAL)
AVALIAÇÃO CLÍNICA + EXAMES LABORATORIAIS (FINAL) AVALIAÇÃO CLÍNICA + QUESTIONÁRIO
Quadro 13 - Métodos e valores de referência do hemograma
HEMOGRAMA
Método Valores de referência
SÉRIE VERMELHA
Hemácias Citometria de Fluxo e Impedância 4,5 a 6,0 milhões/mm3 (homem) 4,0 a 5,5 milhões/mm3 (mulher) Hemoglobina Citometria de Fluxo e Impedância 14 a 18 g/dL (homem)
12 a 16 g/dL (mulher) SÉRIE BRANCA
Leucócitos Citometria de Fluxo e Impedância 4.000 a 11.000 mm3
Neutrófilos Microscopia 45-70%
CONTAGEM DE PLAQUETAS
Plaquetas Citometria de Fluxo e Impedância 150.000 a 400.000 mm3
4.3.6 Parâmetros bioquímicos
As análises bioquímicas foram realizadas em amostra de soro. As dosagens da glicose, colesterol total, transaminases (AST e ALT), fosfatase alcalina, ureia, creatinina foram realizadas no analisador bioquímico automatizado, COBAS – C501 ROCHE®. Os métodos e
valores de referência encontram-se ilustrados no quadro 14.
Quadro 14 - Métodos e valores de referência das dosagens bioquímicas
Bioquímica Método Origem da amostra Valor de referência
Glicose Enzimático Soro 70 a 99 mg/dL
Ureia Enzimático Soro 19 a 44 mg/dL
Creatinina JAFFÉ modificado Soro 0,9 a 1,3 mg/dL
Colesterol Total Enzimático Soro < 200 mg/dL
Aspartato aminotransferase (AST) Cinético Soro 5 a 34 U/l Alanina aminotransferase- (ALT) Cinético Soro 6 a 55 U/l
4.3.7 Parâmetro imunológico
O estudo imunológico foi realizado com amostra do soro das pacientes e permite determinar quantitativamente e qualitativamente a gonadotrofina coriônica humana fração beta ( -hCG). Esta dosagem, por meio do método de enzimaimunoensaio de micropartícula (MEIA) foi realizada no analisador AXSYM SYSTEM DA ABBOTT®. Os valores de referência encontram-se ilustrados no quadro 15.
Quadro 15 - Método e valores de referência do -hCG
Método Origem da amostra Valor de referência
-hCG Enzimaimunoensaio de particula
Soro Negativo: ≤ a 5 mUI/ml Intermediario: 5 a 25 mUI/ml
Positivo: ≥ a β5 mUI/ml
4.3.8 Reações adversas
Com o objetivo de mapear possíveis reações adversas, sugestivas de toxicidade, foi aplicado um questionário (apêndice C), o qual faz parte do protocolo experimental. Após as avaliações, registraram-se as possíveis reações descritas pelos voluntários no período de 4 semanas.
4.3.9 Tratamento estatístico
Para a análise dos dados utilizou-se o programa GraphPad Prism versão 6.0, utilizando o teste t-pareado sendo os resultados considerados significativos quando apresentaram um nível de significância de 5% (p < 0,05). Nos gráficos os dados foram expressos como média e desvio padrão da média, visto que as variáveis seguiram a curva de normalidade de Gauss e podem ser analisadas via testes paramétricos.
4.4 ENSAIOS FARMACOLÓGICOS CLÍNICOS FASE II COM O ANTIVIRAL TÓPICO