3.1. Caracterização da amostra 3.1.1. Animais
Para este estudo foi utilizado sangue de animais considerados saudáveis com base nos dados obtidos na anamnese e no exame físico realizados imediatamente antes da recolha de sangue. Todos os cavalos estavam vacinados contra as principais doenças infeciosas: tétano e influenza, e desparasitados internamente há menos de 6 meses. De maneira a aumentar a [LA] sanguíneo as amostras foram colhidas após uma sessão de treino mais intenso de aproximadamente 30 minutos. Os cavalos foram passados à guia no picadeiro da Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro. A intensidade de treino para cada animal variou consoante a sua preparação físíca, idade e problemas locomotores. De uma maneira geral, os animais tiveram um aquecimento de aproximadamente 10 minutos em que foram trabalhados para duas mãos a passo e trote, seguido de uma intensificação do ritmo de trabalho para trote e galope também para as duas mãos.
Foram utilizados 11 animais: 5 machos e 6 fêmeas, com idades compreendidas entre os 6 e os 22 anos. Dos 11 animais, 8 eram de raça Puro Sangue Lusitano, 1 Puro Sangue Árabe, 1 Trotador Francês e 1 cruzado Lusitano. Quanto à aptidão, 7 eram utilizados para reprodução, 1 para corridas de passo travado, 1 para hipoterapia e 2 mantidos em boxe por problemas locomotores. Todas as amostras foram recolhidas no Hospital Veterinário da Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro e analisadas no Laboratório de Patologia Clínica do mesmo Hospital.
3.2. Recolha das amostras de sangue
Após a sessão de treino, as recolhas de sangue foram realizadas na boxe de cada animal. Foram recolhidos 20 a 30 mililitro de sangue a cada animal. O sangue foi obtido por punção jugular, utilizando agulhas de 20G de uma polegada Sterican® da B.Braun® e seringas descartáveis esterilizadas de 20mL da B.Braun®.
Imediatamente após a colheita foi utilizada uma gota de sangue para ver qual a [LA] no sangue total com o aparelho Accutrend Plus.
20 O sangue, depois de colhido foi distribuído em tubos com ácido etilenodiamino tetra- acético (EDTA), heparina sódica (HEP), fluoreto de sódio/oxalato de potássio (NaF/Ox) e outro sem anticoagulante. Os tubos, devidamente identificados, foram colocados num recipiente refrigerado com acumuladores de frio até serem centrifugados. As amostras de sangue foram centrifugadas num espaço de 30 minutos após a recolha.
De forma a aumentar o número de amostras, o sangue foi colhido dos diversos animais, tendo em alguns casos sido feita mais que uma colheita. O número máximo de colheitas feitas num animal foram 6, tendo noutros 3 animais sido feitas 5, 4 e 2 colheitas, respectivamente. Nos restantes animais foram realizadas apenas 1 colheita. Nos animais em que foram feitas mais do que uma colheita, houve pelo menos uma semana de intervalo a separá-las.
3.3. Medição do lactato
Os tubos de EDTA e heparina foram centrifugados durante 10 minutos a 6000 rpm. Os tubos de fluoreto de sódio/oxalato de potássio e os tubos sem anticoagulante foram centrifugados durante 15 minutos a 3000 rpm.
O plasma obtido da centrifugação dos diferentes tubos foi pipetado em aliquotas de 1,5mL devidamente identificadas. Para cada anticoagulante, o plasma foi dividido em 4 aliquotas. O soro foi também separado em 4 aliquotas. As amostras hemolisadas foram excluídas do estudo.
De maneira a simplificar a metodologia do trabalho para cumprir os objetivos propostos, estes foram agrupados em 4 estudos. Alguns dados foram utilizados para mais do que um estudo.
3.3.1. Estudo 1: comparação dos valores da concentração de lactato obtidos no
Accutrend Plus e no RX Daytona para o soro e plasmas obtidos dos diferentes
anticoagulantes
No estudo 1 foram colhidas 13 amostras que foram centrifugadas como em cima descrito.
Uma das aliquotas de cada anticoagulante foi utilizada para medir a [LA] com o aparelho RX Daytona da Randox® e com o aparelho portátil Accutrend Plus da Roche®. Esta
21 medição foi considerada a [LA] ao tempo 0 horas para cada um dos anticoagulantes. Uma aliquota contendo soro foi utilizada para medir a [LA] no tempo 0 horas com o aparelho RX
Daytona e com o medidor portátil Accutrend Plus.
3.3.2 Estudo 2: comparação dos valores da concentração de lactato entre o soro e os plasmas obtidos dos diferentes anticoagulantes utilizando o RX Daytona
Para este estudo utilizou-se a mesma metodologia que foi utilizada no estudo 1, tendo sido incluído mais um animal, no qual foram feitas medições apenas com o aparelho RX Daytona.
3.3.3. Estudo 3: efeito da temperatura e tempo de armazenamento na concentração de lactato 24h após colheita das amostras utilizando o RX Daytona
No estudo 3 foram colhidas 13 amostras que foram centrifugadas como em cima descrito. Para estudar o efeito da temperatura de armazenamento na [LA] ao fim de 24 horas, as aliquotas foram colocadas em diferentes temperaturas durante 24 horas:
Temperatura ambiente (aproximadamente 20ºC);
Refrigerado (aproximadamente 4ºC);
Congelado (aproximadamente -18ºC).
Antes de ser medida a [LA] após o período de espera de 24 horas, todas as aliquotas foram agitadas num agitador de tipo vórtex.
Os resultados verificados após as 24 horas de armazenamento foram comparados com os resultados da [LA] no soro e plasmas obtidos ao tempo zero com o RX Daytona no estudo 1. Também foram comparados entre si de forma a estudar o efeito da temperatura de armazenamento na [LA] plasmático ao fim de 24 horas.
3.3.4. Estudo 4: efeito da separação da fração celular da fração sérica ou plasmática na concentração de lactato utilizando o RX Daytona
Foi colhido em duplicado, sangue de 10 animais em repouso, e colocado em tubos de EDTA, heparina, fluoreto de sódio/oxalato de potássio e sem anticoagulante. A [LA] ao tempo zero foi medida após centrifugação das amostras como em cima referido. Para este estudo, a [LA] foi mensurada utilizando apenas o aparelho RX Daytona.
22 Os duplicados de cada tubo foram armazenados a uma temperatura de aproximadamente 4ºC durante 24 horas. Após este período os tubos foram centrifugados como em cima descrito e mensurada a [LA] utilizando o aparelho RX Daytona. Para cada tubo os resultados foram comparados entre o tempo 0 e as 24 horas.
3.4. Análise estatística
Para proceder à análise estatística utilizou-se o programa IBM SPSS® Statistics versão 20. Com este programa aplicou-se o Teste T, Teste de T para comparação de grupos emparelhados, e ANOVA. Os graus de significância considerados foram: estatisticamente significativo para p<0,05, e estatisticamente muito significativo para p<0,01 e p<0,001.
23
4. Resultados
Com o aparelho RX Daytona obtivemos valores para a [LA] em mg/dL, pelo que, este valor foi multiplicado pelo fator de conversão: 0,111, para que os valores pudessem ser apresentados em unidades do Sistema Internacional: mmol/L.
4.1. Estudo 1: comparação dos valores da concentração de lactato obtidos no Accutrend
Plus e no RX Daytona para o soro e plasmas obtidos dos diferentes anticoagulantes Neste estudo partimos de uma amostragem de 13 amostras, nos quais os resultados obtidos com o Accutrend Plus podem ser observados na tabela 2. Devido à incapacidade de calibrarmos e obtermos controlos dentro de valores desejados com RX Daytona no dia em que algumas das amostras foram colhidas, o número de amostras analisadas com este aparelho foi de apenas 7 amostras (tabela 3).
Na tabela 2 podem ser observados os valores da [LA] no sangue total logo após o exercício, e no soro ou plasma, obtidos após a centrifugação dos tubos, com o aparelho portátil
Accutrend Plus. Este aparelho tem um limiar inferior de deteção de 0,7 mmol/L no plasma pelo
que quando a [LA] não atinge este valor, no aparelho é visível a indicação: “Low”.
Tabela 2 Concentrações de lactato em mmol/L obtidas utilizando o aparelho Accutrend Plus em 13 amostras de soro e plasma obtido com os diferentes anticoagulantes
NaF/Ox: Fluoreto de Sódio/Oxalato de Potássio; EDTA: Ácido etilenodiamino tetra-acético; Low: <0,7mmol/L
Amostra Sangue total Soro NaF/Ox Heparina EDTA
1 1,3 Low Low Low Low
2 2 Low Low Low Low
3 1,6 Low Low Low Low
4 3 0,8 1,2 1,2 1,1
5 1,2 Low Low Low Low
6 1,2 Low Low Low Low
7 1,8 Low Low 0,9 Low
8 1,2 Low Low Low Low
9 1 Low Low Low Low
10 0,8 Low Low Low Low
11 1,2 Low Low Low Low
12 1,5 Low Low Low Low
24 Na tabela 3 são visíveis os valores da [LA] obtidos com o aparelho RX Daytona para o soro e para o plasma obtido com os diferentes anticoagulantes.
Tabela 3 Concentrações de lactato em mmol/L obtidas com o aparelho RX Daytona em 7 amostras de soro e plasma obtido com os diferentes anticoagulantes
Amostra Soro NaF/Ox Heparina EDTA
3 1,56 1,37 1,41 1,35 4 2,09 1,92 1,95 1,99 5 0,81 0,56 0,61 0,58 10 1,01 0,8 0,88 0,84 11 0,77 0,64 0,72 0,67 12 0,91 0,51 0,52 0,56 13 1,47 1,21 1,23 1,24
NaF/Ox: Fluoreto de Sódio/Oxalato de Potássio; EDTA: Ácido Etilenodiamino tetra-acético
Não foi feita qualquer análise estatística comparando os valores obtidos entre o aparelho
RX Daytona e o Accutrend Plus pelo facto de não terem sido obtidos valores de concentrações
de lactato precisas para a maioria das amostras quando utilizado o Accutrend Plus.
4.2 Estudo 2: comparação dos valores da concentração de lactato entre o soro e plasmas obtidos dos diferentes anticoagulantes utilizando o RX Daytona
Na tabela 4 podem ser observadas a média, o desvio padrão e o erro padrão da média em mmol/L da [LA] ao tempo 0 horas para o soro e para o plasma obtido com os diferentes anticoagulantes. Para este estudo foram utilizadas amostras de 8 animais, 7 utilizadas no estudo anterior e mais uma que foi obtida posteriormente de maneira a aumentar a amostragem.
Tabela 4 Média, desvio padrão e erro padrão da média em mmol/L da concentração de lactato ao tempo 0 horas para o soro e plasma obtido com os diferentes anticoagulantes
Amostra N Média Desvio Padrão Erro Padrão da Média
Soro 8 1,22 0,46 0,16
NaF/Ox 8 1,00 0,48 0,17
Heparina 8 1,04 0,48 0,17
EDTA 8 1,03 0,49 0,17
N: tamanho da amostra; NaF/Ox: Fluoreto de Sódio/Oxalato de Potássio; EDTA: Ácido Etilenodiamino tetra-acético
No gráfico 1 pode observar-se a representação gráfica das médias da [LA] no tempo 0 horas para o soro e para o plasma obtido com os diferentes anticoagulantes.
25
Gráfico 1 Representação gráfica das médias da concentração de [LA] em mmol/L ao tempo 0 horas para o soro e plasmas obtidos com os diferentes anticoagulantes
LA: lactato; NaF/Ox: Fluoreto de Sódio/Oxalato de Potássio; EDTA: Ácido Etilenodiamino tetra-acético
Neste estudo a hipótese nula (H0) era de que não existem diferenças estatisticamente
significativas para a [LA] ao tempo 0 horas entre o soro e plasma obtido com os diferentes anticoagulantes. A hipótese alternativa (Ha) era de que existem diferenças estatisticamente
significativas.
Utilizando a ferramenta de análise estatística ANOVA de fator único obtivemos um valor de significância estatística para a variância entre a média do soro e do plasma obtido com os diferentes anticoagulantes de 0,799, o que indica que não existem diferenças estatisticamente significativas, embora seja evidente que a [LA] média é mais elevada no soro comparativamente ao plasma.
4.3 Estudo 3: efeito da temperatura e tempo de armazenamento na concentração de lactato 24h após colheita das amostras utilizando o RX Daytona
Neste estudo, partimos de 13 amostras, no entanto, só foi possível medir a [LA] nos soros/plasmas de 5 animais devido à incapacidade de calibrarmos e controlarmos devidamente o RX Daytona no dia em que algumas das amostras foram colhidas. Além disso,
Soro NaF/Ox Heparina EDTA
Concentração LA 1,22 1 1,04 1,03 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 C o n ce n tr aç ão ( m m o l/L )
Média da concentração de lactato ao tempo 0 horas
para o soro e plasmas
26 em algumas amostras não foi possível medir a [LA] por não termos tido quantidade de soro/plasma suficiente ou porque o reagente chegou ao fim (n=4).
Na tabela 5 podem ser observados os valores da média, do desvio padrão e do erro padrão da média em mmol/L da [LA] no soro e plasma obtido com os diferentes anticoagulantes, ao tempo 0 horas e quando estes foram armazenados à temperatura ambiente a 20ºC, refrigerados a 4ºC ou congelados a -18ºC, durante 24 horas.
Utilizando a ferramenta de análise estatística ANOVA de fator único foi possível obter para cada anticoagulante os valores de significância estatística existente entre a [LA] ao tempo 0 horas e às 24 horas para os diferentes tipos de armazenamento. Este valor pode ser observado na tabela 5 entre parênteses.
Tabela 5 Média, desvio padrão e erro padrão da média em mmol/L da concentração de lactato dependendo do tipo e tempo em horas de armazenamento para o soro e plasma obtido com os diferentes anticoagulantes
Amostra (Significância)
Armazenamento
e tempo em horas N Média
Desvio Padrão Erro Padrão da Média Soro (0,995) Tempo 0 5 1,31 0,51 0,23 Ambiente 24 4 1,28 0,46 0,23 Refrigerado 24 5 1,29 0,44 0,19 Congelado 24 5 1,24 0,42 0,19 NaF/Ox (0,985) Tempo 0 5 1,12 0,53 0,24 Ambiente 24 5 1,10 0,47 0,21 Refrigerado 24 5 1,07 0,45 0,20 Congelado 24 5 1,18 0,40 0,18 Heparina (0,995) Tempo 0 5 1,17 0,52 0,23 Ambiente 24 5 1,19 0,50 0,22 Refrigerado 24 5 1,15 0,48 0,22 Congelado 24 4 1,10 0,53 0,27 EDTA (0,995) Tempo 0 5 1,16 0,54 0,24 Ambiente 24 5 1,15 0,47 0,21 Refrigerado 24 5 1,13 0,47 0,21 Congelado 24 4 1,07 0,52 0,26
N: tamanho da amostra; NaF/Ox: Fluoreto de Sódio/Oxalato de Potássio; EDTA: Ácido Etilenodiamino tetra-acético; Tempo 0: tempo 0 horas; Ambiente 24: amostra mantida à temperatura ambiente, aproximadamente 20ºC, durante 24 horas; Refrigerado 24: amostra refrigerada a 4ºC durante 24 horas: Congelado 24: amostra congelada a -18ºC durante 24 horas
27 Apesar do tamanho da amostra ser reduzido e qualquer inferência não ser mais que uma tendência observada, não foram encontradas quaisquer diferenças estatisticamente significativas entre as amostras ao tempo 0 horas ou 24 horas após serem mantidas à temperatura ambiente, refrigeradas ou congeladas.
4.4 Estudo 4: efeito da separação da fração celular da fração sérica ou plasmática na concentração de lactato utilizando o RX Daytona
Na Tabela 6 podem ser observados os valores da média, desvio padrão e erro padrão da média em mmol/L da [LA] nas amostras de soro e plasma obtido com os diferentes anticoagulantes ao tempo 0 horas e depois de 24 horas sem serem centrifugadas. Para este estudo partimos de uma amostragem de 10 animais e análise estatistica contempla este mesmo número.
Tabela 6 Média, desvio padrão e erro padrão da média em mmol/L da concentração de lactato das amostras de soro e plasma obtido com os diferentes anticoagulantes ao tempo 0 horas e depois de 24 horas sem serem centrifugadas
Anticoagulante Tempo N Média Desvio Padrão Erro Padrão da Média Soro 0h 10 1,08 0,29 0,09 24h 10 2,25 0,45 0,14 NaF/Ox 0h 10 0,75 0,23 0,07 24h 10 0,83 0,24 0,08 Heparina 0h 10 0,79 0,25 0,08 24h 10 1,40 0,29 0,09 EDTA 0h 10 0,77 0,23 0,07 24h 10 1,30 0,31 0,10
N: tamanho da amostra; NaF/Ox: Fluoreto de Sódio/Oxalato de Potássio; Hep.: Heparina; EDTA: Ácido Etilenodiamino tetra-acético
No gráfico 2 pode observar-se a representação gráfica das médias da concentração de [LA] das amostras de soro e plasma obtido com os diferentes anticoagulantes ao tempo 0 horas e depois de 24 horas sem serem centrifugadas.
28
Gráfico 2 Efeito da separação da fração sérica ou plasmática na concentração do lactato em mmol/L para o soro e plasmas obtidos dos diferentes anticoagulantes
[LA]: concentração do lactato; 0h: tempo 0 horas; 24h; tempo 24 horas; NaF/Ox: Fluoreto de Sódio/Oxalato de Potássio; EDTA: Ácido Etilenodiamino tetra-acético
Na tabela 7 é possível observar para o soro e plasma obtido com os diferentes anticoagulantes os valores de significância estatística e a diferença entre as médias, obtidas através do teste de T para a comparação entre as médias de amostras emparelhadas, da [LA] das amostras ao tempo 0 horas e depois de 24 horas sem serem centrifugadas.
Soro NaF/Ox Heparina EDTA
0h 1,08 0,75 0,79 0,77 24h 2,25 0,83 1,40 1,30 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 Con ce n tra ção L act at o (mm o l/L) Anticoagulante
Efeito da separação da fração celular da fração sérica ou
plasmática de amostras de sangue na concentração de lactato
29
Tabela 7 Teste t para amostras emparelhadas para comparar as médias da [LA] ao tempo 0horas e 24horas para o soro e plasma obtido com os diferentes anticoagulantes
Amostra/tempo Sig. (bi-caudal) Diferença entre médias (mmol/L)
Soro 24 – Soro 0 ,000 1,64
NaF/Ox 24 – NaF/Ox 0 ,445 0,08
Hep. 24 – Hep. 0 ,000 0,61
EDTA 24 – EDTA 0 ,000 0,53
Sig.: significância estatística para um intervalo de confiança de 95%; Soro 24: concentração de lactato no soro obtido ao tempo 24 horas; NaF/Ox 24: concentração de lactato no plasma obtido do tubo com o anticoagulante fluoreto de sódio/oxalato de potássio ao tempo 24 horas; Hep. 24: concentração de lactato no plasma obtido do tubo com o anticoagulante Heparina ao tempo 24 horas; EDTA 24: concentração de lactato no plasma obtido do tubo com o anticoagulante ácido etilenodiamino tetra-acético ao tempo 24 horas; Soro 0: concentração de lactato no soro obtido ao tempo 0 horas; NaF/Ox 0: concentração de lactato no plasma obtido do tubo com o anticoagulante fluoreto de sódio/oxalato de potássio ao tempo 0 horas; Hep. 0: concentração de lactato no plasma obtido do tubo com o anticoagulante Heparina ao tempo 0 horas; EDTA 0: concentração de lactato no plasma obtido do tubo com o anticoagulante ácido etilenodiamino tetra-acético ao tempo 0 horas
Neste estudo a hipótese nula (H0) é que não existem diferenças estatisticamente
significativas entre a [LA] das amostras de soro e plasmas obtido com os diferentes anticoagulantes ao tempo 0 horas e depois de 24 horas quando a fração celular não é separada da fração sérica ou plasmática. A hipótese alternativa (Ha) é que existem diferenças
estatisticamente significativas entre a [LA] ao tempo 0 horas e às 24 horas. Tendo em conta estas definições e os resultados da significância estatística apresentados na tabela 7 só se aceita a H0 para o plasma obtido a partir dos tubos com o anticoagulante NaF/Ox. O soro e o
plasma obtido com os tubos de heparina e EDTA apresentaram diferenças estatisticamente muito significativas pelo que se rejeita a H0.
30
5. Discussão de resultados
Um aumento da [LA] no sangue está frequentemente associada a uma inadequada perfusão tecidular podendo no entanto ocorrer uma hiperlactatemia mesmo quando o aporte sanguíneo das células é normal. É então importante reconhecer as diferentes causas de hiperlactatemia quando se está a fazer a monitorização de um cavalo doente (Tennent-Brown, 2011). A medição da [LA] sanguíneo em cavalos desempenha ainda um papel importante na avaliação da capacidade aeróbia e intensidade de exercício durante o treino desportivo (Kobayashi, 2007).
O anticoagulante NaF/Ox é referido por vários autores como o de eleição quando se pretende fazer a medição da [LA] sanguíneo (Morris et al., 2002; Christopher e O’Neill, 2000; Astles et al., 1994), mas apresenta algumas desvantagens quando se pretendem avaliar outros parâmetros sanguíneos. Por esta razão, este anticoagulante não é utilizado frequentemente a não ser que o único parâmetro que se pretenda avaliar seja o lactato (Christopher e O’Neill, 2000). Outros anticoagulantes, como a heparina e o EDTA, podem ser utilizados quando se pretende avaliar a [LA] (Persson et al., 1995; Leena et al., 1999; Morris
et al., 2002) embora não tenham a capacidade de diminuir a atividade glicolítica dos
eritrócitos ex vivo pelo que as amostras devem ser refrigeradas e centrifugadas o mais rapidamente possível e a fração celular separada da fração plasmática de maneira a que não haja um aumento fictício da [LA] (Astles et al., 1994).
Alguns dos autores referidos em cima também verificaram que existe diferença entre a [LA] no soro e no plasma em gatos e ovelhas, sendo que no soro a [LA] é superior à do plasma (Christopher e O’Neill, 2000; Morris et al., 2002).
Embora se saiba através de outros trabalhos que hoje em dia existem diversos equipamentos que permitem efetuar o registo e medição da [LA] em cavalos, em Portugal, estes muitas vezes não estão disponíveis ou não são utilizados como um método de diagnóstico, terapêutico ou prognóstico. Na prática clínica, a determinação da [LA] pode ser feita utilizando aparelhos de bioquímica de bancada, como é o caso do RX Daytona da
Randox®, ou aparelhos de medição portáteis, como é o caso do Accutrend Plus da Roche®.
O aparelho Accutrend Plus da Roche®, um aparelho portátil, permite determinar a [LA], de colesterol, de triglicéridos e de glicose no sangue. O intervalo de valores para a [LA]
31 no qual este aparelho é sensível em humanos é: 0,8-22mmol/L quando medido em sangue total e 0,7-26mmol/L quando medido no plasma.
Estudo 1: comparação dos valores da concentração de lactato obtidos no Accutrend Plus e no RX Daytona para o soro e plasmas obtidos dos diferentes anticoagulantes
O Accutrend Plus tem capacidade para medir valores de lactato superiores a 0,8mmol/L no sangue total e a 0,7 mmol/L no plasma (Gambke et al., 1997). Em cavalos saudáveis e em repouso, 1,5mmol/L é considerado o limiar superior para o valor basal de lactato sendo que a maioria dos animais apresenta uma [LA] inferior a 1mmol/L (Magdesian, 2003; Tennent-Brown, 2011). Estes dois aspectos limitam a utilização deste aparelho na medição da [LA] basal pois os animais podem apresentar uma [LA] inferior áquela que o
Accutrend Plus consegue medir. Apesar disto, alguns autores referem que a utilização de
modelos anteriores a este aparelho consigam medir a [LA] no plasma sem que hajam diferenças muito significativas quando comparados com aparelhos gold standart (Evans e Golland, 1996; Kobayashi, 2007).
De forma a contornar o facto do Accutrend Plus não ter capacidade para medir valores de lactato inferiores a 0,7 mmol/L no plasma, os animais foram exercitados na tentativa de criar condições de hipoxia celular e assim elevar os valores de lactato plasmáticos. Os resultados apresentados na tabela 2 mostram que mesmo após terem sido exercitados não foi possível determinar a [LA] exata porque esta terá sido inferior a 0,7mmol/L, independentemente do método de conservação utilizado. Na amostra 4 obtivemos valores para o plasma e soro utilizando este aparelho mas quando comparados com os valores obtidos com o aparelho RX Daytona não haviam semelhanças entre estes.
Foi também determinada a [LA] no sangue total imediatamente após a colheita, sendo possível verificar os resultados na mesma tabela. Com isto verificamos que no sangue total foi possível determinar a [LA] sanguíneo mas não no plasma ou soro.
Para as amostras 3, 4, 5 e 10 foi possível medir a [LA] também com o aparelho RX
Daytona e assim tentar verificar as diferenças existentes entre as duas metodologias. Não foi
possível realizar qualquer análise estatística visto que a maioria dos resultados obtidos deram