168 Na realização experimental deste trabalho usou-se o equipamento e procedimentos de carácter geral que a seguir se descrevem:
a) Os banhos de ultrassons foram realizados num aparelho: BRANSON 1200, 5 de 55 kHz.
b) Os solventes e reagentes usados foram adquiridos comercialmente.323
c) A secagem dos extractos orgânicos foi efectuada com sulfato de sódio anidro (Na2SO4) ou sulfato de magnésio anidro (MgSO4).
d) As reacções foram sempre seguidas por c.c.f. excepto quando referido o contrário.
e) A cromatografia em camada fina (c.c.f.) foi realizada em placas de sílica Merck Kieselgel GF 254 com 0,2 mm de espessura. Após a eluição, as placas foram reveladas com luz UV (254 nm e/ou 366 nm).
As placas de c.c.f. correspondentes à preparação da D-glucopiranose, O-acetil- D-glucopiranose, D-glucopiranosil tricloroacetimidato e das respectivas glucosil flavonas, após a eluição, as placas foram reveladas com etanol contendo 10% de H2SO4, seguido de aquecimento da placa a 50-60 ºC.
Na cromatografia em camada preparativa (c.c.p.) foram usadas placas de sílica Merck Kieselgel GF 254 com espessura de 0,5 mm ou 1 mm tendo a revelação sido feita com luz UV a 254 nm e/ou 366 nm.
Na cromatografia em coluna (c.c.) utilizou-se sílica Kieselgel 60 (Merck), de granulometria 70-230 "mesh". Na cromatografia em coluna de sílica "flash" utilizou-se Kieselgel 60 (Merck), de granulometria 230-400 "mesh" e seguiu-se
169 o procedimento descrito na literatura.324 Em todos os casos o eluente é referido.
f) Os resultados de cromatografia líquida foram registados num Cromatógrafo Líquido de Alta Pressão (HPLC) da Waters equipado com um controlador modelo 600, um amostrador automático modelo 717 plus e um detector de ultravioleta (UV), modelo 996 (tipo Photodiode Array, PDA). Foi utilizada uma coluna de fase reversa Waters Symmetry C18, com tamanho de partícula de 5 m, 250 mm de comprimento e 4.6 mm de diâmetro interno. Utilizaram-se duas fases móveis: fase móvel A (1000 mL de acetonitrilo + 0.5 mL de ácido fosfórico) e fase móvel B (30 mL de metanol + 970 mL de Água + 0.5 mL de ácido fosfórico). A mistura de dissolução utilizada foi preparada com 100 mL de acetonitrilo, 100 mL de água e 0,1 mL de ácido fosfórico. As amostras para análise, foram preparadas num um balão volumétrico de 20 mL e o volume completado com a mistura de dissolução. A temperatura da coluna foi de 40 ºC. Utilizou-se um fluxo de cerca de 1.0 mL/min; um volume de injecção de 20 µl. O tempo de corrida foi de 50 min. Em amostras contendo impurezas com tempos de retenção maiores, o tempo de corrida das amostras foi aumentado de forma a garantir que não ficassem picos retidos na coluna. Utilizou-se um sistema isocrático de 1:1 de mistura A e B. Os cromatogramas foram integrados a um comprimento de onda de 254 nm e 220 nm.
g) Os espectros de Ressonância Magnética Nuclear (RMN) foram registados num espectrómetro Brüker Avance II (400 MHz para 1H e 100 MHz para 13C). O
solvente [com tetrametilsilano (TMS) como padrão interno]325 e as condições
utilizadas são especificados em cada experiência. Os desvios são expressos em partes por milhão (ppm), e as constantes de acoplamento (J) em Hertz (Hz). Os dados apresentados encontram-se indicados pela seguinte ordem:
núcleo (solvente): desvio químico (, ppm) [intensidade relativa (nH), multiplicidade do sinal (s- singuleto; sl- singuleto largo; d- dupleto; t- tripleto; q- quarteto; dd- duplo dupleto, m- multipleto), constante de acoplamento (J, em Hz), atribuição na molécula].
170 h) Os espectros de infravermelho (IV) foram registados num espectrofotómetro de transformada de Fourier Mattson Research Series FTIR. Na sua descrição, os dados obtidos são indicados pela seguinte ordem:
estado físico da amostra - KBr (em pastilha de brometo de potássio, no caso de sólidos) ou filme (sem agente dispersante, em células de cloreto de sódio, no caso de líquidos e óleos); frequência máxima de absorção (max em cm-1);
atribuição a um grupo de átomos na molécula.
Outros espectros foram registados num espectrofotómetro Thermo Nicolet 6700 FTIR.
i) Os pontos de fusão (p.f.) foram medidos num aparelho Buchi Melting Point B- 540. O aparelho não foi calibrado antes de ser utilizado.
j) O peso molecular dos compostos foi determinado utilizando um HPLC-MS Micromass Quattro LC (triplo quadropolo) acoplado a um HPLC Waters Alliance 2695 com detector PDA Waters 2996. Foi utilizada uma coluna XBridge C18 (150 mm x 4.6 mm x 3.5 µm).
l) A massa exacta dos compostos foi determinada num espectómetro de massa ESI-TOF marca Bruker, modelo Microtof da “Unidade de Espectrometria de Masas” da Universidade de Santiago de Compostela. As amostras foram analisadas em modo FIA (Flow Injection Analysis) usando como fase móvel uma mistura de MeOH: H2O numa proporção de 1:1. O volume de injecção foram
171
172 5.1 – Síntese de acetato de fenilo _ 181
5.1.1 – Em piridina e com anidrido acético
Preparou-se uma mistura de fenol 179 (10 g; 106.26 mmol) em piridina (40 mL) e arrefeceu-se a mistura a uma temperatura entre 5 ºC e 0 ºC. Adicionou-se lentamente anidrido acético (10.5 mL; 1.05 eq.), e em seguida, ácido clorídrico concentrado (50 mL), mantendo o mesmo intervalo de temperatura. Após 30 minutos de agitação, extraiu-se a mistura com diclorometano (3x 50 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (50 mL), em seguida com solução aquosa de NaOH a 10% (50 mL) e por fim com água (50 mL). A fase orgânica resultante foi seca sob sulfato de magnésio anidro e concentrada à secura. O produto foi purificado por destilação a uma temperatura entre 195 ºC e 197 ºC. Obteve-se 9.97 g (rend: 69%) do produto desejado sob a forma de um líquido incolor.
5.1.2 – Em CH3CN, com cloreto de acilo e ácido trifluoroacético
Preparou-se uma mistura de fenol 179 (5.0 g; 53.13 mmol), cloreto de acilo (11.27 mL; 3.0 eq.) e ácido trifluoroacético (0.61 mL) em CH3CN (65 mL). Após
1 h de agitação à temperatura entre 20 ºC e 25 ºC, adicionou-se a mistura reaccional para uma mistura de água (50 mL) e acetato de etilo (50 mL) à temperatura de 5 ºC e agitou-se durante 30 minutos. As fases foram separadas e a fase orgânica obtida, foi lavada com uma solução aquosa de HCl 1N (50 mL), em seguida com uma solução saturada de NaHCO3 (50 mL) e por fim com uma
solução saturada de NaCl (50 mL). A fase orgânica resultante foi seca sob MgSO4 anidro e concentrada à secura. O produto foi purificado por destilação a
uma temperatura entre 195 ºC e 197 ºC. Obteve-se 7.12 g (rend: 98%) do produto desejado sob a forma de um líquido incolor.
173 p.e.: 95-97 ºC (Lit. 195-196 °C)326 1H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 7.43 – 7.32 (m, 2H, H-3, H-5), 7.23 (dt, J = 14.0, 3.9 Hz, 1H, H-4), 7.08 (dd, J = 8.4, 0.9 Hz, 2H, H-2, H-6), 2.29 (s, 3H, CH3). 13C RMN (101 MHz, CDCl 3) δ 169.51 (C=O), 150.71 (Cquat), 129.45 (C-3, C-5), 125.85 (C-4), 121.59 (C-2, C-6), 21.15 (CH3).
5.2 – Síntese de acetato de 2,4-dimetilfenilo _ 184
Preparou-se uma solução de 2,4-dimetilfenol 183 (1.0 g; 8.19 mmol) em diclorometano (10 mL), arrefeceu-se a 5 ºC e adicionou-se piridina (0.66 mL). Após 30 minutos de agitação, arrefeceu-se a mistura obtida a -10 ºC, adicionou- se gota a gota uma solução cloreto de acetilo (185) (0.58 mL; 1.0 eq.) em DCM (5 mL) e agitou-se durante 1 h. A mistura reaccional foi lentamente aquecida a refluxo, mantendo-se o refluxo durante 2 h. Após esse tempo de refluxo, arrefeceu-se à temperatura ambiente, adicionou-se água (20 mL), acidificou-se até um pH de ~1 com HCl concentrado e extraiu-se com DCM (3x 10 mL). As fases orgânicas combinadas foram secas sob MgSO4 anidro e filtradas através
de um funil contendo sílica. O filtrado foi concentrado à secura. Obteve-se 1.33 g de um óleo amarelo.
174 5.3 – Síntese de 2’-hidroxiacetofenona _ 125
5.3.1 – A partir de acetato de fenilo (181) e APTS
Preparou-se uma mistura de acetato de fenilo 181 (5.0 g; 36.72 mmol) e ácido APTS (6.32 g; 1.0 eq.) e aqueceu-se a mistura a uma temperatura entre 100 ºC e 110 ºC. Após 1 h de agitação, a uma temperatura entre 100 ºC e 110 ºC, a mistura reaccional foi adicionada para uma mistura de água (50 mL) e gelo (50 g), obtendo-se uma suspensão. A suspensão obtida agitou durante 15 minutos. O sólido (p-hidroxiacetofenona) foi isolado por filtração. As águas-mães foram extraídas com éter dietílico (3x 20 mL). As fases orgânicas obtidas foram combinadas e lavadas com uma solução a 10% de bicarbonato de sódio (20 mL) e em seguida com água (20 mL). A fase orgânica resultante foi seca sob sulfato de magnésio anidro e concentrada à secura. Obteve-se 3.24 g (rend: 65%) de um líquido incolor.
5.3.2 – A partir de fenol (179), em anidrido acético e com AlCl3
Preparou-se, sob atmosfera de azoto, uma mistura de fenol 179 (10.0 g; 106.26 mmol), anidrido acético (12.5 mL), AICI3 (3.54 g; 0.25 eq.) como
catalisador em clorobenzeno (50 mL). A mistura foi aquecida a uma temperatura entre 80 ºC e 90 ºC e agitou-se à mesma temperatura durante 3 horas. Após o isolamento do produto e purificação por cromatografia em coluna, usando como eluente uma mistura de acetato de etilo/heptano numa proporção de 7:3, obteve- se 11.08 g (rend: 59%) de 2’-hidroxiacetofenona.
5.3.3 – A partir de fenol (179), em ácido acético e com BF3.Et2O
Preparou-se, sob atmosfera de azoto, uma solução de fenol 179 (5.0 g; 53.13 mmol) em ácido acético glacial (15 mL). A mistura foi arrefecida a uma temperatura entre 0 ºC e -2 ºC. Adicionou-se lentamente uma solução de complexo de BF3.Et2O (36%; 18.2 mL; 1.0 eq), mantendo a mesma temperatura.