Papel da concentração, volume e tipo de sémen

A concentração espermática e o volume do inseminado têm um papel importante na intensidade da reacção inflamatória uterina (Fiala et al, 2007). No entanto, o volume, por si só, não afecta a magnitude da resposta inflamatória uterina (Güvenc et al, 2005).

Na égua, a utilização de um pequeno volume de sémen concentrado na inseminação intrauterina resulta numa resposta inflamatória mais exuberante que quando são utilizados grandes volumes de inseminado menos concentrado. Ou seja, maiores concentrações espermáticas constituem um maior estímulo quimiotático que concentrações mais baixas (Watson et al, 2001; Fiala et al, 2007). Numa inseminação artificial com volumes maiores, cujo sémen é mais diluído, grande parte do fluido e espermatozóides são eliminados pela vagina pouco tempo após inseminação, enquanto que quando são utilizados volumes mais pequenos é mais provável que os espermatozóides estejam em contacto directo com o endométrio durante um maior período de tempo, levando a um influxo superior de PMNs para o lúmen uterino (Watson et al, 2001).

As contracções uterinas são responsáveis não só pelo transporte dos espermatozóides para o local de fertilização como pela eliminação dos espermatozóides e plasma seminal em excesso, dos contaminantes, bem como de todos os produtos inflamatórios.

Katila observou que não existe qualquer diferença entre o número de contracções uterinas e a distribuição ou eliminação dos espermatozóides em éguas inseminadas com ejaculados de diferentes volumes (Katila, 2001). Contraditoriamente, outros autores sugerem que o volume médio de um ejaculado (80 mL) aumenta a frequência, duração e amplitude das contracções uterinas. Num estudo mais recente, Campbell e England (2006) confirmaram que infusões intrauterinas de 80 mL de soro salino fisiológico aumentam as contracções uterinas e revelaram, pela primeira vez, que a infusão tanto de pequenos (10 mL) como grandes volumes (150 mL) reduz estas contracções. Esta diferença pode dever-se, respectivamente, à carência de estimulação dos receptores de tensão uterinos e à distensão excessiva que leva a uma refractariedade dos mesmos receptores. As contracções uterinas podem também ser promovidas pela acção local de hormonas presentes no ejaculado do garanhão, como as prostaglandinas, estrogénios e oxitocina. Logo, o facto de ejaculados de pequeno volume não originarem ou reduzirem as contracções uterinas pode ser simplesmente um reflexo da menor quantidade destas hormonas, quando comparado com os ejaculados de volumes médios.

O sémen pode ser usado de 4 modos: fresco não diluído, sendo usado imediatamente em uma ou duas éguas dependendo do volume do ejaculado, diluído e usado em fresco imediatamente após a sua recolha, diluído e refrigerado de modo a ser utilizado num período não superior a 72h, ou diluído e congelado quando se pretende um armazenamento mais prolongado e utilizar esse sémen no futuro.

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O sémen congelado aparenta provocar uma maior resposta inflamatória devido à maior concentração de espermatozóides e/ou ao reduzido volume de plasma seminal ou do volume do inseminado (Katila, 2001). Outros factores que contribuem para este facto são o atraso na limpeza uterina em éguas susceptíveis à endometrite e/ou uma reacção de hipersensibilidade aos componentes dos diluidores de congelação, nomeadamente o glicerol e a gema de ovo (Card, 2005). Troedsson (1998) verificou que 30% das éguas inseminadas com sémen congelado apresentavam acumulação persistente de fluido intrauterino após IA, contrastando com os 16% observados com monta natural (Barbacini et al, 2003). Contudo, Watson et al (2001) relatam que a incidência da acumulação de fluido intrauterino no dia após inseminação artificial com sémen congelado é semelhante à observada após monta natural (16%), o que contraria as conclusões anteriormente relatadas. Esta maior inflamação uterina não é comum quando se inseminam éguas novas, primíparas e reprodutivamente normais com sémen congelado (Card, 2005).

Foi também demonstrado que, para iguais números de espermatozóides, ocorre uma maior reacção inflamatória em inseminados menos volumosos e, portanto, sémen de elevada concentração, como o sémen congelado, induz uma reacção inflamatória mais exuberante (Katila, 2001, 2005; Güvenc et al, 2005). No entanto, resultados contraditórios foram revelados por Nikolakopoulos e Watson (2000) que detectaram uma maior reacção inflamatória após infusão de ejaculados menos concentrados, decorridas 48 horas após inseminação. Tal discrepância pode ser devida à utilização de diferentes protocolos e tempos de recolha de amostras. De facto, como o pico da resposta inflamatória uterina ocorre por volta das 6 a 12 horas após inseminação, é possível que este maior estímulo quimiotático desenvolvido pelo sémen com maior concentração de espermatozóides seja responsável por uma maior e mais rápida resposta neutrofílica que elimina com maior eficiência os espermatozóides e bactérias, logo, a inflamação tem uma duração tão reduzida que às 48 horas apenas são detectados vestígios da inflamação inicialmente formada (Katila, 2001, 2005; Fiala et al, 2007). Estímulos mais ligeiros (i.e. ejaculados menos concentrados) provocam uma resposta inflamatória menos intensa, mais tardia e duradoura, aumentando o número de PMNs detectados mais tardiamente (Katila, 2005). Aparentemente, a concentração espermática não é um factor crítico na inflamação uterina desde que seja superior ou igual a 4x106 espermatozóides/mL (Katila, 2005). Também é assinalável a ocorrência de uma maior acumulação de fluido intra-uterino em éguas com idade superior a 16 anos inseminadas com sémen congelado (Watson et al, 2001).

Troedsson, em 1999, verificou que não existe nenhuma diferença in vitro entre a quimiotaxia induzida por espermatozóides provenientes de sémen fresco ou de sémen congelado (Troedsson et al, 2001). Pode-se concluir então que o sémen congelado por si só não induz uma maior inflamação que o sémen fresco (Katila, 2005; Dell' Aqua Jr. et al, 2006). No

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entanto,como normalmente são utilizados volumes menores de elevada concentração, a resposta inflamatória ao sémen congelado tende a ser mais exuberante quando comprada com a obtida numa inseminação com sémen fresco (Katila, 2005).

A resposta inflamatória uterina após cobrição natural também não difere da obtida numa inseminação artificial com sémen fresco (Katila, 2001) ou com sémen refrigerado diluído (Nikolakopoulos e Watson, 1997). Este facto é de certa forma algo inesperado tendo em conta que o elevado número de bactérias introduzidas directamente no útero durante uma cobrição natural actuaria como um estímulo adicional para o aumento da resposta inflamatória.