Procedimentos Experimentais

4.2.1. Equipamentos e parâmetros instrumentais

A fim de se determinar o volume de capacidade por experimentos de eluição, foi montada a instrumentação representada pela Figura 4.1.

Figura 4.1. Intrumentação utilizada para determinação do volume de

capacidade.

Os experimentos relacionados a determinação do volume de capacidade foram realizados em um espectrofotômetro modelo 800 XI (Femto, São Paulo, SP, Brasil) com varredura espectral, duplo feixe, 2 fotodiodos de silício, e faixa espectral de 190 a 1100 nm. O comprimento de onda utilizado foi de 205 nm.

Os experimentos para determinação das substâncias foram conduzidos em um sistema de eletroforese capilar (modelo HP3D_{CE, Agilent Technologies, Palo}

Alto, CA, E.U.A.), equipado com detector de arranjo de diodos e “software” (HP ChemStation, rev A.06.01) para tratamento e aquisição de dados. O aparelho possui sistema de refrigeração do capilar por circulação de ar, e a temperatura foi mantida constante. Os capilares utilizados foram de sílica fundida (Polymicro Technology, Phoenix, AZ, E.U.A.), revestidos externamente com poli-imida. Outros parâmetros instrumentais estão descritos nos Capítulos 1 e 2. Para a propulsão das soluções submetidas ao estudo de extração em fase sólida utilizou-se uma bomba peristáltica Ismateck (Zurich, Switzerland, modelo 7618-40) e tubos de bombeamento de Tygon de diâmetro conhecido.

Espectrofotômetro UV/VIS Bomba Peristáltica Espectrofotômetro UV/VIS Bomba Peristáltica Espectrofotômetro UV/VIS Bomba Peristáltica

4.2.2. Reagentes e soluções

Todos os reagentes utilizados foram grau analítico e a água desionizada (Millipore, Bedford, MA, E.U.A.). Padrões dos fármacos diclofenaco, bezafibrato, fenoprofeno, ibuprofeno, cetoprofeno, naproxeno, fluoxetina, fenofibrato, propranolol, estrona, diazepam, clofibrato, etinilestradiol, trimetoprima, carbamazepina, e os metabólito ácido gentísico e ácido salicílico foram adquiridos da Aldrich (Milwaukee, WI, E.U.A.), e ácido difenilacético, adquirido da Acros (Morris Plains, NJ, E.U.A.). Soluções padrão estoque foram preparadas em metanol com concentração aproximada de 2000 mg mL-1 _e

armazenadas sob refrigeração (4 °C).

4.2.3. Amostras

Para a otimização do método de SPE foram utilizadas alíquotas de 100 mL de amostras de água de torneira, fortificada com os padrões em concentrações apropriadas. O método de extração otimizado foi aplicado em alíquotas de 100 mL de amostras de água coletadas na Represa Billings, localizada na região metropolitana de São Paulo. As amostras foram coletadas com profundidade de 50 cm da superfície, no período da manhã, em recipientes de vidro âmbar, e levadas imediatamente ao laboratório, filtradas e armazenadas sob refrigeração (4 °C) ao abrigo da luz. As amostras coletadas apresentavam pH que variou de 6,8 a 7,2, e estas foram analisadas no prazo máximo de 72 horas após a coleta.

4.2.4. Extração em fase sólida

Foram utilizados cartuchos de 500 mg de sorvente para ambas as fases estudadas: fase estacionária C18 (fase reversa contendo o grupo octadecil quimicamente ligado à sílica) e o outro, fase poli-estireno-divinilbenzeno (PS-

DVB) (500 mg). Os cartuchos foram pré-condicionados (para ativação da fase) com 5 mL de metanol, seguidos de 5 mL de água:metanol (50:50 v/v) e água.

Extração das substâncias de caráter ácido: alíquotas de 100 mL de água da

torneira (uma alíquota para cada estudo) foram utilizadas para os estudos de extração através da adição de concentrações conhecidas dos padrões de diclofenaco, bezafibrato, naproxeno, ibuprofeno, cetoprofeno, fenoprofeno, ácido salicílico e ácido gentísico. Após a adição dos compostos, o pH da água foi ajustado em aproximadamente 2,5 (com HCl 37 %), e filtrada em membrana 0,45 mm (Millipore, Bedford, MA, E.U.A.) com o auxílio de um sistema à vácuo. As soluções contendo os padrões foram submetidas à extração em dois cartuchos, um contendo 500 mg da fase estacionária C18 (fase reversa contendo o grupo octadecil quimicamente ligado à sílica) e o outro, fase poli-estireno- divinilbenzeno (PS-DVB) (500 mg). As amostras foram submetidas às colunas de extração em fase sólida com um fluxo aproximado de 3 mL min-1_{. A eluição dos}

analitos de estudo foi realizada com 5 mL de metanol, e o eluato foi evaporado até completa secura sob fluxo de N2 constante e banho de água (45 °C).

Finalmente os resíduos foram ressuspendidos em 1 mL de uma solução contendo 5 mmol L-1 _{TBS em metanol:água (10:80 v/v) e injetados no equipamento de}

eletroforese capilar.

Extração das substâncias de caráter básico e neutro:alíquotas de 100 mL de

água da torneira foram fortificadas concentrações conhecidas dos padrões de fluoxetina, clofibrato, fenofibrato, propranolol, carbamazepina, trimetoprima, etinilestradiol, estrona e diazepam. Após a adição dos compostos, o pH da água foi ajustado em aproximadamente 11 (com NaOH 1 mol L-1_{), e filtrada em}

membrana 0,45 mm (Millipore, Bedford, MA, E.U.A.) com o auxílio de um sistema à vácuo. As amostras foram então submetidas aos cartuchos de extração em fase sólida constituídos 500 mg (cada) da fase estacionária C18 e poli- estireno-divinilbenzeno. As amostras foram submetidas à coluna de extração em fase sólida com um fluxo aproximado de 3 mL min-1_{. Após a extração, a fase foi}

lavada com 10 mL de água desionizada (pH 11) e em seguida seca sob fluxo de nitrogênio durante 30 minutos. A eluição dos analitos de estudo foi realizada com 5 mL de metanol, e o eluato foi evaporado até completa secura sob fluxo de N2 constante e banho de água (45 °C). Finalmente os resíduos foram

ressuspendidos em 1 mL de uma solução contendo 5 mmol L-1 _{de ácido fosfórico}

e 10 mmol L-1 _{de SDS e injetado no equipamento de eletroforese capilar. Os}

mesmos experimentos descritos anteriormente também foram realizados em amostras de água sem o ajuste do pH da solução.

Determinação do volume de capacidade: os experimentos relacionados ao

volume de capacidade foram realizados com uma solução contendo todos os analitos de interesse, de caráter aniônico, catiônico e neutro na concentração de 4 mg L-1 _{cada, suficiente para que cada componente apresentasse sinal no}

detector. Esta solução foi percolada em um cartucho contendo o sorvente de estudo, com o auxílio de um sistema de fluxo em linha, o sinal era registrado no espectrofotômetro no comprimento de onda de 205 nm.

Estudo de recuperação: a recuperação do método foi determinada pela adição de volumes conhecidos de soluções padrão das substâncias analisadas em um volume de 100 mL da amostra. A recuperação foi avaliada através da injeção dos analitos submetidos a extração no equipamento de eletroforese capilar. As metodologias de análise são as mesmas utilizadas nos Capítulos 2 e 3. Os cálculos foram realizados através da comparação entre as áreas resultantes no eletroferograma da solução padrão na concentração apropriada, e da amostra de água adicionada desses padrões e submetidas ao procedimento de extração em fase sólida.